Khảo sát sơ bộ các thành phần có trong bào tử nấm linh chi phá vỡ vách

Đồ án tốt nghiệp LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu đồ án hoàn toàn trung thực, chưa cơng bố cơng trình khác Các thơng tin, tài liệu trích dẫn đồ án ghi rõ nguồn gốc Tp Hồ Chí Minh, tháng năm 2016 Sinh viên thực Vũ Trường Giang LỜI CẢM ƠN Trong thời gian thực đồ án tốt nghiệp tại Trường Đại học Công nghệ Tp Hồ Chí Minh - HUTECH, hướng dẫn tận tình Thầy cơ, anh chị bạn giúp tơi hồn thành tốt đồ án Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn sâu sắc mình đến: Ban giám hiệu Trường Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh – HUTECH tạo hội cho học tập tại trường Cảm ơn quý thầy cô khoa Công nghệ sinh học – Thực phẩm – Môi trường truyền đạt lại tri thức quý báu cho thời gian học tập tại trường Đặc biệt xin gửi lời cảm ơn chân thành đến TS Nguyễn Hoài Hương, người tận tình trực tiếp hướng dẫn, bảo để tơi hồn thành đồ án tốt nghiệp Cùng với đó, tơi xin gửi lời cảm ơn đến gia đình, anh chị bạn học có động viên to lớn, giúp đỡ tơi q trình học tập hồn thành chương trình học tại trường cách tốt Tôi xin chân thành cảm ơn! Sinh viên thực Vũ Trường Giang Đồ án tốt nghiệp MỤC LỤC DANH MỤC HÌNH ẢNH iii DANH MỤC BẢNG v MỞ ĐẦU 1 Tính cấp thiết đề tài Tình hình nghiên cứu Mục đích đề tài Mục tiêu đề tài Phương pháp nghiên cứu Kết thu đề tài Hạn chế đề tài CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm linh chi 1.1.1 Nguồn gốc phân bố 1.1.2 Bào tử nấm Linh chi 1.2 Thành phần hóa học chủ yếu 12 1.2.1 Các polysaccharide peptidoglycan 14 1.2.2 Triterpenes 16 1.2.3 Saponin 22 1.2.4 Những thành phần khác 24 1.3 Sử dụng 25 1.3.1 Phòng ngừa ung thư 26 1.3.2 Tăng cường khả miễn dịch 26 1.3.3 Khả chống oxy hoá 27 1.3.4 Điều trị bệnh đái tháo đường 27 1.3.5 Tác dụng đối với bệnh tim mạch 28 CHƯƠNG 2: VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 29 2.1 Phương tiện nghiên cứu 29 2.1.1 Vật liệu 29 2.1.2 Nơi thực 29 i Đồ án tốt nghiệp 2.1.3 Thời gian thực 29 2.2 Vật liệu thí nghiệm 29 2.2.1 Thiết bị dụng cụ 29 2.2.2 Hóa chất 30 2.3 Phương pháp nghiên cứu 31 2.3.1 Phá vách bào tử nấm Linh chi phương pháp lạnh đông kết hợp sử dụng C20032 10% dịch tăng sinh nấm Trichoderma harzianum T2 32 2.3.2 Quy trình trích ly hợp chất có bào tử nấm linh chi 34 2.3.3 Định tính một số hoạt chất có mẫu bào tử nấm linh chi 34 2.3.4 Định lượng một số hoạt chất có mẫu bào tử nấm linh chi 37 CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ VÀ BIỆN LUẬN 41 3.1 Định tính hợp chất sau trích ly 42 3.1.1 Bào tử 42 3.1.2 Dịch 47 3.2 Định lượng hoạt chất có mẫu bào tử nấm linh chi 53 3.2.1 Bào tử 53 3.2.2 Dịch 54 CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 4.1 Kết luận 58 4.2 Kiến nghị 60 TÀI LIỆU THAM KHẢO 61 ii Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC HÌNH ẢNH Hình 1.1: Nấm linh chi đỏ (Ganoderma lucidum) (A) nấm mọc tự nhiên (B) nấm trồng (C) Hình 1.2: a) Bào tử nấm linh chi kính hiển vi phóng to 3000 lần b) Bào tử nấm linh chi bị phá vỡ vách .10 Hình 1.3 Các kiểu hình bào tử đặc thù họ nấm linh chi 11 Hình 1.4 Cấu trúc không gian Polysaccharide nấm Linh chi 15 Hình 1.5: Cơng thức số triterpene nấm linh chi 17 Hình 1.6: Cấu trúc không gian 29 loại triterpenoids bào tử nấm Linh chi (Bingji Ma et al (2011)) 19 Hình 1.7: Tên 29 triterpenoids bào tử nấm Linh chi (Bingji Ma et al.(2011) Triterpenoids cô lập từ bào tử nấm Linh chi 20 Hình 2.1 Quy trình thí nghiệm 32 Hình 2.2 Quy trình phá vỡ vách bào tử nấm linh chi phương pháp lạnh đông kết hợp enzyme nuôi cấy .34 Hình 3.1 Quy trình trích ly hợp chất có bào tử nấm Linh chi 42 Phần bào tử Hình 3.1 Phản ứng định tính Alkaloid thuốc thử Mayer 43 Hình 3.2 Phản ứng định tính Alkaloid thuốc thử Dragendorff 44 Hình 3.3 Thử nghiệm tính tạo bọt .45 Hình 3.5 Phản ứng Liebermann – Burchard 46 Hình 3.6 Thử nghiệm phản ứng với thuốc thử Molish .47 Phần dịch trích ly Hình 3.7 Phản ứng định tính Alkaloid thuốc thử Mayer 48 Hình 3.8 Phản ứng định tính Alkaloid thuốc thử Dragendorff 49 Hình 3.9 Thử nghiệm tính tạo bọt .50 Hình 3.10 Thử nghiệm Fontan –Kaudel 51 iii Đồ án tốt nghiệp Hình 3.11 Phản ứng Liebermann – Burchard 52 Hình 3.12 Thử nghiệm phản ứng với thuốc thử Molish 53 Hình 3.14 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ D-glucose 55 Hình 4.1 Quy trình tổng kết .61 iv Đồ án tốt nghiệp DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1: Đặc điểm số loại nấm linh chi Đài Loan Bảng 1.2 Thành phần dược tính nấm Linh chi 12 Bảng 1.3 Cấu trúc không gian số nhóm chất saponin 24 Bảng 3.1 Bảng kết thí nghiệm 57 v Đồ án tớt nghiệp MỞ ĐẦU Tính cấp thiết đề tài Trong năm gần đây, dược liệu thiên nhiên ngày đóng vai trò quan trọng việc phòng bệnh, chữa bệnh nâng cao sức khỏe Từ lâu nấm Linh chi thảo dược quý hiếm, xem loại “Thần dược” Theo Đông y, Linh chi có tác dụng kiện não, bảo an, cường tâm, giải độc… Theo Tây y, từ Linh chi người ta bào chế thuốc chữa nhiều bệnh, đáng quan tâm bệnh tiểu đường, viêm gan, ung thư… Trong năm vừa qua, phương pháp phân tích đại cho phép xác định lượng lớn hợp chất hóa học có thể, tơ bào tử nấm Linh chi như: triterpenoid, steroid, polysaccharide, saponin, chất khống, amino acid… polysaccharide, triterpenoid xem thành phần mang nhiều hoạt tính sinh học nấm Tuy hoạt chất sinh học tìm việc phân tích, chiết xuất hoạt chất sinh học chủ yếu thực thể tơ nấm Linh chi, có nghiên cứu việc thực bào tử nấm Linh chi bào tử nấm Linh chi cấu tạo lớp vách đôi bền vững, làm giảm khả chiết xuất chất Vì việc phá vỡ vách bào tử nấm Linh chi xác định diện hợp chất hóa học có bào tử nấm Linh chi giai đoạn quan trọng Để đóng góp phần nhỏ vào việc nghiên cứu xác định hoạt chất có bào tử nấm linh chi, tơi có nghiên cứu sơ thực đồ án tốt nghiệp: “Khảo sát sơ bợ thành phần có bào tử nấm Linh chi phá vỡ vách” Tình hình nghiên cứu Việc nghiên cứu thành phần hợp chất quý nấm Linh chi thực chủ yếu thể tơ nấm Linh chi Vào thập niên 70 – 80, bắt đầu trào lưu khảo cứu hóa dược học nấm Linh chi Chủ yếu Trung Quốc, Nhật Bản, Hàn Quốc, Đài Loan Việt Nam Gần Đồ án tốt nghiệp số phòng thí nghiệm Hoa Kỳ vùng Đông Nam Á bắt đầu tham gia vào tiến trình Năm 1988, Nhật Bản điều trị thành công bệnh nhược Linh chi theo nguyên tắc điều hồ miễn dịch Bệnh viện Sơn Đơng, Trung Quốc dùng “xúp” Linh chi để giải độc bổ gan có kết tốt, 70.000 ca 90% khỏi bệnh (Lui Xing Jia, 1994) Tác giả cho nấm Linh chi có tác dụng tốt đường tiết niệu, điều hoà rối loạn tuần hoàn não, tránh kịch phát nghẽn mạch làm dịu thần kinh, Năm 2010, Chaiyavat Chaiyasut*, Chakkrapong Kruatama and Sasithorn Sirilun cơng bố cơng trình nghiên cứu phá vách bào tử nấm Linh chi trình lên men vi khuẩn Lactobacillus plantarum bào tử nấm Linh chi Mục đích đề tài Trích ly hợp chất bên bào tử nấm linh chi Xác định diện hợp chất có bào tử nấm linh chi bị phá vách Mục tiêu đề tài Định tính định lượng hoạt chất có dịch trích ly bào từ nấm linh chi phá vỡ enzyme Phương pháp nghiên cứu Tổng quan tài liệu tiến hành thực nghiệm Kết thu đề tài Định tính alkaloid, saponin, triterpenoid, polysaccharide có bào tử nấm linh chi sau phá vỡ Định lượng polysaccharide, tởng chất béo có bào tử nấm linh chi sau phá vỡ Hạn chế đề tài Nghiên cứu tiến hành sơ bộ, chưa định lượng xác tồn thành phần hoạt chất có dịch trích ly bào tử nấm linh chi Đờ án tớt nghiệp CHƯƠNG 1: TỞNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm linh chi 1.1.1 Nguồn gốc phân bố Nấm linh chi (Ganoderma lucidum) loài nấm thường tìm thấy nước Á Đông Từ xưa đến nay, Trung Quốc, Nhật Bản số nước châu Á khác sử dụng nấm linh chi loại thảo dược để giúp tăng cường sức khỏe kéo dài tuổi thọ người Đây loại nấm lớn, màu tối, vỏ ngồi nhẵn bóng nhìn giống khúc gỗ Trong tiếng Latin thì lucidus có nghĩa «sáng bóng » hay «rực rỡ » điều tương thích với hình dáng bên ngồi nấm linh chi Nấm phân bố rộng rãi nước Á Đông thường mọc thân khô chết Những loại nấm linh chi sử dụng rộng rãi y học gồm: G lucidum, G luteum Steyaert, G atrum Zhao, Xu and Zhang, G tsugae Murrill, G applanatum (Pers.: Wallr.) Pat., G australe (Fr.) Pat., G capense (Lloyd) Teng, G tropicum (Jungh.) Bres., G tenue Zhao, Xu and Zhang, and G sinense Zhao, Xu and Zhang Ở nơi nấm linh chi gọi nhiều tên khác Reishi (Nhật Bản), Lingzhi (Trung Quốc), Yeongji (Hàn Quốc) Ling-Chih (Đài Loan) Ngoài số tên gọi khác nấm vạn niên (Nhật bản) hay nấm trường sinh (Trung Quốc) Theo cuốc sách nổi tiếng mô tả loại dược thảo Trung Quốc, “Shen Nong Ben Cao Jing” (25- 220 trước Công nguyên, thuộc triều đại Đông Hán) “Ben Cao Gang Mil” Li Shi Zhen (1590 trước Cơng ngun, thuộc triều đại nhà Minh), có chủng nấm biết đến tại thời điểm lúc Trong có 250 loại nấm linh chi đề cập Tuy nhiên, văn cổ đề cập nhiều đến khả chữa bệnh nấm linh chi đỏ Đồ án tốt nghiệp 3.1.2.2 Định tính saponin Tiến hành thí nghiệm mục 2.3.4.2, thu kết sau Thử nghiệm tính tạo bọt a) b) Hình 3.9 Thử nghiệm tính tạo bọt a ) Ống nghiệm lúc bắt đầu thử nghiệm b) Ống nghiệm thời điểm 60 phút Quan sát thấy bọt bền 60 phút : +++ Kết luận: Dịch phá vỡ bào tử nấm linh chi có chứa saponin 49 Đồ án tốt nghiệp Thử nghiệm Fontan – Kaudel: a) b) Hình 3.10 Thử nghiệm Fontan –Kaudel a) Mẫu đối chứng âm (-) b) Mẫu thử nghiệm từ dịch trích ly diethyl ether từ bào tử nấm linh chi qua xử lý phá vỡ Khi cho vào ống nghiệm (NaOH, pH 13 HCl pH 1) 2ml dịch trích ly dung mơi diethylether, nhận định dịch trích ly bào tử nấm Linh chi diethylether qua xử lý vách tế bào có diện có saponin triterpenoid , chiều cao cột bọt ống nghiệm NaOH, pH 13 không cao nhiều so với ống nghiệm HCl, pH (ống pH 13 cột bọt cao 2,2 cm, ống pH cột bọt cao 2,0 cm) 50 Đồ án tớt nghiệp 3.1.2.3 Định tính Triterpenoid Tiến hành thí nghiệm theo mục 2.3.4.3 Phản ứng Liebermann – Burchard a) b) c) Hình 3.11 Phản ứng Liebermann – Burchard a) Mẫu đối chứng âm (-) b) Mẫu thử nghiệm từ dịch trích ly diethyl ether từ bào tử nấm linh chi qua xử lý phá vỡ c) Mẫu đối chứng dương (+) Trong dịch trích ly bào tử nấm Linh chi qua xử lý vách bào tử cho thấy diện triterpenoid, cho dịch trích ly diethyl ether bốc tới cặn phản ứng với thuốc thử ống nghiệm 2, kết định tính cho đỏ nâu đến tím Kết luận: Dịch phá vỡ bào tử nấm linh chi có Triterpenoid 51 Đồ án tốt nghiệp 3.1.2.4 Định tính Polysaccharide Tiến hành thí nghiệm theo mục 2.3.4.4 Th́c thử Molish a) b) c) Hình 3.12 Thử nghiệm phản ứng với thuốc thử Molish a) Mẫu đối chứng âm (-) b) Mẫu thử nghiệm từ dịch trích ly diethyl ether từ bào tử nấm linh chi qua xử lý phá vỡ c) Mẫu đối chứng dương (+) Sau cho vào ống nghiệm 2ml dịch trích ly diethyl ether, thêm vào khoảng 2-3 giọt α-naphtol pha cồn 96o tỉ lệ 1:19 Lắc ống nghiệm, sau nghiêng ống nghiệm cho vào 2ml H2SO4 đậm đặc chảy từ từ theo thành ống nghiệm Quan sát thấy mẫu thử nghiệm có xuất vòng màu tím ngăn cách 52 Đờ án tớt nghiệp hai lớp dung dịch Trong mẫu dịch bào tử nấm linh chi chưa qua xử lý phá vỡ khơng xuất vòng ngăn cách Kết ḷn: Dịch phá vỡ bào tử nấm linh chi có chứa Polysaccharide 3.2 Định lượng hoạt chất có mẫu bào tử nấm linh chi 3.2.1 Bào tử Tởng chất rắn trích ly có 100g bào tử: 𝑋= (𝑚2 − 𝑚1 ) × 100 (𝑔) 𝑚 Trong đó: m: trọng lượng bào tử cân ban đầu (g) m1: trọng lượng cốc thủy tinh (g) m2: trọng lượng cốc thủy tinh chứa chất béo (g) m1 m2 Lần 98,782 98,856 Lần 95,311 95,374 Lượng chất rắn có 100g bào từ (98,856 − 98,782) × 100 𝑚2 − 𝑚1 = = 1,48 (𝑔) 𝑚 (95,374 − 95,311) × 100 𝑚2 − 𝑚1 𝑋2 = = = 1,26 (𝑔) 𝑚 𝑋1 = Lượng chất rắn trung bình 100g bào tử: 𝑋̅ = 𝑋1 + 𝑋2 1,48 + 1,26 = = 1,37 ± 0,156 (𝑔) 2 53 Đồ án tốt nghiệp 3.2.2 Dịch 3.2.2.1 Định lượng polysaccharide phương pháp Phenol - Sulfuric Xác định khoảng tuyến tính Bảng Mật đợ quang dung dịch D-glucose ch̉n STT Nờng đợ (µg/ml) Đợ hấp thụ quang 0 20 0,182 40 0,345 60 0,466 80 0,632 100 0,778 Xây dựng đường chuẩn 0.9 y = 0.0077x + 0.009 R² = 0.9993 Độ hấp thụ quang 0.8 0.7 0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 20 40 60 80 100 120 Nồng đợ Hình 3.14 Đường hồi quy tuyến tính biểu diễn phụ thuộc mật độ quang vào nồng độ D-glucose 54 Đồ án tốt nghiệp Từ hình 3.8 , xác định phương trình đường chuẩn D-glucose y = 0,0077x + 0,009 với R = 0,9993 Trong x: nồng độ dung dịch cần xác định giá trị mật độ quang (µg/ml) y: giá trị mật độ quang R: hệ số tương quan Mật độ quang đo mẫu y1 = 0,48; y2 = 0,495; y3 = 0,51 sau pha loãng mẫu lần Hàm lượng Polysaccharide tương ứng có mẫu 0,48−0.009 0,0077 = 62,208 (µg/ml) 𝑥2 = 0,495−0.009 0,0077 = 63,117 (µg/ml) 𝑥3 = 0,51−0.009 0,0077 = 65,065 (µg/ml) 𝑥1 = Hàm lượng Polysaccharide có 100g mẫu bào tử nấm linh chi 𝑥1 10−6 𝑘.𝑉.100 𝑣.𝑚 𝑥1 10−6 𝑘.𝑉.100 𝑣.𝑚 𝑥1 10−6 𝑘.𝑉.100 𝑣.𝑚 = = = 62,208.10−6.2.150.100 1.5 63,117.10−6.2.150.100 1.5 65,065.10−6.2.150.100 1.5 = 0,3792 (g) = 0,3787 (g) = 0,3903 (g) Vậy hàm lượng polysaccharide trung bình có 100g mẫu bào tử nấm linh chi 0,3792 + 0,3787 + 0,3903 = 0,3828 ± 0,0065(𝑔) 55 Đồ án tốt nghiệp 3.2.2.2 Định lượng chất rắn Tổng chất rắn có dịch chiết: 𝑋= (𝑚2 − 𝑚1 ) × 100 (𝑔) 𝑚 Trong đó: m: thể tích dịch chiết ban đầu (ml) m1: trọng lượng cốc thủy tinh (g) m2: trọng lượng cốc thủy tinh chứa mẫu (g) m1 m2 Lần 113,612 114,880 Lần 127,382 128,559 Lượng chất rắn có dịch chiết 100g bào tử (𝑚2 − 𝑚1) × 100 (114,880 − 113,612) × 100 = = 25,36 (𝑔) 𝑚 (𝑚2 − 𝑚1 ) × 100 (128,559 − 127,382) × 100 𝑋2 = = = 23,54 (𝑔) 𝑚 𝑋1 = Lượng chất rắn trung bình có dịch chiết 100g bào tử: 𝑋̅ = 𝑋1 + 𝑋2 25,36 + 23,54 = = 24,45 ± 1,287 (𝑔) 2 3.2.2.3 Định lượng lipid phương pháp Adam – Rose – Gottlieb m1 m2 Lần 66,105 66,207 Lần 67,241 67,332 56 Đồ án tớt nghiệp Hàm lượng chất béo có dịch chiết 100g bào tử (66,207 − (𝑚2 − 𝑚1 ) × 100 = 𝑚 (67,332 − (𝑚2 − 𝑚1 ) × 100 𝑋2 = = 𝑚 𝑋1 = 66,105) × 100 = 2,04 (𝑔) 67,241) × 100 = 1,82 (𝑔) Hàm lượng chất béo trung bình: 𝑋̅ = 𝑋1 + 𝑋2 2,04 + 1,82 = = 1,93 ± 0,0156 (𝑔) 2 Tởng kết kết thí nghiệm, nhận giá trị theo bảng sau Bảng 3.1 Bảng kết thí nghiệm Định tính Phần dịch Phần bào tử Alkaloid (+) (-) Saponin (+) (-) Triterpenoid (+) (-) Polysaccharide (+) (-) Định lượng (có 100g bào tử 100ml dịch chiết) Polysaccharide 0,3828 ± 0,0065 (g) (-) Chất béo 1,93 ± 0,0156 (g) (-) Chất rắn 24,45 ± 1,287 (g) 1,37 ± 0,156 (g) 57 Đồ án tốt nghiệp CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 4.1 Kết luận Nhận xét Sau sử dụng enzyme cellulose C20032 10% kết hợp với enzyme chitinase nuôi cấy từ nấm Trichoderma hazianum tỉ lệ 1:1 môi trường pH = ủ nhiệt độ 50oC 10 ngày, dịch phá vỡ phân riêng trích ly lỏng-lỏng dung môi diethyl ether Sản phẩm chứa tổng chất rắn 25,82% so với nguyên liệu ban đầu, định tính có mặt alkaloid, saponin, triterpenoid polysaccharidel; định lượng polysaccharide lipid tổng cho 0,3828% 1,93% tương ứng Trong đó, bào tử lại sau ly tâm trích ly dung mơi diethyl ether chứa 2% chất chiết, khơng phát hợp chất kể Như vậy, hiệu suất thu hồi chất chiết tổng từ dịch phá vỡ bào tử bào tử sau phá vỡ 27% so với lượng nguyên liệu ban đầu Vì quy trình đề nghị thực sau 58 Đồ án tốt nghiệp Bào tử nấm Tiền xử lý lạnh đông o C, 12 tiếng Ly tâm Ủ với 15 ml/g bào tử enzyme Cellulase C20032 10% + 15 ml/g bào tử dịch nuôi cấy Trichoderma harzianum T2 đệm acetate pH Ly tâm Thu dịch Định lượng hoạt chất Thu bào tử Định tính Chiết diethylether Chiết diethylether Thu dịch chiết Thu dịch chiết Sấy khô Sấy khô o Bào tử nấm o 70 C 70 C Cân Cân Sản phẩm trích ly từ bào tử nấm Hình 4.1 Quy trình đề nghị 59 Đồ án tốt nghiệp 4.2 Kiến nghị Tìm phương pháp tăng hiệu suất phá vỡ bào tử nấm linh chi Tìm phương pháp tăng hiệu suất trích ly dịch bào tử nấm linh chi sau phá vỡ Tìm phương pháp định lượng triterpenoid, saponin, alkaloid dịch trích ly Khảo sát tỷ lệ, thời gian, nhiệt độ cho dung mơi trích ly Khảo sát thành phần cao tổng thu sau sấy 60 Đồ án tốt nghiệp TÀI LIỆU THAM KHẢO ❖ Tài liệu tiếng Việt 1) Lê Xuân Thám, 1996 Nấm Linh Chi nguồn dược liệu quý Việt Nam Nhà xuất Mũi Cà Mau (1996) 2) Trần Thị Huỳnh Mai Tổng quan quy trình phá vỡ bào tử nấm linh chi bước đầu nghiên cứu điều kiện nảy mầm bào tử Đồ án tốt nghiệp Kỹ sư Công nghệ Sinh học, Đại học Cơng nghệ Tp Hồ Chí Minh 3) Trần Thị Lệ Minh, 2011 Giáo trình Hóa Dược ứng dụng Bộ môn Công nghệ sinh học, Đại học Nông Lâm Tp.HCM 4) Nguyễn Kim Phi Phụng, Phương pháp cô lập hợp chất hữu Nhà xuất Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh, 2007 6) Nguyễn Văn Mùi, 2001 Thực hành Hóa Sinh học Nhà xuất Đại học Quốc gia Hà Nội 7) Nguyễn Lân Dũng, 2001 Công nghệ nuôi trồng nấm Tập 2, nhà xuất Nông nghiệp, 2010 8) Nguyễn Minh Khang, 2005 Khảo sát sinh trưởng nấm Linh Chi đen(Amauroderma subresinosum, Corner) phát hiện vùng núi Chứa Chan – Việt Nam Khóa luận tốt nghiệp Kỹ sư Cơng nghệ Sinh học, Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh 9) GS.TS Ngô Tất Lợi, 2004 Những thuốc và vị thuốc Việt Nam Nhà xuất Y học 10) Lê Xuân Thám (2005), Nấm Linh Chi Ganodermataceaea Donk NXB Khoa học Kỹ thuật, ❖ Tài liệu tiếng Anh 11) T.Mizuno: Antitumor Active Substances of Mushroom Fungi, Based Science and Latest Technology on Mushroom, pp 121-135(1991), Nohson Bunka Sha, Tokyo 12) Cheng CR, Yue QX, Wu ZY, et al Cytotoxic triterpenoids from Ganoderma Lucidum Phytochemistry 2010; 71: 1579-1585 61 Đồ án tốt nghiệp 13) Ma L, Wu F, Chen RY Analysis of triterpene constituents from Ganoderma lucidum Acta Pharm Sin.2003;38:50–52 14) Hou CY, Sun YT, Yan L, et al Studies on the chemical constituents of the spores from Ganoderma Lucidum Acta Bot Sin 1988;30(1):66–70 15) De-hui Dai, Wei-lian Hu, Guang-rong Huang and Wei Li 2011 Purification and characterization of a novel extracellular chitinase from thermophilic Bacillus sp Hu1 African Journal of Biotechnology Vol 10(13), pp 2476- 2485 16) Liu GT, Bao X, Niu S, et al Some pharmacological actions of the spores of Ganoderma lucidum and the mycelium of Ganoderma capense (Lloyd) Teng cultivated by submerged fermentation Chin Med J 1979; 92: 469-500 17) Hikino H, et al Mechanisms of hypoglycemic activity of ganoderan B: a glycan of Ganoderma lucidum fruit bodies Planta Med (1989) 18) Kino, K et al., An immunomodulating protein, Ling Zhi—8(LZ—8) prevents insulitis an non—obese diabetic mice; Diabetolgia, vol 33, p 713—718 (1990) 19) ShimiZu, Akria et al.; Isolation of an Inhibitor of Platelet Aggregation from a Fungus, Ganoderma lucidum; Chem Pharm BulL, vol 33, p 3012—3015 (1985) 20) Lee, Seung Y.; Cardiovascular Effects of Mycelium Extract of Ganoderma lucidum: Inhibition of Sympathetic Outflow as a Mechanism of Its Hypotensive Action, Chem Pharm Bull vol 38, p 1359—1364 (1990) 21) Zhang, G L.; Wang, Y H.; Ni, W.; Teng, H L.; Lin, Z B Hepatoprotective role of Ganoderma lucidum polysaccharide against BCG-induced immune liver injury in mice World J Gastroenterol 2002, 8, 728–733 22) Gao, Y.; Gao, H.; Chan, E.; Tang, W.; Xu, A.; Yang, H.; Huang, M.; Lan, J.; Li, X.; Duan, W.; Xu, C.; Zhou, S Antitumor activity and underlying mechanisms of ganopoly, the refined polysaccharides extracted from Ganoderma lucidum, in mice Immunol Invest 2005, 34, 171–198 62 Đồ án tốt nghiệp 23) Thyagarajan, A.; Jiang, J.; Hopf, A.; Adamec, J.; Sliva, D Inhibition of oxidative stress-induced invasiveness of cancer cells by Ganoderma lucidum is mediated through the suppression of interleukin-8 secre-tion Int J Mol Med 2006, 18, 657–664 24) Hansen, L 1958 On the anatomy of the Danish species of Ganoderma Bot Tidsskrifft 54:333 – 352 (1958) 25) Mau JL, Lin HC, Chen CC Antioxidant properties of several medicinal mushrooms J Agric Food Chem (2001) 26) Sye WT 1991 Improverment method of extraction and high performance liquid chromatographic separation of ganoderic acid from Ganoderma Lucidum Journal of the Chinese Chemical Society, 38, pp 179 27) Lui X J.,1994 Hepatopathy and uterofunctional Bleeding mainly Treated with Ganoderma lucidum Proc 94 Inter Sym On Ganoderma Res., p58-9 Beijing, China, 1994 28) Min BS, Nakamura N, Miyashiro H, et al Triterpenes from the spores of Ganoderma Lucidum and their inhibitory activity against HIV-1 protease Chem Pharm Bull.1998;46(10):1607–1612 29) Min BS, Gao JJ, Nakamura N, et al Triterpenes from the spores of Ganoderma Lucidum and their cytotoxicity against meth-A and LLC tumor cells Chem Pharm Bull.1998;48(7):1026–1033 30) T Mizuno, 1994 Mushroom Science and Biotechnology, 1, 53-59(1994) 63 ... tử nấm Linh chi bào tử nấm Linh chi cấu tạo lớp vách đôi bền vững, làm giảm khả chi t xuất chất Vì việc phá vỡ vách bào tử nấm Linh chi xác định diện hợp chất hóa học có bào tử nấm Linh chi giai... đóng góp phần nhỏ vào việc nghiên cứu xác định hoạt chất có bào tử nấm linh chi, tơi có nghiên cứu sơ thực đồ án tốt nghiệp: Khảo sát sơ bợ thành phần có bào tử nấm Linh chi phá vỡ vách Tình... cứu phá vách bào tử nấm Linh chi trình lên men vi khuẩn Lactobacillus plantarum bào tử nấm Linh chi Mục đích đề tài Trích ly hợp chất bên bào tử nấm linh chi Xác định diện hợp chất có bào tử nấm