Đề cương kiểm nghiệm dược liệu hy thiêm

PHẦN 1: CÁC CHỈ TIÊU KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU HY THIÊM (DƯỢC ĐIỂN VIỆT NAM IV) 1.1. Chỉ tiêu cảm quan (Mô tả) Cách tiến hành: Quan sát bằng mắt thường, đo đạc bằng các dụng cụ phù hợp. Yêu cầu: Thân rỗng ở giữa, đường kính 0,2 cm đến 0,5 cm. Mặt ngoài thân màu nâu sẫm đến nâu nhạt, có nhiều rãnh dọc song song và nhiều lông ngắn sít nhau. Lá mọc đối, có phiến hình mác rộng, mép khía răng cưa tù, có ba gân chính. Mặt trên lá màu lục sẫm, mặt dưới màu lục nhạt, hai mặt đều có lông. Cụm hoa hình đầu nhỏ, gồm hoa màu vàng hình ống ở giữa, 5 hoa hình lưỡi nhỏ ở phía ngoài. Lá bắc có lông dính. 1.2. Vi phẫu Cách tiến hành: Làm vi phẫu các phần khác nhau của dược liệu thô (gân lá, phiến lá, thân), sau đó quan sát trên kính hiển vi. Yêu cầu: Gân lá: Gân phía trên và dưới đều lồi, mặt dưới lồi to hơn. Biểu bì trên và dưới gồm một hàng tế bào hình trứng nhỏ, xếp liên tục đều đặn, mang lông che chở đa bào, dài, thường có 6 đến 8 tế bào xếp thẳng hàng, vách ngăn giữa các tế bào phình to đặc biệt, các tế bào càng gần đầu lông càng dài và nhỏ dần. Dưới biểu bì là mô dày, cấu tạo bởi các tế bào hình tròn nhỏ, có thành dày ở góc, xếp đều đặn thành 2 đến 3 hàng. Mô mềm gồm những tế bào hình tròn, thành mỏng, kích thước không đều nhau. Trong mô mềm rải rác có những ống tiết gồm 4 tế bào đến 5 tế bào nhỏ xếp thành vòng. Ở giữa gân lá có một bó libegỗ to, hình trứng, có lớp libe hình cung bao phía dưới bó gỗ, bó gỗ cấu tạo bỏi các mạch gỗ tương đối nhỏ xếp thành hàng, tập trung thành đám. Trong gân lá có thể thấy 3 đến 5 bó libegỗ nhỏ hơn, xếp thành hình cung, có cấu tạo tương tự bó libegỗ to.

TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI

BỘ MÔN DƯỢC LIỆU



ĐỀ CƯƠNG KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU

HY THIÊM

NHÓM 2 – P1K66 – PHÒNG 2

Thành viên:

1 Lê Thiên Kim – MSV: 1101276

2 Tráng A Páo – MSV: 1101394

Địa điểm: Phòng thực tập 2 – Bộ môn Dược liệu

– Trường ĐH Dược Hà Nội

HÀ NỘI, 2015

PHẦN 1: CÁC CHỈ TIÊU KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU HY THIÊM

(DƯỢC ĐIỂN VIỆT NAM IV) 1.1 Chỉ tiêu cảm quan (Mô tả)

Cách tiến hành: Quan sát bằng mắt thường, đo đạc bằng các dụng cụ phù hợp Yêu cầu: Thân rỗng ở giữa, đường kính 0,2 cm đến 0,5 cm Mặt ngoài thân màu nâu

sẫm đến nâu nhạt, có nhiều rãnh dọc song song và nhiều lông ngắn sít nhau Lá mọc đối, có phiến hình mác rộng, mép khía răng cưa tù, có ba gân chính Mặt trên lá màu lục sẫm, mặt dưới màu lục nhạt, hai mặt đều có lông Cụm hoa hình đầu nhỏ, gồm hoa màu vàng hình ống ở giữa, 5 hoa hình lưỡi nhỏ ở phía ngoài Lá bắc có lông dính

1.2 Vi phẫu

Cách tiến hành: Làm vi phẫu các phần khác nhau của dược liệu thô (gân lá, phiến

lá, thân), sau đó quan sát trên kính hiển vi

Yêu cầu:

Gân lá: Gân phía trên và dưới đều lồi, mặt dưới lồi to hơn Biểu bì trên và dưới

gồm một hàng tế bào hình trứng nhỏ, xếp liên tục đều đặn, mang lông che chở đa bào, dài, thường có 6 đến 8 tế bào xếp thẳng hàng, vách ngăn giữa các tế bào phình

to đặc biệt, các tế bào càng gần đầu lông càng dài và nhỏ dần Dưới biểu bì là mô dày, cấu tạo bởi các tế bào hình tròn nhỏ, có thành dày ở góc, xếp đều đặn thành 2 đến 3 hàng Mô mềm gồm những tế bào hình tròn, thành mỏng, kích thước không đều nhau Trong mô mềm rải rác có những ống tiết gồm 4 tế bào đến 5 tế bào nhỏ xếp thành vòng Ở giữa gân lá có một bó libe-gỗ to, hình trứng, có lớp libe hình cung bao phía dưới bó gỗ, bó gỗ cấu tạo bỏi các mạch gỗ tương đối nhỏ xếp thành hàng, tập trung thành đám Trong gân lá có thể thấy 3 đến 5 bó libe-gỗ nhỏ hơn, xếp thành hình cung, có cấu tạo tương tự bó libe-gỗ to

Phiến lá: Biểu bì trên và dưới cấu tạo bởi 1 hàng tế bào hình chữ nhật nhỏ, tế

bào biểu bì trên có kích thước lớn hơn, có thể mang lông che chở đa bào cấu tạo tương tự như phần gân lá Mô giậu là 2 hàng tế bào hình chữ nhật to, xếp sít nhau và thẳng góc với biểu bì trên Mô khuyết là những tế bào thành mỏng, có kích thước không đều nhau Giữa phiến lá có một số bó libe-gỗ hình trứng nhỏ của gân phụ

Thân: Biểu bì gồm một hàng tế bào nhỏ, hình trứng, xếp đều đặn liên tục, có

thể mang lông che chở đa bào cấu tạo tương tự như ở gân lá Mô dày gồm 2 đến 3 hàng tế bào, có thành dày phát triển ở góc Mô mềm vỏ gồm các tế bào hình tròn, thành mỏng kích thước không đều nhau Trong mô mềm vỏ, sát với bó libe-gỗ hơn

có những bó sợi lớn, xếp thành vòng liên tục hoặc gián đoạn, bao lấy bó libe-gỗ Ứng với mỗi bó sợi là một bó libe-gỗ hình trứng, tương đối to cũng xếp thành vòng liên tục Trong bó libe-gỗ có libe hình bán nguyệt được bó sợi bao gần hết Gỗ cấu tạo bởi các mạch gỗ to, xếp thành hàng, tập trung tạo thành bó Trong cùng là mô mềm ruột gồm các tế bào to, hình tròn, thành mỏng, rải rác thấy một số ống tiết cấu tạo tương tự phần gân lá

1.3 Bột

Cách tiến hành: Nghiền dược liệu (đã làm khô), làm tiêu bản bột toàn phần, quan

sát trên kính hiển vi

Yêu cầu:

Màu lục xám Soi kính hiển vi thấy: Lông che chở đa bào, dài, thường có 6 tế bào đến 8 tế bào xếp thành hàng, vách ngăn giữa các tế bào phình to đặc biệt, các tế bào càng gần đầu lông càng càng dài và nhỏ dần Hai loại lông tiết: loại đầu hình cầu đa bào, chân đơn bào và loại đầu hình cầu đơn bào, chân đa bào Mảnh biểu bì mang lỗ khí Mảnh mô mềm thân (tế bào hình chữ nhật), và mô mềm lá (tế bào trong) Sợi đứng riêng lẻ hoặc tập trung thành bó, tế bào sợi ngắn và nhỏ, khoang rộng Hạt phấn hoa hình cầu gai tương đối to, gai thưa và nhọn, bề mặt có 3 lỗ rãnh, đường kính khoảng 33 μm đến 35 μm, màu vàng nhạt Mảnh cánh hoa gồm tế bào màu vàng nhạt, thành mỏng Mảnh mạch vạch, mạch mạng

1.4 Định tính

Cách tiến hành:

A Lấy 3 g dược liệu đã tán nhỏ Thêm 2 ml dung dịch amoniac 10% (TT), trộn cho thấm đều Thêm 20 ml cloroform (TT) Lắc, để yên 4 giờ Lọc vào bình gạn Thêm

10 ml dung dịch acid sulfuric 10% (TT) Lắc kỹ rồi để yên cho dung dịch tách thành

2 lớp Gạn lấy lớp dung dịch acid ở phía trên cho vào 3 ống nghiệm để làm các phản ứng sau:

 Ống nghiệm 1: Thêm 1 giọt thuốc thử Mayer (TT) sẽ cho tủa trắng

 Ống nghiệm 2: Thêm 1 giọt thuốc thử Bouchardat (TT) sẽ cho tủa nâu

 Ống nghiệm 3: Thêm 1 giọt dung dịch acid picric 1% (TT), cho tủa vàng

B Phương pháp sắc ký lớp mỏng

 Bản mỏng: Silicagel G

 Dung môi triển khai: Toluen – ethyl acetat – aceton – acid formic (15: 2: 2:

1)

 Dung dịch thử: Lấy 2 g bột dược liệu, thêm 30 ml ethyl acetat (TT), lắc siêu

âm 30 phút, lọc Cô dịch lọc trên cách thủy đến cạn Hòa cắn trong 1

ml ethanol 96% (TT) được dung dịch thử

 Dung dịch đối chiếu: Lấy 2 g Hy thiêm (mẫu chuẩn) đã nghiền nhỏ, tiến hành

chiết như dung dịch thử

Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên bản mỏng 20 µl mỗi dung dịch trên Triển

khai sắc ký cho đến khi dung môi đi đựợc khoảng 12 - 13 cm, lấy bản mỏng ra, để

khô ở nhiệt độ phòng, phun dung dịch vanilin 1% trong acid sulfuric đặc (TT), sấy

bản mỏng ở 120 0C đến khi hiện rõ các vết

Yêu cầu:

- Phương pháp A: Dược liệu có phản ứng dương tính

- Phương pháp B: Trên sắc ký đồ, dung dịch thử phải có các vết cùng màu sắc và giá trị Rf với các vết dung dịch đối chiếu

1.5 Độ ẩm

Cách tiến hành: Tiến hành sấy trong tủ sấy ở áp suất thường Dược liệu phải được

làm thành mảnh nhỏ đường kính không quá 3 mm; chiều dày lớp mẫu thử đem sấy

là 5 mm (không quá 10 mm đối với dược liệu có cấu tạo xốp)

- Lượng đem sấy: 2 g

- Nhiệt độ: 100 0C, 4 giờ

- Chênh lệch giữa 2 lần cân < 5mg

Yêu cầu:

Độ ẩm: Không quá 12%

Cách tiến hành:

Cân một lượng mẫu ~50g, dàn mỏng trên tờ giấy, quan sát bằng mắt thường hoặc kính lúp, khi cần có thể dùng rây để phân tách tạp chất và dược liệu

Cân phần tạp chất và tính phần trăm như sau:

Trong đó:

a là khối lượng tạp chất tính bằng gam;

p là khối lượng mẫu thử tính bằng gam

Ghi chú:

Trong một số trường hợp nếu tạp chất rất giống với thuốc, có thể phải làm các phản ứng định tính hoá học, phương pháp vật lý hoặc dùng kính hiển

vi để phát hiện tạp chất Tỷ lệ tạp chất được tính bao gồm cả tạp chất được phát hiện bằng phương pháp này

Yêu cầu:

Tạp chất khác: Không quá 1% (Tạp chất lẫn trong dược liệu bao gồm tất cả

các chất ngoài quy định của dược liệu đó như: Đất, đá, rơm rạ, cây cỏ khác, các bộ phận khác của cây không quy định làm dược liệu, xác côn trùng )

Tỷ lệ lá trong dược liệu: Không ít hơn 40%

1.7 Tỷ lệ vụn nát

Cách tiến hành:

Cân một lượng dược liệu nhất định (p gam) đã được loại tạp chất Rây qua rây

có số quy định theo chuyên luận riêng Cân toàn bộ phần đã lọt qua rây (a gam) Tính tỷ lệ vụn nát (X%) (từ kết quả trung bình của ba lần thực hiện) theo công thức:

Ghi chú:

Lượng dược liệu lấy để thử (tuỳ theo bản chất của dược liệu) từ 100 đến 200 g Đối với dược liệu mỏng manh thì chỉ lắc nhẹ, tránh làm vụn nát thêm

Phần bụi và bột vụn không phân biệt được bằng mắt thường được tính vào mục tạp chất )

Yêu cầu:

Qua rây có kích thước mắt rây 4 mm: Không quá 5%

100 p

a

%

PHẦN 2: SẮP XẾP CÔNG VIỆC CÁC BUỔI THỰC TẬP

4/12 1 Lập kế hoạch, đề cương nghiên cứu

Chỉ tiêu cảm quan

Vi phẫu gân lá

Vi phẫu phiến lá

Vi phẫu thân

8/12 3 Định tính phương pháp B

Chuẩn bị cho định tính phương pháp A (buổi 4)

9/12 4 Định tính phương pháp A

Xác định độ ẩm

Soi bột Xác định tạp chất Xác định tỉ lệ vụn nát

14/12 6 Hoàn thiện báo cáo, làm lại thí nghiệm nếu cần 15/12 7 Hoàn thiện báo cáo

PHẦN 3: DỰ TRÙ HÓA CHẤT THIẾT BỊ CHO TỪNG BUỔI

PHẦN 3: DỰ TRÙ HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ CHO TỪNG BUỔI

Ngày Buổi

Nội dung Hóa chất, thiết bị

Hóa chất, dụng cụ cần chuẩn

bị

Số lượng

4/12 1

- Lập kế hoạch,

đề cương nghiên cứu

- Chỉ tiêu cảm

quan

7/12 2

- Vi phẫu gân lá

- Vi phẫu phiến lá

- Vi phẫu thân

Dược liệu thô (còn thân,

lá, chưa bị nghiền bột) 20g

Mặt kính đồng hồ (cho 3 mẫu gân, phiến, thân) 6

Đĩa petri 3

Dung dịch đỏ son phèn 50ml Dung dịch cloral hydrat 50ml Dung dịch acid acetic 1% 200ml Dung dịch xanh methylen 50ml

Giấy lọc (thấm nước)

1 tờ + 1 bộ Giấy lọc (lọc dịch) + phễu

lọc Glycerin lên tiêu bản Vừa đủ Kính hiển vi quang học 1

8/12 3

- Định tính

phương pháp B

- Chuẩn bị cho

định tính phương pháp A (buổi 4)

Nắp đậy cốc qua đêm

Cân kỹ thuật 1 Phễu lọc, giấy lọc (hoặc

Bình gạn (50 hoặc 100ml) + bộ để bình gạn 1 Dung dịch amoniac 10% > 10ml

Acid sulfuric 10% > 20ml

Bản mỏng: Silicagel GF254

1 bản kích thước khoảng 6cmx15cm

Ethyl Acetat > 50ml (>30+1)

Máy sấy tóc (để làm khô vết - có thể có hoặc không)

1

Cốc chạy sắc ký + nắp

Giấy thấm (để bão hòa dung môi)

1 tờ (kích thước 20cm x 20cm)

Dung dịch vanilin 1%

trong acid sulfuric đặc Vừa đủ Thước kẻ, bút chì, bút

9/12 4

- Định tính

phương pháp A

- Xác định độ ẩm

Phễu lọc, giấy lọc (hoặc

Thuốc thử Bouchardat Vừa đủ Dung dịch acid picric 1% Vừa đủ

Thước kẻ, bút chì, bút

Chày cối (hoặc kéo để

10/12 5

- Soi bột

- Xác định tạp

chất

- Xác định tỉ lệ

vụn nát

Nước lọc lên tiêu bản

Lam kính, phiến kính 3

Kính hiển vi quang học 1

Đũa thủy tinh/thìa/ nhíp 1

Kính lúp 2

14/12 6

- Hoàn thiện báo

cáo, làm lại thí nghiệm nếu cần 15/12 7 - Hoàn thiện báo

cáo

PHẦN 4: DỰ TRÙ HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ CẦN THIẾT CHO

TỪNG CHỈ TIÊU

4.1 Chỉ tiêu cảm quan (Mô tả)

4.2 Vi phẫu

0 Dược liệu thô (còn thân, lá, chưa bị nghiền bột) 10g

STT Hóa chất, Thiết bị Số lượng

5 Mặt kính đồng hồ (cho 3 mẫu gân, phiến, thân) 6

15 Giấy lọc (thấm nước)

1 tờ + 1 bộ

16 Giấy lọc (lọc dịch) + phễu lọc

4.3 Bột

STT Hóa chất, Thiết bị Số lượng

4.4 Định tính

STT Hóa chất, Thiết bị Số lượng

ống cho PP B)

11 Bình gạn (50 hoặc 100ml) + bộ để bình gạn 1

khoảng 6cmx15cm

STT Hóa chất, Thiết bị Số lượng

28 Máy sấy tóc (để làm khô vết - có thể có hoặc

30 Giấy thấm (để bão hòa dung môi) 1 tờ (kích thước 20cm

x 20cm)

31 Dung dịch vanilin 1% trong acid sulfuric đặc Vừa đủ

4.5 Độ ẩm

4.6 Tạp chất

4.7 Tỷ lệ vụn nát

2 Rây 4mm

TÀI LIỆU THAM KHẢO

1 Dược điển VN IV (2009), chuyên luận Hy Thiêm, NXB Y học

2 Dược điển Trung Quốc (2015), Volume 1, trang 182