PHẦN 1: CÁC CHỈ TIÊU KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU HY THIÊM (DƯỢC ĐIỂN VIỆT NAM IV) 1.1. Chỉ tiêu cảm quan (Mô tả) Cách tiến hành: Quan sát bằng mắt thường, đo đạc bằng các dụng cụ phù hợp. Yêu cầu: Thân rỗng ở giữa, đường kính 0,2 cm đến 0,5 cm. Mặt ngoài thân màu nâu sẫm đến nâu nhạt, có nhiều rãnh dọc song song và nhiều lông ngắn sít nhau. Lá mọc đối, có phiến hình mác rộng, mép khía răng cưa tù, có ba gân chính. Mặt trên lá màu lục sẫm, mặt dưới màu lục nhạt, hai mặt đều có lông. Cụm hoa hình đầu nhỏ, gồm hoa màu vàng hình ống ở giữa, 5 hoa hình lưỡi nhỏ ở phía ngoài. Lá bắc có lông dính. 1.2. Vi phẫu Cách tiến hành: Làm vi phẫu các phần khác nhau của dược liệu thô (gân lá, phiến lá, thân), sau đó quan sát trên kính hiển vi. Yêu cầu: Gân lá: Gân phía trên và dưới đều lồi, mặt dưới lồi to hơn. Biểu bì trên và dưới gồm một hàng tế bào hình trứng nhỏ, xếp liên tục đều đặn, mang lông che chở đa bào, dài, thường có 6 đến 8 tế bào xếp thẳng hàng, vách ngăn giữa các tế bào phình to đặc biệt, các tế bào càng gần đầu lông càng dài và nhỏ dần. Dưới biểu bì là mô dày, cấu tạo bởi các tế bào hình tròn nhỏ, có thành dày ở góc, xếp đều đặn thành 2 đến 3 hàng. Mô mềm gồm những tế bào hình tròn, thành mỏng, kích thước không đều nhau. Trong mô mềm rải rác có những ống tiết gồm 4 tế bào đến 5 tế bào nhỏ xếp thành vòng. Ở giữa gân lá có một bó libegỗ to, hình trứng, có lớp libe hình cung bao phía dưới bó gỗ, bó gỗ cấu tạo bỏi các mạch gỗ tương đối nhỏ xếp thành hàng, tập trung thành đám. Trong gân lá có thể thấy 3 đến 5 bó libegỗ nhỏ hơn, xếp thành hình cung, có cấu tạo tương tự bó libegỗ to.
TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI BỘ MÔN DƯỢC LIỆU ĐỀ CƯƠNG KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU HY THIÊM NHĨM – P1K66 – PHỊNG Thành viên: Lê Thiên Kim – MSV: 1101276 Tráng A Páo – MSV: 1101394 Địa điểm: Phòng thực tập – Bộ môn Dược liệu – Trường ĐH Dược Hà Nội HÀ NỘI, 2015 PHẦN 1: CÁC CHỈ TIÊU KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU HY THIÊM (DƯỢC ĐIỂN VIỆT NAM IV) 1.1 Chỉ tiêu cảm quan (Mô tả) Cách tiến hành: Quan sát mắt thường, đo đạc dụng cụ phù hợp Yêu cầu: Thân rỗng giữa, đường kính 0,2 cm đến 0,5 cm Mặt ngồi thân màu nâu sẫm đến nâu nhạt, có nhiều rãnh dọc song song nhiều lơng ngắn sít Lá mọc đối, có phiến hình mác rộng, mép khía cưa tù, có ba gân Mặt màu lục sẫm, mặt màu lục nhạt, hai mặt có lơng Cụm hoa hình đầu nhỏ, gồm hoa màu vàng hình ống giữa, hoa hình lưỡi nhỏ phía ngồi Lá bắc có lơng dính 1.2 Vi phẫu Cách tiến hành: Làm vi phẫu phần khác dược liệu thô (gân lá, phiến lá, thân), sau quan sát kính hiển vi u cầu: Gân lá: Gân phía lồi, mặt lồi to Biểu bì gồm hàng tế bào hình trứng nhỏ, xếp liên tục đặn, mang lông che chở đa bào, dài, thường có đến tế bào xếp thẳng hàng, vách ngăn tế bào phình to đặc biệt, tế bào gần đầu lông dài nhỏ dần Dưới biểu bì mơ dày, cấu tạo tế bào hình trịn nhỏ, có thành dày góc, xếp đặn thành đến hàng Mơ mềm gồm tế bào hình trịn, thành mỏng, kích thước khơng Trong mơ mềm rải rác có ống tiết gồm tế bào đến tế bào nhỏ xếp thành vịng Ở gân có bó libe-gỗ to, hình trứng, có lớp libe hình cung bao phía bó gỗ, bó gỗ cấu tạo bỏi mạch gỗ tương đối nhỏ xếp thành hàng, tập trung thành đám Trong gân thấy đến bó libe-gỗ nhỏ hơn, xếp thành hình cung, có cấu tạo tương tự bó libe-gỗ to Phiến lá: Biểu bì cấu tạo hàng tế bào hình chữ nhật nhỏ, tế bào biểu bì có kích thước lớn hơn, mang lông che chở đa bào cấu tạo tương tự phần gân Mô giậu hàng tế bào hình chữ nhật to, xếp sít thẳng góc với biểu bì Mơ khuyết tế bào thành mỏng, có kích thước khơng Giữa phiến có số bó libe-gỗ hình trứng nhỏ gân phụ Thân: Biểu bì gồm hàng tế bào nhỏ, hình trứng, xếp đặn liên tục, mang lông che chở đa bào cấu tạo tương tự gân Mô dày gồm đến hàng tế bào, có thành dày phát triển góc Mơ mềm vỏ gồm tế bào hình trịn, thành mỏng kích thước khơng Trong mơ mềm vỏ, sát với bó libe-gỗ có bó sợi lớn, xếp thành vòng liên tục gián đoạn, bao lấy bó libe-gỗ Ứng với bó sợi bó libe-gỗ hình trứng, tương đối to xếp thành vịng liên tục Trong bó libe-gỗ có libe hình bán nguyệt bó sợi bao gần hết Gỗ cấu tạo mạch gỗ to, xếp thành hàng, tập trung tạo thành bó Trong mơ mềm ruột gồm tế bào to, hình trịn, thành mỏng, rải rác thấy số ống tiết cấu tạo tương tự phần gân 1.3 Bột Cách tiến hành: Nghiền dược liệu (đã làm khơ), làm tiêu bột tồn phần, quan sát kính hiển vi Yêu cầu: Màu lục xám Soi kính hiển vi thấy: Lơng che chở đa bào, dài, thường có tế bào đến tế bào xếp thành hàng, vách ngăn tế bào phình to đặc biệt, tế bào gần đầu lông càng dài nhỏ dần Hai loại lông tiết: loại đầu hình cầu đa bào, chân đơn bào loại đầu hình cầu đơn bào, chân đa bào Mảnh biểu bì mang lỗ khí Mảnh mơ mềm thân (tế bào hình chữ nhật), mơ mềm (tế bào trong) Sợi đứng riêng lẻ tập trung thành bó, tế bào sợi ngắn nhỏ, khoang rộng Hạt phấn hoa hình cầu gai tương đối to, gai thưa nhọn, bề mặt có lỗ rãnh, đường kính khoảng 33 μm đến 35 μm, màu vàng nhạt Mảnh cánh hoa gồm tế bào màu vàng nhạt, thành mỏng Mảnh mạch vạch, mạch mạng 1.4 Định tính Cách tiến hành: A Lấy g dược liệu tán nhỏ Thêm ml dung dịch amoniac 10% (TT), trộn cho thấm Thêm 20 ml cloroform (TT) Lắc, để yên Lọc vào bình gạn Thêm 10 ml dung dịch acid sulfuric 10% (TT) Lắc kỹ để yên cho dung dịch tách thành lớp Gạn lấy lớp dung dịch acid phía cho vào ống nghiệm để làm phản ứng sau: Ống nghiệm 1: Thêm giọt thuốc thử Mayer (TT) cho tủa trắng Ống nghiệm 2: Thêm giọt thuốc thử Bouchardat (TT) cho tủa nâu Ống nghiệm 3: Thêm giọt dung dịch acid picric 1% (TT), cho tủa vàng B Phương pháp sắc ký lớp mỏng Bản mỏng: Silicagel G Dung môi triển khai: Toluen – ethyl acetat – aceton – acid formic (15: 2: 2: 1) Dung dịch thử: Lấy g bột dược liệu, thêm 30 ml ethyl acetat (TT), lắc siêu âm 30 phút, lọc Cô dịch lọc cách thủy đến cạn Hòa cắn ml ethanol 96% (TT) dung dịch thử Dung dịch đối chiếu: Lấy g Hy thiêm (mẫu chuẩn) nghiền nhỏ, tiến hành chiết dung dịch thử Cách tiến hành: Chấm riêng biệt lên mỏng 20 µl dung dịch Triển khai sắc ký dung môi đựợc khoảng 12 - 13 cm, lấy mỏng ra, để khơ nhiệt độ phịng, phun dung dịch vanilin 1% acid sulfuric đặc (TT), sấy mỏng 120 0C đến rõ vết Yêu cầu: - Phương pháp A: Dược liệu có phản ứng dương tính - Phương pháp B: Trên sắc ký đồ, dung dịch thử phải có vết màu sắc giá trị Rf với vết dung dịch đối chiếu 1.5 Độ ẩm Cách tiến hành: Tiến hành sấy tủ sấy áp suất thường Dược liệu phải làm thành mảnh nhỏ đường kính khơng q mm; chiều dày lớp mẫu thử đem sấy mm (không 10 mm dược liệu có cấu tạo xốp) - Lượng đem sấy: g - Nhiệt độ: 100 0C, - Chênh lệch lần cân < 5mg Yêu cầu: Độ ẩm: Không 12% 1.6 Tạp chất Cách tiến hành: Cân lượng mẫu ~50g, dàn mỏng tờ giấy, quan sát mắt thường kính lúp, cần dùng rây để phân tách tạp chất dược liệu Cân phần tạp chất tính phần trăm sau: x% Yêu cầu: a 100 p Trong đó: a khối lượng tạp chất tính gam; p khối lượng mẫu thử tính gam Ghi chú: Trong số trường hợp tạp chất giống với thuốc, phải làm phản ứng định tính hố học, phương pháp vật lý dùng kính hiển vi để phát tạp chất Tỷ lệ tạp chất tính bao gồm tạp chất phát phương pháp Tạp chất khác: Không 1% (Tạp chất lẫn dược liệu bao gồm tất chất quy định dược liệu như: Đất, đá, rơm rạ, cỏ khác, phận khác không quy định làm dược liệu, xác côn trùng ) Tỷ lệ dược liệu: Khơng 40% 1.7 Tỷ lệ vụn nát Cách tiến hành: Cân lượng dược liệu định (p gam) loại tạp chất Rây qua rây có số quy định theo chuyên luận riêng Cân tồn phần lọt qua rây (a gam) Tính tỷ lệ vụn nát (X%) (từ kết trung bình ba lần thực hiện) theo công thức: Ghi chú: Lượng dược liệu lấy để thử (tuỳ theo chất dược liệu) từ 100 đến 200 g Đối với dược liệu mỏng manh lắc nhẹ, tránh làm vụn nát thêm Phần bụi bột vụn không phân biệt mắt thường tính vào mục tạp chất ) u cầu: Qua rây có kích thước mắt rây mm: Không 5% PHẦN 2: SẮP XẾP CÔNG VIỆC CÁC BUỔI THỰC TẬP Ngày Buổi 4/12 Nội dung Lập kế hoạch, đề cương nghiên cứu Chỉ tiêu cảm quan Vi phẫu gân 7/12 Vi phẫu phiến Vi phẫu thân 8/12 9/12 Định tính phương pháp B Chuẩn bị cho định tính phương pháp A (buổi 4) Định tính phương pháp A Xác định độ ẩm Soi bột Xác định tạp chất 10/12 14/12 Hoàn thiện báo cáo, làm lại thí nghiệm cần 15/12 Hồn thiện báo cáo Xác định tỉ lệ vụn nát PHẦN 3: DỰ TRÙ HÓA CHẤT THIẾT BỊ CHO TỪNG BUỔI PHẦN 3: DỰ TRÙ HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ CHO TỪNG BUỔI Nội dung Ngày Buổi Hóa chất, thiết bị Hóa chất, dụng cụ cần chuẩn Số lượng bị - Lập kế hoạch, đề cương nghiên cứu - Chỉ tiêu cảm Dược liệu 10g Thước chia mm Kính lúp Kính soi Đĩa petri Nước … Giẻ lau Kim mũi mác Chổi lông Dao lam Cốc có mỏ quan 4/12 - Vi phẫu gân - Vi phẫu phiến - Vi phẫu thân Dược liệu thơ (cịn thân, lá, chưa bị nghiền bột) Cốc có mỏ Nước cất 7/12 20g (~1000ml) Bể cách thủy Dao lam Mặt kính đồng hồ (cho mẫu gân, phiến, thân) 6 Đĩa petri Chổi lông Kim mũi mác Dung dịch đỏ son phèn 50ml Dung dịch cloral hydrat 50ml Dung dịch acid acetic 1% 200ml Dung dịch xanh methylen 50ml Lá kính 12 Phiến kính 12 Giấy lọc (thấm nước) Giấy lọc (lọc dịch) + phễu tờ + lọc Glycerin lên tiêu Kính hiển vi quang học - Định tính phương pháp B - Chuẩn bị cho định tính phương pháp A (buổi 4) 8/12 Vừa đủ Dược liệu thô 100g Hy thiêm chuẩn 10g Tủ sấy Đĩa petri Chày + cối Cốc có mỏ Nắp đậy cốc qua đêm (hoặc màng bọc) Ống nghiệm nhỏ Cân kỹ thuật Phễu lọc, giấy lọc (hoặc bơng) Đũa thủy tinh Bình gạn (50 100ml) + để bình gạn 1 1 Dung dịch amoniac 10% > 10ml Cloroform > 50ml Acid sulfuric 10% > 20ml Bản mỏng: Silicagel GF254 Toluen Ethyl Acetat kích thước khoảng 6cmx15cm > 20ml > 50ml (>30+1) Aceton > 10ml Acid Formic > 5ml Bình lắc siêu âm Bể cách thủy Tủ hút Ethanol 96% Mao quản > 50ml Máy sấy tóc (để làm khơ vết - có khơng) Cốc chạy sắc ký + nắp cốc Giấy thấm (để bão hịa dung mơi) Dung dịch vanilin 1% acid sulfuric đặc Thước kẻ, bút chì, bút đánh dấu - Định tính phương pháp A - 9/12 Xác định độ ẩm Dược liệu thô tờ (kích thước 20cm x 20cm) Vừa đủ … 50g Tủ sấy Đĩa petri Chày + cối Cốc có mỏ Ống nghiệm nhỏ Cân kỹ thuật Phễu lọc, giấy lọc (hoặc bông) Đũa thủy tinh Thuốc thử Mayer Vừa đủ Thuốc thử Bouchardat Vừa đủ Dung dịch acid picric 1% Vừa đủ Tủ hút Thước kẻ, bút chì, bút đánh dấu … Chày cối (hoặc kéo để chia nhỏ) Đũa thủy tinh/thìa Giấy cân - Soi bột - Xác định tạp chất - Xác định tỉ lệ Vừa đủ Cân phân tích Bình hút ẩm Nhiệt kế (nếu cần) Dược liệu 300g Cốc có mỏ Đĩa petri Tủ sấy Bộ chày cối Rây (~0,25mm) Nước lọc lên tiêu vụn nát Giấy thấm nước 10/12 Vừa đủ Lam kính, phiến kính Kim mũi mác Kính hiển vi quang học Rây 4mm Rây tách tạp chất Đũa thủy tinh/thìa/ nhíp Giấy trắng Cân kỹ thuật Vừa đủ 10 Kính lúp 14/12 Hồn thiện báo cáo, làm lại thí nghiệm cần 15/12 - Hồn thiện báo cáo 11 PHẦN 4: DỰ TRÙ HÓA CHẤT, TRANG THIẾT BỊ CẦN THIẾT CHO TỪNG CHỈ TIÊU 4.1 Chỉ tiêu cảm quan (Mơ tả) Hóa chất, Thiết bị STT Số lượng Dược liệu Thước chia mm Kính lúp Kính soi Đĩa petri Nước … Giẻ lau Kim mũi mác Chổi lông Dao lam 10 Cốc có mỏ 4.2 10g Vi phẫu STT Hóa chất, Thiết bị Số lượng Dược liệu thơ (cịn thân, lá, chưa bị nghiền bột) 10g Cốc có mỏ Nước cất (~1000ml) 12 Hóa chất, Thiết bị STT Số lượng Bể cách thủy Dao lam Mặt kính đồng hồ (cho mẫu gân, phiến, thân) 6 Đĩa petri Chổi lông Kim mũi mác Dung dịch đỏ son phèn 30ml 10 Dung dịch cloral hydrat 50ml 11 Dung dịch acid acetic 1% 150ml 12 Dung dịch xanh methylen 20ml 13 Lá kính 12 14 Phiến kính 12 15 Giấy lọc (thấm nước) 16 Giấy lọc (lọc dịch) + phễu lọc 17 Glycerin lên tiêu 18 Kính hiển vi quang học 4.3 tờ + Vừa đủ Bột Hóa chất, Thiết bị STT Số lượng Dược liệu 5g Cốc có mỏ 13 Hóa chất, Thiết bị STT Số lượng Đĩa petri Tủ sấy Bộ chày cối Rây (~0,25mm) Nước lọc lên tiêu Giấy thấm nước Lam kính, phiến kính Kim mũi mác 10 Kính hiển vi quang học 4.4 Vừa đủ Định tính Hóa chất, Thiết bị STT Số lượng Dược liệu thô 10g Hy thiêm chuẩn 10g Tủ sấy Đĩa petri Chày + cối Cốc có mỏ Nắp đậy cốc qua đêm (hoặc màng bọc) 14 Hóa chất, Thiết bị STT Số lượng (3 ống cho PP A, Ống nghiệm nhỏ Cân kỹ thuật Phễu lọc, giấy lọc (hoặc bơng) 10 Đũa thủy tinh 11 Bình gạn (50 100ml) + để bình gạn 12 Dung dịch amoniac 10% > 2ml 13 Cloroform > 20ml 14 Acid sulfuric 10% > 10ml 15 Thuốc thử Mayer Vừa đủ 16 Thuốc thử Bouchardat Vừa đủ 17 Dung dịch acid picric 1% Vừa đủ 18 Bản mỏng: Silicagel GF254 19 Toluen 20 Ethyl Acetat 21 Aceton 22 Acid Formic 23 Bình lắc siêu âm 24 Bể cách thủy 25 Tủ hút 26 Ethanol 96% ống cho PP B) 1 kích thước khoảng 6cmx15cm > 7,5ml > 31ml (30+1) > 1ml > 0,5ml > 10ml 15 Hóa chất, Thiết bị STT 27 28 Mao quản Máy sấy tóc (để làm khơ vết - có khơng) 29 Cốc chạy sắc ký + nắp cốc 30 Giấy thấm (để bão hịa dung mơi) 31 Dung dịch vanilin 1% acid sulfuric đặc 32 Thước kẻ, bút chì, bút đánh dấu 4.5 Số lượng 1 tờ (kích thước 20cm x 20cm) Vừa đủ … Độ ẩm Hóa chất, Thiết bị STT Số lượng Dược liệu Chày cối (hoặc kéo để chia nhỏ) Đũa thủy tinh/thìa Đĩa petri Giấy cân Vừa đủ Cân phân tích Tủ sấy Bình hút ẩm Nhiệt kế (nếu cần) 5g (2g) 16 Tạp chất 4.6 Hóa chất, Thiết bị STT Số lượng Dược liệu Rây Đũa thủy tinh/thìa/ nhíp Đĩa petri Giấy trắng Cân kỹ thuật Kính lúp 4.7 ~ 50g Vừa đủ Tỷ lệ vụn nát Hóa chất, Thiết bị STT Dược liệu Đũa thủy tinh/thìa Rây 4mm Đĩa petri Giấy trắng Cân kỹ thuật Số lượng ~ 100g 1 Vừa đủ 17 18 TÀI LIỆU THAM KHẢO Dược điển VN IV (2009), chuyên luận Hy Thiêm, NXB Y học Dược điển Trung Quốc (2015), Volume 1, trang 182 19 ... Không 1% (Tạp chất lẫn dược liệu bao gồm tất chất quy định dược liệu như: Đất, đá, rơm rạ, cỏ khác, phận khác không quy định làm dược liệu, xác côn trùng ) Tỷ lệ dược liệu: Khơng 40% 1.7 Tỷ lệ...PHẦN 1: CÁC CHỈ TIÊU KIỂM NGHIỆM DƯỢC LIỆU HY THIÊM (DƯỢC ĐIỂN VIỆT NAM IV) 1.1 Chỉ tiêu cảm quan (Mô tả) Cách tiến hành: Quan sát mắt... trung bình ba lần thực hiện) theo công thức: Ghi chú: Lượng dược liệu lấy để thử (tuỳ theo chất dược liệu) từ 100 đến 200 g Đối với dược liệu mỏng manh lắc nhẹ, tránh làm vụn nát thêm Phần bụi bột