Nghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ người (Luận án tiến sĩ)

Nghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ ngườiNghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ ngườiNghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ ngườiNghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ ngườiNghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ ngườiNghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ ngườiNghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ ngườiNghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ ngườiNghiên cứu sự phân bố và tác dụng kháng ung thư của kháng thể đơn dòng Nimotuzumab gắn 131I trên chuột mang khối ung thư đầu cổ người

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN THỊ KIM HƢƠNG NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ VÀ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƢ CỦA KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG NIMOTUZUMAB GẮN 131I TRÊN CHUỘT MANG KHỐI UNG THƢ ĐẦU CỔ NGƢỜI LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC HÀ NỘI - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN THỊ KIM HƢƠNG NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ VÀ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƢ CỦA KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG NIMOTUZUMAB GẮN 131I TRÊN CHUỘT MANG KHỐI UNG THƢ ĐẦU CỔ NGƢỜI Chuy n ng nh: KHOA HỌC Y SINH M số: 9720101 LUẬN ÁN TIẾN SĨ Y HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS TS PHẠM HUY QUYẾN PGS TS HỒ ANH SƠN HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn Ban Giám đốc Học viện Quân y; Phòng Sau đại học - Học viện Quân y; Trung tâm Y dược học quân - Học viện Quân y; Trung tâm ung bướu, khoa Giải phẫu bệnh - Bệnh viện Quân y 103; Phòng thí nghiệm trọng điểm Gen-Protein Đại học khoa học tự nhiên, Đại học quốc gia Hà Nội; Bộ môn Sinh lý bệnh - Học viện Quân y, sở đào tạo tạo điều kiện giúp đỡ để tơi hồn thành luận án Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới: - PGS.TS Phạm Huy Quyến PGS.TS Hồ Anh Sơn, người Thầy hướng dẫn trực tiếp, hết lòng giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình thực luận án, đồng thời người Thầy định hướng truyền cho tơi lịng say mê kinh nghiệm quý báu nghiên cứu khoa học - PGS.TS Nguyễn Lĩnh Tồn, ngun chủ nhiệm mơn Sinh lý bệnh Học viện Quân y tận tình giúp đỡ tạo điều kiện cho trình học tập thu thập số liệu mơn để tơi hồn thành luận án in chân thành cảm ơn thầy cô hội đồng chấm luận án cho tơi đóng góp quý báu để hoàn ch nh luận án in chân thành cảm ơn bạn bè đồng nghiệp giúp đỡ, động viên suốt q trình học tập hồn thành luận án Cuối tơi xin bày tỏ lịng biết ơn bố mẹ đặc biệt chồng hai chỗ dựa vững tôi, thương yêu, khuyến khích, động viên tạo điều kiện tốt tình cảm, tinh thần cho tơi để hồn thành tốt chương trình học tập thực thành công luận án Hà Nội, tháng 09 năm 2018 Tác giả Nguyễn Thị Kim Hƣơng LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan l cơng trình nghi n cứu với hướng dẫn khoa học cán hướng dẫn Các kết nêu luận án trung thực v công bố phần báo khoa học Luận án chưa cơng bố Nếu có điều sai tơi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm Tác giả Nguyễn Thị Kim Hƣơng MỤC LỤC Trang LỜI CAM ĐOAN MỤC LỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC BẢNG DANH MỤC CÁC BIỂU ĐỒ DANH MỤC CÁC HÌNH -ẢNH ĐẶT VẤN ĐỀ Chƣơng 1 TỔNG QUAN 1.1 Dịch tễ học ung thƣ đầu cổ 1.1.1 Trên giới 1.1.2 Tại Việt Nam 1.2 Các yếu tố nguy chế bệnh sinh 1.2.1 Vai trò thuốc ung thư đầu cổ 1.2.2 Vai trò rượu ung thư đầu cổ 1.2.3 Vai trò Humanpapilloma virus ung thư đầu cổ 1.2.4 Vai trò Epstein Barr virus ung thư đầu cổ 1.3 Yếu tố thụ thể tăng trƣởng biểu bì 11 1.3.1 Cấu trúc thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì 11 1.3.2 Vai trò thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì truyền tín hiệu tế bào 12 1.3.3 Thụ thể yếu tố tăng trưởng biểu bì ung thư 15 1.4 Kháng thể đơn dịng gắn đồng vị phóng xạ điều trị ung thƣ 18 1.4.1 Kháng thể đơn dòng 18 1.4.2 Đồng vị phóng xạ 20 1.4.3 Kháng thể đơn dịng (nimotuzumab) gắn đồng vị phóng xạ (131I) điều trị ung thư 1.5 21 Sử dụng mơ hình chuột thiếu hụt miễn dịch tạo ứng dụng thử nghiệm điều trị khối ung thƣ ngƣời 1.5.1 Các dòng chuột thiếu hụt miễn dịch sử dụng cho nghiên cứu tạo khối u người thực nghiệm 1.5.2 24 29 Tạo khối ung thư có nguồn gốc từ người lên chuột thiếu hụt miễn dịch 31 Chƣơng ĐỐI TƢỢNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 33 2.1 Đối tƣợng - vật liệu - thời gian nghiên cứu 33 2.1.1 Đối tượng nghiên cứu 33 2.1.2 Vật liệu - phương tiện nghiên cứu 33 2.1.3 Địa điểm, thời gian nghiên cứu 34 2.2 Phƣơng pháp nghiên cứu 35 2.2.1 Thiết kế nghiên cứu 35 2.2.2 Nội dung nghiên cứu 35 2.2.3 Các kỹ thuật sử dụng nghiên cứu 37 2.3 Xử lý số liệu 51 2.4 Đạo đức nghiên cứu động vật 52 2.5 Sơ đồ nghiên cứu 52 Chƣơng KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU 53 3.1 Đánh giá tác dụng ức chế tế bào Hep-2 Nimotuzumab 131I-nimotuzumab in vitro… 53 3.1.1 Kết nuôi cấy tế b o Hep-2 53 3.1.2 Kết đánh giá tác dụng kháng ung thư Nimotuzumab 131 I-Nimotuzumab dòng tế b o Hep-2………………………………………………………………………… 54 3.1.3 Kết đánh giá tác dụng gây chết tế b o theo chương trình thử nghiệm apoptosis tr n dịng tế b o Hep-2 với 56 phức hợp 131I-Nimotuzumab, Nimotuzumab 131I 3.2 Đánh giá phân bố 131I-nimotuzumab chuột 3.2.1 Kết tạo mơ hình chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thư biểu mô vảy đầu cổ người dòng Hep-2 3.2.2 Kết phân bố sinh học 131 59 I-nimotuzumab mô/cơ quan chuột 3.2.3 59 Kết phân bố to n thân chuột phức hợp 131 I- 60 65 nimotuzumab chụp xạ hình SPECT …………… 3.3 Kết tác dụng kháng ung thƣ phức hợp 131 I- nimotuzumab thể động vật mang ung thƣ 70 3.3.1 Đánh giá phát triển khối u sau điều trị 71 3.3.2 Đánh giá khối lượng chuột thí nghiệm sau điều trị 77 3.3.3 Thời gian sống trung bình nhóm chuột điều trị 78 Chƣơng BÀN LUẬN 81 4.1 Tác dụng kháng tế bào Hep-2 131 I- 82 Nimotuzumab in vitro……………………………… 4.1.1 Lựa chọn kháng thể đơn dịng Nimotuzumab v đồng 82 vị phóng xạ 131I tạo th nh phức hợp để điều trị …… 4.1.2 Phức hợp 131 I-Nimotuzumab có tác dụng ức chế tế 87 bào Hep-2 in vitro…………………………………… 4.1.2.1 Khả ức chế tế bào Hep-2 qua thử nghiệm MT 87 4.1.2.2 Bước đầu xác định chế gây chết tế bào Hep-2 theo 88 đường apoptosis………………………………… 4.2 Sự phân bố phức hợp 131 I-nimotuzumab mơ hình chuột mang khối ung thƣ biểu mơ tế bào vảy đầu cổ ngƣời dịng Hep-2…………………… 90 4.2.1 4.2.2 Tế b o ung thư biểu mơ tế b o vảy đầu cổ người dịng Hep-2 ………………………………………… 90 Tạo khối ung thư biểu mô tế bào vảy đầu cổ người 91 dòng Hep-2 chuột thiếu hụt miễn dịch ………… 4.2.3 Phân bố sinh học phức hợp 131 I-Nimotuzumab 95 tr n thể chuột thí nghiệm ……………………… 4.3.2.1 Phân bố sinh học 131 I-Nimotuzumab tạng 96 chuột thí nghiệm …………………………………… 4.2.3.2 Sử dụng SPECT đánh giá phân bố sinh học 131 I- 97 Nimotuzumab chuột mang khối ung thư đầu cổ người 4.3 Hiệu điều trị 131 I-nimotuzumab mơ 100 hình chuột thiếu hụt miễn dịch mang khối ung thƣ biểu mô vảy đầu cổ ngƣời…………………… 4.3.1 131 Phức hợp I-nimotuzumab có tác dụng hạn chế 100 phát triển khối ung thư biểu mô vảy đầu cổ người 4.3.2 Phức hợp 131 I-nimotuzumab có tác dụng kéo dài thời 105 gian sống chuột mang khối ung thư biểu mô vảy đầu cổ người ………………………………………… KẾT LUẬN 107 KIẾN NGHỊ 109 DANH MỤC CÁC CƠNG TRÌNH NGHIÊN CỨU CỦA TÁC GIẢ ĐÃ CƠNG BỐ CĨ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC 110 111 CHỮ VIẾT TẮT STT Phần Phần viết đầy đủ viết tắt ADN Acid Deoxyribonucleic EBV Epstein Barr virus EGF Epidermal growth factor (Yếu tố tăng trưởng biểu bì) EGFR Epidermal growth factor receptor Thụ thể Yếu tố tăng trưởng biểu bì HE 11 HNSCC Hematoxylin Eosin Head and neck squamous cell carcinoma Ung thư biểu mô tế bào vảy đầu cổ HPV Human Papilloma Virus mAbs Monoclonal antibodies (Kháng thể đơn dòng) 10 mRNA messenger RNA MTT NK-κB 15 PS Phosphatidyl serine 16 RIT Radioimmunotherapy (Miễn dịch xạ trị) 17 SPECT (3-[4,5- Dimethylthiazol-2-yl]-2,5- diphenyltetrazolium bromide) Nuclear factor kappa B Single Photon Emission Computed Tomography Chụp cắt lớp phát xạ đơn photon 13 TGF- Transforming growth factor alpha Yếu tố tăng trưởng chuyển hóa alpha 12 TNF Tumor necrosis factor alpha Yếu tố hoại tử khối u alpha 14 VGFR Vascular endothelial growth factor Yếu tố tăng trưởng nội mô mạch máu DANH MỤC BẢNG Bảng Tên bảng Trang 1.1 Số ước tính ca ung thư nam nữ, tỉ lệ mắc thô tỉ lệ mắc chuẩn hóa theo tuổi 100.000 dân 3.1 Kết tỷ lệ % ức chế tế b o Hep-2 thời điểm 48 tác dụng 131I-Nimotuzumab, Nimotuzumab 54 3.2 Trung bình hiệu suất gắn 131I với nimotuzumab 60 3.3 So sánh phân bố 131I-nimotuzumab u so với máu thời điểm 24 sau ti m 61 3.4 So sánh phân bố 131I-nimotuzumab u so với mô v quan chuột thời điểm 24 sau tiêm 61 3.5 So sánh phân bố 131I-nimotuzumab u so với máu thời điểm 48 sau ti m 62 3.6 So sánh phân bố 131I-nimotuzumab u so với mô v quan chuột thời điểm 48 sau ti m 63 3.7 So sánh phân bố 131I-nimotuzumab u so với máu thời điểm 72 sau ti m 63 3.8 So sánh phân bố 131I-nimotuzumab u so với mô v quan chuột thời điểm 72 sau tiêm 64 3.9 So sánh tỷ lệ % số đếm xung gamma mô - quan so với máu tr n nhóm chuột thí nghiệm 65 3.10 So sánh hoạt độ phóng xạ chụp SPECT vùng đầu cổ v khối u chuột thí nghiệm sau 24 ti m 131Inimotuzumab 67 ... DỤC VÀ ĐÀO TẠO BỘ QUỐC PHÒNG HỌC VIỆN QUÂN Y NGUYỄN THỊ KIM HƢƠNG NGHIÊN CỨU SỰ PHÂN BỐ VÀ TÁC DỤNG KHÁNG UNG THƢ CỦA KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG NIMOTUZUMAB GẮN 131I TRÊN CHUỘT MANG KHỐI UNG THƢ ĐẦU CỔ... Phức hợp I -nimotuzumab có tác dụng hạn chế 100 phát triển khối ung thư biểu mô vảy đầu cổ người 4.3.2 Phức hợp 131 I -nimotuzumab có tác dụng kéo dài thời 105 gian sống chuột mang khối ung thư biểu... Tế b o ung thư biểu mô tế b o vảy đầu cổ người dòng Hep-2 ………………………………………… 90 Tạo khối ung thư biểu mô tế bào vảy đầu cổ người 91 dòng Hep-2 chuột thiếu hụt miễn dịch ………… 4.2.3 Phân bố sinh