ĐIỀU TRA SỰ LƯU HÀNH CỦA VI RÚT CÚM TÝP A VÀ PHÂN TÝP H5 TRÊN VỊT VÀ NGAN CHƯA TIÊM PHÒNG VẮC XIN CÚM TẠI 3 TỈNH BẠC LIÊU, CẦN THƠ VÀ SÓC TRĂNG Họ

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐIỀU TRA SỰ LƯU HÀNH CỦA VI RÚT CÚM TÝP A VÀ PHÂN TÝP H5 TRÊN VỊT VÀ NGAN CHƯA TIÊM PHÒNG VẮC XIN CÚM TẠI TỈNH BẠC LIÊU, CẦN THƠ VÀ SÓC TRĂNG Họ tên sinh viên : HÀ TẤN AN Ngành : Thú Y Lớp : Thú Y 03 Sóc Trăng Niên khóa : 2003 - 2008 Tháng 6/2009 ĐIỀU TRA SỰ LƯU HÀNH CỦA VI RÚT CÚM TÝP A VÀ PHÂN TÝP H5 TRÊN VỊT VÀ NGAN CHƯA TIÊM PHÒNG VẮC XIN CÚM TẠI TỈNH BẠC LIÊU, CẦN THƠ VÀ SÓC TRĂNG Tác giả HÀ TẤN AN Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Bác Sỹ ngành Thú Y Giáo viên hướng dẫn TS LÊ ANH PHỤNG Tháng năm 2009 i LỜI CẢM ƠN Chân thành cảm ơn Ban giám hiệu trường Đại Học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, q Thầy, Cơ khoa Chăn Ni Thú Y tận tình dạy dỗ, truyền đạt kiến thức, kinh nghệm quý báo cho suốt thời gian học tập Thầy: Lê Anh Phụng hết lòng giúp đỡ, tận tình dẫn tơi suốt thời gian thực đề tài tốt nghiệp hồn thành khóa luận tốt nghiệp TS.Nguyễn Bá Thành, Ths.Trương Thị Kim Dung tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tơi suốt thời gian thực đề tài Xin cảm ơn Ban lãnh đạo Cơ Quan Thú Y Vùng Cần Thơ, cơ, chú, anh, chị tận tình giúp đỡ tơi suốt thời gian thực tập Gia đình bạn lớp thú y 03 Sóc Trăng giúp đỡ, hỗ trợ lúc thực tập tốt nghiệp HÀ TẤN AN ii TÓM TẮT KHÓA LUẬN Đề tài: “Điều tra lưu hành vi rút cúm týp A phân týp H5 vịt ngan chưa tiêm phòng vắc xin cúm tỉnh Bạc Liêu, Cần Thơ Sóc Trăng” thực từ tháng 08 đến tháng 12/2008 Qua điều tra tình hình chăn ni tình hình bệnh cúm xảy gia cầm, xét nghiệm 1040 mẫu swab vịt ngan (208 mẫu xét nghiệm) kỹ thuật Real time RT – PCR (phát týp A phân týp H5 vi rút cúm gia cầm), kết cho thấy: - Tổng số gia cầm tỉnh năm 2008 7.389.290 Trong vịt chiếm đa số (60,66%), kế gà (37,45%) thấp ngan (1,89%) - Trong năm 2008 tỉnh Bạc Liêu không xảy dịch cúm gia cầm Thành phố Cần Thơ xảy ổ dịch cúm gia cầm Tỉnh Sóc Trăng xảy 11 ổ dịch cúm gia cầm (tất ổ dịch xảy đàn gia cầm chưa tiêm phòng vắc xin cúm gia cầm) - Trên vịt ngan (vịt, ngan) tỷ lệ nhiễm týp A vi rút cúm gia cầm địa bàn khảo sát 39,90% tỷ lệ nhiễm phân týp H5 12,89% Tỷ lệ nhiễm týp A vịt ngan Bạc Liêu cao (61,11%), Sóc Trăng (32,35%) thấp Cần Thơ (20,24%) Tỷ lệ nhiễm phân týp H5 vịt ngan Sóc Trăng cao (29,41%), Bạc Liêu (17,78%) thấp Cần Thơ (1,19%) - Tỷ lệ nhiễm týp A phân týp H5 vi rút cúm gia cầm loài vịt (44,63% 13,56%) cao loài ngan (12,90% 9,68%) - Tỷ lệ nhiễm týp A vi rút cúm gia cầm không khác biệt theo lứa tuổi vịt (P > 0,05) Phân týp H5 vi rút cúm gia cầm phát vịt tháng tuổi - Tỷ lệ nhiễm týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan chợ bán vịt ngan sống (55% 27,5%) cao so với vịt ngan hộ nuôi vịt ngan (36,31% 9,52%) iii MỤC LỤC Trang TRANG TỰA .i LỜI CẢM ƠN .ii TÓM TẮT KHÓA LUẬN iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT .vii DANH SÁCH CÁC BẢNG viii DANH SÁCH CÁC HÌNH ix DANH SÁCH CÁC BIỂU ĐỒ x Chương MỞ ĐẦU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ .1 1.2 MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU 1.2.1 Mục đích 1.2.2 Yêu cầu .2 Chương TỔNG QUAN 2.1 LỊCH SỬ BỆNH CGC 2.2 CĂN NGUYÊN GÂY BỆNH 2.2.1 Phân loại vi rút 2.2.2 Hình thái cấu tạo 2.2.3 Đặc tính kháng nguyên 2.2.4 Cách sinh sản trình nhân lên vi rút cúm .6 2.2.4.1 Cách sinh sản 2.2.4.2 Quá trình nhân lên vi rút cúm 2.2.5 Khả tồn sức đề kháng vi rút CGC .7 2.3 TÌNH HÌNH BỆNH CGC 2.3.1 Tình hình bệnh CGC giới .7 2.3.2 Tình hình bệnh CGC Việt Nam từ tháng 12/2003 đến .8 2.3.3 Tình hình bệnh CGC tỉnh ĐBSCL năm 2008 .9 2.4 DỊCH TỂ BỆNH CGC 2.4.1 Mùa phát bệnh iv 2.4.2 Loài cảm thụ .10 2.4.3 Chất có mầm bệnh 10 2.4.4 Đường xâm nhập phương thức truyền lây bệnh CGC .10 2.4.5 Cơ chế sinh bệnh .11 2.5 TRIỆU CHỨNG VÀ BỆNH TÍCH 11 2.5.1 Triệu chứng .11 2.5.2 Bệnh tích 11 2.6 CHẨN ĐOÁN BỆNH CGC 12 2.7 PHƯƠNG PHÁP PCR (Polymerase chain reaction) 12 2.7.1 Nguyên tắc chung PCR .12 2.7.2 Phản ứng RT – PCR (Reverse Transcription – Polymerase Chain Reaction) .13 2.7.3 Kỹ thuật Real Time RT - PCR 15 2.7.4 Ứng dụng phương pháp sinh học phân tử (PCR, RT – PCR, rRT – PCR) 16 2.8 MỘT SỐ CƠNG TRÌNH CĨ LIÊN QUAN 17 Chương NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM .18 3.2 VẬT LIỆU NGHIÊN CỨU 18 3.2.1 Mẫu xét nghiệm 18 3.2.2 Thiết bị dụng cụ dùng nghiên cứu .18 3.2.3 Dung dịch hóa chất dùng nghiên cứu 18 3.3 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 19 3.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 19 3.4.1 Phương pháp điều tra tình hình chăn ni, dịch bệnh cúm gia cầm 19 3.4.2 Phương pháp lấy mẫu swab bảo quản mẫu 19 3.4.3 Bố trí mẫu xét nghiệm .20 3.4.4 Phương pháp xét nghiệm 21 3.4.4.1 Qui trình xét nghiệm tổng quát .21 3.4.4.2 Xử lý mẫu swab .21 3.4.4.3 Qui trình chiết tách RNA mẫu xét nghiệm 22 3.4.4.4 Thực phản ứng rRT - PCR 23 3.5 CÁC CHỈ TIÊU THEO DÕI 26 v 3.6 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 27 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .28 4.1 TÌNH HÌNH CHĂN NI VÀ DỊCH BỆNH CÚM XẢY RA TRÊN GIA CẦM Ở BẠC LIÊU, CẦN THƠ VÀ SÓC TRĂNG TRONG NĂM 2008 28 4.1.1 Tình hình chăn ni gia cầm năm 2008 tỉnh .28 4.1.2 Tình hình bệnh cúm xảy gia cầm tỉnh năm 2008 31 4.1.2.1 Thiệt hại bệnh cúm xảy gia cầm tỉnh 31 4.1.2.2 Thời gian địa điểm xảy bệnh CGC .34 4.2 KẾT QUẢ XÉT NGHIỆM TÝP A VÀ PHÂN TÝP H5 CỦA VI RÚT CÚM TRÊN THỦY CẦM Ở BẠC LIÊU, CẦN THƠ VÀ SÓC TRĂNG 36 4.2.1 Tỷ lệ phát týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan tỉnh 36 4.2.2 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan theo địa bàn (tỉnh) 40 4.2.3 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm theo loài vịt ngan 44 4.2.4 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm theo lứa tuổi vịt ngan 46 4.2.5 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan theo địa điểm lấy mẫu 49 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 54 5.1 KẾT LUẬN 54 5.2 ĐỀ NGHỊ 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO .56 PHỤ LỤC 58 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT AGID : Agar gel immunodiffusion CGC : Cúm gia cầm cDNA : Complenmentary deoxyribonucleic acid dATP : Deoxyadenosine triphosphates dCTP : Deoxycytosine triphosphates dGTP : Deoxyguanosine triphosphates DNA : Deoxyribonucleic acid dNTP : Deoxyribonucleotide triphosphates dTTP : Deoxythymine triphosphates ĐBSCL : Đồng Bằng Sông Cửu Long H : Haemaglutinin HI : Haemaglutinatin inhibition HPAI : Highly Pathogenic Avian Influenza LAPI : Low Pathogenic Avian Influenza M : Matrix protein N : Neuraminidase NI : Neuraminidase inhibition OIE : Office international of epizooties PCR : Polymerase chain reaction RNA : Ribonucleic acid rRT – PCR : Real time Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction RT – PCR : Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction TP : Thành Phố WHO : World Health Organization µl : Microlittre vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 3.1 Bố trí số mẫu xét nghiệm 20 Bảng 3.2 Trình tự nucleotid mẫu dò cặp mồi đặc hiệu 23 Bảng 3.3 Hỗn hợp nguyên liệu Master Mix phản úng rRT - PCR để xác định vi rút cúm týp A phân týp H5 24 Bảng 4.1 Số lượng gia cầm tỉnh năm 2008 28 Bảng 4.2 Thiệt hại bệnh cúm xảy gia cầm tỉnh năm 2008 32 Bảng 4.3 Thời gian địa điểm xảy bệnh cúm tỉnh năm 2008 34 Bảng 4.4 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan rRT – PCR 36 Bảng 4.5 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan theo địa bàn rRT – PCR 41 Bảng 4.6 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm theo loài vịt ngan rRT – PCR 44 Bảng 4.7 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm theo lứa tuổi vịt rRT – PCR 47 Bảng 4.8 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan theo địa điểm lấy mẫu rRT - PCR .50 viii DANH SÁCH CÁC HÌNH Trang Hình 2.1 Cấu tạo vi rút cúm týp A Hình 2.2 Trao đổi gen vi rút cúm Hình 2.3 Sơ đồ trình nhân lên vi rút CGC .7 Hình 2.4 Bản đồ dịch tể nước có dịch CGC từ 2003 – 2008 Hình 2.6 Đoạn DNA phản ứng RT - PCR nhân lên theo cấp số nhân .15 Hình 2.7 Cơ chế phản ứng rRT- PCR 16 Hình 2.8 Giai đoạn chiết tách RNA vi rút cúm 23 Hình 2.9 Giai đoạn cho mẫu RNA thu vào máy để thực phản ứng rRT PCR 25 Hình 2.10 Các đường biểu diễn số lượng đơn vị huỳnh quang kỹ thuật rRT - PCR 26 Hình 2.11 Ni thả vịt chạy đồng huyện Ngã Năm tỉnh Sóc Trăng 31 ix Tóm lại tỷ lệ nhiễm phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan chợ bán vịt ngan có cao so với vịt ngan hộ chăn nuôi Vì đề nghị người dân khơng nên mua gia cầm chưa tiêm phịng vắc xin CGC ni giết thịt Theo nhận định chúng tôi, việc theo dõi giám sát lưu hành vi rút CGC vịt ngan phương pháp rRT – PCR quan trọng, giúp quan thú y đánh giá mức độ lưu hành vi rút cúm týp A phân týp H5 Từ dự đốn khả xảy dịch cúm vịt ngan để đề liệu pháp phịng, chống bệnh thích hợp cho đàn gia cầm nuôi địa phương 53 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Qua thời gian thực đề tài: “Điều tra lưu hành vi rút cúm týp A phân týp H5 vịt ngan chưa tiêm phòng vắc xin cúm gia cầm Bạc Liêu, Cần Thơ Sóc Trăng” Chúng tơi kết luận sau: - Tổng số gia cầm tỉnh 7.389.290 Trong ưu vịt với 4.482.184 (60,66%), gà 2.767.020 (37,45%) ngan 140.086 (1,89%) - Trong năm 2008 tỉnh Bạc Liêu không xảy dịch CGC TP Cần Thơ xảy ổ dịch gia cầm Tỉnh Sóc Trăng xảy 11 ổ dịch CGC (các ổ dịch xảy đàn gia cầm chưa tiêm phòng vắc xin CGC) - Tỷ lệ nhiễm týp A vi rút CGC vịt ngan tỉnh (Bạc Liêu, Cần Thơ Sóc Trăng) 39,90% tỷ lệ nhiễm phân týp H5 12,89% - Tỷ lệ nhiễm týp A vi rút cúm vịt ngan tỉnh Bạc Liêu cao (61,11%), tỉnh Sóc Trăng (32,35%), thấp TP Cần Thơ (20,24%) Tỷ lệ nhiễm phân týp H5 vịt ngan tỉnh Sóc Trăng cao (29,41%), tỉnh Bạc Liêu (17,78%), thấp TP Cần Thơ (1,19%) - Tỷ lệ nhiễm týp A phân týp H5 vi rút cúm loài vịt (44,63% 13,56%) cao loài ngan (12,9% 9,68%, theo thứ tự) - Tỷ lệ nhiễm týp A vi rút cúm không khác biệt theo lứa tuổi vịt (P > 0,05) Phân týp H5 vi rút cúm phát vịt tháng tuổi - Tỷ lệ nhiễm týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan chợ bán vịt ngan sống (55% 27,5%) cao so với vịt ngan hộ nuôi vịt ngan (36,31% 9,52%, theo thứ tự) 54 5.2 ĐỀ NGHỊ - Tổ chức tiêu hủy đàn vịt ngan xác định nhiễm vi rút cúm (theo chủ trương Cục Thú Y) Tăng cường quản lý chặt chẽ cơng tác tiêm phịng vắc xin CGC, đàn vịt chạy đồng - Xét nghiệm mẫu swab phương pháp rRT – PCR riêng cá thể vịt ngan để có số liệu xác Định kỳ khảo sát lưu hành vi rút CGC phương pháp rRT – PCR vịt ngan gà 55 TÀI LIỆU THAM KHẢO Bio – Rad Laboratories, Inc, 2001 Real time PCR – Kỹ thuật ứng dụng Cơ Quan Thú Y Vùng Cần Thơ, 2006 Bệnh CGC công tác giám sát – điều tra dịch bệnh Tài liệu tập huấn Cục Thú Y, 2008 Báo cáo tình hình dịch CGC năm 2007 – 2008 kinh nghiệm phòng chống Tài liệu lưu hành nội Cục Thú y – Cơ Quan Thú Y Vùng Cần Thơ, 2008 Báo cáo công tác thú y 10 tỉnh, thành phố ĐBSCL năm 2008 Cục Thú Y, 2007 Sổ tay giám sát bệnh CGC Nhà xuất Nông Nghiệp Trần Hữu Cổn, Bùi Quang Anh Bệnh cúm gia cầm biện pháp phòng chống Cục Thú Y, 2004 Trương Văn Dung, 2008 Những kết nghiên cứu đạt bệnh CGC Việt Nam Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XV, số – 2008, trang – 8 Nguyễn Tiến Dũng, 2008 Vài nét vi rút CGC H5N1 Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XV, số – 2008, trang 80 – 86 Hồ Huỳnh Thùy Dương, 1998 Sinh học phân tử Nhà xuất giáo dục 10 Trần Mạnh Giang, Trương Văn Dung, Hoàng Hồng Vân cs, 2008 Kết giám sát lưu hành vi rút cúm A/H5N1 GC Hà Nội tháng cuối năm 2006 Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XV, số – 2008, trang 33 – 37 11 Lê Thanh Hòa, 2002 “Sinh học phân tử: nguyên lý ứng dụng” Bài giảng sau đại học 12 Lê Thanh Hòa cộng tác viên, 2004 Vi rút cúm A gia cầm mối quan hệ lây nhiễm động vật sang người Viện khoa học công nghệ Việt Nam 13 Văn Đăng Kỳ, 2008 Diễn biến dịch CGC VN giải pháp phịng chống Tạp chí khoa học kỹ thuật TY, tập XV, số – 2008, trang 87 – 91 14 Xầm Văn Lang, 2006 Tình hình bệnh CGC (AVIAN INFLUENZA) vịt Sóc Trăng Luận án Thạc Sỹ Khoa Học Nông Nghiệp Trường Đại Học Cần Thơ 56 15 Phạm Sỹ Lăng, 2005 Bệnh kỹ thuật phòng trị Nhà Xuất Bản Nông Nghiệp Hà Nội 16 Lê Văn Năm, 2004 Bệnh cúm gà Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XI, số – 2004 17 Nguyễn Thị Kiều Nga, 2008 Phát vi rút CGC týp A phân týp H5 rRT-PCR số điểm trung chuyển, chợ sở giết mổ gia cầm Cần Thơ Vĩnh Long Luận văn tốt nghiệp KCNTY Đại Học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh 18 Trần Thanh Phong, 1996 Giáo trình bệnh truyền nhiễm vi rút gà Tủ sách trường Đại Học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh 19 Nguyễn Thị Thanh Tâm, 2006 Tình hình bệnh CGC hiệu phòng bệnh cúm A, H5 vắc xin Bạc Liêu Luận án Thạc Sỹ Khoa Học Nông Nghiệp Trường Đại Học Cần Thơ 20 Tơ Long Thành, Nguyễn Hồng Đăng, Hoàng Đăng Huyến, 2008 Đáp ứng miễn dịch gà dịch tiêm phòng vắc xin CGC tỉnh Bắc Giang Tạp chí khoa học kỹ thuật thú y, tập XV, số – 2008, trang – 17 21 Lê Đức Trình, 2001 Sinh học phân tử tế bào Nhà xuất khoa học kỹ thuật 22 Đặng Thanh Tùng, 2005 Tình hình bệnh CGC (AVIAN INFLUENZA) An Giang Luận án Thạc Sỹ Khoa Học Nơng Nghiệp Trường Đại Học Cần Thơ 23 Trần Đình Từ, 2006 Bài giảng vi rút học Tủ sách trường Đại Học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Trang wed http://vietnamnet.vn/khoahoc/suckhoe http://www.cucthuy.gov.vn http://www.oie.int http://www.who.int 57 PHỤ LỤC PHỤ LỤC Tổng đàn gia cầm tỉnh tỉnh năm 2008 BẠC LIÊU Tổng đàn gia cầm (con) Gà Vịt Ngan 11100 12500 468 54480 138830 4580 106410 173091 6750 207714 209196 9890 162480 201582 9975 41176 126128 5120 94877 84083 3250 678237 945410 40033 Địa bàn (quận/huyện) STT Thị xã Bạc Liêu Huyện Vĩnh Lợi Huyện Hòa Bình Huyện Hồng Dân Huyện Phức Long Huyện Giá Rai Huyện Đông Hải Tổng Tổng 24068 197890 286251 426800 374037 172424 182210 1663680 (Nguồn: Cục Thống Kê Bạc Liêu, 2008) CẦN THƠ STT Địa bàn (quận/huyện) Tổng đàn gia cầm (con) Quận Ninh Kiều Quận Ơ Mơn Quận Bình Thủy Quận Cái Răng Huyện Thốt Nốt Huyện Vĩnh Thạnh Huyện Cờ Đỏ Huyện Phong Điền Tổng Gà Vịt Ngan 3100 47780 23150 19610 32230 54530 83820 44950 309170 650 207060 63930 20970 380860 330720 741010 64780 1809980 150 3390 5290 4410 5780 4190 17180 4120 44510 Tổng 3900 258230 92370 44990 418870 389440 842010 113850 2163660 (Nguồn: Cục Thống Kê Cần Thơ, 2008) SÓC TRĂNG STT 10 Địa bàn (quận/huyện) TP Sóc Trăng Huyện Kế Sách Huyện Long Phú Huyện Cù Lao Dung Huyện Mỹ Tú Huyện Châu Thành Huyện Mỹ Xuyên Huyện Thạnh Trị Huyện Ngã Năm Huyện Vĩnh Châu Tổng Tổng đàn gia cầm (con) Gà Vịt Ngan 77469 333223 120693 53682 111612 630161 138575 117921 124095 72182 1779613 21365 294999 144582 5744 210944 185766 77716 337675 408866 39137 1726794 545 10560 7250 250 6875 7368 857 9864 10876 1098 55543 (Nguồn: Cục Thống Kê Sóc Trăng, 2008) 58 Tổng 99379 638782 272525 59676 329431 823295 217148 465460 543837 112417 3561950 PHỤ LỤC Thành phần phản ứng rRT - PCR Thành phần RNA khuôn mẫu Tác dụng Khuôn mẫu chép ngược từ RNA sang DNA Nước tinh khiết (khơng có Tạo mơi trường phản ứng DNase, RNase) 5x Buffer Chứa dung dịch đệm phản ứng MgCl2 Có tác dụng gắn liên kết dNTP với DNA polymerase, tăng khả bám mồi dNTP Gồm loại dATP, dTTP, DGTP, DCTP nguyên liệu tham gia tạo nên mạch DNA Cặp đoạn mồi Để xác định điểm để bắt đầu tổng hợp DNA Mẫu dò Trình tự oligonucleotide đặc hiệu với đoạn mồi gắn chất huỳnh quang Giúp kiểm sốt khuếch đại trình tự mục tiêu RNase inhibitor Ức chế hoạt động enzyme phân hủy RNA (RNase) Enzyme mix Hổn hợp enzyme reverse transcription DNA polymerase Tham gia vào trình chép phiên mã ngược PHỤ LỤC Thành phần hóa chất chuyên dùng để chiết xuất RNA Chất Transport Medium RLT buffer RW1 buffer RPE buffer Thành phần Penicillin G 2.000.000UI Gentamycin 250mg Streptomycin 200mg lít nước cất 10 μl β- mercatoethanol Guanidine thiocyante Ethanol 70% Guanidine thiocyante Ethanol 70% Guanidine thiocyante Ethanol 70% 59 Ghi Chất bảo quản Rất độc hại, phải mặc đồ bảo hộ, kính, trang, găng tay sử dụng Dễ cháy PHỤ LỤC CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập – Tự – Hạnh phúc (Địa danh), …… ngày tháng… năm … PHIẾU GỞI MẪU XÉT NGHIỆM GIÁM SÁT SỰ LƯU HÀNH CỦA VI RÚT CÚM GIA CẦM 1/ Thông tin cán thú y trực tiếp lấy mẫu: - Họ tên:…………………………………………………………………… - Cơ quan:…………………………………… Điện thoại (nếu có)………… 2/ Thơng tin chủ gia cầm: - Họ tên:…………………………………………………………………… - Địa chỉ: …………………………………… Điện thoại (nếu có)………… 3/ Thơng tin đàn gia cầm tiêm phịng: Lồi gia cầm Hướng sản xuất Nhóm tuổi Tổng số gia cầm Số tiêm phòng Thời gian tiêm phòng Lần Lần Loại vắc xin Ghi Gà Vịt Ngan Lồi khác Tổng số 4/ Thơng tin mẫu: - Loại mẫu: ……………………………… Tổng số mẫu: …………………… - Chủ gia cầm có nhận tiền lấy mẫu khơng ?: ………………………… Có Nếu có nhận bao nhiêu?: ………… Khơng 5/ Những điều lưu ý khác (nếu có): …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… …………………………………………………………………………………… XÁC NHẬN CỦA CHỦ HỘ GIA CẦM (Ký xác nhận, ghi rõ họ tên) XÁC NHẬN CỦA NGƯỜI ĐƯỢC GIAO TRÁCH NHIỆM LẤY MẪU (Ký xác nhận, ghi rõ họ tên) XÁC NHẬN CỦA CƠ QUAN ĐƯỢC GIAO TRÁCH NHIỆM TỔ CHỨC THỰC HIỆN LẤY MẪU (Ký xác nhận, ghi rõ họ tên) 60 PHỤ LỤC Xử lý thống kê So sánh tỷ lệ nhiễm týp A theo địa bàn SM(+) SM(+)5 Total BL 55 35 90 35,91 54,09 CT 17 67 84 33,52 50,48 ST 11 23 34 13,57 20,43 Total 83 125 208 Chi-Sq = 10,144 + 6,735 + 8,141 + 5,406 + 0,486 + 0,323 = 31,234 DF = 2, P-Value = 0,000 …………………………………… SM(+) SM(+) Total BL 55 35 90 37,24 52,76 CT 17 67 84 34,76 49,24 Total 72 102 174 Chi-Sq = 8,468 + 5,978 + 9,073 + 6,405 = 29,923 DF = 1, P-Value = 0,000 …………………………………… SM(+) SM(+) Total BL 55 35 90 47,90 42,10 ST 11 23 34 18,10 15,90 Total 66 58 124 Chi-Sq = 1,051 + 1,196 + 2,783 + 3,167 = 8,198 DF = 1, P-Value = 0,004 …………………………………… SM(+) SM(+) Total CT 17 67 84 19,93 64,07 ST 11 23 34 8,07 25,93 Total 28 90 118 Chi-Sq = 0,431 + 0,134 + 1,066 + 0,332 = 1,963 DF = 1, P-Value = 0,161 ……………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm phân týp H5/SM(+)A tỉnh SM(+) SM(-) Total BL 16 39 55 17.89 37.11 CT 16 17 61 5.53 11.47 ST 10 11 3.58 7.42 Total 27 56 83 Chi-Sq = 0.200 + 0.096 + 3.711 + 1.789 + 11.524 + 5.556 = 22.877 DF = 2, P-Value = 0.000 …………………………………… SM(+) SM(-) Total BL 16 39 55 12.99 42.01 CT 16 17 4.01 12.99 Total 17 55 72 Chi-Sq = 0.699 + 0.216 + 2.263 + 0.699 = 3.878 DF = 1, P-Value = 0.049 ……………………………………… SM(+) SM(-) Total BL 16 39 55 21.67 33.33 ST 10 11 4.33 6.67 Total 26 40 66 Chi-Sq = 1.482 + 0.963 + 7.410 + 4.817 = 14.672 DF = 1, P-Value = 0.000 ……………………………………… SM(+) SM(-) Total CT 16 17 6.68 10.32 ST 10 11 4.32 6.68 Total 11 17 28 Chi-Sq = 4.828 + 3.124 + 7.462 + 4.828 = 20.243 DF = 1, P-Value = 0.000 ……………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm phân týp H5/SMXN tỉnh SM(+) SM(+) Total BL 16 74 90 11,68 78,32 CT 83 84 10,90 73,10 ST 10 24 34 4,41 29,59 Total 27 181 208 Chi-Sq = 1,595 + 0,238 + 8,996 + 1,342 + 62 7,071 + 1,055 = 20,297 DF = 2, P-Value = 0,000 …………………………………… SM(+) SM(+) Total BL 16 74 90 8,79 81,21 CT 83 84 8,21 75,79 Total 17 157 174 Chi-Sq = 5,907 + 0,640 + 6,329 + 0,685 = 13,560 DF = 1, P-Value = 0,000 ………………………………… SM(+) SM(+) Total BL 16 74 90 18,87 71,13 CT 10 24 34 7,13 26,87 Total 26 98 124 Chi-Sq = 0,437 + 0,116 + 1,156 + 0,307 = 2,016 DF = 1, P-Value = 0,156 ………………………………… SM(+) SM(+) Total CT 83 84 7,83 76,17 ST 10 24 34 3,17 30,83 Total 11 107 118 Chi-Sq = 5,958 + 0,613 + 14,720 + 1,513 = 22,804 DF = 1, P-Value = 0,000 …………………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm týp A vịt ngan SM(+) SM(-) Total Vịt 79 98 177 70.63 106.37 Ngan 27 31 12.37 18.63 Total 83 125 208 Chi-Sq = 0.992 + 0.659 + 5.664 + 3.761 = 11.075 DF = 1, P-Value = 0.001 …………………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm phân týp H5/SM(+)A vịt ngan SM(+) SM(-) Total Vịt 24 55 79 25.70 53.30 Ngan 1.30 2.70 63 Total 27 56 83 Chi-Sq = 0.112 + 0.054 + 2.218 + 1.069 = 3.454 DF = 1, P-Value = 0.063 …………………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm phân týp H5/SMXN vịt ngan SM(+) SM(-) Total Vit 24 153 177 22.98 154.02 Ngan 28 31 4.02 26.98 Total 27 181 208 Chi-Sq = 0.046 + 0.007 + 0.261 + 0.039 = 0.352 DF = 1, P-Value = 0.553 ………………………………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm týp A lứa tuổi vịt (tháng) SM(+) SM(-) Total 4 11 18 8.03 9.97 Total 79 98 177 Chi-Sq = 2.073 + 1.671 + 0.548 + 0.442 + 0.133 + 0.107 = 4.973 DF = 2, P-Value = 0.083 ………………………………………………… SM(+) SM(-) Total 4 11 18 8.59 9.41 Total 73 80 153 Chi-Sq = 0.039 + 0.036 + 0.294 + 0.268 = 0.637 DF = 1, P-Value = 0.425 ………………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm phân týp H5/SM(+)A lứa tuổi vịt SM(+) SM(-) Total 4 2.13 4.87 Total 24 55 79 Chi-Sq = 1.823 + 0.795 + 0.055 + 0.024 + 3.883 + 1.694 = 8.274 DF = 2, P-Value = 0.016 4 2.30 4.70 Total 24 49 73 Chi-Sq = 0.336 + 0.164 + 65 3.164 + 1.550 = 5.214 DF = 1, P-Value = 0.022 ………………………………………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm phân týp H5/SMXN lứa tuổi vịt SM(+) SM(-) Total 4 13 18 2.44 15.56 Total 24 153 177 Chi-Sq = 3.254 + 0.510 + 0.026 + 0.004 + 2.684 + 0.421 = 6.900 DF = 2, P-Value = 0.032 ……………………………………… SM(+) SM(-) Total 4 13 18 2.82 15.18 Total 24 129 153 Chi-Sq = 0.224 + 0.042 + 1.678 + 0.312 = 2.255 DF = 1, P-Value = 0.133 ………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm týp A địa điểm lấy mẫu SM(+) SM(-) Total Chợ 22 18 40 66 15.96 24.04 Hộ 61 107 168 67.04 100.96 Total 83 125 208 Chi-Sq = 2.284 + 1.517 + 0.544 + 0.361 = 4.706 DF = 1, P-Value = 0.030 ……………………………………………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm phân týp H5/SM(+) địa điểm lấy mẫu SM(+) SM(-) Total Chợ 11 11 22 7.16 14.84 Hộ 16 45 61 19.84 41.16 Total 27 56 83 Chi-Sq = 2.064 + 0.995 + 0.744 + 0.359 = 4.163 DF = 1, P-Value = 0.041 ………………………………………………………………………… So sánh tỷ lệ nhiễm phân týp H5/SMXN địa điểm lấy mẫu SM(+) SM(-) Total Chợ 11 29 40 5.19 34.81 Hộ 16 152 168 21.81 146.19 Total 27 181 208 Chi-Sq = 6.496 + 0.969 + 1.547 + 0.231 = 9.242 DF = 1, P-Value = 0.002 67 ... H5 vịt ngan ch? ?a tiêm phòng vắc xin cúm tỉnh Bạc Liêu, Cần Thơ Sóc Trăng 1.2 MỤC ĐÍCH VÀ U CẦU 1.2.1 Mục đích Điều tra lưu hành vi rút cúm týp A phân týp H5 vịt ngan ch? ?a tiêm phòng vắc xin cúm. ..ĐIỀU TRA SỰ LƯU HÀNH C? ?A VI RÚT CÚM TÝP A VÀ PHÂN TÝP H5 TRÊN VỊT VÀ NGAN CH? ?A TIÊM PHÒNG VẮC XIN CÚM TẠI TỈNH BẠC LIÊU, CẦN THƠ VÀ SÓC TRĂNG Tác giả HÀ TẤN AN Kh? ?a luận đệ trình... TÝP A VÀ PHÂN TÝP H5 C? ?A VI RÚT CÚM TRÊN THỦY CẦM Ở BẠC LIÊU, CẦN THƠ VÀ SÓC TRĂNG 36 4.2.1 Tỷ lệ phát týp A phân týp H5 vi rút cúm vịt ngan tỉnh 36 4.2.2 Kết xét nghiệm týp A phân týp H5 vi