[Luận văn]nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất vacxin nhược độc dịch tả vịt chủng DP EG 2000

Luận văn, thạc sỹ, tiến sĩ, cao học, kinh tế, nông nghiệp

Bộ giáo dục và đào tạo trờng đại học nông nghiệp i ----------------------- Đặng Hữu Anh Nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất vacxin nhợc độc dịch tả vịt chủng DP - EG - 2000 Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên ngành: Thú y Mã số: 60.62.50 Ngời hớng dẫn khoa học: TS. Nguyễn bá hiên Hà Nội - 2007 Lời cam đoan Tôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của riêng tôi. Các số liệu, kết quả nghiên cứu trong luận văn này là trung thực và cha từng đợc ai công bố trong bất kì công trình nào khác. Tôi xin cam đoan rằng các thông tin trích dẫn trong luận văn đều đ đợc ghi rõ nguồn gốc. Tác giả luận văn Đặng Hữu Anh Lời cám ơn Trong quá trình học tập và nghiên cứu tại lớp Cao học khoá 14 chuyên ngành Thú y trờng Đại học Nông nghiệp I, tôi đ nhận đợc sự giúp đỡ, giảng dạy nhiệt tình của các thầy giáo, cô giáo trong nhà trờng. Nhân dịp này tôi xin bày tỏ lời cảm ơn chân thành tới tập thể các thầy giáo, cô giáo; đặc biệt là các thầy, cô trong bộ môn Vi sinh vật-Truyền nhiễm-Bệnh lý Khoa Thú y trờng Đại học Nông nghiệp I. Tôi xin bày tỏ lời cảm ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Bá Hiên, ngời đ tận tình hớng dẫn, tạo điều kiện giúp đỡ tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu này. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành tới TS. Nguyễn Viết Không - Trởng phòng Hoá sinh miễn dịch bệnh lý - Viện thú y quốc gia cùng các cán bộ nghiên cứu trong bộ môn đ nhiệt tình giúp đỡ tôi hoàn thành đề tài nghiên cứu này. Xin cảm ơn các bạn đồng nghiệp và những ngời thân đ động viên, giúp đỡ tôi trong quá trình thực hiện đề tài. Rất mong nhận đợc sự đóng góp ý kiến của các thầy cô giáo và các bạn đồng nghiệp đối với đề tài nghiên cứu của tôi. Xin chân thành cảm ơn! Tác giả luận văn Đặng Hữu Anh ii ii Mục lục Lời cam đoan .i Lời cảm ơn ii Mục lục iii Danh mục các chữ viết tắt .v Danh mục các bảng .vi Danh mục các sơ đồ, đồ thị vii Danh mục các hình và ảnh .viii 1. mở đầu 1 1.1. Tính cấp thiết của đề tài .Error! Bookmark not defined. 1.2. Mục tiêu nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 1.3. ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài Error! Bookmark not defined. 2. Tổng quan tài liệu Error! Bookmark not defined. 2.1. Bệnh dịch tả vịt Error! Bookmark not defined. 2.1.1. Lịch sử và phân bố bệnh Error! Bookmark not defined. 2.1.2. Truyền nhiễm học .Error! Bookmark not defined. 2.1.3. Triệu chứng và bệnh tích .Error! Bookmark not defined. 2.1.4. Chẩn đoán .Error! Bookmark not defined. 2.1.5. Biện pháp can thiệp và phòng bệnh dịch tả vịt Error! Bookmark not defined. 2.2. Virus gây bệnh dịch tả vịt Error! Bookmark not defined. 2.2.1. Hình thái, kích thớc .Error! Bookmark not defined. 2.2.2. Sức đề kháng .Error! Bookmark not defined. 2.2.3. Độc lực Error! Bookmark not defined. 2.2.4. Đặc tính nuôi cấy Error! Bookmark not defined. 2.3. Miễn dịch chống virus dịch tả vịt .Error! Bookmark not defined. 2.3.1. Đáp ứng miễn dịch không đặc hiệu .Error! Bookmark not defined. 2.3.2. Đáp ứng miễn dịch đặc hiệu Error! Bookmark not defined. 2.3.3. Độ dài miễn dịch .Error! Bookmark not defined. 3. Nội dung, Nguyên liệu, Phơng pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 3.1. Nội dung nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 3.2. Nguyên liệu Error! Bookmark not defined. 3.3. Phơng pháp nghiên cứu Error! Bookmark not defined. 3.3.1. Phơng pháp xác định khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 trên phôi gà .Error! Bookmark not defined. 3.3.2. Phơng pháp xác định chỉ số ELD 50 (liều gây chết 50% phôi) của chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000Error! Bookmark not defined. 3.3.3. Phơng pháp xác định chỉ số EID 50 (liều gây nhiễm 50% phôi) của chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000Error! Bookmark not defined. 3.3.4. Phơng pháp xác định mức độ tơng đồng kháng nguyên giữa chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 và chủng virus cờng độc dịch tả vịt VG-2004 (phơng pháp PCR) Error! Bookmark not defined. 3.3.5. Phơng pháp kiểm tra chỉ tiêu vô trùngError! Bookmark not defined. 3.3.6. Phơng pháp kiểm tra chỉ tiêu an toàn.Error! Bookmark not defined. 3.3.7. Phơng pháp kiểm tra chỉ tiêu hiệu lựcError! Bookmark not defined. 3.3.8. Phơng pháp xác định khả năng đáp ứng miễn dịch của vịt sau khi tiêm vacxin nhợc độc dịch tả vịt chủng DP-EG-2000 Error! Bookmark not defined. 4. Kết quả nghiên cứu và thảo luậnError! Bookmark not defined. 4.1. Kiểm tra một số đặc tính sinh học của chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 .Error! Bookmark not defined. 4.1.1. Khả năng thích ứng và ổn định của chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 trên phôi gà .Error! Bookmark not defined. 4.1.2. Kết quả xác định chỉ số ELD 50 của chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 .Error! Bookmark not defined. 4.1.3. Kết quả xác định chỉ số EID 50 của chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 .Error! Bookmark not defined. 4.1.4. Xác định mức độ tơng đồng kháng nguyên giữa chủng virus nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 và chủng virus cờng độc dịch tả vịt VG-2004 Error! Bookmark not defined. 4.2. Hoàn thiện quy trình nuôi cấy virus sản xuất vacxin Error! Bookmark not defined. 4.2.1. Kiểm định và bảo quản giống Error! Bookmark not defined. 4.2.2. Chuẩn bị trứng .Error! Bookmark not defined. 4.2.3. Cấy virus sản xuất vacxin Error! Bookmark not defined. 4.2.4. Thu hoạch, xử lý và bảo quản vacxin Error! Bookmark not defined. 4.2.5. Sử dụng vacxin Error! Bookmark not defined. 4.3. hoàn thiện quy trình kiểm nghiệm vacxin .Error! Bookmark not defined. 4.3.1. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin Error! Bookmark not defined. 4.3.2. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin Error! Bookmark not defined. 4.3.3. Kết quả kiểm tra chỉ tiêu hiệu lực của vacxin . Error! Bookmark not defined. 4.3.4. Kết quả xác định khả năng đáp ứng miễn dịch của vịt sau khi đợc tiêm phòng vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 Error! Bookmark not defined. 4.4. kết quả ứng dụng vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 trong phòng bệnh và can thiệp dịch Error! Bookmark not defined. 4.4.1. Kết quả ứng dụng vacxin trong phòng bệnh .Error! Bookmark not defined. 4.4.2. Kết quả sử dụng vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 trong can thiệp dịch tại một số địa phơng .Error! Bookmark not defined. 5. Kết luận và đề nghị .Error! Bookmark not defined. 5.1. Kết Luận Error! Bookmark not defined. 5.2. đề nghị .Error! Bookmark not defined. Tài liệu tham khảo Error! Bookmark not defined. Danh môc c¸c ch÷ viÕt t¾t trong luËn v¨n CPE : Cytopathogene effect Cs : céng sù DEF : Duck Embryo Fibroblast DEV : Duck enteritis virus DNA : Dezoxy ribonucleic acid DVE : Duck virus enteritis ELD 50 : 50 percent Embryo Lethal Dose EID 50 : 50 percent Embryo Infective Dose LD 50 : 50 percent Lethal Dose NI : Neutralization Index OIE : Office International des Epizooties PBS : Phosphate Buffered Saline PCR : Polymerase chain reaction p.p : papers SN : Serum Neutralization Tr : trang VN : Virus Neutralization VSV-TN-BL : Vi sinh vËt - TruyÒn nhiÔm - BÖnh lý Danh mục các bảng Số bảng tên bảng trang Bảng 2.1 Tình hình bệnh dịch tả vịt ở một số nớc châu áError! Bookmark not defined. Bảng 4.1 Kết quả cấy truyền chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG- 2000 trên phôi gà.48 Bảng 4.2 Kết quả xác định chỉ số ELD 50 của chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 . Error! Bookmark not defined. Bảng 4.3 Kết quả xác định chỉ số EID 50 của chủng virus vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 . Error! Bookmark not defined. Bảng 4.4a Kết quả kiểm tra chỉ tiêu vô trùng của vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-200064 Bảng 4.4b Kết quả kiểm tra tạp nhiễm virus viêm gan vịtError! Bookmark not defined. Bảng 4.5 Kết quả kiểm tra chỉ tiêu an toàn của vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 Error! Bookmark not defined. Bảng 4.6 Kết quả xác định chỉ tiêu hiệu lực của vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 Error! Bookmark not defined. Bảng 4.7 Biến động hàm lợng kháng thể của vịt đợc tiêm vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 . Error! Bookmark not defined. Bảng 4.8 Kết quả sử dụng vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 vào phòng bệnh cho vịt ở một số địa phơng Error! Bookmark not defined. Bảng 4.9 Kết quả sử dụng vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 trong can thiệp dịch tại một số địa phơng Error! Bookmark not defined. Danh mục các sơ đồ, đồ thị Số sơ đồ, đồ thị tên sơ đồ, đồ thị trang Sơ đồ 1 Sơ đồ chẩn đoán bệnh dịch tả vịt 12 Sơ đồ 2 Tóm tắt quy trình sản xuất vacxin nhợc độc dịch tả vịt chủng DP- EG-2000 62 Đồ thị 1 Biến động hàm lợng kháng thể của vịt đợc tiêm vacxin nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 .74 vi Danh mục các hình và ảnh Số hình, ảnh tên hình, ảnh trang Hình 1 Giản đồ một phần đoạn gen DNA-polymerase virus dịch tả vịt của Việt Nam sau khi giải trình trình tự và thành phần nucleotit và axit amin của gen này 57 Hình 2 So sánh trình tự nucleotit của chủng virus cờng độc dịch tả vịt phân lập ở Việt Nam (ký hiệu: DEV-VN) và chủng vacxin của thế giới (DEV-vx) 58 ảnh 4.1 Phôi gà đối chứng 49 ảnh 4.2 Phôi gà xuất huyết, còi cọc, gan phôi gà sng, xuất huyết 49 ảnh 4.3 Kết quả chạy PCR xác định mức độ tơng đồng kháng nguyên giữa chủng virus nhợc độc dịch tả vịt DP-EG-2000 và chủng virus cờng độc dịch tả vịt VG-2004 .56 ảnh 4.4 Vịt liệt chân .69 ảnh 4.5 Lách hoại tử .69 ảnh 4.6 Ruột xuất huyết .69 ảnh 4.7 Gan sng, xuất huyết, túi mật sng 69- . ----------------------- Đặng Hữu Anh Nghiên cứu hoàn thiện quy trình sản xuất vacxin nhợc độc dịch tả vịt chủng DP - EG - 2000 Luận văn thạc sĩ nông nghiệp Chuyên. bệnh dịch tả vịt. .......................................................12 Sơ đồ 2 Tóm tắt quy trình sản xuất vacxin nhợc độc dịch tả vịt chủng DP- EG- 2000. .........................................................................................................62