Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ sản xuất vacxin nhược độc, vô hoạt phòng bệnh cho gia súc gia cầm và ứng dụng kỹ thuật gene xác định TYP vi rut lở mồm long móng (LMLM)

Bộ KH CN Viện Thú y Bộ KH CN Viện Thú y Bộ khoa học, công nghệ và môi trờng Viện Thú Y 86, Đờng Trờng Chinh - Đống Đa Hà Nội Báo cáo tổng kết KHKT Đề tài KC.04.06: Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ sản xuất vacxin nhợc độc, vô hoạt phòng bệnh cho gia súc gia cầm và ứng dụng kỹ thuật gene xác định typ vi rut Lở mồm long móng (LMLM) Chủ nhiệm đề tài: TS. Tô Long Thành 6102 19/9/2006 Hà Nội 2005 Bản quyền 2005 thuộc Viện Thú y. Đơn xin sao chép toàn bộ hoặc từng phần tài liệu này phải gửi đến Viện trởng Viện Thú y trừ trờng hợp sử dụng với mục đích nghiên cứu. Bộ KH CN Viện Thú y http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB Mục lục Trang Các đề tài nhánh của đề tài kc.04.06 2 Danh sách cán bộ tham gia 3 Danh sách các đon vị tham gia, phối hợp 5 tóm tắt Báo cáo 6 Những từ viết tắt 13 Lời nói đầu 14 Chơng I Tổng quan tài liệu 24 1.1. Bệnh Tụ huyết trùng trâu bò 24 1.1.1. Vài nét về lịch sử nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng 24 1.1.1.1. Lịch sử nghiên cứu về bệnh tụ huyết trùng trên thế giới 24 1.1.1.2. Lịch sử nghiên cứu bệnh tụ huyết trùng ở Việt Nam 25 1.1.2. Tóm lợc về nghiên cứu vacxin phòng bệnh tụ huyết trùng 26 1.1.3. Vi khuẩn Pasteurella multocida 27 1.1.3.1. Đặc tính sinh vật học của vi khuẩn P. multocida 27 1.1.3.2. Đặc tính hình thái của vi khuẩn 27 1.1.3.3. Tính chất bắt màu của vi khuẩn. 28 1.1.3.4. Đặc tính nuôi cấy của vi khuẩn P. multocida 28 1.1.3.5. Đặc tính sinh hoá của Pasteurella multocida 31 1.1.3.6. Giáp mô của vi khuẩn Pasteurella multocida 32 1.1.3.7. Độc tố của Pasteurella multocida 32 1.1.4. Cấu trúc kháng nguyên của vi khuẩn Pasteurella multocida 33 1.1.4.1. Kháng nguyên vỏ K (Kapsular antigen). 33 1.1.4.2. Kháng nguyên thân (O) - Somatic antigen. 34 1.1.5. Các type huyết thanh học của P. multocida. 35 1.2. Bệnh và vấn đề an toàn, vệ sinh thực phẩm do vi khuẩn Salmonella spp gây ra ở gia cầm. 37 1.2.1. Lịch sử nghiên cứu về vi khuẩn Salmonella. 37 1.2.2. Tình hình nghiên cứu trong nớc. 39 1.2.3. Đặc điểm của Salmonella. 41 1.2.4. Tình trạng ngộ độc thức ăn do Salmonella. 41 1.2.5. Biện pháp phòng bệnh. 42 1.2.6. vắc-xin chống Salmonella cho gà 43 1.2.6.1. Một số loại vaccine chống Salmonella 43 1.2.6.2. Sơ lợc về kháng nguyên roi của S. typhimurium 44 1.2.6.3. Kháng nguyên roi của Salmonella typhimurium có khả năng bảo hộ cho gà chống Salmonella. 45 http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB 1.2.6.4. Khả năng sinh đáp ứng miễn dịch của protein flagellin 46 1.3. Bệnh Lở mồm Long móng 47 1.3.1. Bệnh Lở mồm Long móng và tình hình nghiên cứu về bệnh trong, ngoài nớc. 47 1.3.1.1. Bệnh Lở mồm Long móng, tình hình bệnh trên thế giới và ở Việt Nam. 47 1.3.1.2. Tình hình nghiên cứu bệnh LMLM trên thế giới. 49 1.3.1.3. Tình hình nghiên cứu bệnh LMLM trong nớc. 51 1.3.2. Vi rút gây bệnh LMLM. 52 1.3.2.1. Hình thái học. 52 1.3.2.2. Sức đề kháng của vi rút. 52 1.3.2.3. Đặc tính nuôi cấy. 52 1.3.3. Các phơng pháp chẩn đoán. 53 1.3.3.1. Chẩn đoán lâm sàng. 53 1.3.3.2. Đại cơng về chẩn đoán trong phòng thí nghiệm. 53 1.3.3.3. Chẩn đoán huyết thanh học. 54 1.3.3.3.1. Phản ứng kết hợp bổ thể (KHBT) 54 1.3.3.3.2. Phản ứng trung hoà vi rút. 55 1.3.3.3.3. Phản ứng ELISA. 55 1.3.3.3.4. Các phản ứng huyết thanh học khác 56 1.3.3.4. Chẩn đoán vi rút học. 56 1.3.3.5. Chẩn đoán bằng kỹ thuật RT-PCR. 56 Chơng II: Nguyên liệu và phơng pháp nghiên cứu 58 A. Nguyên liệu 58 2.1. Nghiên cứu phát triển và hoàn thiện vắc xin phòng chống bệnh tụ huyết trùng trâu bò chất lợng cao. 58 2.1.1. Động vật thí nghiệm. 58 2.1.2. Vi khuẩn gây bệnh tụ huyết trùng. 58 2.1.3. Dụng cụ máy móc thí nghiệm. 58 2.1.4. Môi trờng, hoá chất 58 2.2. Sản xuất vắc xin phòng bệnh do S. enteritidis và S. typhimurium bằng công nghệ vi khuẩn. 59 2.2.1. Động vật và sản phẩm động vật. 59 2.2.2. Các loại môi trờng thông thờng. 59 2.2.3. Các loại môi trờng chuyên biết. 60 2.2.4. Các trang thiết bị phòng thí nghiệm cần thiết khác. 62 2.3. Sản xuất vắc xin phòng bệnh do S.enteritidis và S. typhimurium bằng vi khuẩn biến nạp. 62 2.3.1. Chủng vi sinh vật. 62 2.3.2. Động vật. 62 2.3.3. Plasmid. 62 http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB 2.3.4. Môi trờng nuôi cấy. 63 2.3.5 Các dung dịch. 63 2.4. Định type vi rút LMLM bằng kỹ thuật RT-PCR. 64 2.4.1. Bệnh phẩm. 64 2.4.2. Nguồn bệnh phẩm. 64 2.4.3. Dung dịch bảo quản bệnh phẩm. 64 2.4.4. Tế bào BHK- 21 và môi trờng nuôi cấy tế bào. 65 2.4.5. Hoá chất, vật liệu và thiết bị để tiến hành phản ứng RT- P CR. 65 2.4.5.1. Mẫu ARN chuẩn. 65 2.4.5.2. Các hoá chất, vật liệu cần thiết tiến hành phản ứng RT- PCR. 65 2.4.5.3. Các hóa chất, vật liệu cần thiết cho việc tách dòng (cloning). 65 2.4.5.4. Thiết bị, máy móc. 66 2.4.5.5. Các cặp mồi đặc hiệu với vi rút LMLM type O, A , C hoặc Asia-1. 66 B. Phơng pháp nghiên cứu 66 3.1. Nghiên cứu phát triển và hoàn thiện vắc xin phòng chống bệnh tụ huyết trùng trâu bò chất lợng cao. 66 3.1.1. Kiểm tra giống vi khuẩn dùng để nghiên cứu và sản xuất vacxin. 66 3.1.2. Xác định đặc điểm hình thái và đặc tính sinh hoá của vi khuẩn gây bệnh tụ huyết trùng trâu bò chủng IR. 67 3.1.3. Kiểm tra độc lực của vi khuẩn đối với chuột nhắt trắng. 69 3.1.4. Sản xuất vacxin vô hoạt toàn khuẩn có chất bổ trợ keo phèn Saponin. 71 3.1.5. Kiểm nghiệm vắc xin 72 3.1.5.1. Kiểm tra vô trùng vắc xin. 72 3.1.5.2 Kiểm tra an toàn vacxin 72 3.1.5.3. Kiểm tra hiệu lực của vacxin. 72 3.1.5.3.1. Kiểm tra hiệu lực của vacxin trong phòng thí nghiệm. 72 3.1.5.3.2. Kiểm tra đáp ứng miễn dịch của vacxin đối với trâu, bò. 72 3.1.6. Phơng pháp xử lý số liệu. 76 3.1.6.1. Phơng pháp tính chỉ số miễn dịch. 76 3.1.6.2. Phơng pháp xử lý số liệu bằng toán thống kê. 76 3.2. Sản xuất vắc xin phòng chống S. enteritidis và S. typhimurium bằng công nghệ vi khuẩn. 77 3.2.1. Các phơng pháp vi sinh vật học thông thờng. 77 3.2.2. Các phơng pháp sản xuất và kiểm nghiệm vắc xin. 77 3.3. Sản xuất vắc xin phòng bệnh do S.enteritidis và S. typhimurium bằng vi khuẩn biến nạp. 78 3.3.1. Tách chiết ADN hệ gen của vi khuẩn. 78 3.3.2. Phơng pháp tổng hợp chuỗi (PCR). 78 http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB 3.3.3. Xử lý ADN bằng enzym hạn chế. 78 3.3.4. Phản ứng nối ghép gen. 79 3.3.5. Biến nạp vào E. coli. 79 3.3.6. Tách chiết ADN plasmid từ E. coli. 80 3.3.7. Cảm ứng biểu hiện protein tái tổ hợp. 81 3.3.8. Biến nạp plasmid vào nấm men P. pastoris bằng xung điện. 82 3.3.9. Western Blot, ELISA. 83 3.4. Định type vi rút LMLM bằng kỹ thuật RT-PCR. 84 3.4.1. Các phơng pháp chẩn đoán, định typ vi rút LMLM của Phòng Thí nghiệm Tham chiếu quốc tế. 84 3.4.2. Phơng pháp thu thập, vận chuyển và bảo quản bệnh phẩm. 84 3.4.3. Phơng pháp RT-PCR để chẩn đoán định type vi rút LMLM. 86 3.4.3.1. Tách chiết ARN từ bệnh phẩm biểu mô. 86 3.4.3.2. Tạo cADN bằng phản ứng sao chép ngợc. 86 3.4.3.3. Phản ứng PCR. 86 3.4.3.5. Kiểm tra sản phẩm PCR. 87 3.4.4. Tách dòng và giải trình tự đoạn gen mã hóa cho serotype O của vi rút gây bệnh LMLM phân lập tại Việt nam. 88 3.4.4.1. Lai sản phẩm PCR vào vector tách dòng pCRR2.1 và biến nạp vào tế bào khả biến (competent E. coli cells). 88 3.4.4.2. Tách chiết Plasmid. 89 3.4.4.3. Cắt bằng enzym giới hạn. 89 3.4.5. Phơng pháp nuôi cấy tế bào và gây nhiễm vi rút gây bệnh LMLM. 90 3.4.5.1. Phơng pháp nuôi tế bào BHK-21 (Baby Hamster Kidney - 21). 90 3.4.5.2. Phơng pháp tách tế bào bám dính. 90 3.4.5.3. Phơng pháp gây nhiễm vi rút LMLM lên tế bào BHK-21. 90 Chơng III. Kết quả nghiên cứu và thảo luận 92 4.1. Nghiên cứu phát triển và hoàn thiện vắc xin phòng chống bệnh tụ huyết trùng trâu bò chất lợng cao. 92 4.1.1. Kết quả phân lập vi khuẩn Pasteurella multocida từ trâu bò chết của các địa phơng. 92 4.1.2. Tính tơng đồng kháng nguyên giữa vi khuẩn P. multocida chủng IR với đại diện các chủng P. multocida phân lập đợc. 95 4.1.3. Kết quả xác định liều kháng nguyên thích hợp kích thích khả năng sản sinh miễn dịch tốt nhất trên trâu bò. 96 4.1.4. Kết quả xác định công thức bổ trợ thích hợp và theo dõi độ dài miễn dịch của vắc xin keo phèn-saponin. 97 4.1.5. Kết quả chế vắc xin tụ huyết trùng trâu bò keo phèn- saponin chủng IR. 98 4.1.6. Tính tơng đồng kháng nguyên của vi khuẩn P.multocida chủng IR với các chủng P. multocida khác đang sử dụng chế vắc xin THT trâu bò tại Việt Nam. 99 http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB 4.2. Sản xuất vắc xin phòng chống S. enteritidis và S. typhimurium bằng công nghệ vi khuẩn. 99 4.2.1. Kết quả điều tra một vài đặc điểm dịch tễ tại 4 cơ sở chăn nuôi gà giống. 99 4.2.2. Kết quả xác định tỷ lệ nhiễm Salmonella spp. 100 4.2.3. Kết quả giám định một số đặc tính sinh hoá của vi khuẩn Salmonella phân lập đợc. 102 4.2.4. Kết quả thử độc lực của các chủng Salmonella phân lập đợc trên chuột nhắt trắng. 104 4.2.5. Kết quả thử khả năng mọc của các chủng Salmonella trên các loại môi trờng dinh dỡng khác nhau. 105 4.2.6. Kết quả thử đặc tính sinh hóa của các chủng Salmonella 106 4.2.7. Kết quả thử độc lực của các chủng Salmonella phân lập đợc 106 4.2.8. Kết quả xác định LD 50 của các chủng Salmonella phân lập đợc 107 4.2.9. Sản xuất thử nghiệm vacxin S. enteritidis và S. Typhimurium vô hoạt keo phèn 108 4.2.10. Kết quả thử thuần khiết vacxin 108 4.2.11. Kết quả thử vô trùng của vacxin 108 4.2.12. Kết quả thử an toàn trên chuột nhắt trắng 109 4.2.13. Kết quả thử an toàn trên gà mái hậu bị 110 4.2.14. Kết quả kiểm tra hiệu lực của vacxin trên chuột nhắt trắng 110 4.2.15. Kết quả thử nghiệm hiệu lực của vác xin trên gà 111 4.2.16. Thí nghiệm xác định liều sử dụng của vacxin 111 4.3. Sản xuất vắc xin phòng bệnh do S. enteritidis và S. typhimurium bằng vi khuẩn biến nạp 113 4.3.1. Biểu hiện gen fliC3, gm3, sef14 trong E. coli BL21 113 4.3.1.1. Đa gen vào vectơ pCR2.1 113 4.3.1.1.1. Tách chiết ADN hệ gen của vi khuẩn 113 4.3.1.1.2.Nhân đoạn gen fliC3, gm3, sef14 từ hệ gen S. typhimurium, S. enteritidis 114 4.3.1.1.3. Đa sản phẩm PCR vào vectơ tách dòng pCR2.1 115 4.3.1.2. Đa gen vào vectơ biểu hiện pET22b(+) 119 4.3.1.3. Biểu hiện gen fliC3, gm3, sef14 trong E. coli BL21 120 4.3.2. Biểu hiện gen fliC3, gm3, sef14 trong nấm men P. pastoris 122 4.3.2.1. Nhân các gen bằng PCR 122 4.3.2.2. Đa gen vào vectơ tách dòng pCR2.1 123 4.3.2.3. Đa gen vào vectơ biểu hiện pPIC9 123 4.3.2.4. Biểu hiện gen trong nấm men P. pastoris 125 4.3.3. Thử đáp ứng miễn dịch của gà với kháng nguyên tái tổ hợp Flic3 126 http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB 4.3.3.1. Tinh sạch kháng nguyên tái tổ hợp FliC 126 4.3.3.2. Gây miễn dịch kháng nguyên tái tổ hợp FliC và kháng nguyên toàn phần trên gà hậu bị 127 4.3.3.3. Western blot và ELISA 127 4.3.4. Tinh sạch protein tái tổ hợp GM3 131 4.3.5. Nghiên cứu khả năng bảo hộ của protein tái tổ hợp Flic3 và Gm3 132 4.4. Định type vi rút LMLM bằng kỹ thuật RT-PCR 134 4.4.1. Khái quát tình hình dịch bệnh LMLM tại Việt Nam trong vòng 5 năm trở lại đây thời gian gần đây 134 4.4.2. Diễn biến lâm sàng của bệnh trên bò và lợn 136 4.4.3. Thu thập, vận chuyển và bảo quản bệnh phẩm từ gia súc nghi mắc bệnh 138 4.4.3.1. Thu thập bệnh phẩm từ gia súc nghi mắc bệnh LMLM 138 4.4.3.2. Vận chuyển bệnh phẩm từ gia súc nghi mắc bệnh LMLM 139 4.4.3.3. Bảo quản mẫu bệnh phẩm từ gia súc nghi mắc bệnh LMLM 139 4.4.4. Thiết lập phơng pháp RTPCR để phát hiện vi rút gây bệnh LMLM bằng mẫu ARN đã biết 140 4.4.5. Chẩn đoán định type các mẫu bệnh phẩm thu thập tại tỉnh Qủang Trị 143 4.4.6. Kết quả xác định tính đặc hiệu của các cặp mồi dùng trong chẩn đoán định type vi rút gây bệnh LMLM. 145 4.4.7. Kết quả ứng dụng phơng pháp RT-PCR để chẩn đoán định typ vi rút LMLM từ các bệnh phẩm thu thập từ thực địa 147 4.4.8. Tách dòng và giải trình trình tự đoạn gene mã hoá cho serotype O của vi rut LMLM thu thập tại tỉnh Qủang Trị 149 4.4.8.1. Tách dòng đoạn gene đặc hiệu chung để nhận biết các type O, A, C, và asia-1 và đoạn gene đặc hiệu cho typ O 149 4.4.8.2. Kết quả giải trình trình tự nuclêotide 151 4.4.9. Kết quả phân lập vi rút trên tế bào dòng BHK-21 153 4.4.9.1 Điều kiện làm việc với vi rút LMLM 153 4.4.9.2. Kết quả nuôi cấy và duy trì tế bào BHK-21 153 4.4.9.3. Kết quả gây nhiễm bệnh phẩm nghi có chứa vi rút LMLM lên tế bào BHK-21 155 4.4.9.4. So sánh chẩn đoán vi rút LMLM bằng RT-PCR từ bệnh phẩm biểu mô và từ bệnh phẩm biểu mô đã cấy chuyển trên tế bào 156 4.4.10. So sánh phơng pháp ELISA và RT-PCR để chẩn đoán- định typ virut LMLM 158 4.4.11. Nhận xét tổng quan về phơng pháp RT-PCR trong chẩn đoán định type vi rút gây bệnh LMLM 160 Chơng IVKết luận và đề nghị 163 Kết luận 163 I. Các chỉ tiêu cơ bản của các sản phẩm 163 II. Về nội dung và phơng pháp sử dụng 163 http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB III. Về giải pháp khoa học công nghệ 164 IV. Các sản phẩm cụ thể 165 Đề nghị 165 Lời cảm ơn 166 Tài liệu tham khảo 167 http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB 2 Các đề tài nhánh của đề tài kc.04.06 TT Mã số Tên đề tài nhánh Cơ quan của chủ nhiệm đề tài nhánh 1 KC.04.06.01 Nghiên cứu phát triển và hoàn thiện vắc xin phòng chống bệnh tụ huyết trùng trâu bò chất lợng cao ThS. Hoàng Xuân Nghinh Viện Thú y 2 KC.04.06.02 Sản xuất vắc xin phòng bệnh do S. enteritidis và S. typhi murium bằng công nghệ vi khuẩn. TS. Trần Thị Hạnh Viện Thú y 3 KC.04.06.03 Sản xuất vắc xin phòng bệnh do S. enteritidis và S. typhi murium bằng vi khuẩn biến nạp. TS. Trơng Nam Hải Viện Công nghệ Sinh học 4 KC.04.06.04 Định type vi rút LMLM bằng kỹ thuật sinh học phân tử (RT-PCR). TS. Tô Long Thành Viện Thú y http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB 3 Danh sách cán bộ tham gia TT Họ và Tên Học vị chuyên môn Cơ quan công tác 1 Trơng Văn Dung PGS. TS Viện Thú y 2 Hoàng Xuân Nghinh Th.S Viện Thú y 3 Đỗ Tuấn Cơng BSTY Viện Thú y 4 Trần Ngọc ánh Th.S Viện Thú y 5 Nguyễn Lại Hoàn TS Viện Thú y 6 Trơng Thị Hồng Hoa BSTY Viện Thú y 7 Lê Văn Phan BSTY Viện Thú y 8 Nguyễn Thị Bích BSTY Viện Thú y 9 Đặng Vũ Hoàng BSTY Viện Thú y 10 Trần Thị Thanh Hà BSTY Viện Thú y 11 Trần Thu Hiền Th.S Công Ty Hanvet 12 Nguyễn Thị Nguyệt Th.S Công Ty Hanvet 13 Nguyễn Lê Văn Th.S Viện Chăn nuôi 14 Trần Thị Hạnh TS Viện Thú y 15 Nguyễn Tiến Thành BSTY Viện Thú y 16 Đặng Thị Thanh Sơn BSTY Viện Thú y 17 Ngô Chung Thủy BSTY Viện Thú y 18 Trịnh Phú Ngọc TS Viện Thú y 19 Đặng Đình Thởng BSTY Viện Thú y http://elib.ntt.edu.vn NTTULIB [...]... Vi n TY NT 15 ĐH Nông lâm Thủ Đức 16 Trung tâm kiểm tra Vệ sinh Thú y TW2 5 http://elib.ntt.edu.vn tóm tắt Báo cáo Đề tài: Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ sản xuất vacxin nhợc độc vô hoạt phòng bệnh cho giá súc, gia cầm và ứng dụng kỹ thuật gen xác định loại vi rut Lở mồm Long móng (LMLM) Mã số: KC.04.06 Thuộc Chơng trình Khoa học Công nghệ cấp Nhà nớc KC.04 nghiên cứu khoa học và phát triển công nghệ. .. xin nhợc độc, vô hoạt phòng bệnh cho gia súc gia cầm và ứng dụng kỹ thuật gen xác định type vi rut lở mồm long móng (LMLM)" Các mục tiêu của Đề tài là: - Tạo công nghệ sản xuất vắc xin nhợc độc, biến nạp gen phòng bệnh cho gà - Lựa chọn chủng vi khuẩn tụ huyết trùng để sản xuất vắc xin - Định type vi rut LMLM bằng kỹ thuật sinh học phân tử (RT-PCR) để kựa chọn vacxin phù hợp Để thực hiện các mục tiêu... nh vi rut gây bệnh LMLM, vi khuẩn gây bệnh tụ huyết trùng thì vi c ứng dụng các kỹ thuật sinh học phân tử để định typ một các chính xác các chủng vi rút hay vi khuẩn phân lập đều đợc tất cả các nớc trên thế giới đặc biệt quan tâm Đã có rất nhiều công trình công bố về vi c sử dụng các kỹ thuật sinh học phân tử để định typ vi khuẩn P multocida và xác định typ và subtyp của vi rut LMLM Vi c định subtyp... chung và bệnh do Salmonella gây ra ở gia súc, gia cầm nói riêng Xuất phát từ tình hình dịch bệnh trong nớc và tri thức của nhân loại về chẩn đoán và phòng trừ các bệnh của gia súc, chúng tôi đã nhận đơn đặt hàng của Bộ Khoa học và Công nghệ để thực hiện Đề tài Khoa học Công nghệ cấp Nhà nớc mang mã số KC.04.06 mang tiêu đề "Nghiên cứu hoàn thiện công nghệ sản xuất vắc xin nhợc độc, vô hoạt phòng bệnh cho. .. có bổ trợ lanolin và parafin có hoạt tính miễn dịch cao để chế vacxin nhũ hoá (kết quả nghiên cứu khoa học và kỹ thuật thú y 1979- 1984) Nguyễn Ngã, Lê Minh Tâm và Nguyễn Bá Cờng nghiên cứu và sản xuất vacxin THT trâu bò chủng Iran (kết quả nghiên cứu khoa học và kỹ thuật Thú y 1985-1989) Phan Thanh Phợng và cộng sự nghiên cứu vacxin nhũ hoá THT trâu bò trong sản xuất Kết quả: Sản xuất kháng nguyên... trâu bò và lợn nghi là mắc bệnh Lở mồm Long móng (LMLM), lần đầu tiên ở Vi t Nam, các tác giả đã áp dụng thành công kỹ thuật RT-PCR nhằm chẩn đoán định type vi rút gây bệnh LMLM Thêm vào đó, các tác giả đã phân lập thành công vi rút gây bệnh LMLM từ bệnh phẩm thu thập ở một số địa phơng trên nuôi cấy tế bào dong BHK-21 và đây chính là phơng pháp làm tăng số lợng vi rút và sau đó tiến hành định type bằng... không có mầm bệnh (cho dù là nhợc độc hoặc vô hoạt) mà chỉ có các kháng nguyên (tức là các prôtêin) có khả năng kích thích cơ thể vật chủ sản sinh đáp ứng miễn dịch phòng hộ Vi c ứng dụng các kỹ thuật SHPT để sản xuất các vắc xin tái tổ hợp nhằm tạo ra một vắc xin an toàn, có tính sinh miễn dịch cao ứng dụng trong phòng bệnh cho gia súc và gia cầm đã và đang đợc thực hiện ở hầu hết các quốc gia tiên tiến... của Phòng Dịch tễ, Cục Thú y) Chẩn đoán và định subtyp một cách chính xác sẽ giúp chúng ta tìm ra nguồn gốc của bệnh, định hớng cho vi c nhập vắc xin để hạn chế và từng bớc tiến tới thanh toán bệnh này Cho đến nay cha có một cơ sở nào trong nớc tiến hành phân lập vi rút cũng nh ứng dụng các kỹ thuật sinh học phân tử để định typ và subtyp một cách chính xác loại vi rut nguy hiểm này Để chẩn đoán (và. .. pháp này là xác định type vi rút gây bệnh LMLM một cách nhanh chóng và chính xác để lựa chọn và sử dụng vắc xin thích hợp Bảng 1 Phân công chủ đề nghiên cứu và Chủ trì các Đề tài nhánh TT Mã số nhánh Đề tài nhánh Chủ trì Cơ quan Nghiên cứu phát triển 1 KC.04.06.01 và hoàn thiện vắc xin phòng chống bệnh tụ Hoàng Xuân Nghinh Vi n TY huyết trùng trâu bò chất lợng cao Sản xuất vắc xin phòng KC.04.06.02... Trong hoàn cảnh nớc ta, vi c ứng dụng kỹ thuật SHPT trong vi c định typ vi rút LMLM trở nên cấp thiết để chúng ta có thể chủ động trong công vi c này, không phải mua Kit ELISA của nớc ngoài, và sau đó tạo cơ sở cho những nghiên cứu sâu hơn ở mức độ sub -typ Các prôtêin tái tổ hợp dùng trong nghiên cứu và phòng chống các bệnh LMLM (Leippert, 2001; Nayak và cs, 2001), Newcastle (Baumans, 2001), và Gumboro . thiện công nghệ sản xuất vacxin nhợc độc, vô hoạt phòng bệnh cho gia súc gia cầm và ứng dụng kỹ thuật gene xác định typ vi rut Lở mồm long móng (LMLM) Chủ nhiệm đề tài: TS. Tô Long Thành. độc vô hoạt phòng bệnh cho giá súc, gia cầm và ứng dụng kỹ thuật gen xác định loại vi rut Lở mồm Long móng (LMLM) Mã số: KC.04.06. Thuộc Chơng trình Khoa học Công nghệ cấp Nhà nớc KC.04 nghiên. 1.3.1. Bệnh Lở mồm Long móng và tình hình nghiên cứu về bệnh trong, ngoài nớc. 47 1.3.1.1. Bệnh Lở mồm Long móng, tình hình bệnh trên thế giới và ở Vi t Nam. 47 1.3.1.2. Tình hình nghiên