Ứng dụng nhựa macroporous d101 trong làm giàu bacosid từ rau đắng biển (bacopa monnieri l )

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG THÙY NHUNG ỨNG DỤNG NHỰA MACROPOROUS D101 TRONG LÀM GIÀU BACOSID TỪ RAU ĐẮNG BIỂN (BACOPA MONNIERI L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI - 2018 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI LƯƠNG THÙY NHUNG Mã sinh viên: 1301303 ỨNG DỤNG NHỰA MACROPOROUS D101 TRONG LÀM GIÀU BACOSID TỪ RAU ĐẮNG BIỂN (BACOPA MONNIERI L.) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: PGS TS Nguyễn Văn Hân TS Nguyễn Tuấn Hiệp Nơi thực hiện: Viện Dược liệu HÀ NỘI - 2018 LỜI CẢM ƠN Em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Văn Hân, người thầy hết lịng giúp đỡ em suốt q trình thực khóa luận Đồng thời, em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS Nguyễn Tuấn Hiệp, khoa Công nghệ Chiết xuất, Viện Dược liệu tận tình hướng dẫn em Em xin cảm ơn anh chị nghiên cứu viên thuộc khoa Công nghệ chiết xuất, Viện Dược liệu: anh Đỗ Quang Thái, chị Đỗ Thị Thùy Linh, anh Đặng Tuấn Anh, anh Mai Văn Kiên năm qua quan tâm bảo em Em xin cảm ơn thầy cô, cán bộ, nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội giảng dạy, dìu dắt em suốt năm năm qua Em xin cảm ơn Viện Dược liệu tạo điều kiện sở vật chất, trang thiết bị hóa chất thí nghiệm, giúp em hồn thành khóa luận Với lịng biết ơn vơ hạn, xin chân thành cảm ơn gia đình, nguồn động lực to lớn bước đường học tập, lao động Tôi xin cảm ơn bạn bè, đặc biệt tập thể tổ - lớp M2K68 san sẻ buồn vui, động viên suốt quãng đời sinh viên Do thời gian, lực kinh nghiệm cịn hạn chế, khóa luận chắn mắc phải nhiều thiếu sót Em nhóm nghiên cứu mong nhận bảo thầy cô ý kiến đóng góp bạn bè Hà Nội, tháng năm 2018 Sinh viên Lương Thùy Nhung MỤC LỤC DANH MỤC CÁC CHỮ, CÁC KÝ HIỆU VIẾT TẮT DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Rau đắng biển 1.1.1 Tên gọi 1.1.2 Đặc điểm thực vật 1.1.3 Phân bố 1.1.4 Bộ phận dùng 1.1.5 Công dụng, cách dùng 1.1.6 Thành phần hóa học 1.1.7 Tác dụng dược lý 1.1.8 Một số nghiên cứu chiết xuất làm giàu (hoặc phân lập) bacosid 1.2 Nhựa macroporous ứng dụng làm giàu hoạt chất từ thực vật 1.2.1 Giới thiệu chung 1.2.2 Bản chất hóa học 10 1.2.3 Ứng dụng làm giàu hoạt chất từ thực vật 10 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 15 2.1 Đối tượng nghiên cứu 15 2.1.1 Nguyên vật liệu 15 2.1.2 Hóa chất, thiết bị, dụng cụ 15 2.2 Nội dung nghiên cứu 16 2.2.1 Nghiên cứu trình hấp phụ bacosid từ dịch chiết lên hạt nhựa macroporous D101 16 2.2.2 Nghiên cứu trình giải hấp phụ bacosid từ hạt nhựa macroporous D101 16 2.2.3 Đề xuất đánh giá tính ổn định quy trình làm giàu bacosid ứng dụng hạt nhựa macrporous D101 16 2.2.4 Nghiên cứu làm giàu bacosid bước than hoạt 17 2.3 Phương pháp nghiên cứu 17 2.3.1 Phương pháp định lượng 17 2.3.2 Phương pháp xử lý dịch chiết 18 2.3.3 Phương pháp xử lý hạt nhựa 18 2.3.4 Phương pháp nghiên cứu trình hấp phụ bacosid từ dịch chiết lên hạt nhựa macroporous D101 18 2.3.5 Phương pháp nghiên cứu trình giải hấp phụ bacosid từ hạt nhựa macroporous D101 19 2.3.6 Đề xuất đánh giá tính ổn định phương pháp làm giàu bacosid dịch chiết RĐB ứng dụng nhựa macroporous D101 23 2.3.7 Phương pháp làm giàu bước than hoạt 24 CHƯƠNG THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 25 3.1 Kết nghiên cứu trình hấp phụ bacosid từ dịch chiết lên hạt nhựa macroporous D101 25 3.1.1 Kết khảo sát tốc độ hấp phụ 25 3.1.2 Kết xác định điểm dừng hấp phụ 25 3.2 Kết nghiên cứu trình giải hấp phụ bacosid từ hạt nhựa macroporous D101 26 3.2.1 Kết khảo sát dung môi giải hấp phụ 26 3.2.2 Kết khảo sát thể tích dung môi giải hấp phụ tạp 27 3.2.3 Kết khảo sát thể tích dung mơi giải hấp phụ bacosid 28 3.2.4 Kết khảo sát tỉ lệ chiều cao/ đường kính cột 30 3.3 Kết xây dựng quy trình làm giàu bacosid dịch chiết RĐB ứng dụng nhựa macroporous D101 đề xuất 30 3.3.1 Đề xuất quy trình làm giàu bacosid dịch chiết RĐB ứng dụng nhựa macroporous D101 30 3.3.2 Kết khảo sát tính ổn định quy trình đề xuất 32 3.4 Kết làm giàu bacosid bước than hoạt 33 3.5 Bàn luận 33 3.5.1 Bàn luận kết nghiên cứu trình hấp phụ bacosid từ dịch chiết lên hạt nhựa macroporous D101 33 3.5.2 Bàn luận kết nghiên cứu trình giải hấp phụ bacosid từ hạt nhựa macroporous D101 34 3.5.3 Bàn luận quy trình làm giàu bacosid macroporous D101 đề xuất 35 3.5.4 Bàn luận kết làm giàu bước than hoạt 36 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 37 TÀI LIỆU THAM KHẢO 38 PHỤ LỤC 42 DANH SÁCH CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT RĐB rau đắng biển EtOH ethanol MeOH methanol EtOAc ethyl acetat BuOH n-butanol ACN acetonitril BV bed volume DVB divinyl benzen SPE chiết pha rắn SEM kính hiển vi điện tử quét DEN N-nitroso diethylamin DANH MỤC CÁC BẢNG Trang Bảng 1.1 Một số saponin RĐB Bảng 1.2 Một số loại nhựa macroporous đặc tính 12 Bảng 1.3 Một số đặc tính lý hóa hạt nhựa Macroporous D101 13 Bảng 2.1 Danh sách hóa chất sử dụng 15 Bảng 2.2 Thời gian lưu tương đối hệ số quy đổi (so với chất chuẩn bacosid A3) saponin mẫu định lượng 17 Bảng 3.1 Ảnh hưởng tốc độ nạp dịch lên dung lượng hấp phụ 24 Bảng 3.2 Khảo sát dung môi giải hấp phụ tạp bacosid 25 Bảng 3.3 Kết khảo sát thể tích EtOH 70% giải hấp phụ bacosid 27 Thể tích dung mơi rửa tạp Bảng 3.4 (theo thứ tự: nước, EtOH 10%, EtOH 30%) 27 Bảng 3.5 So sánh lượng tạp bacosid giải hấp phụ dung môi 28 Bảng 3.6 Kết khảo sát tỷ lệ chiều cao/ đường kính cột 29 Bảng 3.7 Bảng 3.8 Kết khảo sát tính ổn định quy trình làm giàu bacosid nhựa macroporous D101 Kết khảo sát tỷ lệ than hoạt/ cao giàu (% kl/tt) 32 33 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Trang Hình 1.1 Bacopa monnieri Hình 1.2 Aglycon bacosid Hình 1.3 Bốn saponin bacosid A Hình 1.4 Bacopasid I Hình 1.5 Một phần mạng lưới polyme polystyrene liên kết chéo 10 Hình 1.6 Sơ đồ yếu tố ảnh hưởng tới trình làm giàu (phân tách) hoạt chất phương pháp SPE 14 Hình 2.1 Nguyên liệu RĐB 15 Hình 2.2 Hạt nhựa macroporous D101 15 Hình 3.1 Đường cong hấp phụ 26 Hình 3.2 Khảo sát dung môi giải hấp phụ tạp bacosid 27 Khảo sát thể tích dung mơi rửa tạp Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 (theo thứ tự: nước, EtOH 10%, EtOH 30%) Đường cong giải hấp phụ bacosid EtOH 70% Sơ đồ quy trình làm giàu bacosid dịch chiết RĐB sử dụng nhựa macroporous D101 27 29 31 Hình 3.6 Cao RĐB sau phun sấy 32 Hình 3.7 Nguyên tắc rửa giải theo gradient nồng độ 35 ĐẶT VẤN ĐỀ Rau đắng biển, Bacopa monnieri từ lâu sử dụng Y học cổ truyền Ấn Độ với cơng dụng cải thiện trí nhớ, tập trung tỉnh táo Nhiều nghiên cứu tiền lâm sàng lâm sàng cho thấy tác dụng tăng cường trí nhớ [9], [10], chống tăng động giảm ý [21], [22], chống oxy hóa [16], bảo vệ gan [24],… dược liệu Thành phần hóa học cho tạo nên tác dụng trí nhớ nhận thức rau đắng biển saponin, gọi bacosid [50] Nhiều sản phẩm với hàm lượng bacosid cao (khoảng 50%) lưu hành thị trường Tới nay, có nhiều nghiên cứu làm giàu bacosid từ dịch chiết rau đắng biển Các dung môi hữu n-butanol, aceton, ethyl acetat,… sử dụng phương pháp gây mối lo ngại môi trường sức khỏe người Trong đó, với ưu điểm khả tinh chế, chi phí vận hành, giảm lượng dung môi hữu sử dụng, hạt nhựa macroporous ngày ứng dụng rộng rãi để làm giàu hợp chất thiên nhiên Nhận thức ý nghĩa bacosid ưu điểm hạt nhựa macroporous, nhóm nghiên cứu tiến hành đề tài “Ứng dụng nhựa macroporous D101 làm giàu bacosid từ rau đắng biển, Bacopa monnieri L.” với mục tiêu sau: Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình hấp phụ giải hấp phụ bacosid lên hạt nhựa macroporous D101 Xây dựng quy trình ứng dụng hạt nhựa macroporous D101 làm giàu bacosid từ dịch chiết rau đắng biển ... TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI L? ?ƠNG THÙY NHUNG Mã sinh viên: 1301303 ỨNG DỤNG NHỰA MACROPOROUS D101 TRONG L? ?M GIÀU BACOSID TỪ RAU ĐẮNG BIỂN (BACOPA MONNIERI L. ) KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người... tài ? ?Ứng dụng nhựa macroporous D101 l? ?m giàu bacosid từ rau đắng biển, Bacopa monnieri L. ” với mục tiêu sau: Khảo sát số yếu tố ảnh hưởng đến trình hấp phụ giải hấp phụ bacosid l? ?n hạt nhựa macroporous. .. macroporous D101 Xây dựng quy trình ứng dụng hạt nhựa macroporous D101 l? ?m giàu bacosid từ dịch chiết rau đắng biển CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Rau đắng biển 1.1.1 Tên gọi Tên khoa học: Bacopa monnieri L Tên