ỨNG DỤNG ENZYME CELLULASE VÀ PECTINASE BÓC VỎ TIÊU

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG ENZYME CELLULASE VÀ PECTINASE BĨC VỎ TIÊU Ngành học : CƠNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : HUỲNH DIỆU NGỌC Niên khóa : 2007 – 2011 Tháng 7/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ỨNG DỤNG ENZYME CELLULASE VÀ PECTINASE BÓC VỎ TIÊU Hướng dẫn khoa học ThS NGUYỄN NHƯ NHỨT Sinh viên thực HUỲNH DIỆU NGỌC Tháng 7/2011 LỜI CẢM ƠN Khóa luận hồn thành với quan tâm giúp đỡ nhiều thầy cô, anh chị ḅạn Em xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Các thầy cô trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh dạy truyền đạt kiến thức cho chúng em suốt năm học vừa qua Các thầy cô môn Công nghệ Sinh học giúp chúng em lựa chọn đề tài phù hợp hỗ trợ gặp vấn đề khó khăn đề tài Thạc sĩ Nguyễn Như Nhứt, người tận tình hướng dẫn tạo điều kiện để em thực khóa luận Thạc sĩ Trần Ngọc Hùng, người hướng dẫn em thao tác kỹ thuật suốt trình làm đề tài Các anh chị Phòng thí nghiệm, Phòng môi trường anh chị Khu sản xuất Chi nhánh Cơng ty TNHH Gia Tường nhiệt tình giúp đỡ em thời gian làm đề tài công ty Cảm ơn tất thành viên lớp DH07SH đặc biệt nhóm G8 tơi chia sẻ buồn vui năm đại học Và hết, cám ơn gia đình ln chăm lo, ủng hộ khích lệ lúc khó khăn để đường chọn Sinh viên thực Huỳnh Diệu Ngọc i TÓM TẮT Đề tài “Ứng dụng cellulase pectinase bóc vỏ tiêu” thực Phòng thí nghiệm Cơng ty TNHH Gia Tường, Chi nhánh tỉnh Bình Dương từ 11/2010 đến 07/2011 với hướng dẫn ThS Nguyễn Như Nhứt Nhu cầu tiêu sọ giá trị ln ln cao tiêu đen Chính vậy, việc nghiên cứu hoàn thiện cách thức quy trình xử lý bóc vỏ tiêu để nâng cao giá trị tiêu Việt Nam điều cần thiết để tăng giá trị tiêu xuất Trong đề tài này, nghiên cứu phối hợp chế phẩm enzyme cellulase pecinase cơng ty Genencor để bóc vỏ tiêu xanh tiêu đen điều kiện pH, nhiệt độ, thời gian ủ, hàm lượng enzyme thời điểm áp dụng bổ sung enzyme vào quy trình bóc vỏ tiêu nhằm lựa chọn điều kiện ứng dụng phù hợp Kết cho thấy, tiêu xanh sau ngâm nước ngày, bổ sung đồng thời lần enzyme Multifect CXGC Multifect Pectinase PL với nước pH 4,5 nhiệt độ 550C tỷ lệ bóc vỏ đạt 96,97% (đối chứng đạt 74,24%) Đối với tiêu đen, sau ngâm nước ngày bổ sung đồng thời enzyme Multifect CXGC Multifect Pectinase FE với đệm pH 3,5 nhiệt độ 450C ngày sau tỷ lệ bóc vỏ đạt 91,72% (đối chứng đạt 7,39%) Tiêu sọ thu từ tiêu xanh có hàm lượng piperine 7,8%, từ tiêu đen 5,5% ii SUMMARY Thesis “Application of cellulase and pectinase for peeling pepper ” This thesis was carried out at the laboratory of Gia Tuong CO., LTD., branch in Binh Duong province from 11/2010 to 7/2011 with the guidance of MA Nguyen Nhu Nhut The demand for white pepper as well as its value is always higher than those of black pepper Thus how to improve the method as well as the processes of peeling pepper to enhance the value of Vietnam’s pepper is essential to increase the value of pepper exports In this thesis, we coordinated cellulase and pectinase of Genencor company to peel green and black pepper In each kind of pepper, we surveyed the appropriate temperature and pH, incubated time, enzyme concentration, and the additional enzyme time in peel pepper process to select appropriate conditions for the application Results showed that, green pepper after days immersion, added times 200 UI Multifect CXGC and 40 UI Multifect Pectinase PL in pH 4,5 and 550C water, percentage of peel was 96,97% (controls reached 74,24%) For soaking water day black pepper, added 200 UI Multifect and CXGC Multifect Pectinase FE in pH 3,5 and 450C buffer, the peel rate was 91,72% (control reached 7,39%) Peeled pepper produced from green pepper content 7,8% piperine while one from black pepper was 5,5% iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii SUMMARY .iii MỤC LỤC iv DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT .vii DANH SÁCH CÁC BẢNG viii DANH SÁCH CÁC HÌNH ix Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề .1 1.2 Mục tiêu nghiên cứu 1.3 Nội dung thực Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Khái quát tiêu 2.1.1 Thành phần hóa học tiêu .4 2.1.2 Các phương pháp sản xuất tiêu sọ 2.1.3 Tác dụng dược lý tiêu 2.1.3.1 Chống bệnh ung thư .5 2.1.3.2 Chữa bệnh bạch biến 2.2 Khái quát hệ enzyme cellulase pectinase 2.2.1 Hệ enzyme cellulase chế thủy phân cellulose .6 2.2.1.1 Cơ chất cellulose 2.2.1.2 Hệ enzyme cellulase 10 2.2.1.3 Cơ chế thủy phân cellulose enzyme cellulase 12 2.2.2 Enzyme pectinase chế thủy phân pectin 16 2.2.2.1 Cơ chất pectin 16 2.2.2.2 Hệ enzyme pectinase 17 2.2.2.3 Cơ chế tác dụng tính đặc hiệu enzyme pectinase 18 Chương VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP 20 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 20 iv 3.2 Vật liệu, dụng cụ thiết bị 20 3.2.1 Vật liệu 20 3.2.2 Dụng cụ thiết bị 20 3.3 Phương pháp 20 3.3.1 Phương pháp xác định hoạt tính cellulase 20 3.3.1.1 Nguyên tắc 20 3.3.1.2 Hóa chất 20 3.3.1.3 Cách thực 21 3.3.1.4 Cách tính 21 3.3.2 Phương pháp xác định hoạt tính pectinase 22 3.3.2.1 Nguyên tắc 22 3.3.2.2 Hóa chất 22 3.3.2.3 Cách thực 23 3.3.3 Phương pháp phân hủy vỏ tiêu enzyme 24 3.3.3.1 Tiêu xanh 24 3.3.3.2 Tiêu đen 24 3.4 Phương pháp nghiên cứu 24 3.4.1 Xác định hoạt tính enzyme 24 3.4.1.1 Xác định hoạt tính cellulase 24 3.4.1.2 Xác định hoạt tính pectinase 255 3.4.2 Xác định chế phẩm enzyme thích hợp cho loại tiêu 25 3.4.3 Xác định yếu tố ảnh hưởng đến trình phân hủy vỏ tiêu dùng 25 3.4.3.1 Cellulase 25 3.4.3.2 Pectinase 25 3.4.4 Xác định yếu tố ảnh hưởng đến trình phân hủy vỏ tiêu dùng 26 3.4.4.1 Chọn điều kiện bổ sung thích hợp 26 3.4.4.2 Chọn tỷ lệ phối hợp enzyme 27 3.4.5 Đưa điều kiện khảo sát vào quy trình bóc vỏ tiêu 27 3.4.6 Đánh giá tiêu thành phẩm 27 3.4.7 Sơ đồ tóm tắt 28 Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 29 4.1 Kết 29 v 4.1.1 Xác định chế phẩm enzyme sử dụng cho loại tiêu 29 4.1.1.1 Chọn chế phẩm pectinase 29 4.1 1.2 Chọn chế phẩm cellulose 29 4.1.2 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến pectinase chọn 30 4.1.2.1 Nhiệt độ pH 30 4.1.2.2 Hàm lượng thời gian ủ tiêu với enzyme 31 4.1.3 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến cellulase chọn 32 4.1.3.1 Nhiệt độ pH 32 4.1.3.2 Hàm lượng thời gian ủ tiêu với enzyme 33 4.1.4 Khảo sát yếu tố ảnh hưởng đến phối hợp enzyme cellulase 35 4.1.4.1 Tìm điều kiện phối hợp cho enzyme 35 4.1.4.2 Khảo sát hàm lượng phối hợp enzyme 36 4.1.5 Khảo sát tác động phối hợp enzyme cellulase pectinase 37 4.1.5.1 Tiêu xanh 37 4.1.5.2 Tiêu đen 38 4.1.6 Đánh giá tiêu sau xử lý 39 4.2 Thảo luận 39 4.2.1 Ảnh hưởng nhiệt độ pH 39 4.2.2 Hàm lượng thời gian 40 Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 42 5.1 Kết luận 42 5.2 Đề nghị 42 TÀI LIỆU THAM KHẢO 43 PHỤ LỤC 45 vi DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT CBM : Carbohydrate-binding module CBD : Cellulose binding domain CMC : Carboxylmethyl cellulose SBD : Subtrate binding domain RGase : Rhamnogalacturonase PG : Polygalactoronase PL : Pectin lyase vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 2.1 Thành phần hóa học tiêu đen tiêu sọ Bảng 4.1 Hàm lượng D-galacturonic acid dịch ủ tiêu xanh với 29 Bảng 4.2 Hàm lượng đường khử dịch ủ tiêu với chế phẩm cellulase 29 Bảng 4.3 So sánh khả bóc vỏ tiêu xanh enzyme nước cất chỉnh pH 37 Bảng 4.4 Khả bóc vỏ tiêu bổ sung enzyme lần 38 Bảng 4.5 So sánh khả bóc vỏ tiêu đen enzyme nước cất 38 viii Phụ lục Khảo sát tỷ lệ phối hợp hai loại enzyme ảnh hưởng đến hàm lượng Dgalacturonic acid tạo thành ủ tiêu xanh Hàm lượng cellulase (UI) Hàm lượng pectinase (UI) 200 30 200 35 200 40 150 40 100 40 Thử không Thử thật ∆OD 0,469 0,469 0,460 0,473 0,471 0,456 0,512 0,512 0,514 0,452 0,450 0,450 0,452 0,447 0,441 0,567 0,568 0,565 0,591 0,593 0,587 0,675 0,677 0,672 0,547 0,543 0,537 0,514 0,519 0,524 0,098 0,099 0,105 0,119 0,123 0,131 0,163 0,166 0,159 0,096 0,093 0,087 0,062 0,072 0,083 Hàm lượng Dgalacturonic acid (µg) 3,662 ± 0,112 4,500 ± 0,185 5,885 ± 0,105 3,321 ± 0,134 2,624 ± 0,303  Xử lý số liệu thống kê ANOVA Table for D galactoronic acid by ty le Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 18,8102 4,70255 93,54 0,0000 Within groups 0,502721 10 0,0502721 Total (Corr.) 19,3129 14 Phụ lục 10 Khảo sát tỷ lệ phối hợp hai loại enzyme ảnh hưởng đến hàm lượng đường khử tạo thành ủ tiêu xanh Hàm lượng cellulase (UI) Hàm lượng pectinase (UI) 200 30 200 35 200 40 150 40 100 40 Thử không 0,368 0,364 0,370 0,370 0,369 0,373 0,387 0,381 0,390 0,328 0,327 0,322 0,314 0,315 0,312 Thử thật 0,427 0,427 0,427 0,442 0,447 0,444 0,509 0,510 0,511 0,401 0,396 0,399 0,360 0,358 0,355 ∆OD 0,060 0,064 0,058 0,072 0,078 0,071 0,122 0,129 0,121 0,074 0,070 0,077 0,047 0,044 0,043 Hàm lượng đường khử (µmol) 303,170 ± 13,295 371,069 ± 15,702 623,385 ± 18,623 368,834 ± 14,822 224,094 ± 8,279  Xử lý số liệu thống kê ANOVA Table for Duong khu by ty le Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 268896,0 67223,9 211,72 0,0000 Within groups 3175,2 10 317,52 Total (Corr.) 272071,0 14 Phụ lục 11 Khảo sát yếu tố nhiệt độ pH ảnh hưởng đến enzyme pectinase dùng để bóc vỏ tiêu đen pH ủ Nhiệt độ ủ (0C) 30 35 40 3,0 45 50 55 30 35 40 3,5 45 50 55 Thử không Thử thật ∆OD 0,446 0,451 0,434 0,501 0,495 0,500 0,520 0,539 0,527 0,525 0,534 0,560 0,522 0,528 0,519 0,566 0,584 0,584 0,443 0,454 0,439 0,396 0,391 0,399 0,405 0,400 0,407 0,450 0,438 0,453 0,455 0,457 0,454 0,577 0,582 0,542 0,756 0,767 0,753 0,721 0,720 0,716 0,694 0,700 0,687 0,818 0,815 0,814 0,624 0,622 0,622 0,800 0,819 0,826 0,638 0,646 0,649 0,619 0,629 0,629 0,725 0,740 0,710 0,872 0,865 0,839 0,611 0,607 0,605 0,837 0,838 0,839 0,310 0,316 0,319 0,220 0,226 0,216 0,175 0,161 0,160 0,294 0,282 0,255 0,102 0,094 0,103 0,234 0,235 0,243 0,195 0,192 0,210 0,223 0,238 0,231 0,320 0,341 0,303 0,423 0,427 0,387 0,156 0,150 0,151 0,261 0,256 0,297 Độ pha loãng Hàm lượng Dgalacturonic acid (µg) 2,282 ± 0,026 3,196 ± 0,044 2,395 ± 0,099 4,010 ± 0,237 1,445 ± 0,058 3,439 ± 0,055 1,444 ± 0,058 3,345 ± 0,088 4,657 ± 0,224 5,975 ± 0,259 2,211 ± 0,040 3,933 ± 0,262 Phụ lục 11(tt) Khảo sát yếu tố nhiệt độ pH ảnh hưởng đến enzyme pectinase dùng để bóc vỏ tiêu đen pH ủ Nhiệt độ ủ (0C) 30 35 40 4,0 45 50 55 30 35 40 4,5 45 50 55 Thử không Thử thật ∆OD 0,360 0,361 0,364 0,326 0,326 0,321 0,411 0,418 0,412 0,482 0,484 0,476 0,536 0,551 0,549 0,577 0,579 0,569 0,258 0,267 0,270 0,282 0,285 0,279 0,411 0,410 0,414 0,443 0,448 0,451 0,543 0,549 0,553 0,655 0,640 0,618 0,411 0,413 0,404 0,506 0,507 0,508 0,700 0,707 0,698 0,736 0,781 0,770 0,743 0,755 0,750 0,797 0,793 0,791 0,331 0,333 0,337 0,378 0,385 0,376 0,433 0,432 0,436 0,596 0,587 0,590 0,775 0,784 0,787 0,813 0,811 0,794 0,051 0,052 0,041 0,180 0,182 0,187 0,289 0,289 0,286 0,254 0,297 0,295 0,207 0,204 0,201 0,220 0,214 0,222 0,074 0,067 0,068 0,096 0,100 0,098 0,023 0,022 0,023 0,153 0,140 0,139 0,232 0,235 0,234 0,158 0,171 0,176 Độ pha loãng Hàm lượng Dgalacturonic acid (µg) 0,346 ± 0,038 2,648 ± 0,043 4,177 ± 0,024 4,090 ± 0,284 2,955 ± 0,034 3,172 ± 0,053 0,503 ± 0,021 1,420 ± 0,024 0,327 ± 0,006 2,086 ± 0,098 3,391 ± 0,020 2,442 ± 0,111  Xử lý số liệu thống kê Analysis of Variance for D galactoronic acid - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Nhiet 54,9689 10,9938 454,87 0,0000 B:pH 33,2866 11,0955 459,08 0,0000 INTERACTIONS AB 48,4374 15 3,22916 133,61 0,0000 RESIDUAL 1,16012 48 0,0241692 -TOTAL (CORRECTED) 137,853 71 -All F-ratios are based on the residual mean square error Phụ lục 12 Khảo sát yếu tố hàm lượng thời gian ảnh hưởng đến enzyme The StatAdvisor pectinase dùng để bóc vỏ tiêu đen - The ANOVA table decomposes the variability of D galactoronic acid into contributions due to various factors Since Type III sums of Hàm Độ Hàm lượng Dsquares (the default) Thời gian have Thửbeen chosen, the contribution of each lượng Thử thật ∆OD pha galacturonic factor is measured removed the effects of all other factors ủ (giờ) having không (UI)P-values test the statistical significance of each oflỗng acid (µg) The the factors Since P-values are less than 0,05, these factors have a 0,368 0,222acid at the 95,0% statistically significant effect on 0,590 D galactoronic 3,265 ± 0,052 0,367 0,590 0,223 confidence level 30 40 0,354 0,384 0,396 0,407 0,424 0,421 0,423 0,530 0,537 0,531 0,590 0,580 0,588 0,381 0,378 0,376 0,428 0,425 0,422 0,584 0,698 0,686 0,685 0,775 0,788 0,785 0,746 0,743 0,747 0,751 0,750 0,750 0,598 0,599 0,614 0,743 0,745 0,738 0,230 0,314 0,290 0,279 0,351 0,367 0,362 0,217 0,206 0,216 0,161 0,171 0,162 0,217 0,221 0,238 0,315 0,320 0,317 4,269 ± 0,215 5,224 ± 0,098 6,176 ± 0,136 5,970 ± 0,159 3,269 ± 0,131 4,603 ± 0,028 Phụ lục 12 (tt) Khảo sát yếu tố hàm lượng thời gian ảnh hưởng đến enzyme pectinase dùng để bóc vỏ tiêu đen Hàm lượng (UI) Thời gian ủ (giờ) 40 50 Thử không Thử thật ∆OD 0,494 0,498 0,488 0,466 0,467 0,467 0,542 0,543 0,557 0,321 0,334 0,329 0,382 0,383 0,383 0,406 0,408 0,405 0,460 0,459 0,461 0,536 0,548 0,543 0,905 0,900 0,896 0,686 0,675 0,679 0,670 0,669 0,678 0,527 0,520 0,515 0,583 0,580 0,571 0,661 0,663 0,658 0,659 0,658 0,644 0,641 0,645 0,647 0,412 0,402 0,408 0,220 0,209 0,212 0,129 0,127 0,121 0,206 0,186 0,187 0,202 0,198 0,189 0,255 0,256 0,254 0,200 0,199 0,183 0,106 0,097 0,105 Độ pha lỗng Hàm lượng Dgalacturonic acid (µg) 5,905 ± 0,055 6,189 ± 0,135 4,544 ± 0,122 2,800 ± 0,136 2,842 ± 0,081 3,696 ± 0,014 5,625 ± 0,224 3,458 ± 0,300  Xử lý số liệu thống kê Analysis of Variance for D galactoronic acid - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Ham luong 15,8547 7,92736 246,23 0,0000 B:Thoi gian 42,6678 10,667 331,32 0,0000 INTERACTIONS AB 7,65469 0,956837 29,72 0,0000 RESIDUAL 0,965846 30 0,0321949 -TOTAL (CORRECTED) 67,1431 44 -All F-ratios are based on the residual mean square error The StatAdvisor The ANOVA table decomposes the variability of D galactoronic acid into contributions due to various factors Since Type III sums of squares (the default) have been chosen, the contribution of each factor is measured having removed the effects of all other factors The P-values test the statistical significance of each of the factors Since P-values are less than 0,05, these factors have a Phụ lục 13 Khảo sát yếu tố nhiệt độ pH ảnh hưởng đến enzyme cellulase dùng để bóc vỏ tiêu đen pH ủ Nhiệt độ ủ (0C) 40 45 3,0 50 55 60 40 45 3,5 50 55 60 40 4,0 45 Thử không Thử thật ∆OD 0,311 0,310 0,315 0,347 0,343 0,334 0,378 0,379 0,376 0,382 0,380 0,369 0,454 0,452 0,447 0,273 0,273 0,272 0,305 0,304 0,307 0,283 0,279 0,275 0,457 0,452 0,455 0,418 0,419 0,415 0,262 0,266 0,264 0,309 0,307 0,305 0,342 0,341 0,345 0,396 0,390 0,386 0,491 0,483 0,481 0,489 0,485 0,479 0,468 0,468 0,465 0,328 0,326 0,323 0,347 0,348 0,351 0,439 0,440 0,432 0,578 0,576 0,568 0,495 0,502 0,501 0,389 0,399 0,389 0,350 0,353 0,347 38,979 39,608 38,350 61,612 58,678 65,803 142,504 131,816 132,026 134,121 131,607 138,313 17,603 20,537 23,681 69,156 67,270 64,336 53,439 55,535 55,535 196,152 202,649 198,458 151,725 156,964 142,294 96,819 103,944 108,345 159,688 167,442 158,221 52,182 57,840 52,810 Độ pha lỗng Hàm lượng đường khử (µmol) 38,979 ± 0,513 62,031 ± 2,924 135,449 ± 4,990 134,680 ± 2,766 20,607 ± 2,482 66,921 ± 1,983 54,836 ± 0,988 199,086 ± 2,689 150,328 ± 6,070 103,036 ± 4,749 161,784 ± 4,046 54,277 ± 2,532 Phụ lục 13 (tt) Khảo sát yếu tố nhiệt độ pH ảnh hưởng đến enzyme cellulase dùng để bóc vỏ tiêu đen pH ủ Nhiệt độ ủ (0C) 50 4,0 55 60 40 45 4,5 50 55 60 40 5,0 45 50 Thử không Thử thật ∆OD 0,392 0,386 0,389 0,313 0,309 0,311 0,468 0,471 0,451 0,299 0,295 0,294 0,307 0,310 0,309 0,445 0,451 0,456 0,376 0,370 0,371 0,472 0,471 0,461 0,284 0,288 0,292 0,263 0,264 0,255 0,385 0,386 0,384 0,591 0,579 0,586 0,508 0,507 0,498 0,569 0,565 0,557 0,322 0,317 0,318 0,344 0,348 0,341 0,652 0,652 0,654 0,654 0,654 0,656 0,601 0,604 0,593 0,297 0,305 0,304 0,359 0,359 0,346 0,532 0,538 0,539 249,801 242,257 247,286 245,190 249,382 234,712 127,625 118,404 132,864 29,549 28,710 30,177 46,523 47,362 40,656 259,860 252,944 249,591 349,554 357,098 359,403 161,784 167,442 165,975 15,927 20,956 15,298 120,709 119,452 114,632 185,465 191,332 195,524 Độ pha lỗng Hàm lượng đường khử (µmol) 246,448 ± 3,136 243,095 ± 6,169 126,298 ± 5,977 29,479 ± 0,601 44,847 ± 2,983 254,132 ± 4,275 355,352 ± 4,206 165,067 ± 2,398 15,298 ± 3,287 118,264 ± 2,619 190,774 ± 4,126 Phụ lục 13 (tt) Khảo sát yếu tố nhiệt độ pH ảnh hưởng đến enzyme cellulase dùng để bóc vỏ tiêu đen pH ủ Nhiệt độ ủ (0C) 55 5,0 60 40 45 5,5 50 55 60 Thử không Thử thật ∆OD 0,405 0,405 0,404 0,532 0,528 0,534 0,270 0,268 0,270 0,259 0,262 0,258 0,371 0,372 0,372 0,442 0,425 0,441 0,356 0,364 0,366 0,504 0,506 0,505 0,663 0,666 0,661 0,294 0,291 0,295 0,292 0,292 0,290 0,419 0,421 0,421 0,477 0,465 0,482 0,411 0,422 0,423 125,529 127,625 126,577 165,766 173,939 160,736 30,596 29,968 31,435 42,122 37,931 39,817 60,355 61,612 61,822 44,218 50,715 51,553 69,575 73,557 71,881 Độ pha lỗng Hàm lượng đường khử (µmol) 126,577 ± 0,856 166,813 ± 5,441 30,666 ± 0,601 39,957 ± 1,714 61,263 ± 0,648 48,829 ± 3,278 71,671 ± 1,632  Xử lý số liệu thống kê Analysis of Variance for Duong khu - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Nhiet 256381,0 64095,3 3619,13 0,0000 B:pH 167932,0 33586,3 1896,44 0,0000 INTERACTIONS AB 187925,0 20 9396,25 530,56 0,0000 RESIDUAL 1062,61 60 17,7102 -TOTAL (CORRECTED) 613301,0 89 -All F-ratios are based on the residual mean square error The StatAdvisor The ANOVA table decomposes the variability of Duong khu into contributions due to various factors Since Type III sums of squares (the default) have been chosen, the contribution of each factor is measured having removed the effects of all other factors The P-values test the statistical significance of each of the factors Since P-values are less than 0,05, these factors have a statistically significant effect on Duong khu at the 95,0% confidence level Phụ lục 14 Khảo sát yếu tố hàm lượng thời gian ảnh hưởng đến enzyme cellulase dùng để bóc vỏ tiêu đen Hàm Thời gian lượng (UI) ủ (giờ) 150 200 250 Thử không Thử thật ∆OD 0,268 0,267 0,264 0,362 0,370 0,362 0,373 0,379 0,363 0,430 0,446 0,441 0,530 0,530 0,528 0,255 0,257 0,255 0,299 0,299 0,299 0,412 0,411 0,410 0,475 0,483 0,488 0,521 0,524 0,521 0,255 0,257 0,255 0,358 0,361 0,352 0,443 0,443 0,437 0,337 0,335 0,333 0,467 0,475 0,465 0,520 0,517 0,506 0,581 0,597 0,588 0,678 0,677 0,677 0,389 0,391 0,391 0,479 0,480 0,480 0,610 0,608 0,608 0,769 0,777 0,778 0,840 0,848 0,845 0,387 0,388 0,384 0,526 0,524 0,526 0,652 0,653 0,642 0,070 0,068 0,069 0,106 0,105 0,103 0,148 0,138 0,143 0,152 0,151 0,148 0,148 0,147 0,150 0,135 0,134 0,136 0,180 0,181 0,182 0,199 0,198 0,198 0,294 0,294 0,291 0,320 0,324 0,325 0,132 0,132 0,129 0,168 0,163 0,174 0,210 0,211 0,205 Độ pha loãng Hàm lượng đường khử (µmol) 86,410 ± 0,772 131,607 ± 1,401 179,806 ± 4,962 188,608 ± 2,302 186,512 ± 1,401 169,677 ± 0,926 227,657 ± 0,650 249,382 ± 0,513 368,205 ± 2,103 405,577 ± 2,750 164,648 ± 1,617 211,660 ± 5,848 262,375 ± 3,008 Phụ lục 14 (tt) Khảo sát yếu tố hàm lượng thời gian ảnh hưởng đến enzyme cellulase dùng để bóc vỏ tiêu đen Hàm lượng (UI) Thời gian ủ (giờ) 250 300 350 Thử không Thử thật ∆OD 0,483 0,493 0,488 0,573 0,570 0,575 0,303 0,304 0,288 0,369 0,365 0,364 0,451 0,448 0,447 0,485 0,492 0,487 0,479 0,479 0,472 0,332 0,336 0,326 0,390 0,389 0,395 0,510 0,503 0,514 0,500 0,498 0,504 0,516 0,513 0,519 0,776 0,779 0,776 0,892 0,893 0,891 0,429 0,425 0,411 0,532 0,533 0,531 0,688 0,686 0,681 0,779 0,785 0,780 0,784 0,781 0,782 0,445 0,451 0,441 0,558 0,555 0,560 0,724 0,725 0,723 0,816 0,815 0,817 0,829 0,831 0,833 0,294 0,287 0,288 0,319 0,324 0,316 0,127 0,121 0,123 0,163 0,168 0,167 0,237 0,238 0,234 0,294 0,294 0,293 0,305 0,302 0,310 0,113 0,115 0,116 0,168 0,166 0,166 0,215 0,223 0,209 0,317 0,317 0,314 0,313 0,318 0,314 Độ pha loãng Hàm lượng đường khử (µmol) 364,223 ± 3,784 401,945 ± 3,776 155,427 ± 3,043 208,936 ± 2,589 297,093 ± 2,167 369,392 ± 0,431 384,341 ± 4,035 144,111 ± 1,748 209,215 ± 1,165 271,037 ± 6,789 397,125 ± 1,811 396,007 ± 2,729  Xử lý số liệu thống kê Analysis of Variance for Duong khu - Type III Sums of Squares -Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value -MAIN EFFECTS A:Ham luong 197653,0 49413,4 3719,24 0,0000 B:Thoi gian 485200,0 121300,0 9130,00 0,0000 INTERACTIONS AB 48540,6 16 3033,79 228,35 0,0000 RESIDUAL 664,293 50 13,2859 -TOTAL (CORRECTED) 732058,0 74 Phụ lục 15 Khảo sát cách phối hợp hai loại enzyme ảnh hưởng đến hàm lượng Dgalacturonic acid tạo thành ủ tiêu đen Cách phối hợp Nhiệt độ ủ (0C) pH ủ Cellulase trước Pectinase sau 55 4,5 Pectinase trước Cellulase trước 45 3,5 55 4,5 45 3,5 50 4,0 Đồng thời Thử không Thử thật ∆OD 0,292 0,313 0,298 0,250 0,268 0,279 0,320 0,322 0,323 0,213 0,221 0,208 0,383 0,380 0,370 0,416 0,432 0,423 0,522 0,544 0,515 0,449 0,451 0,451 0,576 0,587 0,579 0,562 0,584 0,559 0,125 0,120 0,125 0,273 0,277 0,236 0,129 0,130 0,128 0,363 0,367 0,371 0,179 0,205 0,189 Độ pha lỗng Hàm lượng Dgalacturonic acid (µg) 1,787± 0,038 3,798 ± 0,263 1,872± 0,009 5,323 ± 0,047 2,767 ± 0,151  Xử lý số liệu thống kê ANOVA Table for D galactoronic acid by cach bo sung Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 56,16 14,04 488,66 0,0000 Within groups 0,287315 10 0,0287315 Total (Corr.) 56,4473 14 Phụ lục 16 Khảo sát cách phối hợp hai loại enzyme ảnh hưởng đến hàm lượng đường khử tạo thành ủ tiêu đen Cách phối hợp Nhiệt độ ủ pH ủ (0C) Cellulase trước Pectinase sau 55 4,5 Pectinase trước Cellulase sau 45 3,5 55 4,5 45 3,5 50 4,0 Đồng thời Thử không Thử thật ∆OD 0,266 0,254 0,248 0,179 0,181 0,178 0,231 0,231 0,226 0,171 0,170 0,169 0,227 0,227 0,223 0,583 0,601 0,579 0,828 0,848 0,809 0,661 0,683 0,659 0,883 0,881 0,865 0,849 0,843 0,833 0,317 0,348 0,332 0,650 0,667 0,631 0,430 0,453 0,434 0,712 0,711 0,696 0,622 0,617 0,610 Độ pha lỗng Hàm lượng đường khử (µmol) 835,324 ± 31,147 1632,787 ± 36,962 1103,148 ± 24,860 1776,548 ± 18,315 1549,520 ± 11,650  Xử lý số liệu thống kê ANOVA Table for Duong khu by cach bo sung Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1,86962E6 467405,0 454,83 0,0000 Within groups 10276,5 10 1027,65 Total (Corr.) 1,8799E6 14 Phụ lục 17 Khảo sát tỷ lệ phối hợp hai loại enzyme ảnh hưởng đến hàm lượng Dgalacturonic acid tạo thành ủ tiêu đen Hàm lượng cellulase (UI) Hàm lượng pectinase (UI) 200 20 200 30 200 40 150 40 100 40 Thử không Thử thật ∆OD 0,565 0,567 0,570 0,568 0,573 0,581 0,601 0,599 0,598 0,558 0,556 0,563 0,531 0,538 0,539 0,897 0,910 0,909 0,972 0,938 0,948 0,883 0,878 0,878 0,771 0,776 0,770 0,744 0,740 0,732 0,332 0,344 0,339 0,404 0,366 0,368 0,282 0,279 0,281 0,213 0,221 0,207 0,213 0,203 0,194 Hàm lượng Dgalacturonic acid (µg) 2,452 ± 0,035 2,749 ± 0,128 4,069 ± 0,022 3,09 ± 0,080 2,946 ± 0,118  Xử lý số liệu thống kê ANOVA Table for D galactoronic acid by ty le Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 4,4972 1,1243 98,47 0,0000 Within groups 0,114174 10 0,0114174 Total (Corr.) 4,61138 14 Phụ lục 18 Khảo sát tỷ lệ phối hợp hai loại enzyme ảnh hưởng đến hàm lượng đường khử tạo thành ủ tiêu đen Hàm lượng cellulase (UI) Hàm lượng pectinase (UI) 200 20 200 30 200 40 150 40 100 40 Thử không Thử thật ∆OD 0,160 0,163 0,164 0,186 0,189 0,190 0,231 0,177 0,187 0,162 0,165 0,172 0,182 0,178 0,161 0,403 0,406 0,407 0,517 0,523 0,520 0,580 0,591 0,587 0,435 0,441 0,462 0,449 0,443 0,433 0,243 0,243 0,243 0,331 0,334 0,330 0,350 0,414 0,400 0,273 0,276 0,291 0,267 0,266 0,272 Hàm lượng đường khử (µmol) 1223,019 ± 0,684 1668,413 ± 8,279 1950,627 ± 139,616 1406,877 ± 39,993 1349,596 ± 13,842  Xử lý số liệu thống kê ANOVA Table for Duong khu by ty le Analysis of Variance Source Sum of Squares Df Mean Square F-Ratio P-Value Between groups 1,01249E6 253123,0 39,51 0,0000 Within groups 64058,3 10 6405,83 Total (Corr.) 1,07655E6 14 ... việc bóc vỏ tiêu giải Điều đưa đến hướng ứng dụng chế phẩm enzyme cellulase pectinase nhằm bóc vỏ tiêu sọ hiệu quả, tiết kiệm thời gian dễ dàng áp dụng công nghiệp đáp ứng yêu cầu xuất 1.2 Mục tiêu. .. phẩm enzyme cellulase pecinase cơng ty Genencor để bóc vỏ tiêu xanh tiêu đen điều kiện pH, nhiệt độ, thời gian ủ, hàm lượng enzyme thời điểm áp dụng bổ sung enzyme vào quy trình bóc vỏ tiêu nhằm... Mục tiêu nghiên cứu - Rút ngắn thời gian bóc vỏ tiêu xanh tiêu đen để tạo tiêu sọ cách kết hợp enzyme cellulase pectinase - Tiêu bóc vỏ đều, đồng loạt Tiêu sọ sau xử lý đạt yêu cầu chất lượng