NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG ENZYME PROTEASE THỦY PHÂN NHAU HEO TẠO PHÂN BÓN LÁ Ngành

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG ENZYME PROTEASE THỦY PHÂN NHAU HEO TẠO PHÂN BÓN LÁ Ngành học : CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực : NGUYỄN CƠNG PHÁT Niên khóa : 2008 – 2012 Tháng 7/2012 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NƠNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG ENZYME PROTEASE THỦY PHÂN NHAU HEO TẠO PHÂN BÓN LÁ Giáo viên hƣớng dẫn Sinh viên thực ThS VÕ THỊ THÚY HUỆ NGUYỄN CÔNG PHÁT KS NGUYỄN MINH QUANG Tháng 7/2012 LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến: Ban giám hiệu trƣờng đại học Nơng Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh, ban chủ nhiệm Bộ môn Công nghệ Sinh Học tất q thầy tận tình hƣớng dẫn truyền đạt kiến thức q báu cho tơi suốt thời gian theo học trƣờng ThS Võ Thị Thúy Huệ, KS Nguyễn Minh Quang, ThS Trƣơng Phƣớc Thiên Hồng ln theo sát hƣớng dẫn tạo điều kiện tốt để tơi hồn thành khóa luận tốt nghiệp Anh Nguyễn Văn Út, Phan Hữu Tín, chị Nguyễn Trƣờng Ngọc Tú, Trƣơng Thị Ngọc Hân trại Thực Nghiệm viện nghiên cứu Công Nghệ Sinh Học Môi Trƣờng Trƣờng Đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh tận tình giúp đỡ, hƣớng dẫn hỗ trợ tơi nhiều suốt q trình thực khóa luận tốt nghiệp Các bạn Lê Văn Hiếu, Quách Văn Thiệu, Hồ Đức Quyết, Võ Đức Tuấn bạn tập thể lớp DH08SH giúp đỡ, động viên chia khó khăn, vui buồn suốt trình học tập nghiên cứu trƣờng Cuối xin gửi lời cảm ơn sâu sắc đến cha mẹ anh chị nuôi nấng, dạy dỗ khôn lớn, động viên, giúp đỡ tạo điều kiện cho suốt thời gian học tập Trƣờng đại học Nông Lâm Thành Phố Hồ Chí Minh Sinh viên thực Nguyễn Cơng Phát i TÓM TẮT Ngày vấn đề an ninh lƣơng thực thách thức ngành nông nghiệp nƣớc giới Trong đó, đất nơng nghiệp ngày bị thu hẹp, mơi trƣờng bị nhiễm, thiên tai, biến đổi khí hậu yêu cầu thiết đƣợc đặt phải tạo sản phẩm phân bón phục vụ cho trồng trọt nhằm cải thiện suất trồng đặc biệt phải thân thiện với môi trƣờng Dựa sở đề tài “nghiên cứu ứng dụng enzyme protease thủy phân heo tạo phân bón lá” đƣợc thực Nội dung bao gồm phân lập vi khuẩn từ mẫu bùn đáy ao, ruột cá, đất, sau sử dụng phản ứng sinh hóa để định danh vi khuẩn Bacillus subtilis Khảo sát khả sinh enzyme protease vi khuẩn phân lập yếu tố ảnh hƣởng đến hoạt động enzyme protease vi khuẩn sản sinh Khảo sát điều kiện tối ƣu nhằm xây dựng quy trình thủy phân heo để tạo phân bón hữu sinh học Ứng dụng thử nghiệm phân bón rau cải bẹ xanh nhằm tìm nồng độ sử dụng thích hợp chế phẩm phân bón tự tạo Kết nghiên cứu phân lập đƣợc chủng Bacillus subtilis, có chủng từ mẫu đất chủng từ ruột cá Chủng Ba17 phân lập từ đất có khả phân giải casein tốt tổng hợp enzyme protease với hoạt độ cao điều kiện tối ƣu 500C pH 7,6 31,95 UI/g Quy trình tối ƣu cho trình thủy phân heo enzyme protease đƣợc thiết lập với điều kiện pH 7,6, nồng độ enzyme so với chất UI/g, lƣợng nƣớc so với chất 150%, nhiệt độ thủy phân 500C thời gian 48 Nồng độ chế phẩm 8‰ sử dụng cải bẹ xanh cho suất 29,214 tấn/ha nồng độ thích hợp cải bẹ xanh ii SUMMARY Today, the issue of food security is a challenge for the agricultural sector of many countries in the world The decreasing of, agricultural land environmental polluted, natural disasters and climate change has woged the demand of fertilizer products for farming which can improve both crop yields, especially, friendly to the environment Thus, the subject of "applied research protease enzyme hydrolyzed pig placenta fertilizer" was performed Isolation of bacteria from the pond mud, gut fish and soil sample was done The biochemical reactions were applied to identify Bacillus subtilis Study of protease enzyme synthesis ability of isolated bacteria and other factors affecting the activity of the protease enzyme produced by bacteria Examined the optimal conditions for building protocols pig placenta hydrolyzed bio-organic fertilizer trials of fertilizer on Brassica juncea were performed in order to find the most appropriate concentration of fertilizer product As a result, strains Bacillus subtilis were isolated, including strains from soil samples and three strains from fish intestine The best strain that cuold best resolve casein and synthesite protease with high activity (31.95 UI/g) at 500C under optimum conditions and pH 7.6 was Ba17 strain isolated from soil Optimization process for the hydrolysis of pig placenta by protease was set to pH 7.6 conditions, 2UI/g enzyme levels compared to the substrate, water content compared to the substrate 150%, at 500C for 48 hours Appropriate concentration for use on Brassica juncea were identified as ‰ to yield 29.214 tons/ha Keywold: pig placenta, Bacillus subtilis, enzyme protease, Brassica juncea iii MỤC LỤC Trang Lời cảm ơn i Tóm tắt ii Summary iii Mục lục iv Danh sách từ viết tắt .vii Danh sách bảng viii Danh sách sơ đồ hình ix Chƣơng MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Yêu cầu đề tài 1.3 Nội dung nghiên cứu Chƣơng TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Sơ lƣợc vi khuẩn Bacillus subtilis 2.1.1 Đặc điểm phân loại phân bố vi khuẩn Bacillus subtilis 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Đặc điểm nuôi cấy 2.1.4 Đặc điểm sinh hoá 2.1.5 Một số ứng dụng vi khuẩn Bacillus subtilis 2.2 Sơ lƣợc enzyme protease 2.2.1 Lịch sử phát enzyme protease 2.2.2 Phân loại protease 2.2.3 Đặc điểm protease thu nhận từ nguồn vi sinh vật iv 2.2.4 Các yếu tố ảnh hƣởng đến hoạt động enzyme protease 2.2.5 Cơ chế thủy phân enzyme protease 2.2.6 Ứng dụng enzyme protease 2.3 Sơ lƣợc phân bón hữu sinh học 10 2.3.1 Xu hƣớng nghiên cứu phân hữu sinh học nƣớc 10 2.3.1.1 Các nghiên cứu nƣớc 10 2.3.1.2 Các nghiên cứu nƣớc 11 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 13 3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 13 3.2 Vật liệu, hóa chất, thiết bị dụng cụ dùng nghiên cứu 13 3.3 Nôi dung phƣơng pháp nghiên cứu 13 3.3.1 Phân lập thử phản ứng sinh hóa vi khuẩn Bacillus subtilis 13 3.3.1.1 Phân lập vi khuẩn Bacillus subtilis từ mẫu bùn, đất ruột cá 13 3.3.1.2 Khảo sát đặc điểm vi khuẩn phân lập 14 3.3.2 Khảo sát điều kiện thích hợp cho hoạt động enzyme protease 15 3.3.3 Khảo sát yếu tố ảnh hƣởng đến trình thủy phân 15 3.3.4 Khảo sát nồng độ sử dụng chế phẩm thích hợp cải bẹ xanh 17 3.3.5 Phƣơng pháp xử lý số liệu 17 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 18 4.1 Đặc điểm vi khuẩn Bacillus subtilis 18 4.1.1 Đặc điểm hình thái khuẩn lạc nghi nghờ Bacillus subtilis 18 4.1.2 Đặc điểm hình thái 21 khuẩn lạc nghi ngờ Bacillus subtilis 18 4.1.3 Đặc điểm sinh hóa 14 chủng trực khuẩn bắt màu Gram dƣơng 19 4.1.4 Hoạt độ enzyme protease chủng đƣợc chọn 21 v 4.2 Các điều kiện tối ƣu cho hoạt động enzyme protease 21 4.2.1 Nhiệt độ tối ƣu cho enzyme hoạt động 21 4.2.2 Xác định pH tối ƣu cho enzyme hoạt động enzyme protease 22 4.3 Các yếu tố ảnh hƣởng đến trình thủy phân heo enzyme protease 23 4.3.1 Ảnh hƣởng nồng độ enzyme đến trình thủy phân 23 4.3.2 Ảnh hƣởng nồng độ chất đến trình thủy phân 24 4.3.3 Ảnh hƣởng thời gian đến trình thủy phân 25 4.3.4 Ảnh hƣởng hàm lƣợng nƣớc đến trình thủy phân 26 4.3.5 Hoàn thiện quy trình thủy phân heo 26 4.4 Khảo nghiệm hiệu chế phẩm phân hữu sinh học dạng lỏng 28 Chƣơng KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 29 5.1 Kết luận 30 5.2 Đề nghị 30 TÀI LIỆU THAM KHẢO 31 PHỤ LỤC vi DANH SÁCH CÁC TỪ VIẾT TẮT CRD Completely Randomized Design HCSH Hữu sinh học IUBMB International Union of Biochemistry and Molecular Biology LLL Lần lặp lại NA Nutrient agar NB Nutrient Broth NT Nghiệm thức NSLT Năng suất lý thuyết NSTT Năng suất thực tế NTS Đạm tổng số RCBD Randomized Conpletely Block Design UI International Unit vii DANH SÁCH CÁC BẢNG Trang Bảng 4.1 Kết thử phản ứng sinh hóa 14 chủng bắt màu Gram dƣơng 19 Bảng 4.2 Kết định tính vòng phân giải casein chủng Bacillus subtilis 20 Bảng 4.3 Kết định lƣợng hoạt độ enzyme protease 21 Bảng 4.4 Ảnh hƣởng nhiệt độ lên hoạt tính protease chủng Ba17 tổng hợp 22 Bảng 4.5 Ảnh hƣởng pH lên hoạt độ protease chủng Ba17 tổng hợp 23 Bảng 4.6 Ảnh hƣởng nồng độ enzyme lên trình thủy phân 24 Bảng 4.7 Ảnh hƣởng nồng độ chất lên trình thủy phân 24 Bảng 4.8 Ảnh hƣởng thời gian lên trình thủy phân 25 Bảng 4.9 Ảnh hƣởng hàm lƣợng nƣớc lên trình thủy phân 26 Bảng 4.10 Thành phần dinh dƣỡng heo dịch thủy phân 28 Bảng 4.11 Ảnh hƣởng nồng độ chế phẩm lên suất yếu tố cấu thành suất cải bẹ xanh 28 viii Thử phản ứng MR (Methyl – Red) Chuẩn bị: Môi trƣờng Clark lubs Thuốc thử Methyl Red Giống vi khuẩn Bacillus subtilis Cách làm: Dùng que cấy vòng lấy vi khuẩn cấy vào môi trƣờng Clark lubs, nuôi nhiệt độ 370C/24 Sau nhỏ – giọt thuốc thử Methyl Red vào canh khuẩn đọc kết Kết quả: Phản ứng MR (-): Mơi trƣờng có màu vàng Phản ứng MR (+): Mơi trƣờng có màu đỏ Thử phản ứng khử Nitrate (NO3) Chuẩn bị: Môi trƣờng Nitrate Dung dịch thuốc thử Giess A, Giess B Giống vi khuẩn Bacillus subtilis Cách làm: Dùng que cấy thẳng lấy vi khuẩn cấy sâu vào môi trƣờng thạch nitrate, nuôi nhiệt độ 370C/24 Sau 24 nhỏ vào môi trƣờng – giọt Giess A, sau nhỏ tiếp – giọt Giess B Kết quả: Phản ứng (-): Mơi trƣờng có màu vàng Phản ứng (+): Mơi trƣờng có màu đỏ Thử khả sử dụng Citrate Chuẩn bị: Môi trƣờng Simon Citrate Giống vi khuẩn Bacillus subtilis Cách làm: Cấy vi khuẩn vào môi trƣờng Citrate Ủ nhiệt độ 370C/24 Kết quả: Phản ứng (-): Mơi trƣờng có màu xanh mạ non Phản ứng (+): Mơi trƣờng có màu xanh dƣơng PHỤ LỤC Phƣơng pháp Anson xác định hoạt tính enzyme protease Nguyên lý phƣơng pháp Casein bị phân giải môi trƣờng kiềm dƣới tác dụng protease tạo sản phẩm đoạn peptide ngắn hòa tan tricloroacetic axit (TCA), xác định lƣợng tyrosine tryptophan hòa tan thuốc thử Folin Đối tƣợng áp dụng phƣơng pháp Phƣơng pháp áp dụng để xác định hoạt độ enzyme thực phẩm, thức ăn chăn ni, chế phẩm sinh học Dụng cụ hố chất Dụng cụ, thiết bị - Máy lắc - Máy đo mật độ quang - Bếp ổn nhiệt - Bình tam giác 250 ml - Bình định mức 10 ml, 100 ml, 500ml - Ống nghiệm - Pipet ml, ml, 10 ml Hoá chất - Dung dịch Na2HPO4 1/15M: hòa tan 5,9690g Na2HPO4.12H2O nƣớc vừa đủ 250 ml - Dung dịch KH2PO4 1/15M : hòa tan 0,9072 g KH2PO4 nƣớc vừa đủ 100 ml - Dung dịch đệm Sorensen pH 7,6: trộn chung 88,5 ml dung dịch Na2HPO4 1/15M với 11,5 ml dung dịch KH2PO4 1/15M đến pH đạt 7,6 - Dung dịch casein 1%: pha 1g Casein 100 ml dung dịch đệm Sorensen - Dung dịch TCA 5%: hòa tan g TCA nƣớc cho đủ 100 ml - Dung dich NaOH 0,5N: hòa tan 10 g NaOH nƣớc cho đủ 500 ml - Thuốc thử Folin ( pha loãng với nƣớc cất theo tỷ lệ 1:4) - Dung dich HCl 0,2N: trộn 4,25 ml HCl đậm đặc với nƣớc cho đủ 250 ml - Dung dịch Tyrosine 20 µM/l : khuấy nghiền 1,8119 g Tyrosin dung dịch HCl 0,2N vừa đủ 500 ml - Dung dịch Tyrosin chuẩn µM/l dung dịch HCl 0,2N: pha lỗng ml dung dịch Tyrosine 20 µM/l dung dịch HCl 0,2N thành 100 ml Dựng đƣờng chuẩn Tyrosine - Chuẩn bị dung dịch tyrosin chuẩn - Từ dung dịch tyrosin chuẩn µM/l , xây dựng đƣờng chuẩn với dung dịch tyrosin có nồng độ từ 0,2 -1,0 µM/l Dung dịch hóa chất Ống nghiệm Dung dịch tyrosine chuẩn (ml) 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 Lượng tyrosine tương ứng 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 5,0 Dung dịch HCl 0,2N (ml) 4,8 4,6 4,4 4,2 4,0 5,0 Dung dịch NaOH 0,5N (ml) 10 10 10 10 10 10 Thuốc thử Folin (ml) 3 3 3 (µM) Lắc mạnh, sau 10 phút đo OD bƣớc sóng 660nm Ống số ống kiểm chứng (KC), ống lại ống thí nghiệm (TN) Vẽ đƣờng chuẩn tyrosine tƣơng quan tƣơng quan lƣợng tyrosine (µM) ΔOD (ΔOD = ODTN - ODKC ) Phƣơng pháp tiến hành Mẫu cân xác 10 g ( mẫu rắn) 10 ml (đối với mẫu lỏng) cho vào becher, định mức vừa đủ 100 ml nƣớc cất đem lắc máy lắc vòng 15 phút Đem ly tâm lạnh với 4000 vòng/ phút 10 phút, thu dịch, bỏ bã (đối với mẫu lỏng không cần ly tâm, lắc để đồng mẫu) Lấy ống nghiệm sạch, khô, tiến hành làm ống thử thật, ống thử khơng Ống nghiệm Dung dịch hóa chất Thử thật Thử không Dung dịch casein 1% (ml) 5 Dung dịch TCA 5% (ml) 10 Dung dịch enzyme mẫu (ml) 1 Lắc giữ 35,5oC 20 phút Dung dịch TCA 5% (ml) 10 Để yên 30 phút, lọc lấy dịch bên dƣới Lấy ống nghiệm khác,cho vào ống thứ 5ml dịch lọc ống thử thật cho vào ống thứ hai 5ml dịch lọc cùa ống thử không Tiếp tục thêm vào ống 10ml NaOH 0,5N 3ml thuốc thử Folin, lắc mạnh, sau 10 phút đo OD bƣớc sóng 660nm ΔOD = ODTT – ODTK, sau dựa vào đồ thị chuẩn suy đƣợc µM tyrosine Tính kết Định nghĩa đơn vị Anson: đơn vị Anson lƣợng enzyme tối thiểu điều kiện thí nghiệm ( 35,50C: pH 7,6 … ) thủy phân casein phút tạo thành sản phẩm hòa tan TCA, phản ứng với thuốc thử Folin cho ta độ hấp thu OD bƣớc sóng 660nm tƣơng ứng với µM tyrosine đƣờng chuẩn µM tyrosine * V * L Hđ Protease (UI/g) = t*m*v Với: Hđ Protease : hoạt độ enzyme protease (UI/g) V : tổng thể tích hỗn hợp ống thử thật ống thử khơng (ml) v : thể tích dịch lọc đem phân tích (ml) t : thời gian thủy phân (phút) m : khối lƣợng mẫu enzyme đem xác định hoạt tính (g) L: độ pha lỗng enzyme µM tyrosine: lƣợng µM tyrosine v (ml) suy từ đƣờng chuẩn Đƣờng chuẩn tyrosine xác định hoạt độ protease theo phƣơng pháp Anson Bảng Sự tƣơng quan OD660nm với nồng độ tyrosine µM tyrosine 0,2 0,4 0,6 0,8 ΔOD 0,129 0,239 0,362 0,474 0,591 0,7 y = 0,5876x + 0,0054 R² = 0,9996 0,6 0,5 ΔOD 0,4 0,3 0,2 0,1 0 0,2 0,4 0,6 0,8 µM Tyrosine Hình Đƣờng chuẩn tyrosine để xác định hoạt độ enzyme protease 1,2 Phƣơng pháp đếm khuẩn lạc Chuẩn bị đĩa môi trƣờng TSA hấp tiệt trùng để khô mặt thạch Lấy ml dịch vi khuẩn cần đếm pha loãng nhiều nồng độ liên tiếp (theo phƣơng pháp pha loãng thập phân) dung dịch nƣớc muối sinh lí Cấy trang 0,1 ml dịch pha lỗng lên mơi trƣờng TSA (mỗi nồng độ trang đĩa), ủ 370C 24 Đem đếm số lƣợng vi khuẩn Đếm số lƣợng bào tử phƣơng pháp đếm khuẩn lạc: Lấy dịch nuôi cấy vi khuẩn pha lỗng xử lí tế bào sinh dƣỡng cách đun 1000C giờ, sau thực bƣớc nhƣ Số khuẩn lạc 1g mẫu hay ml dịch mẫu độ pha lỗng Cơng thức: X=Ax x Trong đó: X: Số lƣợng vi khuẩn 1g mẫu hay ml dịch mẫu A: Số khuẩn lạc trung bình có đĩa (trong tổng số đĩa có nồng độ pha loãng) h: Độ pha loãng tứ (10-7, 10-8, 10-9, …) V: Thể tích dịch mẫu cấy lên đĩa Số khuẩn lạc trung bình 1g mẫu hay ml dịch mẫu độ pha loãng liên tiếp nhau: Cơng thức: Y= Trong đó: Y: Số khuẩn lạc trung bình độ pha lỗng X1, X2, X3: Số khuẩn lạc trung bình có 1g mẫu hay ml dịch mẫu nồng độ pha loãng PHỤ LỤC Bảng Khảo sát nhiệt độ tối ƣu cho enzyme hoạt động Nhiệt độ phản ứng 30 35 40 45 50 55 60 65 70 75 Lần lặp lại 15,731 17,337 23,381 30,113 31,908 28,854 20,854 17,730 5,500 0,830 15,821 17,573 23,724 29,627 32,109 28,583 20,315 17,798 6,361 0,739 Trung bình 16,065 17,353 23,244 29,104 31,832 28,281 20,877 18,144 6,803 0,721 15,872 17,421 23,450 29,615 31,950 28,573 20,682 17,893 6,221 0,763 Bảng Bảng ANOVA cho thí nghiệm khảo sát nhiệt độ tối ƣu A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 2710.215 301.135 2848.026 0.0000 Within 20 2.115 0.106 -Total 29 2712.329 Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng cho thí nghiệm khảo sát nhiệt độ tối ƣu Duncan's Multiple Range Test Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 = = = = = = = = = = 15.87 17.42 23.45 29.62 31.95 28.57 20.68 17.89 6.220 0.7600 Ranked Order G F D B A C E F H I Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean 10 = = = = = = = = = = 31.95 29.62 28.57 23.45 20.68 17.89 17.42 15.87 6.220 0.7600 A B C D E F F G H I Bảng Khảo sát pH tối ƣu cho enzyme hoạt động Nhiệt độ phản Lần lặp lại Trung bình ứng 6,8 15,708 15,571 15,897 15,725 7,2 22,198 22,674 22,456 22,443 7,6 29,709 29,492 29,719 29,640 8,0 26,223 25,975 26,121 26,106 8,4 14,840 15,604 14,716 15,053 Bảng Bảng ANOVA cho khảo sát pH tối ƣu cho enzyme hoạt động A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 488.526 122.132 1760.676 0.0000 Within 10 0.694 0.069 -Total 14 489.220 Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng cho khảo sát pH tối ƣu cho enzyme hoạt động Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.6797 s_ = 0.1517 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 15.73 22.44 29.64 26.11 15.05 Ranked Order D C A B E Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = 29.64 26.11 22.44 15.73 15.05 A B C D E Bảng Lƣợng enzyme tối ƣu cho trình thủy phân Lần lặp lại Nồng độ enzyme (UI) 25 17,989 17,513 17,239 17.550 50 23,285 23,109 22,633 23.009 75 25,470 25,099 24,819 25.129 100 29,337 28,657 28,763 28.919 125 27,488 27,284 27,312 27.361 150 25,778 26,640 26,773 26.397 Trung bình Bảng Bảng ANOVA lƣợng enzyme tối ƣu cho trình thủy phân A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 245.773 49.155 384.076 0.0000 Within 12 1.536 0.128 -Total 17 247.308 Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng lƣợng enzyme tối ƣu cho trình thủy phân Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.8923 s_ = 0.2066 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 17.55 23.01 25.13 28.92 27.36 26.40 Ranked Order F E D A B C Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 28.92 27.36 26.40 25.13 23.01 17.55 A B C D E F Bảng 10 Lƣợng chất tối ƣu cho trình thủy phân Lần lặp lại Nồng độ chất (g) 25 24,840 24,574 24,342 24.585 50 29,197 28,784 28,006 28.662 75 26,255 26,199 26,535 26.330 100 24,209 24,041 23,278 23.843 125 23,018 23,621 22,661 23.100 150 20,286 20,511 20,237 20.345 Trung bình Bảng 11 Bảng ANOVA lƣợng chất tối ƣu cho trình thủy phân A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 121.007 24.201 150.755 0.0000 Within 12 1.926 0.161 -Total 17 122.934 Bảng 12 Bảng trắc nghiệm phân hạng lƣợng chất tối ƣu cho trình thủy phân Duncan's Multiple Range Test LSD value = 1.001 s_ = 0.2317 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 24.59 28.66 26.33 23.84 23.10 20.35 Ranked Order C A B CD D E Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 28.66 26.33 24.59 23.84 23.10 20.35 A B C CD D E Bảng 13 Thời gian tối ƣu cho trình thủy phân Lần lặp lại Thời gian (giờ) Trung bình 12 10,395 10,634 10,536 10.522 24 18,227 18,353 18,276 18.285 36 26,129 26,521 26,493 26.381 48 28,006 28,048 28,132 28.062 60 27,277 27,235 27,320 27.277 72 27,081 27,123 27,046 27.083 Bảng 14 Bảng ANOVA thời gian tối ƣu cho trình thủy phân A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 749.807 149.961 12208.314 0.0000 Within 12 0.147 0.012 -Total 17 749.955 Bảng 15 Bảng trắc nghiệm phân hạng thời gian tối ƣu cho trình thủy phân Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.2732 s_ = 0.06325 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 10.52 18.29 26.38 28.06 27.28 27.08 Ranked Order E D C A B B Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = 28.06 27.28 27.08 26.38 18.29 10.52 A B B C D E Bảng 16 Lƣợng nƣớc tối ƣu cho trình thủy phân Lần lặp lại Lƣợng nƣớc (%) 25 22,822 22,654 22,402 22.626 50 27,796 27,754 27,796 27.782 75 28,763 29,001 28,594 28.786 100 29,099 29,085 29,015 29.066 125 29,589 29,309 29,197 29.365 150 29,701 29,743 29,561 29.688 175 27,193 27,516 27,207 27.305 Trung bình Bảng 17 Bảng ANOVA lƣợng nƣớc tối ƣu cho trình thủy phân A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob -Between 106.593 17.765 721.781 0.0000 Within 14 0.345 0.025 -Total 20 106.938 Bảng 18 Bảng trắc nghiệm phân hạng lƣợng nƣớc tối ƣu cho trình thủy phân Duncan's Multiple Range Test LSD value = 0.3843 s_ = 0.09129 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = 22.63 27.78 28.79 29.07 29.37 29.67 27.31 Ranked Order F D C BC AB A E Mean Mean Mean Mean Mean Mean Mean = = = = = = = 29.67 29.37 29.07 28.79 27.78 27.31 22.63 A AB BC C D E F Bảng 19 Ảnh hƣởng nồng độ chế phẩm lên số Lần lặp lại Nồng độ chế phẩm (0/00) ĐC 5,80 5,60 5,80 5,73 7,20 6,80 7,00 7,00 7,80 8,40 8,40 8,20 12 6,80 7,00 6,80 6,87 Trung bình Bảng 20 Bảng ANOVA ảnh hƣởng nồng độ chế phẩm lên số A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -lll 0.02 0.010 0.17 0.8477 nt 9.16 3.052 51.83 0.0001 Error 0.35 0.059 Non-additivity 0.09 0.090 1.70 Residual 0.26 0.053 -Total 11 9.53 Bảng 22 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng nồng độ chế phẩm lên số Least Significant Difference Test LSD value = 0.7353 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 5.730 7.000 8.200 6.870 Ranked Order C B A B Mean Mean Mean Mean = = = = 8.200 7.000 6.870 5.730 A B B C Bảng 23 Ảnh hƣớng nồng độ chế phẩm lên trọng lƣợng Lần lặp lại Nồng độ chế phẩm (0/00) ĐC 28,054 26,292 29,292 27,879 54,304 53,812 55,614 54,577 99,448 101,410 106,080 102,313 12 61,532 63,710 61,600 62,281 Trung bình Bảng 8.1 Bảng ANOVA ảnh hƣớng nồng độ chế phẩm lên trọng lƣợng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -lll 12.86 6.431 1.85 0.2508 NT 8469.34 2823.113 810.86 0.0000 Error 17.41 3.482 -Total 10 8499.61 Bảng 24 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣớng nồng độ chế phẩm lên trọng lƣợng Least Significant Difference Test LSD value = 6.143 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 28.19 54.58 102.3 62.28 Ranked Order D C A B Mean Mean Mean Mean = = = = 102.3 62.28 54.58 28.19 A B C D Bảng 25 Ảnh hƣởng nồng độ chế phẩm lên chiều cao Lần lặp lại Nồng độ chế phẩm (0/00) ĐC 23,46 24,14 23,70 23,77 29,02 29,30 28,92 29,08 37,76 37,90 37,48 37,71 12 31,62 30,68 30,74 31,01 Trung bình Bảng 26 Bảng ANOVA ảnh hƣởng nồng độ chế phẩm lên chiều cao A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Source Freedom Squares Mean Square F-value Prob -LLL 0.20 0.102 0.81 0.4870 NT 298.81 99.604 790.58 0.0000 Error 0.76 0.126 Non-additivity 0.01 0.012 0.08 Residual 0.74 0.149 -Total 11 299.77 Bảng 27 Bảng trắc nghiệm phân hạng ảnh hƣởng nồng độ chế phẩm lên chiều cao Least Significant Difference Test LSD value = 1.075 at alpha = 0.010 Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 23.77 29.08 37.71 31.01 Ranked Order D C A B Mean Mean Mean Mean = = = = 37.71 31.01 29.08 23.77 A B C D ... hoạt hóa có chất khác nhƣ coenzym NAD+, NADP+, vitamin làm nhiệm vụ chuyển hyrogen, ADP chuyển phosphate Có thể nói chất hoạt hóa có khả phá vỡ số liên kết phân tử enzym, loại bỏ vài đoạn peptide