KHẢO SÁT SỰ SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM Cordyceps sinensis TRONG CÁC GIÁ THỂ NUÔI CẤY KHÁC NHAU

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM Cordyceps sinensis TRONG CÁC GIÁ THỂ NUÔI CẤY KHÁC NHAU Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Sinh viên thực hiện: ĐẶNG THANH DUYÊN Niên khóa: 2007 - 2011 Tháng 07/2011 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MƠN CƠNG NGHỆ SINH HỌC KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP KHẢO SÁT SỰ SINH TRƯỞNG VÀ PHÁT TRIỂN CỦA NẤM Cordyceps sinensis TRONG CÁC GIÁ THỂ NUÔI CẤY KHÁC NHAU Hướng dẫn khoa học Sinh viên thực TS LÊ THỊ DIỆU TRANG ĐẶNG THANH DUYÊN Tháng 07/2011 LỜI CẢM ƠN Tôi xin chân thành cảm ơn! Cha me, cha mẹ người tạo điều kiện tốt cho học hành.Cha mẹ bên cạnh chỗ dựa vững cho sống TS Lê Thị Diệu Trang tận tình hướng dẫn, bảo giúp đỡ em q trình thực đề tài Cơ truyền đạt nhiều kiến thức kinh nghiệm trình nghiên cứu khoa học Quý thầy cô trường Đại học Nông Lâm Thành phố Hồ Chí Minh giảng dạy em suốt q trình học tập trường Thầy dạy cho em nhiều kiến thức bổ ích Các thầy cô, cán Viện CNSH Môi Trường tạo điều kiện cho thực đề tài Các bạn lớp DH07SH trải qua năm đại học trường người bạn bên tôi chia sẻ niềm vui nỗi buồn Long An, Ngày 11 tháng năm 2011 Sinh viên thực Đặng Thanh Duyên i   TĨM TẮT C.sinensis hay đơng trùng hạ thảo loại dược liệu quý biết đến từ lâu lịch sử đông y C.sinensis sử dụng chữa bệnh phổi, thận từ hàng trăm năm y học cổ truyền Trung Quốc Gần nhiều cơng trình nghiên cứu cho thấy Cordyceps có hoạt tính tăng cường miễn dịch, kháng ung thư chống oxy hóa Do sản phẩm tự nhiên thường có suất ngày giảm nhu cầu sử dụng tăng cao, người ta nghiên cứu tìm cách thay sản phẩm Cordyceps tự nhiên sản phẩm Cordyceps sản xuất mơi trường nhân tạo Mục đích nghiên cứu nhằm góp phần tìm kiếm điều kiện mơi trường tối ưu cho việc nuôi cấy nhân tạo sợi nấm đông trùng hạ thảo Sợi nấm trồng túi nhựa chứa số loại hạt ngũ cốc khử trùng hạt bắp, kê có khơng có bổ sung bột nhộng tằm Sau tiến hành khảo sát sinh trưởng phát triển nấm C.sinensis hạt ngũ cốc Kết quả: Ghi nhận đặc điểm hình thái đặc điểm, tốc độ sinh trưởng C.sinensis nuôi cấy giá thể khác Trong giá thể sử dụng nuôi cấy, giá thể bắp - nhộng cho hiệu cao trình phát triển sinh khối nấm C.sinensis Kết luận: giá thể bắp - nhộng lựa chọn tối ưu thành phần môi trường nuôi cấy C.sinensis để đạt sinh khối cao ii   SUMMARY The title of thesis: ‘‘Investigation growth and development of C.sinensis in different culture mediums’’ C.sinensis or winter worm summer grass is a valuable traditional medicine for long time ago It was used to treat diseases related to kidney and lung for hundreds of years in China Recently, many studies indicated that extracts of C.sinensis help improving immune response, anti-tumor and anti-oxidation Since natural product of C.sinensis is limited and yield has been declining through years while the demand for healthy foods and medicine is increasing, the search for substitutes of the natural products by products cultured in an available media is considered The purpose of this study is to contribute to finding proper substrate for a solid media The mycelium is grown in plastic bags full of sterilized medium, which is almost always some kinds of cereal grain This grain is corn or millet with or without supplementation with Bombyx mori pupal powder Then we examined growth and development of C.sinensis in this grain Results: Morphological characters were observed and growth speed was recorded For different media showed high effect in producing high biomass of the fungus Conclusion and suggestion: The corn-silkworm pupal powder media can be considered as the best components for culture media to obtain highest fungal biomass Keywords: C.sinensis, solid culture media iii   MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i   TÓM TẮT ii  SUMMARY iii  MỤC LỤC iv  DANH SÁCH CÁC BẢNG vi  DANH SÁCH CÁC HÌNH vi  Chương MỞ ĐẦU 1  1.1 Đặt vấn đề 1  1.2 Yêu cầu .2  1.3 Nội dung thực 2  Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU .3  2.1 Sơ lược C.sinensis 3  2.1.1.Phân loại khoa học 3  2.1.2 Sự phân bố nấm C.sinensis .4  2.1.3 Cơ chế xâm nhiễm nấm C.sinensis vào vật chủ 4  2.1.4 Mô tả đông trùng hạ thảo .4  2.1.5 Thành phần hóa học đơng trùng hạ thảo 6  2.1.6 Tác dụng đông trùng hạ thảo 6  2.2 Các phương pháp nhân sinh khối C.sinensis 8  Chương PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 11  3.1 Thời gian địa điểm nghiên cứu 11  3.1.1 Thời gian 11  3.1.2 Địa điểm 11  3.2 Vật liệu thí nghiệm 11  3.2.1 Đối tượng nghiên cứu 11  3.2.2 Dụng cụ thiết bị 11  3.2.3 Hóa chất .11  3.3 Phương pháp nghiên cứu 11  3.3.1 Chuẩn bị môi trường 11  3.3.2 Phục hồi nguồn nấm 12  iv   3.3.3 Khảo sát hình thái 12  3.3.4 Khảo sát tốc độ sinh trưởng môi trường bán rắn 12  3.3.5 Đánh giá chất lượng nấm C.sinensis nuôi cấy giá thể 12  Chương KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 13  4.1 Đặt điểm hình thái khả hình thành thể C.sinensis .13  4.2 Sự phát triển nấm C.sinensis giá thể khác 15  4.2.1 Đặc điểm phát triển nấm C.sinensis giá thể 15  4.2.2 So sánh phát triển nấm C.sinensis giá thể khác 19  4.3 Đánh giá chất lượng nấm C.sinensis sau nuôi cấy giá thể 22  Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 24  5.1 Kết luận 24  5.2 Đề nghị 24  TÀI LIỆU THAM KHẢO .25  PHỤ LỤC 27  v   DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 4.1 Mức độ lan tơ nấm C.sinensis giá thể bắp .15 Bảng 4.2 Mức độ lan tơ nấm C.sinensis giá thể bắp - nhộng 17 Bảng 4.3 Mức độ lan tơ nấm C.sinensis giá thể bắp - kê 18 Bảng 4.4 Mức độ lan tơ nấm C.sinensis giá thể bắp - kê - nhộng 19 Bảng 4.5 Mức độ phát triển nấm C.sinensis 19 Bảng 4.6 Lượng giá thể lại nghiệm thức sau 29 ngày 20 Bảng 4.7 Kết phân tích thống kê phần mềm MSTATC .21 Bảng 4.8 Kết phân tích hàm lượng amino axit .23 DANH SÁCH CÁC HÌNH Hình Hình 2.1 C militaris C.sinensis Hình 2.2 Nấm C.sinensis mọc thành .4 Hình 2.3 Mô tả nấm mọc thành Hình 4.1 Khuẩn lạc nấm C.sinensis môi trường PGA 13 Hình 4.2 Hình thái nấm C.sinensis kính hiển vi 13 Hình 4.3 Bào tử nấm C.sinensis kính hiển vi .14 Hình 4.4 Quả thể nấm C.sinensis .14 Hình 4.5 Nấm C.sinensis giá thể bắp .16 Hình 4.6 Nấm C.sinensis giá thể bắp - nhộng 16 Hình 4.7 Nấm C.sinensis giá thể bắp - kê 17 Hình 4.8 Nấm C.sinensis giá thể bắp - kê - nhộng 18 Hình 4.9 Nấm C.sinensis phát triển giá thể sau 29 ngày 22 vi   Chương MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Đông trùng hạ thảo dạng kí sinh lồi nấm túi có tên khoa học C.sinensis với ấu trùng số loài trùng cánh vảy Phần dược tính thuốc chứng minh chất chiết xuất từ nấm C.sinensis Đông trùng hạ thảo vị thuốc bồi bổ q giá, có tác dụng tích cực với bệnh rối loạn tình dục, thận hư, liệt dương, di tinh, đau lưng mỏi gối, ho hen phế hư phế, thận hư, có tác dụng tốt trẻ em chậm lớn Một số nghiên cứu đại đơng trùng hạ thảo có tác dụng tăng cường cơng tuyến thượng thận, cải thiện chức thận, nâng cao lực miễn dịch, kháng khuẩn, kháng virus, chống ung thư phóng xạ Mặt khác nghiên cứu cổ truyền thực nghiệm đại xác định đông trùng hạ thảo tác dụng phụ thể người động vật Thật từ xưa đến đông trùng hạ thảo biết đến loại thần dược quý giá Tuy nhiên, tự nhiên C.sinensis sinh sống phát triển vùng núi cao từ 3500 – 5000 m so với mực nước biển khí hậu lạnh Vì vậy, việc nghiên cứu tìm điều kiện ni cấy thích hợp để C.sinensis sản sinh nhiều hợp chất có lợi tương tự C.sinensis tự nhiên nhằm đáp ứng nhu cầu ngày tăng người cần thiết Do nhiều nước giới Mỹ, Nhật, Trung Quốc có nhiều nghiên cứu giá thể trồng C.sinensis họ tìm loại giá thể thích hợp để ni cấy C.sinensis Nhằm góp phần tìm kiếm giá thể thích hợp để ni cấy nhân tạo sợi nấm C.sinensis, tiến hành đề tài “Khảo sát sinh trưởng phát triển nấm C.sinensis giá thể nuôi cấy khác nhau”   1.2 u cầu Tìm loại giá thể thích hợp nuôi cấy nấm C.sinensis thông qua việc khảo sát tốc độ phát triển nấm C.sinensis nuôi cấy giá thể 1.3 Nội dung thực ¾ Khảo sát đặc điểm hình thái C.sinensis ¾ Khảo sát sinh trưởng phát triển C.sinensis nuôi cấy giá thể khác ¾ Đánh giá chất lượng nấm C.sinensis sau nuôi cấy giá thể Phân tích sơ đánh giá thành phần amino axit nấm C.sinensis   Hình 4.3 Bào tử nấm C.sinensis kính hiển vi quan sát vật kính 100X Khuẩn lạc nấm C.sinensis có màu trắng, mọc lên bề mặt thạch nhìn giống nút bơng Sợi nấm có màu trắng quan sát kính hiển vi thấy sợi nấm có vách ngăn, sợi nấm phân nhánh Bào tử nấm C.sinensis có hình cầu hay hình van, màu trắng trong, bề mặt nhẵn Khi nuôi cấy nấm C.sinensis 22oC với điều kiện có ánh sáng yếu, sợi nấm hình thành thể mơi trường thạch sau khoảng 45 - 50 ngày Cây nấm mọc cao lên bề mặt sợi nấm, nấm có màu vàng cam, hình trụ tròn, dài thẳng đứng, phần đầu phình to Hình 4.4 Quả thể nấm C.sinensis 14   Theo Đặng Trường Nguyễn, (2010) C.sinensis có khả hình thành mơi trường lỏng 22oC hình dạng thể chưa rõ ràng Điều chứng tỏ khả nấm C.sinensis hình thành thể mơi trường nhân tạo hồn tồn có thể, nghiên cứu sâu nhằm xác định môi trường điều kiện nuôi cấy tối ưu để nấm C.sinensis hình thành thể môi trường nhân tạo 4.2 Sự phát triển nấm C.sinensis giá thể khác Nấm C.sinensis nuôi cấy giá thể, tiến hành đo thể tích sợi nấm phát triển giá thể Kết đo liên tục từ ngày nuôi cấy đến ngày thứ 41 (giá thể bắp đến ngày thứ 29) với khoảng thời gian ngày/lần đo Với thể tích mảnh thạch mang sợi nấm cấy giá thể vào ngày khoảng 0,2 cm3 4.2.1 Đặc điểm phát triển nấm C.sinensis giá thể a) Đặc điểm phát triển nấm C.sinensis giá thể bắp Bảng 4.1 Mức độ lan tơ nấm C.sinensis giá thể bắp Đợt Đợt Đợt Ngày 3 (cm ) (%) (cm ) (%) (cm3) 0,2 0,1 0,2 0,1 0,2 11 12,7 12,7 54,6 30 58,24 32 54,6 13 82 45 100,1 55 91 0,1 31 50 17 91 50 109,3 60 100,1 55 55 21 100,1 55 127,4 70 109,2 60 62 25 109 60 136,5 75 118 65 67 29 33 118,5 125,6 65 69 151 160,2 83 88 132,8 140,1 73 77 74 78 37 131 72 163,5 90 145,5 80 81 41 136,3 75 169,2 93 % = (thể tích lan tơ : thể tích giá thể) x 100% 149,2 82 83 15   (%) 0,1 30 50 Giá trị trung bình (%) Hình 4.5 Nấm C.sinensis giá thể (a) Giá thể bắp chưa cấy nấm; (b) Sợi nấm C.sinensis phát triển giá thể bắp sau 41 ngày Tốc độ tăng trưởng nấm giá thể bắp từ ngày - chậm, bắt đầu tăng nhanh từ ngày - 13, chậm từ ngày 13 - 41 Tốc độ tăng trưởng trung bình nấm C.sinensis giá thể bắp 2,02%/ngày b) Đặc điểm phát triển nấm C.sinensis giá thể bắp - nhộng Hình 4.6 Nấm C.sinensis giá thể (a) Giá thể bắp - nhộng chưa cấy nấm; (b) Sợi nấm C.sinensis phát triển giá thể bắp - nhộng sau 29 ngày 16   Bảng 4.2 Mức độ lan tơ nấm C.sinensis giá thể bắp - nhộng Giá trị Đợt Đợt Đợt Ngày trung bình (cm3) (%) (cm3) (%) (cm3) (%) (%) 0,2 0,1 0,2 0,1 0,2 0,1 0,1 10,9 12,74 12,72 7 63,7 35 74,61 41 72,5 40 39 13 109,1 60 127 70 118,3 65 65 17 127,2 70 145,6 80 136,4 75 75 21 145,6 80 154,7 90 154,7 85 85 25 163,8 90 169,3 97 169,3 93 93 29 172,9 95 178,4 99 178,4 % = (thể tích lan tơ : thể tích giá thể) x 100% 98 97 Tốc độ tăng trưởng nấm giá thể bắp - nhộng chậm từ ngày - 5, tăng nhanh từ ngày - 13, chậm lại từ ngày 13 – 29 Tốc độ tăng trưởng trung bình nấm C.sinensis giá thể bắp - nhộng 3,35%/ngày c) Đặc điểm phát triển nấm C.sinensis giá thể bắp - kê Hình 4.7 Nấm C.sinensis giá thể (a) Giá thể bắp - kê chưa cấy nấm; (b) Sợi nấm C.sinensis phát triển giá thể bắp - kê sau 41 ngày Tốc độ tăng trưởng nấm giá thể bắp - kê chậm từ ngày - 5, tăng nhanh từ ngày - 13, chậm lại từ ngày 13 – 21, nhanh từ ngày 21 – 29 chậm lại từ ngày 29 – 41 17   Tốc độ tăng trưởng trung bình nấm C.sinensis giá thể bắp - kê 1,85%/ngày Bảng 4.3 Mức độ lan tơ nấm C.sinensis giá thể bắp - kê Đợt Đợt Đợt Giá trị trung bình Ngày 3 (%) (cm ) (%) (cm ) (%) (cm ) (%) 0,2 0,1 0,2 0,1 0,2 0,1 0,1 9,2 9,5 9,3 5 21,85 12 32,75 16 21,9 12 13 13 45,45 25 45,7 25 45,64 25 25 17 49,2 27 54,62 30 54,58 30 29 21 54,7 30 72,5 40 63,78 35 35 25 76,4 42 99,87 55 82,2 45 47 29 33 90,56 103,7 50 57 132,9 145,5 73 80 109,3 123,7 60 68 61 68 37 112,8 62 152,9 84 131 72 73 76 76 41 120,1 66 158,3 87 138,3 % = (thể tích lan tơ : thể tích giá thể) x 100% d) Đặc điểm phát triển nấm C.sinensis giá thể bắp - kê - nhộng Hình 4.8 Nấm C.sinensis giá thể (a) Giá thể bắp - kê - nhộng chưa cấy nấm; (b) Sợi nấm C.sinensis phát triển giá thể bắp - kê - nhộng sau 41 ngày Tốc độ tăng trưởng nấm giá thể bắp - kê - nhộng chậm từ ngày 5, tăng nhanh từ ngày - 13, chậm lại từ ngày 13 – 21, nhanh từ ngày 21 – 29 chậm lại từ ngày 29 - 41 18   Tốc độ tăng trưởng trung bình nấm C.sinensis giá thể bắp - kê - nhộng 2,37%/ngày Bảng 4.4 Mức độ lan tơ nấm C.sinensis giá thể bắp - kê nhộng Giá trị Đợt Đợt Đợt Ngày trung bình (cm3) (%) (cm3) (%) (cm3) (%) (%) 0,2 0,1 0,2 0,1 0,2 0,1 0,1 9,12 10,92 10,89 6 25,5 14 30,94 17 30,9 17 16 13 45,48 25 63,7 35 54,5 30 30 17 54,6 30 72,81 40 63,9 35 35 21 63,72 35 91,2 50 80 44 43 25 100 55 125,5 69 118,2 65 63 29 33 132,7 149 73 82 258,3 173 87 95 149,3 164 82 90 81 89 37 158,4 87 178,4 98 171 94 93 97 97 41 169,2 93 182 100 176,5 % = (thể tích lan tơ : thể tích giá thể) x 100% 4.2.2 So sánh phát triển nấm C.sinensis giá thể khác Bảng 4.5 Mức độ phát triển nấm C.sinensis theo thời gian giá thể Thời gian phát triển Mức độ phát triển Giá thể (ngày) (%) Bắp 41 83 Bắp - nhộng 29 97 Bắp - kê 41 76 Bắp - kê - nhộng 41 97 Nấm C.sinensis phát triển gần tồn thể tích giá thể bắp - nhộng sau 29 ngày, giá thể bắp - kê - nhộng phải 41 ngày Sau 41 ngày, nấm C.sinensis phát triển giá thể bắp khoảng 83%, giá thể bắp - kê 76% Như thời gian để nấm phát triển giá thể bắp - nhộng ngắn Nấm phát triển loại ngũ cốc có đặc điểm phát triển có bổ sung bột nhộng tốc độ phát triển tăng lên đáng kể Tổng thời gian để sợi nấm phát triển đầy thể tích ni cấy giá thể bắp - nhộng 29 ngày, giá 19   thể bắp - kê - nhộng 41 ngày, giá thể bắp bắp - kê khơng thể phát đầy thể tích giá thể Điều bột nhộng có giá trị dinh dưỡng cao, đồng thời vật chủ C.sinensis ấu trùng số lồi trùng cánh vảy nên mơi trường thích hợp cho C.sinensis phát triển Có thể nói nấm C.sinensis phát triển giá thể bắp - nhộng với tốc độ nhanh nhất, cần khảo sát tỉ lệ bắp bột nhộng để nấm C.sinensis phát triển tốt Đánh giá khác biệt nghiệm thức thông qua lượng giá thể lại sau 29 ngày ni cấy phần mềm máy tính MSTATC Giá thể lại thu nghiệm thức bắp - nhộng so với nghiệm thức lại: ▫ Đợt phần trăm giá thể lại nghiệm thức bắp - nhộng 5%, tiếp nghiệm thức bắp - kê - nhộng 27%, nghiệm thức bắp 30%, nghiệm thức bắp - kê cao 50% ▫ Đợt phần trăm giá thể lại nghiệm thức bắp - nhộng 1%, tiếp nghiệm thức bắp - kê - nhộng 13%, nghiệm thức bắp 17%, nghiệm thức bắp - kê cao 28% ▫ Đợt phần trăm giá thể lại nghiệm thức bắp 2%, tiếp nghiệm thức bắp - kê - nhộng 18%, nghiệm thức bắp 22%, nghiệm thức bắp - kê cao 40% Bảng 4.6 Lượng giá thể lại nghiệm thức sau 29 ngày Đợt Đợt   Đợt (g) (%) (g) (%) (g) (%) Trung bình (%) Bắp 15,1 30 8,48 17 11,03 22 23 Bắp - nhộng 2,54 0,49 0,98 Bắp - kê 24,87 50 13,9 28 20,2 40 39 Bắp - kê - nhộng 13,52 27 6,51 13 18 19 Nghiệm thức % = (lượng giá thể lại : lượng giá thể ban đầu) x 100% Trong điều kiện nuôi cấy, nấm C.sinensis giá thể bắp - nhộng phát triển nhanh giá thể bắp - kê - nhộng, C.sinensis khơng phát triển nhanh hạt kê, điều phù hợp với nghiên cứu (John cs, 2004) Nhưng 20   theo John cs (2004), chất lượng sản phẩm cuối nấm C.sinensis phát triển hạt kê lại cao Do đó, cần đánh giá chất lượng sản phẩm cuối nấm C.sinensis loại giá thể bắp - nhộng bắp - kê - nhộng để xác định xác giá thể phù hợp cho nuôi cấy nấm C.sinensis Nếu chất lượng nấm C.sinensis loại giá thể khác biệt khơng đáng kể sử dụng giá thể bắp - nhộng để tiết kiệm thời gian ni cấy Ngồi ra, ni cấy nấm khoảng thời gian dài dễ tạp nhiễm, đặc biệt giá thể chứa hạt kê tỉ lệ nhiễm gần 50%, cần vơ trùng q trình ni cấy nấm C.sinensis nhằm hạn chế khả tạp nhiễm Bảng 4.7 Kết phân tích thống kê phần mềm MSTATC Nghiệm thức Phần trăm giá thể lại (%) Bắp (A1) 23,00 AB Bắp - nhộng (A2) 2,670 B Bắp - kê (A3) 39,33 A Bắp - kê - nhộng (A4) 19,33 AB LSD0,01 = 20,27; CV = 35,10% Trắc nghiệm phân hạng nghiệm thức thí nghiệm mức 0,01 cho thấy có nhóm nghiệm thức khác biệt có ý nghĩa A B, đó: Nhóm A: Giữa nghiệm thức A1, A3, A4 khơng có khác biệt mặt thống kê Nhóm B: Giữa nghiệm thức A1, A2, A4 khơng có khác biệt mặt thống kê Các nghiệm thức A1 A4 nghiệm thức trung gian chúng thuộc nhóm A B Ngiệm thức A2 A3 khác biệt có ý nghĩa Nghiệm thức A2 thí nghiệm cho lượng giá thể lại thấp chứng tỏ nấm ni cấy A2 có tốc độ tăng trưởng nhanh 21   Hình 4.9 Nấm C.sinensis phát triển giá thể sau 29 ngày A1: nghiệm thức bắp; A2: nghiệm thức bắp – nhộng; A3: nghiệm thức bắp – kê; A4: nghiệm thức bắp – kê – nhộng 4.3 Đánh giá chất lượng nấm C.sinensis sau nuôi cấy giá thể Trong loại giá thể nấm C.sinensis phát triển tốt nhanh giá thể bắp - nhộng nên tơi tiến hành phân tíchiamino axit nấm C.sinensis giá thể để đánh giá chất lượng nấm C.sinensis sau nuôi cấy Kết phân tích phương pháp HPLC, Viện Cơng Nghệ sinh học Môi Trường Trường Đại Học Nông Lâm Tp HCM 22   Bảng 4.8 Kết phân tích hàm lượng amino axit Bắp - nhộng sợi nấm Amino axit (mg/g) Asparagine 6,60 Glutamine 13,44 Serine 4,89 Glycine 3,00 Histidine 1,97 Arginine 2,36 Threonine 0,82 Alanine 6,64 Proline 6,28 Tyrosine 1,09 Valine 3,05 Methionine 1,95 Cysteine 1,85 Isoleucine 1,85 Leucine 1,94 Phenylalanine 9,02 Lysine 7,80 Trong 17 amino axit phân tích mẫu bắp - nhộng chứa nấm C.sinensis có đầy đủ 17 amino axit với glutamine hàm lượng cao 13,44 mg/g, phenylalanine 9,02 mg/g, có amino axit thiết yếu người (ngoại trừ tryptophan chưa xác định) phenylalanine 9,02 mg/g, lysine 7,8 mg/g, leucine 1,94 mg/g, isoleucine 1,85 mg/g, methionine 1,95 mg/g, valine 3,05 mg/g, threonine 0,82 mg/g Ngồi ra, amino axit khác có hàm lượng từ 1,09 mg/g đến 6,64 mg/g Nấm C.sinensis nuôi cấy giá thể bắp - nhộng có chứa 17 amino axit tổng số 17 amino axit phân tích, có amino axit thiết yếu người (ngoại trừ tryptophan chưa xác định) Do tách riêng giá thể nuôi cấy sợi nấm nên hàm lượng amino axit phân tích (Bảng 4.8) hàm lượng amino axit giá thể sợi nấm Nhưng theo phân tích (Hyun Hur, 2008) hàm lượng amino axit thể nấm Cordyceps cao nhiều so với phần thân không chứa sợi nấm Như vậy, dựa sở chúng tơi cho hàm lượng amino axit nấm C.sinensis nuôi cấy giá thể bắp - nhộng cao phần giá thể 23   Chương KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 5.1 Kết luận - Ghi nhận hình thái sợi nấm bào tử nấm - Nấm C.sinensis hình thành tạo thể môi trường nhân tạo nên cần tạo điều kiện nghiên cứu thêm điều kiện môi trường nhân tạo để nấm C.sinensis hình thành thể - Trong giá thể thử nghiệm nấm C.sinensis phát triển giá thể bắp - nhộng cho tốc độ tăng trưởng nhanh 5.2 Đề nghị Tiếp tục khảo sát tỷ lệ phối trộn thành phần môi trường để tìm cơng thức tốt cho phát triển nấm Tiếp tục đánh giá chất lượng nấm C.sinensis giá thể bắp - kê nhộng để xác định xác loại giá thể thích hợp nhân sinh khối nấm C.sinensis 24   TÀI LIỆU THAM KHẢO TÀI LIỆU TIẾNG VIỆT Đặng Trường Nguyễn 2010 Khảo sát sinh trưởng phát triển nấm C.sinensis môi trường nuôi cấy khác Khóa luận tốt nghiệp kĩ sư Cơng Nghệ Sinh Học, Trường ĐH Nông Lâm TP HCM TÀI LIỆU TIẾNG NƯỚC NGOÀI Cleaver DP, Holliday CH, Powers ML 2008 Method for growing C.sinensis on a substrate and novel method for hybridzing diferrent strains of C.sinensis United States Patent Dong CH, Yao YJ 2005 Nutrional requirements of mycelial growth of C.sinensis in submerged culture Journal of Applied Microbiology Vol 99 483-492p Jiaping Chen , Weiyun Zhang , Tingting Lu, Jing Li, Yi Zheng, Lingdong Kong 2005 Morphological and genetic characterization of a cultivated C.sinensis fungus and its polysaccharide component possessing antioxidant property in H22 tumor-bearing mice John Holliday, Matt Cleaver 2008 Medicinal Value of the Caterpillar Fungi Species of the Genus Cordyceps (Fr.) Link (Ascomycetes) A Review International Tournal of Medicinal Mreshroom Vol 10, 219-234 p John C Holliday, Phillip Cleaver, Megan Loomis-Powers, and Dinesh Patel 2004 Analysis of Quality and Techniques for Hybridization of Medicinal Fungus C.sinensis (Berk.)Sacc (Ascomycetes) Vol.6.pp Huang, B.M, Ju, S.Y, Wu, C.S, Chuang, W.J, Sheu, C.C, Leu, S.F, 2001 C.sinensis and its fractions stimulate MA-10 mouse Leydig tumor cell steroidogenesis Journal of Andrology 22 (5), 831–837 Kim SW, Hwang HJ, Xu CP, Na YS, Song SK and Yun JW 2002 Influence of nutritional conditions on the mycela growth and exopolysaccharide production in paecilomyces sinclairii Lett Appl Microbiol 34, 389-393p Li SP, Yang FQ and Tsim Kart WK 2006 Quality control of C.sinensis, valued tradifional Chinese medicine Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis Vol 41, 1571-1584 p 10 Rusell R and Paterson M 2008 Cordyceps –a traditional Chinese medicine and another fungal therapeutic biofactory.Journal of Phytochemistry Vol 69 14691495p 25   11 Ruan, Z, Su, J, Dai, H.C, Wu, M.C, 2005 Characterization and immunomodulating activities of polysaccharide from Lentinus edodes International Immunopharmacology (5), 811–820 TÀI LIỆU INTERNET 12 Nguyễn Lân Dũng Bùi Thị Việt Hà Dinh dưỡng vi sinh vật http://vietsciences.free.fr http://vietsciences.org 13 Nguyễn Lân Dũng C.sinensis.http://vietsciences.free.fr http://vietsciences.net 14 http://vietsciences.net/timhieu/khoahoc/ykhoa/images/cordycepssinensis_01.jpg 15 http:// www.forum.vncnus.net 16 http://www.khoahoc.net/baivo/levanlan/310806-dongtrunghathao.htm 17 http: //www.vi.wikipedia.org 26   PHỤ LỤC Bảng Lượng giá thể lại nghiệm thức sau 29 ngày Đợt Đợt   Đợt (g) % (g) % (g) % Trung bình (%) A1 15,1 30 8,48 17 11,03 22 23 A2 2,54 0,49 0,98 A3 24,87 50 13,9 28 20,2 40 39 A4 13,52 27 6,51 13 18 19 Nghiệm thức Bảng Bảng ANOVA so sánh lượng giá thể lại số liệu Bảng A N A L Y S I S O F V A R I A N C E T A B L E Degrees of Sum of Mean Freedom Squares Square F-value Prob Between 2036.917 678.972 12.401 0.0022 Within 438.000 54.750 Total 11 2474.917 Coefficient of Variation = 35.10% Var V A R I A B L E No Number Sum Average SD SE -1 3.00 69.000 23.000 6.56 4.27 3.00 8.000 2.667 2.08 4.27 3.00 118.000 39.333 11.02 4.27 3.00 58.000 19.333 7.09 4.27 -Total 12.00 253.000 21.083 15.00 4.33 Within 7.40 Bartlett's test Chi-square = 3.420 Number of Degrees of Freedom = Approximate significance = 0.286 27   Bảng Bảng trắc nghiệm phân hạng lượng giá thể lại kết Bảng Duncan's Multiple Range Test LSD value = 20.27 s_ = 4.272 at alpha = 0.010 x Original Order Mean Mean Mean Mean = = = = 23.00 2.670 39.33 19.33 AB B A AB Mean Mean Mean Mean Ranked Order   28   = = = = 39.33 23.00 19.33 2.670 A AB AB B ... ni cấy tối ưu để nấm C .sinensis hình thành thể mơi trường nhân tạo 4.2 Sự phát triển nấm C .sinensis giá thể khác Nấm C .sinensis nuôi cấy giá thể, tiến hành đo thể tích sợi nấm phát triển giá thể. .. khảo sát sinh trưởng phát triển nấm C .sinensis hạt ngũ cốc Kết quả: Ghi nhận đặc điểm hình thái đặc điểm, tốc độ sinh trưởng C .sinensis nuôi cấy giá thể khác Trong giá thể sử dụng nuôi cấy, giá. .. loại giá thể thích hợp ni cấy nấm C .sinensis thơng qua việc khảo sát tốc độ phát triển nấm C .sinensis ni cấy giá thể 1.3 Nội dung thực ¾ Khảo sát đặc điểm hình thái C .sinensis ¾ Khảo sát sinh trưởng