BÁO CÁO ĐÁNH GIÁ RỦI RO NGÔ CHỊU HẠN ĐỐI VỚI SỨC KHOẺ CON NGƯỜI VÀ VẬT NUÔI

TĨM TẮT BÁO CÁO ĐÁNH GIÁ RỦI RO NGƠ CHỊU HẠN ĐỐI VỚI SỨC KHOẺ CON NGƯỜI VÀ VẬT NUÔI SỰ KIỆN MON 87460 Tổ chức đăng ký: Công ty TNHH Dekalb Việt Nam 72 – 74 Nguyễn Thị Minh Khai Phường 6, Quận 3, Thành phố Hồ Chí Minh THÁNG 10 NĂM 2014 © Bản quyền thuộc Tập đoàn Monsanto, năm 2014 Tài liệu bảo vệ theo luật điều khoản luật quyền quốc gia quốc tế Các tổ chức, quan nhà nước cá nhân có thẩm quyền theo quy định pháp luật hành có quyền sử dụng tài liệu Ngồi ra, hình thức sử dụng, chép, lưu hành đăng tải thông tin tài liệu tài liệu kèm theo khơng có đồng ý trước Tập đoàn Monsanto chi nhánh Tập đoàn bị nghiêm cấm MỤC LỤC I THÔNG TIN CHUNG Tổ chức đăng ký cấp Giấy xác nhận Tên kiện chuyển gen đăng ký cấp Giấy xác nhận II THÔNG TIN VỀ CÂY CHỦ NHẬN GEN Tên chủ nhận gen Thông tin lịch sử canh tác, phát triển giống khả gây tác động bất lợi đến sức khỏe người vật nuôi Thông tin lịch sử sử dụng chủ làm thực phẩm, thức ăn chăn ni III THƠNG TIN VỀ SINH VẬT CHO GEN Tên sinh vật cho gen Thông tin lịch sử tự nhiên liên quan đến an tồn thực phẩm thức ăn chăn ni Thông tin chất chống dinh dưỡng, độc tố chất gây dị ứng tự nhiên Thông tin lịch sử sử dụng chuỗi thực phẩm, thức ăn chăn ni IV THƠNG TIN LIÊN QUAN ĐẾN QUÁ TRÌNH CHUYỂN GEN – SỰ KIỆN ĐẬU TƯƠNG MON 87460 A Thông tin đoạn gen chèn vào Thông tin chung Q trình chuyển gen tạo kiện ngơ 87460 B Thông tin kiện ngô MON 87460 Thành phần dinh dưỡng tính an tồn kiện ngơ MON 87460 Thông tin đoạn gen chèn vào tạo kiện ngô MON 87460 Mơ tả đặc điểm kiểu hình tính trạng Hiện trạng cấp phép kiện ngơ MON 87460 tồn cầu V ĐÁNH GIÁ NGUY CƠ ẢNH HƯỞNG CỦA SỰ KIỆN NGÔ MON 87460 ĐỐI VỚI SỨC KHỎE CON NGƯỜI VÀ VẬT NUÔI So sánh khác biệt thành phần hợp chất hàm lượng dinh dưỡng kiện ngô MON 87460 thực vật nhận gen Đánh giá khả chuyển hóa thành phần dinh dưỡng, đặc biệt chất sử dụng làm thực phẩm/thức ăn chăn nuôi i Đánh giá khả gây độc, gây dị ứng chất sử dụng làm thực phẩm thức ăn chăn nuôi Đánh giá khả hình thành hợp chất mới, khả gây bệnh tác động bất lợi khác đến sức khỏe người vật nuôi VI ĐỀ XUẤT CÁC BIỆN PHÁP QUẢN LÝ RỦI RO TIỀM ẨN CỦA SỰ KIỆN NGÔ MON 87460 ĐỐI VỚI SỨC KHỎE CON NGƯỜI VÀ VẬT NUÔI VII KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Đề nghị ii TÓM TẮT BÁO CÁO ĐÁNH GIÁ RỦI RO CỦA SỰ KIỆN NGÔ MON 87460 ĐỐI VỚI SỨC KHỎE CON NGƯỜI VÀ VẬT NUÔI (Theo Phụ lục 03 Thông tư số 02/2014/TT-BNNPTNT ngày 24/01/2014 Bộ trưởng Bộ Nông nghiệp & Phát triển nông thơn) I THƠNG TIN CHUNG Tổ chức đăng ký cấp Giấy xác nhận - Tên tổ chức đăng ký: Công ty TNHH Dekalb Việt Nam - Người đại diện tổ chức: Nguyễn Đình Mạnh Chiến, Tổng Giám đốc - Đầu mối liên lạc tổ chức: Nguyễn Thúy Hà, Giám đốc Pháp chế - Địa chỉ: Phòng 1303, Tòa nhà Centec, 72-74 Nguyễn Thị Minh Khai, Phường 6, Quận 3, Tp Hồ Chí Minh, Việt Nam - Điện thoại: +84 3823 3474/+84 972 330 816 - Email: ha.thuy.nguyen@monsanto.com Fax: +84 3823 3473 Tên kiện chuyển gen đăng ký cấp Giấy xác nhận - Tên thông thường: Cây Ngô - Tên khoa học: Zea mays L - Tên thương mại: Genuity DroughtGard - Sự kiện chuyển gen: Sự kiện MON 87460, ngô chịu hạn - Tính trạng liên quan đến gen chuyển: Chịu hạn - Mã nhận diện (nếu có): MON-8746Ø-4 - Tên tổ chức tạo giống: Tập đoàn Monsanto, Hoa Kỳ II THÔNG TIN VỀ CÂY CHỦ NHẬN GEN Tên chủ nhận gen Tên thông thường: Cây Ngô Tên khoa học: Zea mays L Vị trí phân loại: Cây ngô (Zea mays L) thuộc chi ngô Zea, phân họ ngơ (Maydeae), họ phụ hòa thảo (Panicoideae), họ hòa thảo (Gramineae) Thông tin lịch sử canh tác, phát triển giống khả gây tác động bất lợi đến sức khỏe người vật ni Từ chứng hóa thạch, kết nghiên cứu khảo cổ học, tế bào học di truyền học, Jones cộng (1995) Đại học bang Washington – Pullman (Hoa Kỳ) cho ngô có nguồn gốc phát sinh từ Trung Mỹ Q trình hóa ngơ diễn vào khoảng 7.000 -10.000 năm trước công nguyên miền trung Mexico tổ tiên loại cỏ teosinte hoang dại gần giống với ngơ ngày tìm thấy khu vực sông Balsas, Mexico (Goodman Galinat, 1988) Từ nguồn gốc Trung Mỹ, ngô di nhập đến phần lại giới, cụ thể đến châu Âu châu Mỹ vào cuối kỷ 15, đầu kỷ 16 phát Trung Quốc vào khoảng năm 1.575 Trong giả định nguồn gốc di truyền ngô chưa chứng minh, nhà khoa học cho ngô hoang dại teosinte đóng vai trò quan trọng q trình tiến hóa ngơ Ngơ gieo trồng rộng khắp giới với sản lượng hàng năm cao lương thực Hoa Kỳ nước sản xuất gần nửa sản lượng ngô giới Các nước sản xuất ngô hàng đầu khác có Trung Quốc, Brazil, Mexico, Argentina, Ấn Độ, Pháp, Indonesia, Nam Phi Italia Chỉ tính riêng năm 2008, tổng diện tích trồng ngơ tồn cầu 160 triệu Ha, đạt sản lượng 822,7 triệu (FAOSTAT, 2009) Ngô trồng rộng rãi hầu hết bang Hoa Kỳ với sản lượng 307,14 triệu vào năm 2009 đạt giá trị kim ngạch 48,6 tỷ USD (USDA-NASS, 2010) Những năm đầu thập niên 1920 mở đầu cho thời kỳ phát triển giống ngô lai (Wych, 1988) Giống ngô lai “Copper Cross” canh tác diện tích nhỏ khu vực vành đai ngô (Corn Belt) Hoa Kỳ vào năm 1924 (Crabb, 1947) Cho tới giai đoạn 1934-1936, điều kiện thời tiết khô hạn, người trồng ngô bắt đầu nhận thức tính ưu việt giống lai so với giống (Wych, 1988) suất sức sống nhờ ưu lai từ chấp nhận ứng dụng rộng rãi giống ngô lai Các thông tin liên quan đến tính trạng gây tác động bất lợi đến sức khỏe người vật nuôi trình bày chi tiết mục V Thơng tin an toàn nhận gen, vấn đề độc tính tính gây dị ứng Cho đến nay, chưa có tài liệu cơng bố ảnh hưởng bất lợi ngô sức khỏe người động vật Ngơ khơng mang tính độc, khơng tạo chất mang tính độc yếu tố chống dinh dưỡng gây hại cho người (Watson, 1982; White Pollak, 1995) Ngô thực phẩm gây dị ứng người có vài báo cáo dị ứng sử dụng ngô làm thức ăn (Pastorello cs., 2000; OECD, 2002a; Pasini cs., 2002) Cho đến có hai trường hợp báo cáo dị ứng ăn ngô Hoa Kỳ (Pauls Cross, 1998; Tanaka cộng sự, 2001) Tuy nhiên, kết nghiên cứu độc lập trước Jones cộng (1995) kết luận người bị dị ứng với ngô bị dị ứng với loại phấn hoa hạt ngũ cốc sử dụng làm thực phẩm gia vị Ngồi ra, có sáu trường hợp dị ứng Italia tiêu thụ số sản phẩm từ ngô (Pastorello cs., 2000; Pasini cs., 2002) Tuy nhiên, kết kiểm tra cho thấy bệnh nhân mẫn cảm với phấn hoa với loại hạt ngũ cốc khác, không riêng với ngô Điều cho thấy nguy gây độc gây dị ứng cho người sử dụng ngô làm thực phẩm thức ăn chăn nuôi không xảy thấp (Pastorello cs., 2000; Pasini cs., 2002) Tổ chức Hợp tác Phát triển kinh tế OECD (2002) công bố chất chống dinh dưỡng (anti-nutrients) có ngơ, bao gồm 2,4-dihydroxy-7-methoxy2H-1,4-benzoxazin-3(4H)-one (DIMBOA), axit phytic, raffinose, trypsin chất ức chế chymotrypsin Trong số này, axit phytic chất chống dinh dưỡng quan trọng động vật, đặc biệt động vật khơng thuộc nhóm nhai lại nhờ chức sinh học giảm thiểu hàm lượng phốt mô ngô xuống 15% Trong chế độ thức ăn chăn nuôi lợn gia cầm, enzyme phytase bổ sung để tăng hiệu chuyển hóa phốt Đối với thành phần DIMBOA, OECD không đề nghị phân tích hàm lượng tìm thấy khác giống ngô lai Raffinose phân tử carbonhydrate trọng lượng phân tử thấp hạt ngô gây sinh khí đầy Trypsin chất ức chế chymotrypsin tồn với hàm lượng thấp ngô khơng có tác động đáng kể đến sức khỏe người (White Pollak, 1995) Thông tin lịch sử sử dụng chủ làm thực phẩm, thức ăn chăn nuôi Từ năm 2.700 trước công nguyên ngô trồng làm thực phẩm Mexico (Salvador, 1997) Thổ dân Châu Mỹ hóa tăng cường sử dụng ngô sau nhận tiềm trồng làm thực phẩm, thức ăn chăn nuôi chất đốt Khi người Châu Âu di cư đến Mỹ ngơ trồng phổ biến (Kastner, 1980), người di cư nhanh chóng chấp nhận sử dụng ngơ trồng Vào cuối kỷ 19, khoảng 90% người dân Mỹ sử dụng ngơ làm nguồn thực phẩm (Hardeman, 1981) Ở Việt Nam, ngô đưa vào canh tác khoảng 300 năm trước (Ngơ Hữu Tình cộng sự, 1997) Cây ngô lương thực quan trọng thứ sau lúa trồng rộng rãi nước, điển hình tỉnh Sơn La, Đăklăk, Đồng Nai, Bà Rịa-Vũng Tàu, Thanh Hóa, Nghệ An, An Giang Đồng Tháp Hạt ngơ có chứa 82% nội nhũ, 12% phôi, 5% tầng cám, 1% chân hạt 2,2% phần cám sợi thô Các sản phẩm thực phẩm từ ngô phong phú sử dụng rộng rãi ngành công nghiệp thực phẩm chế biến, sản xuất ethanol, chưng cất đồ uống Bắp ngô bao tử sử dụng làm rau xanh Ngơ nguồn ngun liệu sản xuất thức ăn chăn ni có giá trị dinh dưỡng cao, giá rẻ (OECD, 2002) Do có thành phần chất bột cao, chất xơ thấp nên ngô coi nguồn lượng có giá trị làm thức ăn chăn ni bò, lợn, gia cầm Ngơ nghiền trộn với thành phần thức ăn chăn nuôi giàu đạm, vitamin, chất khoáng bổ sung để cân tỷ lệ dinh dưỡng theo yêu cầu loại thức ăn chăn nuôi (Leath Hill, 1987) Hạt ngô chiếm hầu hết lượng chuyển hóa loại ngũ cốc sử dụng thức ăn chăn ni Tồn thân ngơ (cả thân bắp) thu hoạch, băm nhỏ lưu kho dùng dần làm thức ăn chăn ni béo gia súc cho bò sữa (Newcomb, 1995) Ngoài sử dụng làm thực phẩm thức ăn chăn ni, ngơ ngun liệu nhà máy sản xuất rượu, cồn dược phẩm Theo kết tổng hợp, ngô sử dụng để sản xuất khoảng 670 mặt hàng khác ngành công nghiệp lương thực, thực phẩm, dược công nghiệp nhẹ III THÔNG TIN VỀ SINH VẬT CHO GEN Tên sinh vật cho gen Sinh vật cho protein CSPB a Tên thông thường: Vi khuẩn Bacillus subtilis b Tên khoa học: Vi khuẩn Bacillus subtilis c Vị trí phân loại: Vi khuẩn Bacillus subtilis vi khuẩn gram dương hình thành bào tử, tìm thấy tự nhiên đất Vi khuẩn Bacillus subtilis thuộc chi Bacillus, họ Bacillaceae, Bacillales, lớp Bacilli, ngành Firmicutes, giới Bacteria Sinh vật cho protein NTPII a Tên thông thường: Chủng vi khuẩn Escherichia coli K-12 b Tên khoa học: Chủng vi khuẩn Escherichia coli K-12 c Vị trí phân loại: Vi khuẩn Bacillus thuringiensis vi khuẩn gram âm, tồn phổ biến mơi trường có hệ tiêu hóa lồi động vật có xương sống bao gồm người Vi khuẩn Bacillus thuringiensis thuộc chi Bacillus, họ Bacillaceae, Bacillales, lớp Bacilli, ngành Firmicutes, giới Bacteria Thông tin lịch sử tự nhiên liên quan đến an toàn thực phẩm thức ăn chăn nuôi Protein CSPB Protein CSPB vi khuẩn B subtilis giống nhiều protein vi khuẩn khác có mặt phổ biến thức ăn người nhiều loại thức ăn thông thường CSBP thuộc họ protein sốc lạnh (CSP) Họ protein bao gồm protein thực vật vi khuẩn có miền sốc lạnh (CSD) với trình tự axit amin có độ tương đồng cao với trình tự protein CSPB CSPB vi khuẩn B subtilis tương đồng với protein CSP loài E coli, Lactobacillus, Lactococcous, Bifidobacterium (Bảng 1), vi khuẩn sử dụng phổ biến ngành công nghiệp chế biến sản phẩm từ sữa, sản phẩm probiotic với vi khuẩn sống (Morea cs., 1999; Ogier cs., 2002; http://www.nationaldairycouncil.org) Thêm vào đó, lồi Bacillus, Lactobacillus Lactoccoccus có protein CSP tham gia vào nhiều trình lên men sữa, thịt, ngũ cốc rau Lên men thực phẩm thực hành phổ biến công nghệ cổ điển để bảo quản thực phẩm thông dụng nhiều quốc gia khác Các protein tương tự CSPB B subtilis tìm thấy gạo (Oryza sativa L.) lúa mỳ (Triticum aestivum L.) (Bảng 1) Các miền sốc lạnh protein có CSD protein CSP gạo lúa mì tương đồng đến 40-50% với tồn trình tự protein CSPB B subtilis Gần đây, Karlson Imai phân tích tin sinh so sánh với sở liệu GenBank kết luận protein có CSD có độ bền vững cao thường tồn thực phẩm ngô, lúa mạch đậu tương Như vậy, phân giải protein thực vật có CSD sẽ giải phóng đoạn hay phần CSD bền vững cao vào hệ tiêu hóa người Do hàng ngày người tiêu thụ protein thực vật tương đồng với protein CSPB Protein CSPB MON 87460 tương tự protein CSP vi khuẩn protein có miền CSD thực phẩm protein phổ biến chế độ ăn người thực phẩm thơng dụng cho thấy người có lịch sử tiếp xúc an toàn với loại protein Protein NPTII Protein NPTII sử dụng phổ biến để đánh dấu tính kháng kháng sinh làm vơ hiệu neomycin kháng sinh liên quan khác NPTII phổ biến E coli tồn phổ biến hệ tiêu hóa người NPTII sử dụng làm dấu chuẩn chọn lọc nhiều loại trồng bao gồm cà chua, bông, hạt cải dầu ngô NPTII FDA đánh giá an toàn cho phép sử dụng NPTII làm phụ gia thực phẩm Cục Bảo vệ Môi trường Hoa Kỳ (EPA) ban hành quy chế miễn trừ dư lượng tối đa cho phép việc sử dụng NPTII làm dấu chuẩn chọn lọc sản phẩm nông nghiệp thô (40 CFR Part 174.521) Hàng loạt nghiên cứu chứng minh tồn gen kháng kháng sinh trồng hay sản phẩm trồng khơng có ảnh hưởng đến tính an tồn thực phẩm (Miki McHugh tổng hợp, 2004) mang plasmid Ti biến đổi để khơng có khả tạo mơ sẹo loại bỏ gen hormone thực vật có plasmid Agrobacterium Vector PV-ZMAP595 có trình tự bờ trái bờ phải chặn đoạn DNA vận chuyển (T-DNA) để tiến hành biến nạp Phôi ngô chưa trưởng thành dùng để tạo thể sần (callus) Sau ni cấy mơi trường với Agrobacterium có mang vector biến nạp, thể sần chuyển sang mơi trường có chứa carbenicillin để loại bỏ Agrobacterium, chứa paromomycin để loại bỏ tế bào không biến nạp, kết tế bào có mang T-DNA tồn Các tế bào biến nạp sau cấy truyền nhiều lần mơi trường chọn lọc phát triển thành Các kết q trình biến nạp mơ tả bên (thế hệ R 0) cho tự thụ phấn, hệ R tiếp tục sàng lọc để chọn có mang protein CSPB, chống chịu kanamycin có gen chèn vào đồng hợp tử Chỉ đồng hợp tử cho gen cspB chèn vào chống chịu kanamycin lựa chọn cho phát triển Thế hệ cháu chúng tiếp tục đánh giá cấp độ phân tử (sử dụng lai Southern) đánh giá tính trạng biểu Các nghiên cứu theo quy định cho MON 87460 tiến hành để phân tích đặc điểm đoạn chèn vào, protein biểu tiến hành đánh giá an toàn thực phẩm, thức ăn chăn ni an tồn mơi trường sản phẩm so với ngô truyền thống Các bước tạo kiện MON 87460 trình bày Hình Đặc điểm nguyên tố di truyền trình bày Hình với đầy đủ thơng tin kích thước tính tương đồng thành phần, vị trí, hướng trình tự gen chèn vào vector chức 13 Hình Sơ đồ biến nạp, chọn lọc, tạo kiện đánh giá MON 87460 Sự gắn plasmid vector nhị thể PV-ZMAP595 Agrobacterium, chuyển vào chủng Agrobacterium tumefaciens ABI Các mô thể sần biến nạp giống ngô LH59 (giống ngô truyền thống không chuyển gen) vector PVZMAP595 Agrobacterium tumefaciens Chọn lọc thể biến nạp cho thể sần biến nạp phát triển chồi Chọn lọc biến nạp chống chịu paromomycin Sàng lọc đồng hợp tử phương pháp PCR định lượng Đánh giá khả tổ hợp đoạn chèn kháng kanamycin Đánh giá hệ phòng thí nghiệm ngồi đồng ruộng Xác định chọn kiện MON 87460 để tiếp tục đánh giá đồng ruộng Tiến hành nghiên cứu đặc tính đánh giá an toàn Chuyển kiện MON 87460 vào giống khác đánh giá giá trị thương mại 14 Bảng Tổng hợp nguyên tố di truyền vector PV-ZMAP595 Nguyên tố di truyền Trình tự xen kẽ Vị trí Chức (nguồn tham khảo) Khung Backbone Vector Trình tự sử dụng nhân dòng DNA – 52 CS -rop 53 – 244 Trình tự mã hóa ức chế protein mồi để trì số lượng plasmid E coli Trình tự xen kẽ 245 – 671 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA OR -ori.pBR322 672 – 1260 Gốc tái có nguồn gốc từ pBR322 để trì plasmid E coli Trình tự xen kẽ 1261 – 1790 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA aadA 1791 – 2679 Promoter vi khuẩn trình tự mã hóa enzyme biến đổi aminoglycoside, 3’(9)-O-nucleotidyltransferase từ gen nhảy Tn7 (GenBank mã đăng nhập X03043) Trình tự xen kẽ 2680 – 2815 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA T-DNA B -Bờ phải 2816 – 3172 DNA Agrobacterium tumefaciens mang trình tự bờ phải dùng vận chuyển T-DNA Trình tự xen kẽ 3173 – 3204 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA P -Ract1 3205 – 4128 Promoter đầu dẫn từ gen actin, act1, lúa gạo Oryza sativa I5-Ract1 4129 – 4605 Intron từ gen actin, act1, lúa gạo Oryza sativa Trình tự xen kẽ 4606 – 4607 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA CS-cspB 4608 – 4811 Trình tự mã hóa mã biến đổi gen cspB gene từ vi khuẩn from Bacillus subtilis mã hóa protein CSPB Trình tự xen kẽ 4812 – 4841 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA T6-tr7 4842 – 5349 Trình tự không dịch mã đầu 3' gen transcript từ Agrobacterium tumefaciens điều khiển trình gắn poly A Trình tự xen kẽ 5350 – 5423 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA Bảng (Tiếp) Tổng hợp nguyên tố di truyền vector PV-ZMAP595 15 T-DNA (tiếp.) loxP 5424 – 5457 Trình tự lấy từ Bacteriophage P1 cho vị trí tái tổ hợp phát Cre recombinase Trình tự xen kẽ 5458 – 5483 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA P-35S 5484 – 5776 Promoter cho 35S RNA lấy từ virus khảm súp lơ Trình tự xen kẽ 5777 – 5840 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA CS-nptII 5841 – 6635 Trình tự mã hóa lấy từ Tn5 E coli mã hóa tính kháng neomycin kanamycin Trình tự xen kẽ 6636 – 6666 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA T-nos 6667 – 6919 Trình tự khơng dịch mã đầu 3' gen nopaline synthase (NOS) lấy từ Agrobacterium tumefaciens có chức kết thúc điều khiển trình gắn poly A Trình tự xen kẽ 6920 – 6944 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA loxP 6945 – 6978 Trình tự lấy từ Bacteriophage P1 cho vị trí tái tổ hợp phát Cre recombinase Trình tự xen kẽ 6979 – 6998 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA DNA lấy từ Agrobacterium tumefaciens chứa trình tự bờ trái dùng để vận chuyển T-DNA B-Bờ trái 6999 – 7440 Vector Backbone Trình tự xen kẽ 7441 – 7526 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA OR-ori V 7527 – 7923 Gốc tái từ plasmid RK2 phổ ký chủ rộng để trì plasmid Agrobacterium Trình tự xen kẽ 7924 – 9379 Trình tự sử dụng nhân dòng DNA CS – Trình tự mã hóa OR – Gốc tái B – Bờ P – Promoter I – Intron T – Trình tự kết thúc khơng dịch mã đầu 3' trình tự báo hiệu trình gắn poly A B Thông tin kiện ngô MON 87460 Thành phần dinh dưỡng tính an tồn kiện ngô MON 87460 Từ quan điểm đánh giá an tồn, qua phân tích thành phần hợp chất có hạt thân ngơ qua phân tích hàm lượng dinh dưỡng hạt ngơ khẳng định kiện MON 87460, ngồi đặc tính chuyển vào, khơng làm thay 16 đổi thành phần hợp chất có hạt thân giá trị dinh dưỡng hạt kiện so với đối chứng Trên sở nguyên tắc tương đương Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), Tổ chức Hợp tác Phát triển kinh tế (OECD), Tổ chức Nông nghiệp lương thực Liên hợp quốc (FAO), kết phân tích hỗ trợ việc kết luận kiện MON 87460 an toàn bổ dưỡng giống ngơ truyền thống Chi tiết thành phần tính an tồn kiện MON 87460 trình bày phần V.1 Thông tin đoạn gen chèn vào tạo kiện ngô MON 87460 Thông tin đoạn gen chèn vào tạo kiện MON 87460 mang cấu trúc biểu gen cspB mang trình tự mã hóa protein CSPB quy định tính chịu hạn cấu trúc biểu phosphotransferase II (nptII) neomycin quy định tính kháng kanamycin (Chi tiết xem phần IV.A.1-Báo cáo đánh giá rủi ro) Phân tích lai Southern phân tích đặc điểm phân tử MON 87460 cho kết luận sau: 1) kiện ngô MON 87460 chứa đoạn DNA chèn vào; 2) đoạn gen chèn vào bảo toàn nguyên vẹn nguyên tố di truyền thiết kế; 3) đoạn gen chèn vào không bao gồm khung backbone plasmid dự kiến khơng có protein khác tổng hợp từ đoạn gen chèn vào; 4) kiện ngô MON 87460 mang vị trí hệ gen ổn định di truyền đoạn gen chèn vào khẳng định qua hệ, đảm bảo di truyền ổn định đặc tính chuyển vào kiện MON 87460 Giải trình tự đoạn chèn vùng DNA chặn liền kề khẳng định xếp nguyên tố đoạn chèn vào giống plasmid PV-ZMAP595 Thêm vào đó, giải trình tự DNA khẳng định nguyên tố di truyền đoạn chèn vào ngun vẹn trình tự đoạn chèn vào giống với trình tự plasmid PV-ZMAP595 Mơ tả đặc điểm kiểu hình tính trạng Ngơ MON 87460 có đặc điểm hình thái tương tự ngơ truyền thống ngồi trừ đặc tính chịu hạn biểu protein CSPB Hiện trạng cấp phép kiện ngô MON 87460 tồn cầu Được chọn tạo thành cơng năm 2008, tính đến năm 2013, kiện MON 87460 10 quốc gia phê chuẩn sử dụng làm thực phẩm, thức ăn chăn nuôi bao gồm 17 Hoa Kỳ, Australia/New Zealand, Canada, Trung Quốc, Columbia, Nhật Bản, Hàn Quốc, Mexico, Philippines, Đài Loan 18 V ĐÁNH GIÁ NGUY CƠ ẢNH HƯỞNG CỦA SỰ KIỆN NGÔ MON 87460 ĐỐI VỚI SỨC KHỎE CON NGƯỜI VÀ VẬT NUÔI So sánh khác biệt thành phần hợp chất hàm lượng dinh dưỡng kiện ngô MON 87460 thực vật nhận gen Phân tích thành phần hợp chất việc quan trọng trình đánh giá an tồn Mục đích phân tích để đánh giá xem kiện ngô MON 87460 ngồi đặc tính chịu hạn chủ định đưa vào – có thay đổi thành phần so với ngô truyền thống hay không Thành phần hợp chất phân tích bao gồm: Proximates (protein, chất béo, tro, độ ẩm thân hạt); Chất xơ (chất xơ tẩy rửa axit (ADF), chất xơ tẩy rửa trung tính (NDF) thân hạt); Chất khống (phospho, canxi, kali, magie, sắt, đồng, mangan kẽm hạt); Thành phần axit amin; Các axít béo; Vitamin (vitamin E, axit phytic chất ức chế trypsin hạt); Chất trao đổi thứ cấp (axit ferulic, axit p-coumaric raffinose) Tổng cộng tiến hành phân tích 77 thành phần khác bao gồm thân 68 hạt Có 15 chất phân tích với 50% mẫu quan sát có giá trị nằm giới hạn định lượng (LOQ) nên loại bỏ khỏi phân tích thống kê Do đó, có 62 thành phần phân tích thống kê bao gồm thân 53 hạt để đánh giá tính tương đương thành phần với MON 87460 Phân tích thống kê liệu thành phần hợp chất tiến hành sử dụng phương pháp phân tích phương sai mơ hình hỗn hợp phép phân tích tiến hành dựa số liệu điểm khảo nghiệm riêng rẽ số liệu gộp điểm điểm khảo nghiệm Sự sai khác có ý nghĩa thống kê xác định mức sai khác 5% (p0,05) MON 87460 đối chứng truyền thống không chuyển gen 407 tổng số 434 so sánh tiến hành (Bảng 9-15) Ơ phép so sánh có ghi nhận sai khác có ý nghĩa thống kê, giá trị hợp chất phân tích nằm 19 khoảng giá trị biến động công bố tài liệu tham khảo hạt ngô nói chung nằm khoảng dung sai 99% Do khác biệt khơng có ý nghĩa sinh học Kết phân tích hạt cho thấy 50 số 53 chất phân tích khơng có khác biệt có ý nghĩa (p>0.05) chất tìm thấy khác biệt có ý nghĩa tro, 18:0 axit stearic acid axit 20:1 eicosenoic Tuy nhiên khác biệt không lặp lại không quán tất điểm khảo nghiệm riêng rẽ, giá trị nằm khoảng dung sai 99% giống thương mại tham khảo nên kết luận khơng có ý nghĩa mặt sinh học mà kết biến động tự nhiên Kết phân tích gộp điểm chất thân cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa MON 87460 đối chứng (p>0.05) Số liệu phân tích điểm riêng rẽ chất thân cho thấy khơng có khác biệt có ý nghĩa 51 số 54 phép so sánh (p>0.05) khác biệt có ý nghĩa ghi nhận giá trị phân tích carbohydrate, protein độ ẩm điểm khảo nghiệm không lặp lại điểm khảo nghiệm khác nên kết luận khơng có ý nghĩa mặt sinh học Hơn giá trị nằm khoảng dung sai 99% giống thương mại tham khảo khẳng định sai khác khơng có ý nghĩa mặt sinh học Dựa vào liệu kết luận thân hạt kiện MON 87460 có thành phần tương đương với thân hạt loại ngơ có mặt thị trường Trên sở nguyên tắc tương đương Tổ chức Y tế Thế giới (WHO), Tổ chức Hợp tác Phát triển kinh tế (OECD), Tổ chức Nông nghiệp lương thực Liên hợp quốc (FAO), liệu hỗ trợ kết luận kiện ngô MON 87460 an tồn tương tự ngơ truyền thống Đánh giá khả chuyển hóa thành phần dinh dưỡng, đặc biệt chất sử dụng làm thực phẩm/thức ăn chăn nuôi Giống ngô MON 87460 biểu protein B sốc lạnh (CSPB) có nguồn gốc từ vi khuẩn Bacillus subtilis có tác dụng chịu hạn, giúp làm giảm suất so với ngô truyền thống điều kiện hạn chế nước tưới Phân tích phân tử khẳng định ngơ MON 87460 mang gen cspb nptII chèn vào vị trí hệ gen trồng gen di truyền bền vững qua hệ (xem mục IV.B.4.b-Báo cáo Đánh giá rủi ro) 20 Kết nghiên cứu độc tính cấp tính chuột cho thấy protein CSPB NPTII khơng gây độc cấp tính khơng gây ảnh hưởng bất lợi kể xử lý liều lượng cao Do đó, mức khơng gây ảnh hưởng bất lợi quan sát (NOAEL) cho CSPB NPTII mức 4,7 mg/kg trọng lượng thể 5.000 mg/kg trọng lượng thể, liều lượng cao thử nghiệm Các protein CSPB NPTII sinh biểu với hàm lượng thấp hạt Hàm lượng trung bình CSPB 0.063 μg/g trọng lượng hạt tươi hàm lượng protein NPTII hạt thấp giới hạn định lượng Protein CSPB chiếm 0.00006857% tổng lượng protein hạt MON 87460 Protein NPTII có chiếm lượng nhỏ, nhỏ 0.000003% tổng lượng protein hạt MON 87460 Tóm lại kết luận protein CSPB NPTII không gây độc cho người hay động vật (chi tiết xem phần V.3) Hơn biểu protein CSPB NPTII không làm thay đổi thành phần dinh dưỡng MON 87460 so với đối chứng truyền thống trình bày phần V.1 Kết phân tích thành phần chất dinh dưỡng ngơ MON 87460 cho thấy tính tương đương thành phần dinh dưỡng ngô MON 87460 giống ngô truyền thống Đánh giá khả gây độc, gây dị ứng chất sử dụng làm thực phẩm thức ăn chăn nuôi Trong trình phát triển sản phẩm MON 87460, protein CSPB NPTII đánh giá chi tiết nguy gây độc, gây dị ứng dựa theo hướng dẫn đánh giá CODEX Theo Codex (Codex, 2009), protein khơng phải chất gây độc nếu: 1) Protein có lịch sử sử dụng an tồn; 2) Protein khơng có tương đồng cấu trúc so với chất độc với protein có hoạt động sinh học ảnh hưởng bất lợi đến sức khoẻ người động vật; 3) Protein không gây độc cấp tính động vật có vú Tương tự theo Codex định nghĩa khả không tiềm ẩn nguy gây dị ứng protein bao gồm: 1) Protein phân lập từ nguồn khơng gây dị ứng; 2) Protein khơng chiếm tỷ lệ lớn tổng lượng protein; 3) Protein khơng có tương đồng trình tự axit amin với chất gây dị ứng công bố; 4) Protein dễ dàng bị phân giải dịch dày mô Protein CSPB NPTII sinh ngô MON 87460 khẳng định có nguồn gốc từ lồi vi sinh vật cho có nguồn gốc tự nhiên lịch sử sử dụng an tồn 21 Phân tích tin sinh học so sánh với sở liệu TOX_2009 (cơ sở liệu chất độc) AD_2009 (cơ sở liệu chất gây dị ứng, gliadin glutenin) cho thấy protein CSPB NPTII NP tương đồng trình tự axit amin với chất độc, gây dị ứng, gliadin glutenin có ảnh hưởng bất lợi sức khỏe người vật nuôi Các protein CSPB NPTII khơng gây độc cấp tính thử nghiệm chuột Hơn protein chiếm tỷ lệ nhỏ thành phần protein hạt ngô MON 87460 (protein CSPB chiếm ~0,00006857 % hàm lượng protein NPTII nằm giới hạn định lượng) Hơn nữa, kết thí nghiệm cho thấy protein CSPB phân giải hầu hết vòng 30 giây ủ với dịch dày mơ phỏng, protein NPTII phân giải vòng 10 giây dịch dày mô Thông tin số liệu cung cấp thành phần hợp chất, khả gây dị ứng, ngộ độc hỗ trợ việc kết luận thực phẩm thức ăn chăn nuôi có nguồn gốc từ kiện ngơ MON 87460 an tồn có giá trị dinh dưỡng tương tự ngơ truyền thống Đánh giá khả hình thành hợp chất mới, khả gây bệnh tác động bất lợi khác đến sức khỏe người vật ni Kết phân tích thành phần 77 hợp chất hàm lượng dinh dưỡng có hạt thân kiện ngô MON 87460 khẳng định tương đương thành phần hợp chất dinh dưỡng so với ngô truyền thống không chuyển gen (tham khảo mục V.1 Báo cáo đánh giá rủi ro) Protein CSPB NPTII sản phẩm giải mã cấu trúc biểu gen cspB có nguồn gốc từ vi khuẩn B subtilis gen nptII có nguồn gốc từ vi khuẩn E coli K-12 Các loài vi sinh vật cho gen tìm thấy phổ biến mơi trường; B subtilis phổ biến nhiều loại thực phẩm trình chế biến sản xuất (sản phẩm sữa, đậu tương lên men); E coli thường xuyên tìm thấy hệ tiêu hóa lồi động vật có xương sống, bao gồm lồi người Phân tích tin sinh học thành phần hợp chất cho thấy khơng có tương đồng trình tự axit amin protein CSPB NPTII kiện MON 87460 với khoảng 7.651 chất gây độc Cơ sở liệu chất độc TOX_2009, 1.386 chất gây dị ứng, gliadin glutein Cơ sở liệu chất gây dị ứng AD_2009 sở để kết luận kiện MON 87460 không nguy gây độc, gây dị ứng sử dụng làm thực phẩm thức ăn chăn nuôi so sánh với ngô truyền thống khơng chuyển gen 22 Phân tích lai Southern sử dụng để phân tích đặc điểm phân tử MON 87460 cho kết quả: 1) kiện ngô MON 87460 chứa đoạn DNA chèn vào; 2) đoạn gen chèn vào bảo toàn nguyên vẹn nguyên tố di truyền thiết kế; 3) đoạn gen chèn vào không bao gồm khung backbone plasmid dự kiến khơng có protein khác tổng hợp từ đoạn gen chèn vào; 4) kiện ngô MON 87460 mang vị trí hệ gen ổn định di truyền đoạn gen chèn vào khẳng định qua hệ, đảm bảo di truyền ổn định đặc tính chuyển vào kiện MON 87460 Giải trình tự đoạn chèn vùng DNA chặn liền kề khẳng định xếp nguyên tố đoạn chèn vào giống plasmid PV-ZMAP595 Thêm vào đó, giải trình tự DNA khẳng định ngun tố di truyền đoạn chèn vào nguyên vẹn trình tự đoạn chèn vào giống với trình tự plasmid PV-ZMAP595 Kết đánh giá mức độ gây độc cấp tính protein CSPB NPTII kiện MON 87460 thử nghiệm chuột phân tích cho thấy protein khơng độc cấp tính tác động bất lợi khác chuột thử nghiệm Hơn nữa, protein CSPB NPTII kiện MON 87460 bị phân hủy nhanh dịch dày vòng (CSPB vòng 30 giây NPTII vòng 10 giây) chiếm tỷ lệ nhỏ tổng hàm lượng protein hạt ngô MON 87460 (CSPB chiếm ~0,00006857 % hàm lượng protein NPTII nằm giới hạn định lượng) Như vậy, thông tin số liệu cung cấp thành phần hợp chất, khả gây dị ứng, ngộ độc nêu hỗ trợ việc kết luận thực phẩm thức ăn chăn ni có nguồn gốc từ kiện ngơ MON 87460 an tồn tương tự ngơ truyền thống 23 VI ĐỀ XUẤT CÁC BIỆN PHÁP QUẢN LÝ RỦI RO TIỀM ẨN CỦA SỰ KIỆN NGÔ MON 87460 ĐỐI VỚI SỨC KHỎE CON NGƯỜI VÀ VẬT NUÔI Sự kiện MON 87460 chứng minh an toàn sức khỏe người vật ni Vì việc quản lý kiện MON 87460 thực tương tự quản lý ngô truyền thống Công ty TNHH Dekalb Việt Nam cam kết tuân thủ nghiêm ngặt quy định Thông tư số 02/2014/TT-BNNPTNT ngày 24/01/2014 Bộ Nông nghiệp PTNT quy định hành khác an toàn sinh học sinh vật biến đổi gen, mẫu vật di truyền sản phẩm sinh vật biến đổi gen quy định sản xuất, kinh doanh sản phẩm Việt Nam Công ty có trách nhiệm kịp thời báo cáo Bộ Nơng nghiệp Phát triển nông thôn phối hợp xử lý phát sinh vấn đề liên quan đến an toàn sức khỏe người vật nuôi kiện ngô MON 87460 24 VII KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Sự kiện ngô MON 87460 chịu hạn nhờ biểu protein CSPB công ty Monsanto Hoa Kỳ phát triển Thông tin liệu cung cấp hồ sơ đăng ký chứng minh thực phẩm thức ăn chăn ni có nguồn gốc từ kiện ngơ MON 87460 an tồn có đầy đủ dinh dưỡng thực phẩm thức ăn chăn ni có nguồn gốc từ ngơ truyền thống trồng có lịch sử sử dụng phổ biến an toàn làm thực phẩm thức ăn chăn ni Kết luận dựa tiêu chí sau: Tính an tồn sinh vật cho gen, vi khuẩn B subtilis cho gen quy định protein CSPB (quy định tính chịu hạn) E coli cho gen quy định protein NPTII (dấu chuẩn chọn lọc kháng kháng sinh trình phát triển giống) Vi khuẩn B subtilis phổ biến môi trường, sử dụng sản xuất chế biến thực phẩm có thành phần số công thức probiotic lợi khuẩn định Vi khuẩn E coli phổ biến mơi trường tồn hệ tiêu hóa lồi động vật có xương sống Khơng có tương đồng cấu trúc trình tự protein CSPB hay NPTII với chất độc biết hay protein hoạt động sinh học có hại cho sức khỏe người động vật Cả protein khơng hiểu độc tính cấp tính chuột Mô tả chi tiết đặc điểm phân tử đoạn DNA chèn vào cho thấy a) kiện ngô MON 87460 chứa đoạn T-DNA chèn vào; b) đoạn gen chèn vào bảo toàn nguyên vẹn nguyên tố di truyền thiết kế; c) đoạn gen chèn vào không bao gồm khung backbone plasmid dự kiến khơng có protein khác ngồi protein chủ định tổng hợp từ đoạn gen chèn vào; d) kiện ngô MON 87460 mang vị trí hệ gen ổn định di truyền đoạn gen chèn vào khẳng định qua hệ, đảm bảo di truyền ổn định đặc tính chuyển vào kiện MON 87460 Protein CSPB NPTII, protein sinh MON 87460, có đặc tính cấu trúc tương tự với protein tự nhiên có lịch sử sử dụng an tồn Dữ liệu phân tích tin sinh cho thấy protein CSPB NPTII chất độc hay chất gây dị ứng, dễ dàng bị phân giải dịch dày mơ phỏng, khơng có khả gây độc cấp tính gây ảnh hưởng bất lợi thử nghiệm chuột 25 • Trình tự axit amin protein CSPB NPTII không tương đồng với chất gây độc, chất gây dị ứng, glutines hay gladine công bố cho phép kết luận không tiềm ẩn nguy gây ngộ độc gây dị ứng cho người vật nuôi sử dụng làm thực phẩm thức ăn chăn ni; • 99,4% protein CSPB phân hủy vòng 30 giây dịch dày mơ phỏng, đoạn nhỏ lại khoảng (~2.5 kDa) tồn khoảng thời gian 30 giây-30 phút trình phân giải bị phân giải nốt thời điểm 60 phút Protein NPTII bị phân giải vòng 10 giây dịch dày dịch ruột mơ • Hàm lượng protein CSPB chiếm tỷ lệ nhỏ so tổng hàm lượng protein hạt MON 87460 (~0,00006857 %) hàm lượng NPTII nhỏ giới hạn phát Kết phân tích 77 thành phần hợp chất hạt thân MON 87460 cho thấy có tương đồng với ngô truyền thống, chất phân tích nằm khoảng biến động tự nhiên với khoảng dung sai 99% giống thương mại tham khảo danh sách công bố tài liệu tham khảo Tính đến năm 2012, kiện MON 87460 10 quốc gia phê chuẩn sử dụng làm thực phẩm, thức ăn chăn nuôi trồng trọt Tất liệu chứng minh thuyết phục cho kết luận thực phẩm thức ăn chăn nuôi có nguồn gốc từ MON 87460 an tồn ngô truyền thống 26 Đề nghị Trên sở kết luận từ đánh giá an toàn thực phẩm, thức ăn chăn nuôi kiện MON 87460 khẳng định mức độ an toàn giá trị dinh dưỡng kiện ngô tương tự ngô truyền thống Cơng ty TNHH Dekalb Việt Nam kính đề nghị Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn thẩm định cấp Giấy xác nhận đủ điều kiện sử dụng làm thực phẩm thức ăn chăn nuôi kiện ngô MON 87460 chịu hạn Công ty TNHH Dekalb Việt Nam cam kết tuân thủ nghiêm ngặt quy định hành Việt Nam an toàn thực phẩm thức ăn chăn nuôi thực vật biến đổi gen, kịp thời báo cáo Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn phối hợp xử lý phát sinh vấn đề liên quan đến an toàn sức khỏe người vật ni Tp Hồ Chí Minh, ngày tháng năm 2014 TỔ CHỨC ĐĂNG KÝ CÔNG TY TNHH DEKALB VIỆT NAM TỔNG GIÁM ĐỐC Nguyễn Đình Mạnh Chiến 27