PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT SAPONIN TRONG CAO SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis) ĐÃ BẢO QUẢN

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH KHĨA LUẬN TỐT NGHIỆP PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT SAPONIN TRONG CAO SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis) ĐÃ BẢO QUẢN Sinh viên thực hiện: PHẠM DUY LINH Ngành: Cơng nghệ Hóa học Niên khóa: 2008 - 2012 Tháng 8/2012 PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT SAPONIN TRONG CAO SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis) ĐÃ BẢO QUẢN Tác giả PHẠM DUY LINH Khóa luận đệ trình để đáp ứng yêu cầu cấp Kỹ sư ngành Cơng nghệ hóa học Giảng viên hướng dẫn: ThS BÙI THẾ VINH Tháng 8/2012 LỜI CẢM ƠN Lời cảm ơn em xin gửi đến Ban Giám Hiệu thầy Bợ mơn Cơng nghệ Hóa học trường Đại học Nông Lâm Tp.HCM tạo điều kiện cho em học tập thực hành tốt, tạo tảng kiến thức vững cho tương lai sau Em xin chân thành cảm ơn thầy PGS.TS Trần Công Luận, giám đốc Trung tâm Sâm Dược liệu Tp.HCM tạo điều kiện tốt cho em thực hành nghiên cứu để hoàn thành đề tài luận văn Em vô cảm ơn thầy ThS Bùi Thế Vinh tận tình hướng dẫn em từ lúc em bắt đầu đến hoàn thành đề tài, thầy theo dõi, quan tâm dạy em giúp em giải đáp thắc mắc, khó khăn trình thực để hiểu rõ nhiệm vụ luận văn thực nhiệm vụ cách tốt Em xin cảm ơn thầy cô khác Trung tâm Sâm Dược liệu Tp.HCM, anh chị giúp đỡ, động viên em hồn thành tốt đề tài luận văn Con xin chân thành gửi đến gia đình lòng biết ơn sâu sắc, gia đình tạo cho điều kiện tốt tinh thần vật chất, làm chỗ dựa vững để yên tâm học tập hồn thành tốt luận văn Sau cùng, xin cảm ơn tất bạn lớp DH08HH Trung tâm Sâm Dược liệu Tp.HCM chia sẻ, giúp đỡ động viên suốt thời gian thực đề tài i TÓM TẮT Đề tài nghiên cứu “PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT SAPONIN TRONG CAO SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis) ĐÃ BẢO QUẢN” tiến hành Trung tâm Sâm Dược liệu Tp.HCM, thời gian từ tháng 01/2012 đến tháng 8/2012 Saponin hợp chất có hoạt tính sinh học, có nhiều thuộc chi Sâm (Panax), họ Nhâm Sâm (Araliaceae) Panax vietnamensis (sâm Ngọc Linh hay sâm Việt Nam, sâm K5,…) loài sâm đặc hữu Việt Nam, thành phần giống loài sâm tiếng sâm Triều Tiên (Panax ginseng) hay sâm Mỹ (Panax quinquefolium L) với cấu trúc protopanaxadiol, protopanaxatriol Sâm Việt Nam có hợp chất saponin dammaran kiểu ocotillol là majonosid R2 (MR2) chiếm 50% hàm lượng saponin có sâm Thành phần định khác biệt sâm Việt Nam so với sâm Triều Tiên sâm Trung Quốc trị liệu.[27] Dựa kĩ thuật sắc kí: sắc kí cột cổ điển, sắc kí mỏng, đề tài phân lập định danh hai hợp chất saponin majonoside R2 (MR2) Ginsenoside Rb1 Ngồi ra, xác định cấu trúc phân tử đường kĩ thuật phổ học NMR ii -D-Fructo pyranose ABSTRACT The thesis "Isolation of the saponin compounds from Panax vietnamensis extract preserved" was conducted at HCMC Research Center of Ginseng and Medicinal Materials from 01/2012 to 8/2012 Saponin were the major compounds which have biological activity, can be found in the genus Ginseng (Panax), araliaceae Panax vietnamensis (ginseng or ginseng Vietnam Ngoc Linh, K5 ginseng, ) is an endemic species of ginseng in Vietnam, in addition to the ingredients like ginseng species known as Korean ginseng (Panax ginseng) or American ginseng (Panax quinquefolium L) with the structure of protopanaxadiol, protopanaxatriol, the Vietnam ginseng has the saponin compounds with majonosid dammaran ocotillol type (majonosid R2, MR2) over 50% concentration of saponin in ginseng This component was the remarkable differences compared with Korean ginseng and Chinese ginseng[27] Basing on the chromatographic techniques: column chromatography, thin layer chromatography This study has isolated and identified two compounds are saponins majonoside R2 (MR2) and ginsenoside Rb1 In addition, a sugar was also isolated and elucidared,it’s structure was determited that α-D-fructo-pyranose by NMR spectroscopy techniques iii MỤC LỤC Trang LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii ABSTRACT iii MỤC LỤC .iv Chương GIỚI THIỆU 1.1 ĐẶT VẤN ĐỀ .1 1.2 MỤC ĐÍCH VÀ PHẠM VI CỦA ĐỀ TÀI 1.3 Ý NGHĨA CỦA ĐỀ TÀI .2 Chương TỔNG QUAN .3 2.1 HỌ NHÂN SÂM (ARALIACEAE) 2.2 CHI SÂM (PANAX) .3 2.3 PHÂN BỐ .4 2.4 GIỚI THIỆU VỀ SÂM NGỌC LINH 2.4.1 Nguồn gốc lịch sử phát .4 2.4.2 Danh pháp khoa học 2.4.3 Hình thái thực vật 2.4.4 Dược tính .8 2.4.5 Quá trình nghiên cứu TPHH sâm Ngọc Linh 10 2.5 TỔNG QUAN VỀ HỢP CHẤT SAPONIN .11 2.5.1 Định nghĩa 11 2.5.2 Tính chất saponin 12 2.5.3 Phân loại saponin (theo thành phần hóa học) 13 2.5.4 Sự phân bố thực vật 15 2.6 KỸ THUẬT SẮC KÍ 16 2.6.1 Sắc kí nhanh 17 2.6.2 Sắc kí cột cở điển 17 2.6.3 Sắc kí lớp mỏng 18 Chương 20 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 iv 3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM NGHIÊN CỨU 20 3.1.1 Thời gian 20 3.1.2 Địa điểm .20 3.2 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU .20 3.3 VẬT LIỆU 20 3.3.1 Đối tượng nghiên cứu 20 3.3.2 Dụng cụ 20 3.3.3 Hoá chất .21 3.4.1 Sắc kí cột nhanh 23 3.4.2 Sắc ký cột cổ điển 24 3.4.2.1 Sắc ký cột T2 24 3.4.2.2 Sắc kí cột T4 25 Chương 26 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN .26 4.1 KẾT QUẢ SẮC KÝ CỘT NHANH 26 4.2 KẾT QUẢ SẮC KÝ CỘT CỔ ĐIỂN 27 4.2.1 Kết quả cột T2 27 4.2.2 Kết sắc kí cột tổng kết phân đoạn cột T4 .31 4.2.3 Tổng kết toàn kết 34 4.3 THẢO LUẬN 34 Chương 35 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ .35 5.1 KẾT LUẬN 35 5.2 KIẾN NGHỊ 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO 36 PHỤ LỤC .39 v DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT CTPT công thức phân tử H2O nước H2SO4 acid sulfuric MeOH methanol CHCl3 chloroform EtOH ethanol TPHH thành phần hóa học SKLM sắc kí lớp mỏng SNL sâm Ngọc Linh SVN sâm Việt Nam Tp.HCM thành phố Hồ Chí Minh NXB nhà xuất vi DANH MỤC BẢNG Trang Bảng 2.1 Kết khảo sát hạt thu hái tự nhiên Bảng 3.1 Thơng số cột sắc kí cao áp (sắc kí cợt nhanh) 24 Bảng 3.2 Thơng sớ cợt sắc kí của các phân đoạn cột thường 24 Bảng 3.3 Các phân đoạn cột T2 24 Bảng 3.4 Các phân đoạn của cột T2-3 25 Bảng 3.5 Các phân đoạn cột T4 25 Bảng 4.1 Kết sắc ký cột nhanh 26 Bảng 4.2 Kết quả sắc ký cột T2 27 Bảng 4.3 Kết phân đoạn tách từ phân đoạn cột T2-3 28 Bảng 4.4 Kết phân đoạn tách từ phân đoạn cột T4 31 vii DANH MỤC HÌNH ẢNH Trang Hình 2.1 Cây sâm Ngọc Linh Hình 2.2 Rễ sâm Ngọc Linh tự nhiên Hình 2.3 Rễ sâm Ngọc Linh trờng Hình 2.4 Cấu trúc hóa học saponin MR2 11 Hình 2.5 Cấu trúc hóa học saponin Rb1 11 Hình 2.6 Cấu trúc hóa học saponin Rd 11 Hình 2.7 Cấu trúc hóa học saponin Rg1 11 Hình 2.8 Phân loại saponin theo cấu trúc hóa học 13 Hình 2.9 Một số khung triterpen (tt) 15 Hình 3.1 Sơ đồ quy trình tách, tinh sạch và xác định cấu trúc mợt chất 22 Hình 3.2 Sơ đồ tóm tắt kết thu 23 Hình 4.1 Bản SKLM phân đoạn cột nhanh 26 Hình 4.2 Kết quả các phân đoạn tách được từ phân đoạn T2 27 Hình 4.3 Bản SKLM tất cả các phân đoạn cột T2-3 30 Hình 4.4 Kết quả SKLM của phân đoạn T2-3-6 so với chuẩn MR2 30 Hình 4.5 Cấu trúc hóa học của Saponin MR2 31 Hình 4.6 Bản SKLM tất cả các phân đoạn cột T4 32 Hình 4.7 T4-6 chấm so với các chuẩn 33 Hình 4.8 Cấu trúc Ginsenoside Rb1 33 viii nhỏ màu nhạt Cần tăng hệ để giải ly chất phân cực khỏi cột sắc kí Phân đoạn T2-3-5 (281-520) vết khơng tách rời, vết saponin to đậm màu, vết trùng vết MR2 vết nằm vết MR2, khả tách vết giải ly cột sắc kí sau Phân đoạn T2-3-6 (521-680) vết từ phân đoạn T2-3-5 giải ly hết khỏi cột,vết tinh có Rf trùng với MR2, cần chấm kiểm tra hai hệ sắc kí khác với SKLM dài 10 cm, tiến hành đo Rf xem có phải hồn toàn giống chuẩn MR2 Phân đoạn T2-3-7 (681-hết) vết mờ nhỏ thấy vết Tiến hành xả cột lấy kiệt phần chất bị giữ lại cột Chọn phân đoạn dễ tách tiến hành giải ly cột sắc kí sau Phân lập chất tách Tổng kết cột T2-3 thu phân đoạn phân đoạn kết tủa phân đoạn hứng T2-3-2 (77-100) T2-3-3 (101-130) Sau cô cắn mẫu bếp điều nhiệt, đem cân lấy số liệu sau cho lượng nhỏ methanol vào để bảo quản mẫu điều kiện thường Ta tách được MR2 từ phân đoạn T2-3-6 (521-680) Chấm chung T2-3-6 với MR2 hệ SKLM khác CHCl3:MeOH:H2O (70:30:10) CHCl3:MeOH:H2O (65:35:10) SKLM dài 10 cm dùng để đo Rf xác định độ tinh so sánh khác nhau, giống chất tách với chuẩn MR2 29 T2-3- chọn rửa giải Hình 4.3: Bản SKLM tất phân đoạn từ cột T2-3 Chú thích: phân đoạn hứng từ cột T2-3: T2-3-1(1-76), T2-3-2(77-100), T2-33(101-130), T2-3-4(131-280), T2-3-5(281-520), T2-3-6(521-680), T2-3-7(681-hết) Hình 4.4: Kết SKLM phân đoạn T2-3-6 (521-680) so với chất chuẩn MR2 Theo kết so sánh Rf mẫu chất chuẩn MR2 hai hệ dung môi khác cho giá trị giống Kết luận tách saponin MR2 từ cao chiết methanol sâm Ngọc Linh Cấu trúc hóa học saponin tách cấu trúc saponin majonoside R2 (MR2) 30 Hình 4.5: Cấu trúc hóa học saponin MR2 4.2.2 Kết sắc kí cột tổng kết phân đoạn cột T4 Bảng 4.4: Tổng kết phân đoạn tách từ sắc kí cột T4 Dung môi rửa giải Phân đoạn Phân đoạn hứng Khối lượng, g T4-1 1-8 0,376 T4-2 9-70 1,125 T4-3 71-150 1,317 T4-4 151-226 3,101 vết đậm (b) Tạp mờ T4-5 227-353 2,513 vết đậm (b) Kết tinh T4-6 354-394 2,120 vết mờ vết đậm (b) Chất gần CHCl3:MeOH:H2O 65:35:10 T4-7 395-474 3,116 vết mờ (b) 100% MeOH T4-8 Rửa cột 1,692 vết mờ bị kéo (b) CHCl3:MeOH:H2O 85:15:10 CHCl3:MeOH:H2O 75:25:10 Sắc kí lớp mỏng vết phân cực (a) vết phân cực (a) vết, vết đậm (a) Ghi Tạp nhiều Còn tạp Còn tạp Nhận xét phân đoạn Phân đoạn T4-1 (1-8) vết mờ phân cực, vết bị kéo dài tạp nhiều Mới rửa giải chất chưa giải ly 31 Phân đoạn T4-2 (9-70) vết phân cực, chất bắt đầu giải ly thấy vết saponin mờ vết tạp Phân đoạn T4-3 (71-150) vết vết saponin to đậm có màu tím, vết tạp vả màu nâu nhạt có gắn đường Phân đoạn T4-4 (151-226) vết bị kéo chất giải ly khỏi cột nhiều hệ phân cực thấp không tách vết rõ được, thấy vết nhiều tạp mờ Cần tăng hệ giải ly cột hệ chạy SKLM Phân đoạn T4-5 (227-353) tăng hệ giải ly cột từ CHCl3:MeOH:H2O (85:15:10) thành CHCl3:MeOH:H2O (75:25:10) vết tách rõ thấy vết chính, vết vết saponin to đậm màu, vết bị kéo vệt phân cực Xuất kết tinh phân đoạn này, rửa kết tinh methanol lạnh, hòa tan kết tinh dung môi Chloroform gửi đo phổ Phân đoạn T4-6 (354-394) vết saponin to rõ, màu tím đậm, tạp kéo dài nên chọn phân đoạn để tiếp tục giải ly loại tạp để tách hợp chất saponin tinh Phân đoạn T4-7 (395-474) vết mờ bị kéo dài, chất gần hết nên tiến hành rửa cột methanol 100% cho xả cột Phân đoạn T4-8: Rửa cột Chọn rửa giải tiếp Hình 4.6: Bản SKLM tất phân đoạn cột T4 32 Chú thích: phân đoạn hứng từ cột T4 T4-1(1-8), T4-2(9-70), T4-3(91-150), T44(151-226),T4-5(227-353), T4-6(354-394), T4-7(395-474) Phân đoạn T4-5 sau tinh sạch ta được phân tử đường -D-Fructo pyranose Phân đoạn T4-6 sau chế hóa ta thu Ginsenoside Rb1 Hình 4.7: T4-6 chấm so với chất chuẩn Hình 4.8: Cấu trúc ginsenoside Rb1 33 4.2.3 Tổng kết toàn kết Sắc ký cột chân không thu được phân đoạn đó phân đoạn T2 và T4 được đem rửa giải để tách hợp chất tinh sạch Sắc kí cột T2 thu phân đoạn, đó phân đoạn T2-3 có triển vọng tách được hợp chất tinh sạch Sắc kí cột T2-3 thu phân đoạn, tách hợp chất saponin MR2 với khối lượng là 60 mg Sắc kí cột T4 thu phân đoạn, phân đoạn T4-5 (227-353) có kết tinh đo phồ NMR, kết xác định cấu trúc định danh phân tử đường -D-Fructo pyranose Phân đoạn T4-6 (354-394) tách hợp chất tinh khiết Ginsenoside Rb1 với khối lượng 18 mg 4.3 THẢO LUẬN Lượng cao tổng ban đầu mà số lượng saponin cao chiết lại nhiều nên khối lượng chất Qua cột sắc kí lại xảy hao hụt nên lượng chất đáng kể Vì vậy cần lấy lượng cao chiết tổng nhiều để khối lượng chất tách nhiều hơn, dễ dàng cho việc xác định cấu trúc Ngồi ra, áp dụng phương pháp tách chất khác như: dùng silicagel pha đảo, dùng phương pháp chế hóa silicagel,… Càng mở rộng phương thức kết thu phong phú 34 Chương KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Từ cao chiết methanol sâm Ngọc Linh, thơng qua kĩ thuật sắc kí cột nhanh, sắc kí cột thường , sử dụng các hệ dung môi chạy sắc ký thích hợp và được kiểm tra độ tinh sạch bằng sắc ký bản mỏng , ta tiến hành phân lập Saponin (majonoside R2) MR2 (60mg) ginsenoside Rb1(18mg) Hai Saponin này rất có ý nghĩa công tác kiểm nghiệm và đánh giá chất lượng của sâm Việt Nam 5.2 KIẾN NGHỊ Kiến nghị tiếp tục tách phân lập saponin từ phân đoạn lại sắc kí cột nhanh Kiến nghị kết hợp phương pháp khác như: dùng sắc ký cợt pha đảo, phương pháp chế hóa,…trong việc phân lập tinh saponin phân đoạn sau chất gần tinh Tiến hành thử hoạt tính sinh học saponin tách 35 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Bộ môn Dược Liệu (2007), Phương pháp nghiên cứu dược liệu, Trường Đại Học Y Dược TPHCM Đái Duy Ban (2008), Các hợp chất thiên nhiên nhiên có hoạt tính sinh học phòng chống số bệnh cho người vật nuôi, NXB Khoa Học Tự Nhiên Công Nghệ Đào Kim Long Nguyễn Châu Giang (1991), Sơ lược trình phát sâm Đốt Trúc vùng núi Ngọc Linh (Kon Tum), trong: Liên chi hội Dược Học Sở Y Tế Quảng Nam – Đà Nẵng, trang 138 – 146 Đỗ Tất Lợi (2006), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y Học Hà Thị Dung Grushvitzky I.V (1985), Một loài sâm thuộc chi sâm (Panax L.), họ nhân sâm (Araliaceae) Việt Nam, tạp chí Sinh học, tập 7(3), 45-48 Liên chi Hội Dược Học – Sở Y Tế QN-ĐN (1991), Tập tài liệu viết lịch sử ngành Dược Khu tỉnh Quảng Nam – Đả Nẵng Ngơ Văn Thu (1990), Hóa học saponin, Trường Đại học Y Dược TPHCM Nguyễn Bá Hoạt (1999), Những dẫn liệu hình thái sâm phát Việt Nam, thông báo Dược Liệu, số 1, 5-9 Nguyễn Kim Phi Phụng (2005) Phổ NMR sử dụng phân tích hữu NXB Đại Học Quốc Gia TPHCM 10 Nguyễn Kim Phi Phụng (2007), Phương pháp cô lập hợp chất hữu cơ, NXB Đại Học Quốc Gia TPHCM 11 Nguyễn Tập (2006), Danh lục Đỏ thuốc Việt Nam, Tạp chí Dược liệu; số (11); trang 97 – 105 12 Nguyễn Thị Thu Hương cộng (2001), Nghiên cứu ứng dụng tác dụng antistress tác dụng tăng lực Sâm Việt Nam Đinh lăng, Báo cáo tổng kết đề tài nghiên cứu khoa học Bộ Y Tế ( Mã số đề tài KHYD-0225R ) 13 Nguyễn Thới Nhâm cộng (1993), Tóm tắt kết qủa nghiên cứu từ năm (19781992), Trung tâm Sâm Việt Nam- Bộ Y Tế 14 Nguyễn Thới Nhâm Phan Văn Đệ (1980), Tóm tắt kết nghiên cứu đặc tính sinh học sâm K5 hoang dại năm (1979-1980), TL.06/TV-89-ĐVSK5, 1-21 36 15 Nguyễn Thượng Dong, Trần Công Luận, Nguyễn Thị Thu Hương (2007), Sâm số thuốc thuộc họ Nhân Sâm, NXB Khoa học Kĩ thuật Hà Nội 16 Nguyễn Tiến Bân - chủ biên (1996), Sách Đỏ Việt Nam, Tập II- Phần thực vật, NXB Khoa Học Kĩ thuật Hà Nội; trang 207 – 208 17 Phạm Hoàng Hộ (1972), Cây cỏ miền Nam Việt Nam, Bộ Giáo Dục Sài gòn Q I, tr 989, fig 2492 18 Phan Văn Đệ, Grushvitzky I.V., Skvortsova N.T.(1983), Đặc tính hình thái – giải phẫu Panax vietnamensis (Araliaceae) Leningrad, Tạp chí Thực Vật học, tập 70(4), 512-522 19 Phan Văn Đệ, Grushvitzky I.V., Skvortsova N.T., 1983, Những hoa tự bất thường Panax vietnamensis (Araliaceae), Leningrad, Tạp chí Thực Vật học, tập 72(8), 10791082 Tài liệu tiếng Anh 20 Antan I.S., Slepyan L.I., Minina S.A.; Shikov A.N., Legosteva A B, Vasil'eva A.L.,(1995), Development of the method of quantitative spectrophotometric determination of the main active agents in preparations of the ginseng selective strain Pharmaceutical Chemistry Journal, Vol 26, No 6, 436-439 21 Dan Zhou, Hong Jin, Huan-Bing Lin, Xue-Mei Yang , Yu-Fang Cheng, Feng-Jun Deng, Jiang-Ping Xu (2010), Antidepressant effect of the extracts from Fructus Akebiae Pharmacology, Biochemistry and Behavior 488–495 22 Grushvitzky I V., Skvortsova N T., Hà Thi Dung (1990), The genus Panax (Araliaceae) in the flora of Vietnam Bot Jour 75(6): 884 – 888 23 Hiai S., Oura H., Nakajima T (1976), Color reaction of some sapogenins and saponins with vanillin and sulfuric acid Planta Med 29(2), 116-122 24 Kazuo Yamasaki (1999), Bioactive saponins in Vietnamese ginseng, Panax vietnamensis 25 Konoshima T., Takasaki M., Ichiishi E., Murakami T., Tokudo H., Nishino H., Duc N.M., Kasai R., Yamashaki K (1997), Cancer chemopreventive activity of Majonoside-R2 from Vietnamese ginseng Panax vietnamensis Cancer Lett, 147(1-2), 11-16 37 26 Liang Z.M., Long M.S., Min S.S., Hua X.Z., Na L.A (2001), Two New Triterpenoid Saponins from Aralia subcapitata Natural Product Research Volume 4.0 Issue 157-161 27 Nguyễn Minh Đức Nguyễn Thới Nhâm (1998), Chemical composition and pharmacological activities of Vietnamese ginseng, Advances in Ginseng Research, The Korean Society of Ginseng, 127-137 28 Nham, K Yamasaki and O Tanaka, New on biogenesis of dammarane triterpenoids saponins from Vietnamese ginseng: Highlights Srivastava S.K., Jaina D.C., (1989), Triterpenoid saponins from plants of Araliaceae Phytochemistry Volume 28, Issue 2, 644-64 29 Thomas Barclay, Milena Ginic-Markovic, Martin R Johnston, Peter Cooper , Nikolai Petrovsky (2012), Observation of the keto tautomer of D-fructose in D2O using 1H NMR spectroscopy Carbohydrate 136–141 30 Trần Lê Quan (2002), Biologically active saponin constituents from vietnamese ginseng plants, Ph D Thesis, Falcuty of Pharmacology, Toyama Medical and Pharmaceutical University 31 Xuemei Yang, Guoliang Li, Lingyun Chen, Cong Zhang, Xinxiang Wan, Jiangping Xu (2010), Quantitative determination of hederagenin in rat plasma and cerebrospinal fluidby ultra fast liquid chromatography–tandem mass spectrometry method (1973– 1979), Journal of Chromatography B 32 Yamasaki, Plenum Press, New York and London Yu S., Cai Y.M., Yiao L., Yang L., Sheng C.M (2008), Facile synthesis of oleanolic acid monoglycosides and diglycosides Molecules 13, 1472-1486 38 PHỤ LỤC • Cách pha thuốc thử H2SO4 10% EtOH Dùng ống đong 100 ml: - Cho vào ống đong khoảng 70 ml EtOH - Cho thêm ml H2SO4 - Đong thêm EtOH đến mức 100 ml • Cách pha hệ dung môi CHCl3:MeOH - Đong lượng vừa đủ chất theo tỷ lệ (ví dụ: 85:25, 65:35) - Cho hệ dung môi vừa pha vào erlen, lắc cho chất tác dụng với nhau, dùng máy siêu âm đánh dung môi 15 phút - Dùng tồn hệ dung mơi • Cách pha hệ dung mơi CHCl3:MeOH:H2O - Đong lượng vừa đủ chất theo tỷ lệ.(ví dụ: 65:35:10, 70:30:10) - Chú ý pha CHCl3, sau cho MeOH vào cuối H2O Khơng làm thay đổi vị trí chất pha - Cho hệ dung mơi vừa pha vào bình lắng, lắc cho chất trộn với - Để n bình lắng đến tồn dung mơi suốt (có phân thành lớp), lấy lớp bên bỏ lớp • Kết đo phổ NMR mẫu kết tinh phân đoạn T2-3-5 sắc kí cột T2-3 [10,20,29] 39 40 41 42 Cấu trúc đường xác định dựa vào phổ NMR đường pyranose Hình cấu trúc hóa học đường 43 -D-Fructo pyranose -D-Fructo ...PHÂN LẬP CÁC HỢP CHẤT SAPONIN TRONG CAO SÂM NGỌC LINH (Panax vietnamensis) ĐÃ BẢO QUẢN Tác giả PHẠM DUY LINH Khóa luận đệ trình để đáp ứng u cầu cấp Kỹ sư ngành Cơng nghệ hóa... 31 vii DANH MỤC HÌNH ẢNH Trang Hình 2.1 Cây sâm Ngọc Linh Hình 2.2 Rễ sâm Ngọc Linh tự nhiên Hình 2.3 Rễ sâm Ngọc Linh trồng Hình 2.4 Cấu trúc hóa học saponin... triterpen Tam Thất, Nhân Sâm sâm Ngọc Linh có 11 chất có Rf ngang nhau, màu giống hai hệ dung môi khác Theo đánh giá Nguyễn Minh Đức, Võ Duy Huấn nǎm 1994 từ sâm Ngọc Linh chiết 50 hợp chất, xác định