KHẢO SÁT VÀ XÁC ĐỊNH TUYẾN TRÙNG GÂY BỆNH BƯỚU RỄ TRÊN CÂY HOA MƯỜI GIỜ (Portulaca grandiflora )

Lê Đình Đôn Nội dung nghiên cứu gồm 3 phần chính là: thứ nhất, khảo sát sự hiện diện và mật số bướu rễ do tuyến trùng ký sinh gây bệnh ở các vùng trồng hoa mười giờ trên địa bàn thành ph

KHẢO SÁT VÀ XÁC ĐỊNH TUYẾN TRÙNG GÂY BỆNH

BƯỚU RỄ TRÊN CÂY HOA MƯỜI GIỜ

(Portulaca grandiflora )

TẠI TP HỒ CHÍ MINH

Tác giả

CHÂU THIỆN HỘI

Luận văn được đệ trình để hoàn tất yêu cầu cấp bằng kỹ sư nông nghiệp ngành

Bảo vệ thực vật

GIÁO VIÊN HƯỚNG DẪN PGS.TS LÊ ĐÌNH ĐÔN

Tp HỒ CHÍ MINH, tháng 07/2012

LỜI CẢM TẠ

Để hoàn thành tốt khoá luận tốt nghiệp ngoài sự nổ lực của bản thân, tôi còn được sự giúp đỡ tận tình của qúy thầy cô và các bạn Tôi xin chân thành bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến:

Thầy Lê Đình Đôn đã tận tình hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện đề tài và viết khóa luận tốt nghiệp

Ban giám hiệu trường đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh

Khoa Nông Học, Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật cùng tất cả qúy thầy cô giáo của trường Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh đã hết lòng giảng dạy và truyền đạt cho tôi những kiến thức quý báu trong suốt quá trình học tập tại trường

Cuối cùng với lòng biết ơn sâu sắc xin dành cho bố mẹ, bạn bè đã chia sẽ, động viên và giúp đỡ tôi trong cuộc sống, trong học tập, đặc biệt trong thời gian thực hiện đề tài để tôi hoàn thành khóa luận tốt nghiệp này

TP Hồ Chí Minh, tháng 07/2012

Sinh viên thực hiện

Châu Thiện Hội

TÓM TẮT

CHÂU THIỆN HỘI, Đại học Nông Lâm thành phố Hồ Chí Minh Tháng 7/2012 KHẢO SÁT VÀ XÁC ĐỊNH TUYẾN TRÙNG GÂY BỆNH BƯỚU RỄ TRÊN CÂY

HOA MƯỜI GIỜ (Portulaca grandiflora) TẠI TP HỒ CHÍ MINH

Giáo viên hướng dẫn: PGS.TS Lê Đình Đôn

Nội dung nghiên cứu gồm 3 phần chính là: thứ nhất, khảo sát sự hiện diện và mật số bướu rễ do tuyến trùng ký sinh gây bệnh ở các vùng trồng hoa mười giờ trên địa bàn thành phố Hồ Chí Minh Thứ hai, ảnh hưởng của tuyến trùng ký sinh gây bệnh bướu rễ đến sinh trưởng và phát triển của hoa mười giờ Thứ 3, xác định loài tuyến trùng ký sinh gây bệnh bướu rễ trên hoa mười giờ theo phương pháp cây ký chủ

Bệnh sưng rễ trên hoa mười giờ là do tuyến trùng nội ký sinh cố định

xuất hiện của bệnh bướu rễ Mật số bướu/gram rễ lớn nhất là ở quận 9 (418,3 bướu/gram rễ) và nhỏ nhất là ở quận Thủ Đức (78,3 bướu/gram rễ) Qua các tháng mùa mưa từ tháng 4 đến tháng 6 mật số bướu rễ ở các quận đều tăng điển hình là ở quận 9 mật số bướu tăng từ 298,67 bướu/gram rễ lên 418,3 bướu/gram rễ

Tuyến trùng Meloidogyne ký sinh gây bệnh sưng rễ trên giống hoa mười giờ

màu đỏ là nhiều nhất (2,26 bướu/rễ)

Quần thể tuyến trùng Meloidogyne gây bệnh sưng rễ trên hoa mười giờ cũng ký

sinh gây bệnh sưng rễ trên các cây thuốc lá, cà chua, ớt, dưa hấu nhưng không ký sinh trên cây đậu phộng và cây bông vải

MỤC LỤC

Trang

Trang tựa i

Lời cảm tạ ii

Tóm tắt iii

Mục lục iv

Danh sách các hình vii

Danh sách các bảng vii

Chương 1 GIỚI THIỆU 1

1.1 Đặt vấn đề 1

1.2 Mục tiêu đề tài 2

1.3 Yêu cầu đề tài 2

1.4 Giới hạn đề tài 2

Chương 2 TỔNG QUAN TÀI LIỆU 3

2.1 Giới thiệu về truyến trùng ký sinh gây hại thực vật 3

2.1.1 Sơ lượt về tuyến trùng hại thực vật 3

2.1.2 Đặc điểm hình thái và sinh học của tuyến trùng hại thực vật 4

2.1.3 Phân loại tuyến trùng 6

2.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng lên tuyến trùng thực vật 8

2.1.5 Triệu chứng gây hại của tuyến trùng 9

2.1.6 Một số tuyến trùng ký sinh gây hại thực vật 10

2.1.6.1 Tuyến trùng Meloidogyne 10

2.1.6.2 Tuyến trùng Rotylenchulus 10

2.1.6.3 Tuyến trùng Pratylenchus 11

2.1.6.4 Tuyến trùng Tylenchorhynchus 11

2.1.6.5 Tuyến trùng Helicotylenchus 11

2.1.7 Quan hệ tương hổ của tuyến trùng với các vi sinh vật khác 11

2.1.7.1 Tuyến trùng và nấm bệnh 11

2.1.7.2 Tuyến trùng và bệnh vi khuẩn 12

2.1.7.3 Tuyến trùng và bệnh virus 12

2.1.8 Các biện pháp phòng trừ tuyến trùng 13

2.1.8.1 Ngăn ngừa 13

2.1.8.2 Luân canh 13

2.1.8.3 Biện pháp canh tác 13

2.1.8.4 Các biện pháp vật lý 14

2.1.8.5 Chọn giống kháng 14

2.1.8.6 Biện pháp sinh học 14

2.2 Phương pháp xác định tuyến trùng Meloidogyne dựa vào phản ứng cây ký chủ 15

2.3 Giới thiệu về hoa mười giờ 16

2.3 Một số nghiên cứu trong và ngoài nước 16

2.3.1 Ngiên cứu trong nước 16

2.3.2 Nghiên cứu ngoài nước 17

Chương 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 18

3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu 18

3.1.1 Thời gian nghiên cứu 18

3.1.2 Địa điểm nghiên cứu 18

3.2 Vật liệu và dụng cụ nghiên cứu 18

3.2.1 Vật liệu nghiên cứu 18

3.2.2 Dụng cụ nghiên cứu 18

3.3 Phương pháp nghiên cứu 18

3.3.1 Phương pháp điều tra và thu thập mẫu 18

3.3.2 Phương pháp ly trích và lây nhiễm tuyến trùng nhân tạo 18

3.3.3 Các chỉ tiêu và phương pháp theo dõi khả năng sinh trưởng phát triển của các giống hoa mười giờ 19

3.3.4 Phương pháp đếm mật số ấu trùng cảm nhiễm 19

3.3.5 Phương pháp nhuộm tuyến trùng Meloidogyne ký sinh rễ hoa mười giờ 19

3.3.6 Phương pháp chủng tuyến trùng trên cây ký chủ 20

3.3.7 Phương pháp pha dung dịch thuốc nhuộm fuchsin và acidified glycerol 21

3.3.8 Phương pháp xử lý số liệu 22

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23

4.1 Kết quả 23

4.1.1 Xác định tuyến trùng gây sưng rễ trên hoa mười giờ 23

4.1.2 Tình hình tuyến trùng Meloidogyne ký sinh gây bệnh bướu rễ trên cây hoa mười giờ tại thành phố Hồ Chí Minh 25

4.1.3 Ảnh hưởng của tuyến trùng Meloidogyne ký sinh gây bệnh bướu rễ đến sinh trưởng và phát triển cảu các giống hoa mười giờ 26

4.1.4 Xác định loài tuyến trùng Meloidogyne dựa vào phản ứng cây ký chủ 28

4.2 Thảo luận 30

Chương 5 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 32

5.1 Kết luận 32

5.2 Đề nghị 32

TÀI LIỆU THAM KHẢO 33

PHỤ LỤC 35

DANH SÁCH CÁC HÌNH

Hình 4.1 Một số bệnh phổ biến trên vườn hoa mười giờ 24

Hình 4.2 Các cây ký chủ bị bướu rễ do tuyến trùng Meloidogyne 30

Hình 1 Khu vực thí nghiệm 35

Hình 2 Các hoa giống hoa mười giờ được trồng thí nghiệm 35

Hỉnh 3 Hoa mười giờ màu trắng hồng 36

Hinh 4 Hoa mười giờ màu tím 36

Hình 5 Rễ hoa mười giờ không bị bướu rễ 37

Hình 6 Rễ hoa mười giờ bị bướu rễ do chủng tuyến trùng Meloidogyne 37

DANH SÁCH CÁC BẢNG Bảng 3.1 Cây ký chủ và nguồn gốc 20

Bảng 3.2 Phản ứng của 4 loại Meloidogyne và các nòi của chúng đối với các cây ký chủ khác nhau ở miền Bắc Carolina 21

Bảng 4.1 Diễn biến mật số bướu/gram rễ qua các tháng mùa mưa 25

Bảng 4.2 Diễn biến mật số con cái/bướu qua các tháng mùa mưa 26

Bảng 4.3 Ảnh hưởng của tuyến trùng ký sinh gây bệnh bướu rễ đến chiều cao cây các giống hoa mười giờ được trồng trong phòng thí nghiệm 26

Bảng 4.4 Ảnh hưởng của tuyến trùng ký sinh gây bệnh bướu rễ đến chiều dài rễ các giống hoa mười giờ được trồng trong phòng thí nghiệm 27

Bảng 4.5 Số bướu rễ xuất hiện do tuyến trùng ký sinh gây ra trên các giống hoa mười được trồng trong phòng thí nghiệm 28

Bảng 4.6 Phản ứng của tuyến trùng Meloidogyne đối với các cây ký chủ khác nhau 28

15 cm, cây nở hoa quanh năm và có nhiều màu sắc sặc sở Ở Việt Nam, hoa mười giờ

là loại cây cảnh phổ biến được trồng nhiều nơi như: các công viên, các vườn hoa,… góp phần làm tăng vẻ mỹ quan nơi ở và đô thị Theo các bài thuốc nam hoa mười giờ còn là thuốc dùng trị bỏng rất công hiệu Hoa mười giờ cũng là loài cây rất dễ trồng và chăm sóc, chỉ cần cắt những đoạn thân dài khoảng 5 – 7 cm là có thể trồng được những cây hoa mười giờ Tuy nhiên diện tích hoa mười giờ ngày càng bị thu hẹp là do khi trồng trên diện tích lớn trong một thời gian dài đã xuất hiện một số sâu bệnh hại nghiệm trọng làm hoa chết hàng loạt Đặc biệt là những loài ký sinh gây bệnh cho hoa mười giờ ở trong đất như những loài tuyến trùng ký sinh rễ Chúng tập trung nhiều ở tầng canh tác, đặc biệt ở độ sâu 5 – 20 cm Chúng có kích thước nhỏ bé và số lượng lớn, chiếm tới 90% số lượng các động vật hạ đẳng ,có cơ thể đa bào sống trong đất và

là một trong những đối tượng dịch hại nguy hiểm Chúng có mặt phá hại ở nhiều nơi và nhiều loại thực vật Tuyến trùng sử dụng dịch cây trồng làm thức ăn gây tác hại đáng

kể cho quá trình sống và trao đổi chất trong cây Đồng thời chúng còn tạo điều kiện lan truyền nấm, vi khuẩn và virut gây bệnh cho cây, nếu gây hại nặng có thể làm chết cây trồng (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

Để biết rõ hơn những loài tuyến trùng ký sinh gây hại trên rễ cây hoa mười giờ tôi đã thực hiện đề tài “Khảo sát và xác định tuyến trùng gây bệnh bướu rễ trên cây hoa

mười giờ (Portulaca grandiflora) tại TP Hồ Chí Minh”

1.2 Mục tiêu đề tài

Xác định được loài tuyến trùng ký sinh gây bệnh bướu rễ trên cây hoa mười giờ

1.3 Yêu cầu đề tài

Khảo sát và xác định tuyến trùng gây bệnh bướu rễ trên cây hoa mười giờ

1.4 Giới hạn đề tài

- Thời gian từ 13/02/2012 đến 13/06/2012

- Thực hiện tại TP Hồ Chí Minh

Chương 2

TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.1 Giới thiệu về tuyến trùng ký sinh gây hại thực vật

2.1.1 Sơ lược về tuyến trùng hại thực vật

Tuyến trùng là động vật không xương sống thuộc ngành giun tròn (Nematode hay Nemata) Đây là một trong những nhóm động vật đa dạng và phong phú nhất trên hành tinh của chúng ta Sự phong phú đa dạng của tuyến trùng thể hiện cả về số lượng loài, số lượng cá thể cũng như kiểu sống, phân bố và hệ sinh thái của chúng (Nguyễn Ngọc Châu, 2003) Theo Đường Hồng Dật (1979), tuyến trùng được phát hiện trên cây vào thế kỷ 18, tuy nhiên không được quan tâm vì cơ thể của chúng rất nhỏ bé, các nhà bệnh cây thì cho rằng tuyến trùng là động vật nên không nằm trong phạm vi nghiên cứu của mình Theo Nguyễn Ngọc Châu (2003), hầu hết tuyến trùng sống tự do, phần lớn chúng sống trong đất trong các thủy vực nước ngọt, bãi biển, thềm lục địa và ngay

cả đáy các đại dương Tuyến trùng chiếm 90% tổng số các động vật có trong đất (Dropkin, 1980), trong đó có cả tuyến trùng hoại sinh và cả tuyến trùng ký sinh gây hại cho cây trồng (Phạm Văn Kim, 2000)

Tuyến trùng được xếp vào ngành Nemata, gồm 2 lớp: Secernentea và Adenophorea có 11 bộ Trên thế giới, số lượng loài tuyến trùng không ngừng tăng lên theo thời gian: từ 4.500 loài (1930), 9000 loài (1950) đến nay đã phát hiện 25.000 loài, trong đó có khoảng 5.000 loài ký sinh ở thực vật Ở Việt Nam hiện nay đã phát hiện khoảng 250 loài gây hại trên thực vật (Nguyễn Ngọc Châu, 2003) Hầu hết tuyến trùng gây bệnh cho cây trồng thuộc bộ Tylenchida Với 5 họ chủ yếu là Heteroderidae, Tylenchidae, Aphelenchidae, Tylenchulidae, Neotylenchidae (Lê Lương Tề 1977)

Những thiệt hại tuyến trùng gây ra cho nền nông nghiệp cũng khá đáng kể Theo một số nghiên cứu trên thế giới, hàng năm loài người mất đi 18% sản phẩm nông

nghiệp và hàng tỷ đô la do tuyến trùng gây ra (Allen, 1960) Kết quả nghiên cứu trên

20 loại cây trồng chính ở các vùng khác nhau trên thế giới thì thiệt hại trung bình hàng năm do tuyến trùng ký sinh gây ra là 12,5% tương đương 77 tỷ USD Ở Liên Xô Năng suất cà chua, dưa chuột bị giảm 50% do tuyến trùng, khoai tây bị giảm đến 80%, lượng đường trong củ cải giảm 20% Ở Mỹ, hàng năm thiệt hại do tuyến trùng gây ra cho nông nghiệp trị giá hàng trăm triệu đô la (Nguyễn Ngọc Châu và Nguyễn Vũ Thanh, 2000)

Ở nước ta, tuyến trùng là một trong những nguyên nhân gây hại cho nhiều cây trồng Nó là một trong những trở ngại chủ yếu cho việc phát triển cây hồ tiêu và tuyến trùng cũng gây thiệt hại đáng kể cho cây cà phê Một số cây công nghiệp khác như đay gai, một số cây rau như hành, cà, khoai tây cũng bị tuyến trùng gây nhiều thiệt hại

2.1.2 Đặc điểm hình thái và sinh học của tuyến trùng hại thực vật

Tuyến trùng phát triển qua 3 giai đoạn: trứng, tuyến trùng non và trưởng thành Một vài loại thuộc bộ Rhabditida hoàn thành chu kỳ phát triển trong vài ngày, có khi chỉ mấy giờ Tuyến trùng nội ký sinh có chu kỳ dài nhất Tuyến trùng non khác con trưởng thành ở bộ phận sinh dục chưa phát triển Tuyến trùng thực vật non có 4 tuổi và tuổi thứ 5 là trưởng thành, kích thước các tuổi khác nhau (Phạm Văn Kim, 2000 và Đường Hồng Dật, 1979)

Trong bộ Tylenchida có một vài loài tuyến trùng có ấu trùng tuổi 1 phát triển trong trứng, đến tuổi 2 chúng mới chui ra khỏi trứng và theo các chất hấp dẫn tiết ra từ

rễ cây mà định hướng di chuyển đến rễ (Kleynhans, 1999)

Tuyến trùng ký sinh thực vật hầu hết có dạng hình thoi hay sợi chỉ, một số loài con cái có dạng hình trái lê, trái chanh, quả thận hay hình túi Kích thước cơ thể nhỏ

bé, thường dài 0,2-1mm, một số trường hợp dài đến vài mm, chiều rộng thân không đồng đều theo chiều dài cơ thể, phần đầu cơ thể tròn hay nhọn, phần cuối biến đổi từ

bầu tròn đến nhọn dài như sợi chỉ Đặc biệt các loài Meloidogyne spp., Heterodera spp., Tylenchus spp và một số loài khác có con cái phát triển mạnh chiều ngang, vỏ

thân dày và ít hoặc không di động Hình dáng của chúng liên quan chặc chẽ đến đặc tính sinh sống và ký chủ (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

Vỏ thân tuyến trùng có tầng cutin bao bọc không thấm nước, trong suốt, nhẵn bóng hoặc hơi gợn Tầng này được cấu tạo thành nhiều lớp do các hợp chất protit khác

nhau, trong đó các lipoprotein đảm bảo tính bán thẩm thấu cho da của tuyến trùng Lớp cutin là nơi gắn các bắp thịt giúp cho cơ thể tuyến trùng có độ căng cần thiết Dựa vào cấu tạo và chức năng này có thể phân biệt được sự khác nhau giữa tuyến trùng ký sinh

và tuyến trùng hoại sinh Các loài ký sinh chuyên tính thì lớp cutin có khả năng ngăn chặn các chất xâm nhập vào cơ thể chúng, bảo vệ cho tuyến trùng chống lại các tác động cơ giới và hóa học có hại, đồng thời chúng có khả năng nhuộm màu khác nhau

Vì tuyến trùng không có khả năng tái sinh nên một vết thương nhỏ cũng làm chúng bị chết Hơn nữa do có tính bán thẩm thấu nên một số loài tuyến trùng có thể sống và sinh sản trong những môi trường mà các cơ thể khác không sống được, như môi trường axit axetic 40% (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

Ngoài ra tuyến trùng còn có miệng, hệ tiêu hóa, hệ sinh dục, thần kinh và bài tiết là các cơ quan quan trọng của tuyến trùng Còn hệ thống tuần hoàn và hô hấp thì đơn giản, phát triển không rõ rệt Trong số các cơ quan bên trong thì chỉ có cơ quan tiêu hóa và sinh dục là phát triển hoàn hảo nhất Hệ thần kinh cũng chỉ là những vòng dây thần kinh đơn giản ở quanh đường tiêu hóa Hệ thống bài tiết cũng rất đơn giản chỉ

là một lỗ bài tiết thường nằm ở khoảng giữa thân Giữa vỏ cơ thể và cơ quan bên trong

là một thể xoang mà trong đó chứa đầy dịch thể không mầu

Miệng của tuyến trùng nằm chính giữa ở phần đầu có từ 3-6 môi, trong xoang miệng có răng và một mấu dài nhọn gọi là kim chích hút Tuyến trùng dùng kim chích hút chích vào mô cây hút thức ăn (dạng thức ăn lỏng), kim chích hút có thể di chuyển

ra phía trước nhờ việc co rút cơ bắp của tuyến trùng (Nguyễn Ngọc Châu, 2003)

Ống thực quản là chỗ phình rộng nhất còn gọi là bầu thực quản có tác dụng bơm đẩy tuyến dịch vào cây để ký sinh, thông qua vòi chích hút bơm hút dịch tế bào cây, tiết ra những chất để tiêu hóa thức ăn đã hút được, đồng thời còn sinh ra những loại độc

tố để tác động vào cây trồng Ruột của hệ thống tiêu hóa là một ống thẳng dài, tận cùng

là lỗ bài tiết (Võ Thị Thu Oanh, 2008)

Bộ phận sinh dục của tuyến trùng bao gồm ống sinh dục và các bộ phận khác tùy theo giới tính loài tuyến trùng Bộ phận sinh dục con đực và con cái rất khác nhau Tuyến trùng cái có bộ phận sinh dục gồm buồng trứng (1 hay 2 buồng trứng đối xứng hoặc không đối xứng phụ thuộc vào số lượng phát triển của ống dẫn trứng, tử cung và

lỗ giao phối) Lỗ giao phối thường nằm ở giữa thân hoặc giáp cận với lỗ bài tiết Nhiều

loại tuyến trùng cái có hệ thống sinh dục khá phát triển nên phình to thành dạng hình cầu, hình quả chanh…

Dựa vào đặc điểm về hình thái giải phẩu: kích thước, cấu tạo xoang miệng, ống thực quản, vị trí lỗ bài tiết, kim chích hút, vòng thần kinh, cơ quan sinh dục, vị trí lỗ giao phối, cấu tạo phần đuôi và những đặc điểm khác để phân loại tuyến trùng Phân biệt các loài hoại sinh và ký sinh cũng dựa trên những đặc điểm này, đặc biệt là sự khác nhau về cấu tạo phần xoang miệng và khả năng nhuộm màu Metylen xanh (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

2.1.3 Phân loại tuyến trùng

Theo Agrios (2003), hầu hết tuyến trùng sống tự do trong nước và trong đất Nhiều loài ký sinh trên thực vật gây ra nhiều bệnh quan trọng trên cây trồng, làm giảm năng suất trầm trọng

Tuyến trùng ký sinh thực vật được phân loại dựa trên cơ sở bộ phận bị hại:

nhóm tuyến trùng cố định trên rễ như: Tuyến trùng tạo nang (Heteroderidae), tuyến

trùng gây nốt sưng (Meloidogyne spp.) Nhóm tuyến trùng nội ký sinh trong rễ như tuyến trùng tổn thương rễ (Pratylenchus spp., Radopholus spp.) Tuyến trùng xoắn ốc (Helicotylenchus spp.) Tuyến trùng truyền bệnh siêu vi (Xiphinema spp.), tuyến trùng thân (Ditylenchus spp., Rhadinbaphelenchus sp.) và tuyến trùng búp và lá

(Aphelenchoides spp., Anguina spp.) (Nguyễn Trần Oánh, 1997)

Theo Phạm Văn Kim (2000), dựa vào cách ký sinh có thể chia tuyến trùng thành

3 nhóm: nhóm ngoại ký sinh, nhóm nội ký sinh, nhóm bán nội ký sinh

Dựa vào những đặc điểm hình thái, tập quán sinh sống, đặc tính sinh vật học, mối quan hệ giữa nhóm tuyến trùng thực vật đối với cây trồng mà Paramonop (1962) chia làm 5 nhóm sinh thái khác nhau:

- Nhóm tuyến trùng vùng rễ thường gặp trong đất và không xâm nhập vào cây

trồng Chúng dùng vòi hút chích vào rễ cây để hút dinh dưỡng Chúng phát triển và hoàn thành vòng đời hoàn toàn trong đất, sinh sản chậm và có số lượng không lớn lắm

Vai trò của nhóm này thể hiện không rõ, điển hình là loài Dorylaimus

- Nhóm tuyến trùng hoại sinh điển hình: các loài tuyến trùng trong nhóm này chủ yếu sống ở vùng đất có thức ăn là thực vật bắt đầu phân hủy, các chất hữu cơ của

mô thực vật rơi vào đất Các cơ quan bên trong của tuyến trùng phát triển hoàn chỉnh

Chúng đẻ trứng nhiều sinh sản nhanh ở nơi có thức ăn hoai mục và phát triển một vài thế hệ trong thời gian ngắn

- Nhóm tuyến trùng hoại sinh không điển hình: có khả năng vừa sống trong các

mô tế bào thực vật đang thối rữa lại vừa sống trong mô tế bào khỏe chưa có triệu chứng thối rữa Nhiều tác giả khẳng định đây là nhóm gây hại phần lớn thuộc về họ

Cephalobidae – loài Cephalobus, Eucephalobus, Acrobelus, Panagrolaimus

- Nhóm tuyến trùng ký sinh thực vật: nhóm ký sinh chuyên tính Nhóm này gây bệnh cho cây, có tính ký sinh cao, chỉ sống và phát triển ở trong những mô thực vật còn sống: bộ Tylenchidae và nhiều loài trong họ Longidoridae và Trichodoridae thuộc

bộ Dorylaimida Các cơ quan bên trong của cơ thể tuyến trùng khá phát triển, đặc biệt

là hệ thống men tiêu hóa Đại diện là họ Pratylenchidae Loài Ditylenchus spp gây hại

phá vở tổ chức mô tế bào thực vật, chúng ký sinh trên rất nhiều cây trồng và cây dại

Tuyến trùng ký sinh không chuyên tính: nhóm tuyến trùng này sống ở mô thực vật bị bệnh do các nguyên nhân khác gây ra, chúng ăn sợi nấm như họ Aphelenchidae, Aphelenchoididae, Tylenchidae và Neotylenchidae Một số khác gây hiện tượng thối khô và thối ướt lẫn với hiện tượng do nấm gây thối, do đó khó có thể xác định chính xác nguyên nhân gây bệnh nào là chính

Và dựa vào chu kỳ sinh sống của tuyến trùng thực vật, Paramonov (1962) chia thành 3 nhóm (trích dẫn của Đường Hồng Dật, 1979):

- Nhóm một: nhóm tuyến trùng này có giai đoạn còn non sống trong đất Con cái bám đầu vào rễ cây, còn thân thì vẫn trong đất và đẻ trứng vào đất Con đực sống

hoàn toàn trong đất Ví dụ: Tuyến trùng Tylenchulus semipenetranss

- Nhóm hai: ở nhóm này, tuyến trùng trưởng thành, thành thục và sinh sản trong hạt giống Khi gieo vào đất dưới tác động của độ ẩm, tuyến trùng non ra khỏi hạt tìm đến nách lá cây và gây hại Khi hạt phát triển, tuyến trùng chui vào phôi hạt và chuẩn

bị cho chu kỳ phát triển mới Ví dụ: tuyến trùng Anguina tritic, Heterodera schachtii

- Nhóm ba: con cái sống trong rễ cây và sống trong đó, trứng có thể phát triển trong đất hoặc trong rễ cây Nhóm tuyến trùng này chỉ sống trong mô bị hại Ví dụ:

Meloidogyne goedi, Ditylenchus fillip

2.1.4 Các yếu tố ảnh hưởng lên tuyến trùng thực vật

Loại đất: tuyến trùng di chuyển được thuận lợi hay không và tốc độ di chuyển nhanh hay chậm là phụ thuộc kích thước của các hạt đất Tuyến trùng ký sinh ở rễ cây thì các loại, đất cát pha, đất thịt nhẹ là những loại đất phù hợp cho sự hoạt động của tuyến trùng, giúp di chuyển dễ dàng đến vùng rễ cây để gây hại (Lê Lương Tề, 1977)

Độ ẩm và nhiệt độ đất: độ ẩm tối ưu cho tuyến trùng hoạt động dao động từ 80% (Kleynhans, 1999) Số lượng tuyến trùng tăng nhiều trong mùa mưa ấm áp và giảm đi nhiều trong mùa khô hạn Độ ẩm cao giúp tuyến trùng di chuyển dễ dàng Vì vậy trên lớp đất mặt (2-3cm) khô cứng nên số lượng tuyến trùng ít hơn là các tầng phía dưới Nhiệt độ là yếu tố có vai trò quan trọng trong sự phân bố và phát triển của tuyến

40-trùng Loài Tylenchulus semipenetrans, Rotylenchulus reniformis và Radopholus

cận nhiệt đới Những loài khác như Ditylenchus dipsaci, Aphelenchoides fragariae, A

hậu ôn hòa Nhiệt độ và ẩm độ đất bất lợi làm tuyến trùng chuyển sang trạng thái tiềm sinh, khi gặp điều kiện thuận lợi tuyến trùng hoạt động trở lại (Lê Lương Tề, 1977)

Ánh sáng tác động lên tuyến trùng thông qua cây ký chủ mà chúng ký sinh Đối

với Meloidogyne incognita nếu quá trình quang hợp của cây kéo dài thì số lượng trứng

đẻ nhiều hơn, nếu ngày ngắn thì số cá thể đực tăng Thiếu ánh sáng sẽ ảnh hướng đến quá trình sinh sản và thiếu thức ăn cho tuyến trùng Ngoài ra, tia tử ngoại cũng làm tăng sức chống chịu của cây trồng vì vậy làm giảm khả năng tạo u sưng của tuyến trùng (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

Chất bài tiết của cây trồng: trong quá trình sinh trưởng và phát triển rễ cây thường trao đổi và bài tiết một số chất vào trong đất có khả năng thu hút tuyến trùng, di chuyển tập trung xung quanh vùng rễ cây, có khi còn có tác dụng kích thích thúc đẩy nhanh quá trình nở trứng của tuyến trùng Tuy nhiên, một số loại cây tiết ra các chất có tác dụng xua đuổi tuyến trùng (Lê Lương Tề, 1977)

Kỹ thuật canh tác: luân canh giúp làm hạn chế hoặc cắt đứt nguồn ký chủ của tuyến trùng, làm giảm sự gia tăng mật số của chúng (Kleynhans, 1999)

Sinh vật đối kháng: có những loại nấm, vi khuẩn, virus, côn trùng và tuyến trùng đối kháng có khả năng tiêu diệt tuyến trùng hại cây Sinh vật đối kháng trong đất

là một yếu tố quan trọng làm giảm tuyến trùng hại cây tích lũy tồn tại ở trong đất (Nguyễn Ngọc Châu, 2003)

2.1.5 Triệu chứng gây hại của tuyến trùng

Theo Đường Hồng Dật (1979), tuyến trùng có khả năng thích ứng với tất cả các

bộ phận của cây, chúng có thể sống ở rễ, ở các bộ phận trên mặt đất và các bộ phân sinh sản Tác hại cũng như triệu chứng gây bệnh rất khác nhau Nhiều trường hợp triệu chứng xuất hiện tương đối rõ nhưng cũng có trường hợp không hình thành triệu chứng bên ngoài mà biểu hiện chủ yếu là cây sinh trưởng kém Triệu chứng gây hại do tuyến trùng gây ra dễ nhầm lẫn với triệu chứng do các nguyên nhân khác gây ra như: hiện tượng cây thiếu nước, thiếu chất dinh dưỡng, các bệnh viroide, vi khuẩn,… thậm chí do côn trùng hoặc nhện gây ra (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

Do quá trình sống và sinh sản trên hoặc trong mô thực vật, tuyến trùng có thể gây ra nhiều biến đổi theo chiều hướng bất lợi đối với thực vật Đó là các biến đổi về

cơ học như phá hủy mô thực vật, tạo ra các vết thương, các biến đổi về sinh lý cho các chức năng chính của thực vật như hút và vận chuyển chất dinh dưỡng của rễ thân, quang hợp của lá bị phân hủy, các biến đổi sinh hóa do tuyến trùng tiết ra các enzyme tiêu hóa làm thay đổi các quá trình sinh hóa bình thường của cây (Nguyễn Ngọc Châu

và Nguyễn Vũ Thanh, 2000) Theo Đặng Thái Thuận và Nguyễn Mạnh Chinh (1986) tuyến trùng dùng vòi châm hút dinh dưỡng từ mô cây, đồng thời chúng tiêm nước bọt hóa lỏng các dịch của tế bào chất và chuẩn bị tiêu hóa Như vậy các tế bào cây lần lượt

bị tiêu hủy và chất độc tiết ra tạo nên hoại thư, biến dạng các mô và tạo điều kiện cho nấm, vi khuẩn xâm nhập

Còn theo Phạm Văn Kim (2000), tuyến trùng ký sinh có mang kim ở đầu để chích hút chất dinh dưỡng từ cây Cách gây hại chủ yếu là chích hút và làm mô cây bị

hư hỏng Nếu ký sinh ở rễ thì làm cho rễ bị hư hỏng, cây không hút được đầy đủ dinh dưỡng nên cây bị cằn cõi, lá vàng, rụng lá, cây chết dần Triệu chứng bệnh tuyến trùng gây ra biểu hiện rất chậm Trên cây đa niên, bệnh có thể tiến triển trong nhiều năm trước khi làm cây chết nên rất khó nhận ra kịp thời để có biện pháp phòng trừ

Theo Agrios (2003), tuyến trùng gây hại trên cây tạo nên triệu chứng trên rễ, cũng như các phần khác của cây, tạo nên nốt sần, u bướu, gây tổn thương bộ phận bị hại tạo tiền đề cho các tác nhân khác gây bệnh Tuyến trùng ký sinh thường tạo ra các

vết thương cho cây ký chủ và mở đường cho các tác nhân gây bệnh khác xâm nhập gây hại Chúng làm giảm khả năng miễn dịch của thực vật kháng lại sự xâm nhập của các tác nhân vi sinh vật gây bệnh khác Một số tuyến trùng còn có khả năng mang tuyền Virus gây bệnh cho thực vật (Nguyễn Ngọc Châu và Nguyễn Vũ Thanh, 2000)

2.1.6 Một số tuyến trùng ký sinh gây hại thực vật

2.1.6.1 Tuyến trùng Meloidogyne

Còn gọi là tuyến trùng bướu rễ thuộc bộ Tylenchida, họ Meloidogyninae được Berkley phát hiện đầu tiên vào năm 1855 trên cây dưa chuột ở Anh Đây là nhóm tuyến trùng nội ký sinh cố định quan trọng nhất Cho đến nay đã thống kê khoảng 80 loài ký sinh thuộc giống này, trong đó có 4 loài ký sinh gây hại quan trọng nhất là:

là những ký sinh đa thực có tính chuyên hóa rất rộng Cây trồng bị Meloidogyne xâm

nhiễm thường hình thành các u sưng trên hệ thống rễ Kích thước và hình dạng các u sưng thay đổi theo số lượng, loài tuyến trùng xâm nhiễm và đặc tính của cây ký chủ Tuyến trùng gây hại nặng ở các loại đất các pha, thịt nhẹ, trồng cạn liên tục nhiều năm Mật độ tuyến trùng tập trung nhiều ở tầng đất canh tác với độ sâu 6-15 cm, ẩm độ khoảng 60% Trong điều kiện quá khô hạn hoặc ngập nước lâu dài tuyến trùng kém phát triển, số lượng giảm rõ rệt Tuyến trùng nốt sưng có thể tạo vết thương thúc đẩy bệnh nấm, vi khuẩn phát triển (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

2.1.6.2 Tuyến trùng Rotylenchulus

Đây là tuyến trùng bán nội ký sinh thuộc bộ Tylenchida, họ Nacobbidae Loài R

khắc nghiệt Đây là loài ưu đất mịn với độ bùn đất cao

bông, ngô, chè, các loại đậu, dứa, khoai lang Tác hại do loài này ký sinh thường tăng

lên do kéo theo các nấm bệnh (Rhizoctonia, Fusarium, Verticillium) Một loại nấm sợi

sinh gây hại phổ biến trên nhiều loại cây trồng như: dứa, chuối, hồ tiêu và đặc biệt loài này ký sinh gây hại rất phổ biến ở các vườn ươm (Nguyễn Ngọc Châu, 2003)

2.1.6.3 Tuyến trùng Pratylenchus

Tuyến trùng Pratilenchus thuộc bộ Tylenchida, họ Criconematidae Còn gọi là

tuyến trùng gây thối rễ, đây là một loại tuyến trùng nội ký sinh nhưng không gây sưng

rễ mà chỉ làm rễ loét và thối rửa (Graham, 1981) Tuyến trùng Pratylenchus cũng được

xem là tác nhân mở đường cho nhiều loại nấm và vi khuẩn gây hại cây (Luca, 1965; Miller, 1972) Tuyến trùng gây hại trên các cây trồng: khoai tây, cải bắp Ở Atok, Benguet, nó là nguyên nhân gây thối rễ trên: đậu, cà chua, cà phê, thuốc lá, chuối…

2.1.6.4 Tuyến trùng Tylenchorhynchus

Đây là loại tuyến trùng ngoại ký sinh thuộc bộ Tylenchida, họ Tylenchidae Tuyến trùng này thường gây ra triệu chứng còi cọc ở thuốc lá khi mật số tuyến trùng trong đất lên cao 140con/100 gr đất (Mai, 1960); (Zuekemann, 1971) Ngoài ra,

chua, dưa chuột, ngô…

Loài Tylenchorhynchus annulatus có sự phân bố rộng nhất, kế đến là những loài ít phổ

biến hơn như T claytonia, T elegans, T brassicae (Luc và ctv, 1990)

2.1.6.5 Tuyến trùng Helicotylenchus

Còn gọi là tuyến trùng xoắn ốc thuộc bộ Tylenchida, họ Hoplolaimidae Nhóm tuyến trùng này gồm có nhiều loài phổ biến trên nhiều ký chủ bao gồm cây gỗ cứng, cây thức ăn gia súc, đậu nành, ô liu, kê, cà chua và nhiều loại khác (Dropkin, 1980)

Nhóm tuyến trùng này dùng kim chích đâm xuyên vào rễ để ăn (ngoại ký sinh) Tại các điểm chúng ăn tế bào dễ bị chết tạo ra các vết thương cục bộ trên vỏ rễ Bệnh

héo vi khuẩn do Pseudomonas spp Trên nhiều cây trồng trở nên nghiêm trọng hơn khi

có mặt tuyến trùng Helicotylenchus trong đất (Dropkin, 1980)

2.1.7 Quan hệ tương hổ của tuyến trùng với các vi sinh vật khác

2.1.7.1 Tuyến trùng và nấm bệnh

Theo Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề (1998), tuyến trùng ký sinh có thể trở thành môi giới lan truyền nấm gây bệnh Sự tác động liên quan giữa tuyến trùng và nấm gây bệnh cho cây trồng là rất phức tạp Tuyến trùng tấn công vào rễ tạo ra các vết thương giúp cho nấm bệnh xâm nhiễm được tốt hơn Tuyến trùng có liên quan đến

những bệnh gây ra bởi nấm (Cylindrocladium crotalariae, Fusarium spp., Rhizoctonia

solani và những loài khác) có nghĩa là các loài nấm bệnh có khả năng xâm nhập vào rễ cũng như gây bệnh trên lá với sự tác động của tuyến trùng (Nicholson và ctv, 1985, trích dẫn Nguyễn Ngọc Châu, 2003)

Nấm Phytophthora parasitica var nicotiana gây bệnh đen thân trên thuốc lá chỉ xâm nhập và gây bệnh trên những giống chống bệnh khi có tuyến trùng Meloidogyne

thương (Summer, 1973, trích dẫn của Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

2.1.7.2 Tuyến trùng và bệnh vi khuẩn

Một số vi khuẩn xâm nhập vào cây trồng thông qua các vết thương cơ giới và các lỗ hở tự nhiên Theo kết quả nghiên cứu của nhiều tác giả là có 9 loài tuyến trùng tạo điều kiện cho vi khuẩn lan truyền trên các cây: lúa mì, thuốc lá, cá chua, dâu tây…

như loài Meloidogyne incognita, M hapla, Helicotylenchus multicinetus, Pratylenchus

pratensis, Aphelenchus avenae, Ditylenchus dipsaci, Alphelenchoides ritzemabosi và

Tuyến trùng có thể là môi giới mang truyền vi khuẩn gây bệnh cho thực vật do nhiễm vi khuẩn trên bề mặt cơ thể Các sần được tạo thành do tuyến trùng có thể trở thành độc tố khi nó nhiễm vi khuẩn Tuy nhiên, một số tuyến trùng có thể ăn vi khuẩn gây bệnh cho thực vật (Nguyễn Ngọc Châu, 2003)

2.1.7.3 Tuyến trùng và bệnh virus

Tuyến trùng mang virut cho cây trồng được nghiên cứu từ lâu và được khẳng định là môi giới quan trọng trong việc lan truyền virut gây bệnh Lần đầu tiên Hewitt, Raski và Goheen khảo sát bệnh virut cho cây nho (virut G.F.L.V) với tyến trùng

thức ăn giữ vai trò quan trọng trong việc lan truyển virut Tuyến trùng hút dịch chứa virut, sau đó chúng nhân nhanh số lượng trong cơ thể và truyền lan sang cây khỏe theo phương pháp sinh học Một số loài khác không nhân nhanh số lượng virut trong cơ thể

mà truyền ngay qua tuyến nước bọt khi tuyến trùng bơm đẩy kim chích hút dịch cây Tùy vào từng loại men của tuyến trùng mà nó quyết định phương thức lan truyền Virut

có thể có mặt trong cơ thể tuyến trùng ở tất cả các giai đoạn phát triển từ giai đoạn trứng Virut có thể tồn tại trong cơ thể tuyến trùng sau một vài tuần hoặc vài tháng (Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

2.1.8 Các biện pháp phòng trừ tuyến trùng

2.1.8.1 Ngăn ngừa

Theo Nguyễn Ngọc Châu, ngăn ngừa hoặc phòng ngừa là biện pháp đầu tiên và quan trọng nhất trong quản lý tuyến trùng, vì nó là biện pháp đơn giản để giải quyết tuyến trùng trước khi chúng trở thành vật hại trên đồng ruộng Ngăn ngừa là biện pháp phòng bệnh, chúng bao gồm nhiều biện pháp khác nhau như sản xuất nguồn giống sạch, xử lý giống nhiễm tuyến trùng trước khi gieo trồng, kiểm tra và vệ sinh đồng ruộng trước khi trồng, ngăn ngừa tuyến trùng lan tuyền theo người, máy móc, dụng cụ nông nghiệp hoặc lan truyền theo nước tưới

2.1.8.2 Luân canh

Luân canh được coi là biện pháp quản lý tuyến trùng đơn giản Tuyến trùng thực vật là những ký sinh bắt buộc, chúng cần một vật chủ cho sự phát triển và nhân nuôi số lượng Mỗi loài tuyến trùng thực vật có một phổ vật chủ, phổ này dù có thể là rộng nhất nhưng không bao bao gồm tất cả các loài cây trồng Mật độ tuyến trùng tăng ở các cây chủ thích hợp và suy giảm ở cây chủ không thích hợp Trong luân canh cây trồng

để quản lý các cây trồng mẫn cảm với một loại tuyến trùng đã được trồng luân canh với các cây kháng hoặc miễn nhiễm với tuyến trùng Thường các cây kinh tế là các cây mẫn cảm với tuyến trùng và cây trồng luân canh là cây trồng kém kinh tế hơn Ví dụ:

cà chua là một cây trồng kinh tế nhưng cũng rất mẫn cảm với các loài tuyến trùng gây

bướu rễ (Meloidogyne) phổ biến (Nguyễn Ngọc Châu, 2003)

2.1.8.3 Biện pháp canh tác

Gieo trồng sớm: Tuyến trùng thường gây hại chính ở giai đoạn đầu của cây

trồng, khi hệ rễ còn ít phát triển.Ở vùng ôn đới có thể gieo trồng thời kỳ lạnh, vì vậy cây trồng có thể phát triển trước khi tuyến trùng hoạt động, khi đất trở nên ấm áp tuyến trùng xâm nhập vào rễ đang phát triển thì lúc này cây trồng đã có chất dự trữ và có thể chịu đựng được sự tấn công của côn trùng

Làm khô ruộng: Hầu hết các loài tuyến trùng trong trạng thái hoạt động rất mẫn cảm với sự khô nhanh Ngược lại sự làm khô chậm sẽ giúp tuyến trùng chuyển sang trạng thái tiền sinh, làm tăng sự chống chịu của chúng với điều kiện bất lợi của môi trường Ở vùng khí hậu hạn, một quần thể tuyến trùng trên đồng ruộng có thể bị giảm bằng việc cày xới đất định kỳ thời gian 2-4 tuần trong suốt mùa khô

Làm ngập nước: Ngập nước làm giảm nồng oxygen trong nước bằng 0 trong vòng một hoặc hai ngày Carbon dioxide có thể tăng lên theo sự ngập do giảm vi khuẩn yếm khí Cho ngập nước là một biện pháp kinh tế và rất hiệu quả để phòng trừ tuyến trùng hại chuối ở những đồng chuối trồng trên đất sét bùn tại Surinam

Bón phân hữu cơ: Sự phân hủy các chất hữu cơ sẽ gây độc cho tuyến trùng, đặc biệt là các axit hữu cơ như axetic, propionic và butyric Nồng độ các chất này có thể lưu giữ một vài tuần trong đất và có thể giết chết một vài loài tuyến trùng, nhưng không độc đến các tuyến trùng sống tự do trong đất Các chất hữu cơ cũng làm tăng sự phong phú của các nấm ăn thịt tuyến trùng bằng hiệu quả thông qua chuỗi thức ăn gây ảnh hưởng mật số tuyến trùng ký sinh thực vật (Nguyễn Ngọc Châu, 2003)

2.1.8.4 Các biện pháp vật lý

Tuyến trùng nhìn chung rất mẫn cảm với nhiệt Một vài tuyến trùng có thể chịu được nhiệt độ cao trên 600C, ở nhiệt độ này tế bào chất tuyến trùng bị đông lại Tuy nhiên tuyến trùng thường chết ở nhiệt độ thấp hơn Phương pháp này được áp dụng rộng rãi bằng nhiều biện pháp khác nhau như khử trùng đất bằng khói, phơi nắng, khử trùng bằng nhiệt điện, khử trùng bằng nhiệt vi sóng, đốt đồng sau khi thu hoạch, khử trùng nguyên liệu gieo trồng bằng nhiệt, chiếu xạ Ví dụ: xử lý hạt lúa 550

C trong 20 phút Hành tỏi: 45-460

C trong 15 phút

2.1.8.5 Chọn giống kháng

Việc tìm kiếm giống có tính kháng tuyến trùng đã được các nhà nghiên cứu quan tâm thực hiện từ lâu Một số giống bông vải, thuốc lá, đậu, ớt,… có tính kháng đối với tuyến trùng nốt sưng đã dược tìm thấy (Moore,1960) Tuy nhiên có rất ít giống

có gía trị trong sản xuất kháng được tuyến trùng, hoặc chúng chỉ kháng được loài tuyến trùng này nhưng mẫn cảm với các loài tuyến trùng khác Ví dụ: giống thuốc lá NC 95 kháng được Meloidogyne incognita, nhưng lại mẫn cảm với M javanica và M

arenaria (Moore,1960)

2.1.8.6 Biện pháp sinh học

Theo Nguyễn Ngọc Châu (2003) có 2 dạng phòng trừ sinh học: Phòng trừ sinh học nhân tạo bằng cách nhân nuôi các tác nhân sinh học để đưa ra đồng ruộng và phòng trừ sinh học tự nhiên bằng cách tạo những điều kiện thuận lợi để duy trì nguồn thiên địch sẵn có trong tự nhiên để hạn chế sự sinh sản của tuyến trùng

Tuyến trùng ký sinh thực vật cũng bị tấn công bởi nhiều bởi thiên địch tồn tại trong đất như virus, vi khuẩn, nấm, côn trùng và tuyến trùng ăn thịt Thiên địch tuyến trùng có tầm quan trọng rất lớn trong việc làm giảm mật độ quần thể tuyến trùng ký

sinh gây hại cây trồng Các loài nấm Dactularia, Harposporium anguillulae,

và sử dụng cơ thể tuyến trùng thực vật làm thức ăn Các loài tuyến trùng ăn thịt như:

hại cây trong một ngày

Trồng cây bẫy tuyến trùng: là các cây trồng có thể làm tiêu tán các quần thể tuyến trùng bằng cách dẫn dụ, thu hút tuyến trùng ở giai đoạn nhiễm Sau đó áp dụng các biện pháp xử lý khác để tiêu diệt tuyến trùng

Ngoài ra còn có thể trồng xen canh giữa cây trồng chính với các loại cây mà rễ bài tiết các chất có khả năng xua đuổi tuyến trùng như cúc vạn thọ, cây sục sạc…(Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

2.2 Phương pháp xác định tuyến trùng Meloidogyne dựa vào phản ứng cây ký chủ

Năm 1949, Chiwood chuyển nhóm tuyến trùng nốt sần ra khỏi giống Heterodera

và sắp xếp nhóm này thành một giống riệng gọi tên là Meloidogyne Dựa vào những

nghiên cứu chi tiết về đặc điểm hình thái học của con đực, ấu trùng và con cái bao gồm

cả vân hậu môn, tác giả đã mô tả một số loài chủ yếu Bên cạnh tác giả cũng ghi nhận phản ứng khác biệt quan trọng của mỗi loài tuyến trùng đối với các loại cây ký chủ

khác nhau như M hapla chỉ sinh sản trên cây dâu tây và M incognita không tấn công

dậu phộng nhưng sinh sản dễ dàng trên bông vải (Hartman và Sasser, 1985)

Năm 1954, bằng nhiều thí nghiệm Sasser J.N đưa ra phương pháp xác định bốn

loài Meloidogyne quan trọng dựa vào phản ứng của bốn ký chủ đậu phộng, dưa hấu, ớt,

cà chua dại và đặc điểm của bướu

Vì số lượng ký chủ ít nên kết quả phân biệt sẽ không rõ ràng đối với quần thể

tuyến trùng Meloidogyne thu từ nhiều vùng địa lý khác nhau Năm 1977, Sasser và Triantaphyllou đã đưa ra nhóm sáu ký chủ mới cho việc xác định bốn loài Meloidogyne

thông thường Sáu ký chủ bao gồm: bông vải, thuốc lá, ớt, dưa hấu, đậu phộng, cà chua Dựa vào phản ứng của sáu loại cây trồng này tác giả có thể xác định được cà nòi

(race) của các loài Melidogyne (Hartman và Sasser, 1985)

2.3 Giới thiệu về hoa mười giờ

Hoa mười giờ hay rau sam hoa lớn có tên khoa học là Portulaca grandiflora Nó

là một loài cây thân mọng nước, nhỏ, nhiều nhánh và lớn nhanh thuộc họ rau sam

(Portulacaceae) Tên thường gọi mười giờ là do hoa của nó thường chỉ nở từ khoảng 8 giờ đến 10 giờ sáng trong ngày Là loại cây thân thảo, cao khoảng 10-15 cm Lá hình dải hơi dẹt, dài 1,5-2 cm, mép nguyên, thân có màu hồng nhạt, lá có màu xanh nhạt Loài thực vật này có nguồn gốc Nam Mỹ, nhưng được trồng rộng rãi trong các khu vực

ôn đới Hoa sặc sỡ, với màu sắc có thể là đỏ, cam, hồng, trắng hay vàng Theo tạp chí

Châu Âu khoảng 300 năm trước” Loài cây thích hợp với chỗ đất ráo nước và nhiều nắng Cây cũng dễ bị một số sâu bệnh tấn công như : rệp sáp, bệnh bướu rễ do tuyến trùng ký sinh, bệnh thối gốc…, Tại Việt Nam, nó được trồng làm một loại cây cảnh Theo Đông y, hoa mười giờ có vị chua, tính bình, có tác dụng hoạt huyết, giảm đau, tiêu viêm, tiêu sưng Thường dùng ngoài trị mụn nhọt, ghẻ ngứa, bỏng, Bộ phận dùng làm thuốc là toàn cây, thu hái quanh năm Dùng tươi hay phơi khô

2.4 Một số nghiên cứu trong và ngoài nước

2.4 1 Nghiên cứu trong nước

Theo Nguyễn Ngọc châu và Nguyễn Vũ Thanh (2000), nhìn chung tình hình nghiên cứu về tuyến trùng ở nước ta phát triển rất chậm Tính đến năm 2000, mới chỉ

có điều tra phát hiện khoảng 250 loài tuyến trùng ký sinh cây trồng Trong một số loài được phát hiện chỉ một phần có tư liệu đầy đủ được xây dựng tương đối hoàn chỉnh Còn phần lớn các loài còn lại mặc dù đã được định danh nhưng chưa có số liệu đầy đủ

Tại vùng đồng bằng sông Cửu Long, Nguyễn Thu Cúc (2002) ghi nhận có một

số loài Meloidogyne hiện diện gây hại trên lúa như M graminicola, M incognita, M

trên một số chân ruộng cao hoặc ruộng luân canh lúa Ngoài gây hại trên lúa M

Trung tâm cây quả Phú Hộ nghiên cứu và lấy mẫu đất rễ trên 150 giống chuối,

kết quả cho thấy các loài tuyến trùng Helicotilenchus multicinchus, Pratienchus

Theo Trịnh Thị Thu Thủy và ctv (2004), các vườn trồng cây hồ tiêu ở Quảng Trị, Thừa Thiên Huế, Đắc Lắc, Gia lai, Kom Tum phát hiện thấy 29 loài tuyến trùng

thuộc 10 họ khác nhau Trong đó chủ yếu và phổ biến rộng rãi nhất là Meloidogyne

gây tác hại đáng kể cần được cần được quan tâm nghiên cứu và phòng trừ

2.4 2 Nghiên cứu ngoài nước

Tuyến trùng thực vật đã được tìm ra từ giữa thế kỷ 18 Lần đầu tiên Needham (1743) đã phát hiện ra tuyến trùng thực vật trên bông lúa mì, được Steinbunch đặt tên

là Vibrio tritici (trích dẫn của Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề)

Năm 1930, Nagakura đã nghiên cứu được giống Meloidogyne Đây là loài tuyến

trùng gây hại nặng trên nhiều loài cây trồng (trích dẫn Phạm Minh Đức)

Theo Kofoid – White (1949), Meloidogyne incognita là phổ biến nhất ở vùng

nhiệt đới, gây hại hầu hết các loại cây trồng như: cà chua, thuốc lá, ớt, hồ tiêu, chuối…

Theo Chitwood (1949), Meloidogyne arenaria phổ biến ở nhiều nước nhất là vùng nóng ẩm, gây hại trên nhiều loại cây trồng nhất là trên cà chua, thuốc lá, mía…

Theo Chitwood (1949), Meloidogyne javanica gây hại chủ yếu ở vùng nhiệt đới

và á nhiệt đới, nhiệt độ thích hợp là 300

C Gây hại chủ yếu trên mía, khoai tây, dậu đỗ, chuối cà chua, thuốc lá, hoa cẩm chướng…

Theo Chitwood (1949), Meloidogyne hapla phổ biến chủ yếu ở vùng có khí hậu lạnh và chúng cũng gây hại trên nhiều loại cây: cây họ cà, họ đậu, đặc biệt gây hại nặng trên dâu tây, nho, đào (Trích dẫn Vũ Triệu Mân và Lê Lương Tề, 1998)

Chương 3 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.1 Thời gian và địa điểm nghiên cứu

3.1.1 Thời gian nghiên cứu

Đề tài được thực hiện từ 13/02/2012 đến 13/06/2012

3.1.2 Địa điểm nghiên cứu

- Bộ Môn Bảo Vệ Thực Vật, Khoa Nông Học, Trường Đại Học Nông Lâm

- Trại Công Nghệ Sinh Học, Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học, Tường Đại Học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh

3.2 Vật liệu và dụng cụ nghiên cứu

3.2.1 Vật liệu nghiên cứu

- Tuyến trùng ký sinh gây bệnh bướu rễ trên hoa mười giờ

- Các giống hoa mười giờ trồng phổ biến

3.2.2 Dụng cụ nghiên cứu

- Dụng cụ thu mẫu tuyến trùng: len lấy đất, bao nylon, bao giấy, viết…

- Dụng cụ trích mẫu tuyến trùng: rây lọc tuyến trùng, đĩa petri, xô, giấy thấm

- Dụng cụ quan sát mẫu: kính lúp sôi nổi, kính hiển vi, đĩa đếm, lame, lamelle

3.3 Phương pháp nghiên cứu

3.3.1 Phương pháp điều tra và thu thập mẫu

Điều tra theo 5 điểm trên đường chéo góc, mỗi vị trí dùng len lấy đất ở độ sâu 10– 15m xung quanh vùng rễ cây bị bệnh, lấy khoảng 100g đất Các mẫu này được trộn đều lại rồi lấy mẫu đại diện khoảng 100g đất Mẫu đất được giữ trong một túi nylon bịt kín

3.3.2 Phương pháp ly trích và lây nhiễm tuyến trùng nhân tạo

Rễ hoa mười giờ có bướu do Meloidogyne ký sinh được đem về phòng thí

nghiệm rửa nhẹ Sau khi rửa xong đặt khoảng 1 g rễ vào rây lọc đã có lót giấy thấm và

đặt rây vào đĩa petri, cho nước vừa ngập mẫu rễ, đậy nắp lại, ghi ký hiệu và đặt nơi thoáng mát, ấu trùng và thành trùng của tuyến trùng sẽ chui ra khỏi rễ vào trong nước Sau 24 giờ ta thu và đếm mật số ấu trùng cảm nhiễm (ấu trùng tuổi 2)

Hoa mười giờ được trồng trong chậu với đất đã xử lý sạch tuyến trùng Sau khi trồng được bốn tuần, dùng pipet hút ấu trùng tuổi 2 (J2) chủng trực tiếp vào vùng rễ của cây hoa mưởi giờ Mật số chủng 500 ấu trùng/chậu Thí nghiệm được bố trí theo kiểu hoàn toàn ngẫu nhiên với 3 giống và 3 màu hoa mười giờ khác nhau, mỗi loại 10 chậu

Tiến hành đánh giá kết quả sau chủng 7, 14, 21, 28 ngày

3.3.3 Các chỉ tiêu và phương pháp theo dõi khả năng sinh trưởng phát triển của các giống hoa mười giờ

Đo chiều cao cây: chiều cao cây được đo từ sát mặt đất đến đỉnh sinh trưởng

Đo chiều dài rễ: chiều dài rễ được đo từ sát mặt đất đến hết chiều dài rễ cây

Số bướu /rễ: đếm toàn bộ số bướu xuất hiện trên rễ của một cây hoa mười giờ

Ở những lần theo dõi trên mỗi giống hoa mười giờ ta chọn 3 cây ngẫu nhiên ở 3 chậu khác nhau để đo đếm và lấy chi tiêu

3.3.4 Phương pháp đếm mật số ấu trùng cảm nhiễm

Dùng pipet hút 3 ml dung dịch chứa ấu trùng cho vào đĩa đếm tuyến trùng Đếm

5 điểm trên đường chéo gốc của đĩa đếm, mỗi điểm đếm 4 ô Đếm như vậy 3 lần lặp lại Tính trung bình mật số ấu trùng trong một ô rồi nhân với tổng số ô trong đĩa

3.3.5 Phương pháp nhuộm tuyến trùng Meloidogyne ký sinh rễ cây hoa mười giờ

Rễ hoa mười giờ bị sưng do Meloidogyne ký sinh được rửa sạch, cắt thành đoạn

ngắn 2-3 cm Ngâm rễ trong dung dịch sodium hypochlorite (NaOCl) 1,5% trong 10 phút, thỉnh thoảng lắc nhẹ Rửa kỹ rễ dưới vòi nước chảy, sau đó ngâm rễ trong dung dịch acetic acid 1% khoảng 15 phút Đổ bỏ dung dịch acetic acid, cho rễ vào một beaker, thêm 30 ml nước và 1ml dung dịch thuốc nhuộm fuchsin Đun sôi trong 30 giây Để nguội, rửa rễ dưới vòi nước chảy Chuyển rễ qua dung dịch glycerol được làm chua bằng acid chlohyride Đun đến dung dịch vừa sôi, để nguội Đặt rễ giữa hai phiến lam, ép nhẹ Quan sát dưới kính hiển vi với vật kính 10X

3.3.6 Phương pháp chủng tuyến trùng trên cây ký chủ

Bảng 3.1 Cây ký chủ và nguồn gốc

Stt Tên cây ký chủ Tên khoa học Nguồn gốc

1 Thuốc lá Nicotiana tabacum Giống K394, Viện nghiên cứu

thuốc lá Miền Nam

Cách đánh giá dựa vào cây ký chủ và sử dụng khóa phân loại được áp dụng theo

phương pháp của Hartma và Sasser (1985) cho việc xác định các loài Meloidogyne

(Bảng 3.2) Theo cách phân loại của Hartma và Sasser (1985), nếu quần thể

nhưng có phản ứng (-) trên bông vải và dưa hấu thì loài Meloidogyne cần xác định có thể là M hapla

Quần thể Melidogyne thu từ các vùng nhiệt đới nếu có phản ứng (+) trên thuốc

lá và dưa hấu nhưng lại có phản ứng (-) trên bông vải, đậu phộng và ớt thì loài

nòi khác nhau nên bằng phản ứng (+) trên bông vải, ớt và dưa hấu mà lại có phản ứng (-) trên thuốc lá có thể thuộc nòi 3, trong khi có phản ứng (+) trên thuốc lá có thể thuộc nòi 4 Đối với nòi 1 của loài này hoàn toàn có phản ứng (-) trên bông vải, thuốc lá, đậu

phộng, trong khi đó nòi 2 lại có phản ứng (+) trên thuốc lá Việc xác định loài M

arenaria chủ yếu dựa vào phản ứng trên thuốc lá, dưa hấu, ớt và đậu phộng Nòi 2 của loài này có phản ứng (-) trên cả ớt và đậu phộng trong khi đó nòi 1 có phản ứng (+)

Các ký chủ dùng để làm thí nghiệm được trồng trong chậu với đất đã dược xử lý sạch tuyến trùng Mỗi chậu gieo trực tiếp mười hạt giống, sau khi ký chủ có 2 lá thật chủng trực tiếp ấu trùng vào vùng rễ của cây ký chủ Mật số ấu trùng 100 con/chậu

Bảng 3.2 Phản ứng của 4 loại Meloidogyne và các nòi của chúng đối với ký chủ khác

nhau ở miền bắc Carolina

Meloidogyne

và nòi

sinh lý

Các ký chủ khác nhau Bông vải Thuốc lá Ớt Dưa hấu Đậu phộng Cà chua

- +

+ + + +

+ + + +

+

-

- +

+ + + +

+ + +

+ + + +

+ + + + Ghi chú: Bông vải-Deltapine 61; thuốc lá-NC 95; peper-Early Califorina Wonder; dưa hấu-Charleston; đậu phộng-Florunner; cà chua-Rutgers; (-) chỉ ký chủ kháng, (+) chỉ ký chủ mẫn cảm (Hartman và Sasser, 1985)

Tiến hành đánh giá kết quả 14 ngày sau chủng

3.3.7 Phương pháp pha dung dịch thuốc nhuộm fuchsin và acidified glycerol

- Dung dịch thuốc nhuộm fuchsin

+ 0,5 g acid fuchsin

+ 25 ml acetic acid

+ 75 ml nước cất

- Dung dịch acidified glycerol

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

4.1 Kết quả

4.1.1 Xác định tuyến trùng gây sưng rễ trên hoa mười giờ

Sau quá trình khảo sát các vùng trồng hoa mười giờ trên địa bàn thành phố Hồ

Chí Minh đã phát hiện một số bệnh trên hoa mười giờ phổ biến như: bệnh thối gốc và quan trọng nhất là bệnh bướu rễ Bệnh bướu rễ xuất hiện ở tất cả các vùng trồng hoa mười giờ được điều tra, trong giai đoạn đầu khi bệnh xuất hiện thì triệu chứng bệnh qua thân lá thể hiện chưa rõ, cây hoa mười giờ bị bệnh vẫn sinh trưởng và phát triển bình thường Tuy nhiên sau một khoảng thời gian khi tuyến trùng đã xâm nhập, phát triển và mật số quần thể đã tăng cao thì cây hoa mười giờ sẽ có triệu chứng bị còi cọc, kém phát triển, lá của hoa mười giờ bắt đầu bị héo vàng và rụng đi, cây bị úa vàng và chết dần Lúc này khi nhổ cây hoa mười giờ lên sẽ thấy rất nhiều bướu xuất hiện trên rễ cây Đây cũng là triệu chứng dễ dàng nhất để nhận biết hoa mười giờ bị bệnh bướu rễ

Mang rễ hoa mười giờ bị bệnh bướu rễ về phòng thí nghiệm rửa sạch và quan sát có thể thấy những rễ u sưng sần sùi trên rễ hoa mười giờ Nếu bệnh nhẹ chỉ xuất hiện các u sưng nhỏ nằm tách rời nhau, nếu bệnh nặng sẽ có rất nhiều u sưng và chúng

có thể nằm kế nhau tạo thành từng chuỗi dài ở trên rễ cây hoa mười giờ

Mổ các bướu trên rễ hoa mười giờ bị bệnh quan sát dưới kính lúp sôi nổi ở vật kính 2X hoặc 4X có thể thấy các cá thể tuyến trùng màu trắng đục hình quả lê ký sinh trong bướu rễ Từ những triệu chứng cây bị bệnh đến những triệu chứng u sưng trên rễ

và hình dạng tuyến trùng cái ký sinh trong bướu thì loài tuyến trùng ký sinh gây bệnh bướu rễ trên hoa mười giờ đã được điều tra tại các vùng trồng hoa mười giờ trên địa

bàn thành phố Hồ Chí Minh có thể là tuyến trùng nội ký sinh cố định Meloidogyne

Hình 4.1 Một số bệnh phổ biến trên vườn hoa mười giờ

A: Ruộng hoa mười giờ điều tra tại quận Thủ Đức

B: Hoa mười giờ bị bệnh trên ruộng

C: Rễ hoa mười giờ bị sưng do tuyến trùng ký sinh

D: Hoa mười giờ bị bệnh thối gốc

E: Tuyến trùng Meloidogyne cái được tách từ rễ hoa mười giờ bị bệnh bướu rễ

F: Tuyến trùng Meloidogyne cái ký sinh trong rễ cây hoa mười giờ bị bệnh bướu rễ

B