Sàng lọc trước sinh mẫu máu khô Nguyễn Khắc Hân Hoan

Xét nghiệm trước sinh không xâm lấn NIPT• NIPT: non-­invasive prenatal testing • XN cff-­DNA cell-­free fetal DNA trong máu mẹ • Xu hướng trong tương lai... XN Double test bằng mẫu huyết

TS  BS  Nguyễn  Khắc  Hân  Hoan

Bệnh  viện  Từ  Dũ

Năm  2015

Đề án nâng cao chất lượng dân số

Sàng  lọc  trước  sinh  mẫu  máu  khô

11  – 13  tuần  6  ngày

Gánh  nặng  về  dị  tật  bẩm  sinh  &  di  truyền

Tỉ  lệ  ngày  càng  tăng

• 30%  các  bệnh  nhập  viện  ở  trẻ  em

• 20%  tử  vong  sơ  sinh  &50%  tử  vong  ở  TE

• >  50%  sẩy  thai  trước  13  tuần  do  rối  loạn  NST

Khó  điều  trị,  tốn  kém,  chất  lượng  cuộc  sống  kém

Nguồn: Prenat Neonat Med 1999;4:157-164

Phòng  ngừa  dị  tật  bẩm  sinh  – di  truyền

PMD

PGD CĐDT  trư ớc  làm  tổ

PND

CĐ  trư ớc  sinh

Chương  trình  sàng  lọc  trước  sinh

Trisomy  21  – Hội  chứng  Down

Trisomy  21  – Hội  chứng  Down

John Langdon Down

(1828 – 1896)

Hội  chứng  Edwards

Hội  chứng  Patau  – Trisomy  13

Xét  nghiệm  sàng  lọc  trước  sinh  hiện  nay

• Thai  11  – 13  tuần  6  ngày

o Siêu  âm  khoảng  mờ  gáy   (NT):  70%

Kết  hợp  với

o Double  test   (PAPP-­A  +  fb-­hCG):  65%

Cho  kết  quả

o Combined  test   (double  test  +  NT):    90%

• Thai  15  – 20  tuần  6  ngày

Xét  nghiệm  trước  sinh  không  xâm  lấn  (NIPT)

• NIPT:  non-­invasive  prenatal  testing

• XN  cff-­DNA  (cell-­free  fetal  DNA)  trong  máu  mẹ

• Xu  hướng  trong  tương  lai

Hạn  chế  của  NIPT  (theo  ACOG,  SFMF,  ISUOG)

-­ Chi  phí  rất  cao  (1.000  USD)

-­ Hiện  chỉ  có  5  labo  (công  ty)  thực  hiện  XN  này

-­ Chỉ  có  giá  trị  sàng  lọc,  không  phải  là  XN  chẩn  đoán

-­ Chỉ  định  còn  giới  hạn  cho  thai  nguy  cơ  cao

-­ Nguy  cơ  bị  lạm  dụng  để  sàng  lọc  lựa  chọn  giới  tính

Nếu  chưa  XN  Double  test

Chọc  ối(>  16  tuần)

Siêu  âm  hình  thái  học

META  ANALYSIS    VỀ COMBINED TEST BẰNG KỸ  THUẬT  DELFIA

Tỉ  lệ  phát  hiện  Trisomy  13  &  18  

của  double  test  và  combined  test

Nguồn:  

Mark  I  Evans  &  Eugene  Pergament  (2009)  Fetal  Diagnosis  &  Therapy,  27:  68-­71

XN  Double  test  bằng  mẫu  huyết  thanh

Lấy  mẫu,  bảo  quản,  và  vận  chuyển

• Loại  mẫu  xét  nghiệm:  huyết  thanh  (3mL  máu  toàn  phần)

• Giữ  mẫu  huyết  thanh  ở  4oC  nếu  chuyển  đi  trong  ngày,   hoặc  giữ  ở  -­20oC  (ngăn  đá  tủ  lạnh).

• Vận  chuyển  mẫu:  tốt  nhất  trong  thùng  có  đá  bảo  quản

Tách  huyết  thanh,  bảo  quản  lạnh   giúp  bảo  đảm  chất  lượng  XN.

Sự  thay  đổi  nồng  độ  của  fb-­hCG

ο Máu toàn phần • Huyết thanh

Sự  thay  đổi  nồng  độ  của  fb-­hCG

ο Máu toàn phần

• Huyết thanh

30 độ  C 40 độ  C

XÉT NGHIỆM DOUBLE TEST – COMBINED TEST SÀNG LỌC TRƯỚC SINH TRÊN MẪU MÁU KHÔ

MỘT  PHƯƠNG  PHÁP  MỚI

XÉT  NGHIỆM  SÀNG  LỌC  TRƯỚC  SINH

● Xét  nghiệm  2  chất  sinh  hóa:  hCGb  (human  chorionic   gonadotropin  beta) và  PAPP-­A  (Pregnancy-­associated  plasma  protein  A)

● Là  một  lựa  chọn  thay  thế  phương  pháp  lấy  mẫu

truyền  thống.

● Giữ  nguyên  kỹ  thuật  xét  nghiệm,  tính  nguy  cơ,   biện  luận  kết  quả.

2  -­ 8 o C -­ 20 o C

CÔNG  NHẬN  CỦA  FMF

THỜI  ĐIỂM  LẤY  MẪU

● Thai  từ  11  tuần  đến  13  tuần  6  ngày

● Chiều  dài  đầu  mông  từ  45  mm  đến  84  mm

● Không  liên  quan  đến  bữa  ăn

YÊU  CẦU  CÓ  THÔNG  TIN  SIÊU  ÂM

● Chiều  dài  đầu  mông  (CRL)

● Khoảng  mờ  gáy  (NT)

● Xương  mũi  (NB)  (nên  có,  cho  tỉ  lệ  phát  hiện  cao  hơn)

Bộ  giấy  thấm

DỤNG  CỤ      lấy  máu  đầu  ngón  tay

Bộ  giấy  thấm

Ống  nắp  đỏ,  lancet,  gòn  sát   trùng,  găng  tay  y  tế,  băng  dán      

CHUẨN  BỊ

● Điền  đầy  đủ  thông  tin  vào  giấy:

– Thông  tin  bản  thân  của  thai  phụ  (họ  tên,  ngày  tháng  năm  sinh,   cân  nặng,  dân  tộc, địa  chỉ,  điện  thoại)

– Thông  tin  về  thai  (số  thai,  kinh  cuối,  ngày  siêu  âm,  tuổi  thai,  CRL,  NT,   các  bất  thường  khác  trên  siêu  âm)

– Thông  tin  kèm  theo  (đái  tháo  đường,  thuốc  lá,  tiền  căn  sinh  nở,  

tiền  căn  gia  đình)

Yếu  tố  hiệu  chỉnh  nguy  cơ

KỸ  THUẬT  LẤY  MẪU

Lấy  máu  tĩnh  mạch  có  

dụng  cụ  phân  phối  máu

KỸ  THUẬT  LẤY  MẪU

Lấy  máu  tĩnh  mạch  không  có  

dụng  cụ  phân  phối  máu

Lưu  ý:  thời  gian  từ  lúc  lấy  máu   đến  lúc  nhỏ  máu  lên  giấy  

không  được  quá  1  phút  

KỸ  THUẬT  LẤY  MẪU

Lấy  máu  đầu  ngón  tay

KỸ  THUẬT  LẤY  MẪU

Lấy  máu  đầu  ngón  tay

Lau  bỏ  giọt  máu  nhỏ  đầu   tiên  bằng  gòn  khô,  không   bóp,  không  nặn  máu  tại   chỗ

Để  giọt  máu  rơi  tự   nhiên  xuống  giấy  thấm,  

đủ  2  vòng  tròn,  lau  khô  

và  dán  băng  ngón  tay

BẢO  QUẢN  &  VẬN  CHUYỂN  MẪU

Phơi  mẫu  trên  mặt  phẳng

Điều  kiện:  không  nóng,  không  ẩm

Gửi  mẫu  ở  nhiệt  độ  thường

NHỮNG  ĐIỀU  CẦN  TRÁNH

Nhỏ  chồng  máu Thấm  máu  từ  mặt  sau Chạm  tay  vào  mẫu  máu

Quả

XN

Combined Test

Kết  quả  nghiên  cứu  đối  chiếu   Giọt  máu  khô  với  huyết  thanh

400 mẫu XN Combined test mẫu Huyết thanh so với Máu khô

Có 1 trường hợp thai trisomy 21, phát hiện bởi cả 2 phương pháp.BN: Nguyễn T Thu D, 1986, Daklak, Thai 11 tuần 4 ngày

Máu khô và huyết thanh có cùng kết quả nguy cơ T21 tỷ lệ: 1/5

Sinh thiết gai nhau và XN karyotype: Kết quả Trisomy 21

11  -­ 13  tuần  6  ngày

Đo  NT  +   double  test  mẫu  máu  khô

± Các  XN  khác

Triple  test(15  – 20  tuần  6  ngày)

Nếu  chưa  XN  Double  test

Siêu  âm  hình  thái  học

Sinh  thiết  gai  nhau

• Thai  11  -­ 13  tuần  

• Siêu  âm  dẫn  đường

• Qua  thành  bụng  hoặc  qua  âm  đạo

• Khối  lượng  gai  nhau  ~25mg

• Ưu  điểm

o Tuổi  thai  nhỏ

▪ Chấm  dứt  thai  kỳ  dễ  

▪ Có  thể  theo  dõi  xác  định  thêm

▪ Có  nhiều  thời  gian  để  quyết  định

o Khối  lượng  tế  bào  thu  thập  nhiều

• Nhược  điểm

o Tỉ  lệ  sẩy  thai  ~1%

o Bộ  gen  khảm  (1  – 2%)

o Giá  ~  2  triệu  đồng

Chọc  hút  dịch  ối

Thai 16 – 20 tuần, Dễ  thực hiện

Nguy cơ sẩy thai do thủ  thuật: thấp < 0,5%

Chọc  hút  dịch  ối

Xét  nghiệm  gen,  nhiễm  sắc  thể

Kỹ  thuật  Karyotype  – xét  nghiệm  NST

thu  hoạch à nhỏ  lam  à nhuộm à phân  tích à Kết  quả

Kỹ  thuật  FISH  – xét  nghiệm  NST

• Khảo  sát  nhanh  số  lượng  NST  hoặc  1  đoạn  NST

Phân  tích  kết  quả  QF-­PCR

Bình  thường

Trisomy  21

QF-­PCR:  bình  thường

QF-­PCR:  trisomy  21

Kết  quả  QF-­PCR:  Trisomy  18

11  -­ 13  tuần  6  ngày

Đo  NT  +   double  test  mẫu  máu  khô

± Các  XN  khác

Triple  test(15  – 20  tuần  6  ngày)

Nếu  chưa  XN  Double  test

Siêu  âm  hình  thái  học

Quy  trình  lấy  mẫu  và  trả  kết  quả  XN

BV

Từ  Dũ

Chi cục KHHGĐ

DS-Trung tâm SKSSBệnh viện

Website SLSS

Gửi vật tư Thực hiện XN Báo cáo KQ

Gửi vật tư Chỉ  đạo, điều phối thực hiện

Siêu âm Lấy mẫu

Tư vấn

Chuyển ca nguy cơ

Cám  ơn

TS  BS  NGUYỄN  KHẮC  HÂN  HOAN

Trưởng  Khoa  Xét  nghiệm  Di  truyền  Y  học Bệnh  viện  Từ  Dũ  – Khu  N  – Tầng  3 Email:  drhoan@gmail.com  – DĐ:  0968  400  088

Liên hệ Sàng lọc trước sinh &  sơ sinh:  08.5404  2812