KHẢO SÁT SỰ BIẾN THIÊN TẾ BÀO BIỂU MÔ ÂM ĐẠO TRONG CHU KỲ ĐỘNG DỤC CỦA CHÓ GREYHOUND VÀ MỘT SỐ TRƯỜNG HỢP BỆNH LÝ BẰNG VẾT PHẾT ÂM ĐẠO

TÓM TẮT Đề tài “Khảo sát sự thay đổi các loại tế bào biểu mô âm đạo trong chu kỳ động dục của chó Greyhound và chẩn đoán một số trường hợp bệnh lý” được thực hiện từ tháng 02/2012 đến th

*********

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

KHẢO SÁT SỰ BIẾN THIÊN TẾ BÀO BIỂU MÔ ÂM ĐẠO TRONG CHU KỲ ĐỘNG DỤC CỦA CHÓ GREYHOUND

Tháng 07/2012

BỘ GIÁO DỤC và ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH

KHOA CHĂN NUÔI – THÚ Y

*********

KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP

KHẢO SÁT SỰ BIẾN THIÊN TẾ BÀO BIỂU MÔ ÂM ĐẠO TRONG CHU KỲ ĐỘNG DỤC CỦA CHÓ GREYHOUND

Tháng 07/2012

TÓM TẮT

Đề tài “Khảo sát sự thay đổi các loại tế bào biểu mô âm đạo trong chu kỳ động dục của chó Greyhound và chẩn đoán một số trường hợp bệnh lý” được thực hiện từ tháng 02/2012 đến tháng 05/2012 tại trung tâm nuôi và huấn luyện chó đua

ở Bà Rịa Thí nghiệm được bố trí theo kiểu cắt ngang, gồm 3 nội dung và kết quả như sau:

(1) Phân tích 428 mẫu vết phết âm đạo của 24 chó Greyhound cái sinh sản bình thường được phân chia theo 2 nhóm tuổi (4 – 7 năm tuổi và > 7 năm tuổi)

Kết quả khảo sát cho thấy các giai đoạn trong chu kỳ động dục có thể được xác định dựa vào đặc điểm của vết phết âm đạo và tỉ lệ các loại tế bào biểu mô Ở giai đoạn trước động dục, tỉ lệ trung bình của các loại tế bào cận nền, trung gian, trung gian – bề mặt và bề mặt lần lượt là 2 %, 16 %, 29 % và 53 % Trong giai đoạn động dục, tỉ lệ các tế bào sừng hóa gia tăng với 17 % tế bào trung gian – bề mặt và 79 % tế bào bề mặt Qua giai đoạn sau động dục, các tế bào biểu mô không sừng hóa xuất hiện trở lại với 11 % tế bào cận nền, 16 % tế bào trung gian trong khi

tế bào bề mặt giảm còn 43 % Vào giai đoạn nghỉ ngơi, vết phết âm đạo có đủ 4 loại tế bào biểu mô với tỉ lệ trung bình lần lượt là 50 % tế bào cận nền, 31 % tế bào trung gian, 13 % tế bào trung gian – bề mặt và 6 % tế bào bề mặt

Chu kỳ động dục của chó Greyhound kéo dài 9 tháng, tương ứng với khoảng thời gian trung bình của các giai đoạn trước động dục, động dục, sau động dục và nghỉ ngơi là 7 ngày, 9 ngày, 72 ngày và 6 tháng

(2) Khảo sát được tiến hành trên 16 chó Greyhound cái đang chờ phối được chia thành 2 nhóm (phối giống theo xét nghiệm tế bào và phối giống theo kinh nghiệm) Kết quả cho thấy tỉ lệ đậu thai ở 2 nhóm lần lượt là 50 % và 25 %

(3) Xét nghiệm tế bào âm đạo có thể chẩn đoán khá chính xác một số bệnh lý trên đường sinh dục của chó cái, kể cả các trường hợp nhẹ chưa biểu hiện ra bên ngoài, cũng như chấn đoán phân biệt giữa viêm và bướu

MỤC LỤC

TRANG

Xác nhận của giáo viên hướng dẫn ii

Lời cảm ơn iii Tóm tắt iv Mục lục v Danh mục các chữ viết tắt x

2.2 CHU KỲ ĐỘNG DỤC CỦA CHÓ CÁI 7

2.2.2 Các giai đoạn trong chu kỳ động dục của chó cái 8

2.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến chu kỳ động dục 10

2.3.3 Một số ứng dụng của xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo 12

2.4 LƯỢC DUYỆT MỘT SỐ CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU LIÊN

3.3 NỘI DUNG KHẢO SÁT 21

3.3.1 NỘI DUNG 1: Khảo sát sự biến thiên tế bào biểu mô âm đạo

trong các giai đoạn của chu kỳ động dục

21

3.3.2 NỘI DUNG 2: Ứng dụng xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo để

chẩn đoán tình trạng mang thai và đánh giá hiệu quả của công tác

3.3.3 NỘI DUNG 3: Ứng dụng xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo để

phát hiện những trường hợp rối loạn sinh sản và chẩn đoán một số

trường hợp bệnh lý trên đường sinh dục

Chương 4 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 28

4.1 KHẢO SÁT SỰ BIẾN THIÊN TẾ BÀO BIỂU MÔ ÂM ĐẠO

TRONG CÁC GIAI ĐOẠN CỦA CHU KỲ ĐỘNG DỤC

28

4.1.1.5 Nhận định chung về nội dung xác định các giai đoạn trong chu

kỳ động dục của chó Greyhound cái

41

4.1.2 Ước lượng khoảng thời gian của từng giai đoạn trong chu kỳ

động dục

42

4.2 ỨNG DỤNG XÉT NGHIỆM TẾ BÀO BIỂU MÔ ÂM ĐẠO ĐỂ

XÁC ĐỊNH THỜI ĐIỂM PHỐI GIỐNG VÀ MANG THAI TRÊN

CHÓ GREYHOUND

44

4.2.1 Kết quả phối giống của các chó nhóm I 44

4.2.2 Kết quả phối giống của các chó nhóm II 48

4.2.3 Nhận định chung về nội dung ứng dụng xét nghiệm tế bào âm đạo

để xác định thời điểm phối giống và mang thai trên chó

Greyhound

52

4.3 CHẨN ĐOÁN MỘT SỐ TRƯỜNG HỢP BỆNH LÝ TRÊN

ĐƯỜNG SINH DỤC CỦA CHÓ GREYHOUND CÁI

54

Chương 5 KẾT LUẬN, TỒN TẠI VÀ ĐỀ NGHỊ 60

5.1 KẾT LUẬN 60 5.2 TỒN TẠI 61

TÀI LIỆU THAM KHẢO 62

PHỤ LỤC 66

TG Tế bào trung gian

TG-BM Tế bào trung gian-bề mặt

Tiếng Anh

ANOVA Analysis of variance Phân tích phương sai

FSH Follicle stimulating hormone Kích nang noãn tố

LH Luteinizing hormone Kích tố gây xuất noãn LTH Luteotropic hormone Kích tố tác động thể vàng và

gây sản xuất sữa

SCC Squamous cell carcinoma Bướu độc tế bào vảy

SES Sport and Entertainment Service

Center

Công ty Dịch vụ Thể thao Thi đấu giải trí

TCC Transitional cell carcinoma Bướu độc tế bào chuyển tiếp TVT Transmissible veneral tumor Bướu truyền lây do giao phối

Đơn vị tính

ha Hectare (10.000 square meter)

USD United States dollars

DANH MỤC CÁC BẢNG

TRANG Bảng 2.1 Đặc trưng chu kỳ động dục của một số động vật nuôi 8

Bảng 2.2 Các dấu hiệu sinh lý của chó cái trong chu kỳ động dục 9

Bảng 2.3 Tỉ lệ các loại tế bào biểu mô trong vết phết âm đạo của chó

cái theo khảo sát của một số tác giả

13

Bảng 2.4 Tỉ lệ các loại tế bào biểu mô trong vết phết âm đạo của chó

Greyhound theo kết quả nghiên cứu của Hoàng Như Quỳnh

Bảng 3.2 Số chó và vết phết khảo sát trong nội dung 2 23

Bảng 3.3 Công thức tế bào biểu mô âm đạo qua các giai đoạn trong chu

kỳ động dục của chó cái

25

Bảng 4.1 Số vết phết khảo sát theo từng giai đoạn của chu kỳ động dục 28

Bảng 4.2 Tỉ lệ tế bào biểu mô âm đạo theo tuổi ở giai đoạn trước động

dục

29

Bảng 4.3 Tỉ lệ tế bào biểu mô âm đạo theo tuổi ở giai đoạn động dục 31

Bảng 4.4 Tỉ lệ tế bào biểu mô âm đạo theo tuổi ở giai đoạn sau động

dục

35

Bảng 4.5 Tỉ lệ tế bào biểu mô âm đạo theo tuổi ở giai đoạn nghỉ ngơi 38

Bảng 4.6 Tỉ lệ các loại tế bào biểu mô âm đạo của chó Greyhound

qua từng giai đoạn trong chu kỳ động dục

Bảng 4.9 Tỉ lệ đậu thai của nhóm I (Phối giống theo kinh nghiệm) 45

Bảng 4.10 Kết quả phân tích vết phết âm đạo của chó Greyhound H56 46

Bảng 4.11 Kết quả phân tích vết phết âm đạo của chó Greyhound C95 47

Bảng 4.12 Tỉ lệ đậu thai của nhóm II (theo xét nghiệm vết phết âm đạo) 49

Bảng 4.13 Kết quả phân tích vết phết âm đạo của chó Greyhound A128 49

Bảng 4.14 Kết quả phân tích vết phết âm đạo của chó Greyhound H66 51

Bảng 4.16 Tỉ lệ chó cái bệnh lý ở đường sinh dục 54

DANH MỤC CÁC HÌNH

Hình 2.1 Mô hình bộ máy sinh dục chó cái 3

Hình 2.2 Cấu tạo buồng trứng và các giai đoạn của nang noãn 4

Hình 2.3 Cấu tạo ống dẫn trứng 5

Hình 2.4 Các loại tế bào biểu mô âm đạo 12

Hình 2.5 Con thỏ máy chạy phía trước và các chú chó lao theo 15

Hình 2.6 Các loại màu lông của chó Greyhound 17

Hình 3.1 Các tế bào biểu mô trong vết phết âm đạo 25

Hình 3.2 Cách thực hiện vết phết âm đạo 26

Hình 4.1 Vết phết âm đạo ở giai đoạn trước động dục 30

Hình 4.2 Vết phết âm đạo ở giai đoạn động dục 32

Hình 4.3 Vết phết âm đạo ở giai đoạn sau động dục 36

Hình 4.4 Vết phết âm đạo ở giai đoạn nghỉ ngơi 38

Hình 4.5 Chó Greyhound C95 và 4 chó con 47

Hình 4.6 Chó Greyhound F122 và 6 chó con 48

Hình 4.7 Chó Greyhound A128 và 9 chó con 50

Hình 4.8 Chó Greyhound H66 và 8 chó con 51

Hình 4.9 Chó Greyhound F112 sắp sinh và H47 cùng 6 chó con 52

Hình 4.10 Vết phết âm đạo của chó bị viêm đường sinh dục 55

Hình 4.11 Vết phết âm đạo của chó Greyhound nghi ngờ bị bướu 57

Hình 4.12 Vết phết âm đạo của chó Greyhound cái bị viêm trước và

sau điều trị

58

Đua chó là một môn thể thao không lạ và cũng không kém phần hấp dẫn đối với người dân ở nhiều nước trên thế giới Năm 2001, chó đua lần đầu tiên xuất hiện tại Việt Nam dưới sự độc quyền của công ty Cổ Phần Dịch Vụ Thể Thao Thi Đấu Giải Trí (Sports and Entertainment Services Co., Ltd.- SES) Đến nay, môn thể thao này đã rất quen thuộc với người dân thành phố và theo đó cũng có nhiều người muốn sở hữu riêng một chú chó đua (giống English Greyhound) Tuy nhiên, trước nay giống chó này thường được nhập từ Úc về với giá khoảng 2.000 USD/con Nắm bắt được tình hình này, Trung tâm Nuôi và Huấn luyện chó đua (trực thuộc công ty SES) đã tiến hành phối giống trực tiếp để cho ra đời những chó Greyhound Việt Nam với giá thành rẻ hơn nhằm đáp ứng nhu cầu đua chó trong nước cũng như xuất khẩu

Bên cạnh đó, chó là loài động vật có đặc tính sinh lý sinh sản phức tạp như chu kỳ động dục khá dài và thời gian động dục rất biến động, thay đổi theo từng cá thể Đồng thời, trên chó thường gặp các vấn đề về bệnh lý sinh sản như phối không đậu, mang thai giả…sẽ làm ảnh hưởng đến công tác quản lý giống, không sử dụng được hết năng suất sinh sản của đàn chó giống…

Hiện nay, người ta có thể sử dụng nhiều phương pháp, kỹ thuật để chẩn đoán thai và bệnh lý trên chó như X-quang giúp xác định số con, phát hiện những bất

thường của tử cung…; siêu âm giúp xác định sự mang thai, ước lượng tuổi thai, dự đoán ngày sinh, xác định thai sống hay chết hoặc trường hợp mang thai giả và phát hiện một số trường hợp bệnh lý đường sinh dục…Tuy nhiên, các kỹ thuật này đòi hỏi phải có vốn đầu tư lớn, tay nghề chuyên môn cao, lại không xác định được ngày rụng trứng, thời điểm phối giống, phát hiện bệnh lý ở giai đoạn tiền lâm sàng

Bên cạnh đó, kỹ thuật xét nghiệm tế bào âm đạo có tính chính xác cao, lại dễ thực hiện, nên cũng được sử dụng để khảo sát tình trạng sinh lý và phát hiện tình trạng bệnh lý ở đường sinh dục trên chó cái Ngoài ra, xét nghiệm tế bào âm đạo còn được ứng dụng để xác định ngày sinh, nhận dạng một số dạng ung thư liên quan đến tử cung và âm đạo

Xuất phát từ những vấn đề trên, được sự cho phép của khoa Chăn Nuôi – Thú Y thuộc trường Đại học Nông Lâm TP.Hồ Chí Minh, dưới sự hướng dẫn của

TS Đỗ Hiếu Liêm, chúng tôi thực hiện đề tài: “KHẢO SÁT SỰ THAY ĐỔI CÁC LOẠI TẾ BÀO BIỂU MÔ ÂM ĐẠO TRONG CHU KỲ ĐỘNG DỤC CỦA CHÓ GREYHOUND VÀ CHẨN ĐOÁN MỘT SỐ TRƯỜNG HỢP BỆNH LÝ” tại Trung tâm nuôi và huấn luyện chó đua Bà Rịa

1.2 MỤC ĐÍCH VÀ YÊU CẦU

1.2.1 Mục đích

Áp dụng phương pháp xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo để xác định khoảng thời gian của các giai đoạn trong chu kỳ động dục trên đàn chó Greyhound, đồng thời phát hiện sớm một số trường hợp bệnh lý trên đường sinh dục chó cái

 Sản xuất noãn bào hay trứng

 Vận chuyển noãn bào từ buồng trứng đến vị trí thụ tinh theo ống dẫn trứng

 Dự trữ và hoàn thiện khả năng thụ tinh của tinh trùng

 Định vị và nuôi dưỡng phôi thai

 Sinh con

 Tổng hợp và phân tiết các hormone sinh dục cái là estrogen và progesterone

Hình 2.1 Mô hình bộ máy sinh dục chó cái (Nguồn: enpevet.de, 2011)

2.1.2 Cấu tạo

2.1.2.1 Dây rộng

Dây rộng là những nếp gấp mô liên kết phúc mạc gắn liền buồng trứng, ống dẫn trứng, tử cung, phần đầu âm đạo với thành trên của xoang bụng và xoang chậu Dây rộng chứa nhiều mạch máu, mạch bạch huyết và dây thần kinh Mỗi dây rộng chia làm 3 phần: dây treo buồng trứng, dây treo ống dẫn và dây treo tử cung

2.1.2.2 Buồng trứng

Hình 2.2 Cấu tạo buồng trứng và các giai đoạn của nang noãn

(Nguồn: ANS 3319C) Chó cái có hai buồng trứng hình ovan đến hình tròn, nằm trong hai túi buồng trứng, ở phía sau thận Buồng trứng phải thường nằm về trước hơn buồng trứng trái

(vị trí khoảng 1/3 dưới thận trái)

Buồng trứng vừa là tuyến ngoại tiết sản xuất tế bào sinh dục cái, vừa là tuyến nội tiết tổng hợp và phân tiết hormone estrogen, progesterone

2.1.2.3 Ống dẫn trứng

Hình 2.3 Cấu tạo ống dẫn trứng (Nguồn: ANS 3319C)

Ống dẫn trứng còn gọi là ống tử cung hay ống Fallope, bao bọc bởi túi buồng trứng Phần đầu ống tiếp giáp với buồng trứng có dạng hình phễu được gọi

là vòi Fallope và tận cùng ở phần tiếp giáp với sừng tử cung Cửa ngõ đi vào sừng

tử cung gọi là vòi tử cung (trích dẫn của Đỗ Hiếu Liêm, 2006)

2.1.2.4 Tử cung

Tử cung của chó cái có dạng chữ Y, gồm hai sừng tử cung, thân tử cung và

cổ tử cung Tử cung định vị ở khoảng giữa phần bụng của bàng quang và kết tràng

xuống (một phần nằm trong xoang bụng và một phần trong xoang chậu) Kích

thước của tử cung rất thay đổi, phụ thuộc vào tầm vóc của thú, số lần mang thai,

tình trạng bệnh lý sinh sản, mang thai hay không mang thai

Sừng tử cung là một ống màng cơ hơi hẹp từ vùng lưng xuống bụng, tiếp nối

với ống dẫn trứng ở phía trước và thân tử cung ở phía sau Sừng tử cung nằm hoàn

toàn trong xoang bụng, sừng bên phải thường dài hơn sừng bên trái Thân tử cung

nằm trong xoang bụng và một phần trong xoang chậu, phía trước tiếp nối với 2

nhánh của sừng tử cung và phía sau là âm đạo thông qua cổ tử cung Cổ tử cung là

phần thu hẹp phía sau của thân tử cung tiếp nối với âm đạo (trích dẫn của Đỗ Hiếu

Liêm, 2006)

2.1.2.5 Âm đạo

Âm đạo nằm hoàn toàn trong xoang chậu, giữa cổ tử cung và tiền đình Phần

đầu âm đạo được gọi là vòm âm đạo, phần còn lại kéo dài về phía trước có lớp nội

bì xếp theo chiều dọc và các nếp gấp nhỏ xếp theo chiều ngang Nếp dọc tận cùng ở

ngang tầm với lỗ thoát tiểu, là nơi tiếp nối với tiền đình Âm đạo đảm nhận các

chức năng như tiếp nhận dương vật của thú đực trong quá trình phối giống và là

đường tiếp dẫn thú con sinh ra (trích dẫn của Đỗ Hiếu Liêm, 2006)

2.1.2.6 Tiền đình

Tiền đình là giới hạn của phần cuối âm đạo và âm hộ phía sau Phía trước

tiền đình có một nếp gấp gọi là màng trinh Sau màng này phía dưới có lỗ mở ra

của ống thoát tiểu Hai bên ống thoát tiểu có 2 thể xốp chứa nhiều mạch máu và có

thể cương lên như dương vật (Phan Quang Bá, 2002)

2.1.2.7 Âm hộ

Âm hộ là cửa sau của cơ quan sinh dục cái, nằm dưới hậu môn Bên ngoài là

lớp da chứa sắc tố Cửa mở của âm hộ có hình bầu dục, hai bên là 2 môi âm hộ Mép dưới của âm hộ có một thể tròn nằm trong một xoang nhỏ, đó chính là âm vật (Phan Quang Bá, 2002)

2.2 CHU KỲ ĐỘNG DỤC CỦA CHÓ CÁI

2.2.1 Tuổi thành thục tính dục

Theo Đỗ Hiếu Liêm (2006), tuổi thành thục tính dục là tuổi mà cơ quan sinh dục bắt đầu hoạt động, buồng trứng của thú cái sản sinh noãn bào, dịch hoàn sản sinh tinh trùng và các tế bào giao tử này có khả năng thụ tinh Chó cái thành thục tính dục trung bình 6 – 12 tháng tuổi nhưng rất biến động (4 – 24 tháng tuổi) tùy thuộc vào giống, trọng lượng và còn chịu tác động của nhiều yếu tố khác, trong đó giống có ảnh hưởng rất lớn đến thời điểm động dục lần đầu Do vậy rất khó xác định chính xác tuổi thành thục của chó cái

Concannon (1991) ghi nhận các giống chó tầm vóc nhỏ thành thục lúc 6 – 10 tháng tuổi, các giống tầm vóc to thành thục muộn hơn (khoảng 12 tháng tuổi); tuy nhiên, nhiều giống chó to có chu kỳ sinh dục đầu tiên xảy ra từ 18 – 24 tháng tuổi

Sự thay đổi này có thể do chó cái động dục thầm lặng nên chúng ta không thể xác định thời điểm động dục đầu tiên Tương tự, Brooks (2003); Hopkins (2003); Schulman (2004) nhận định các giống chó nhỏ thành thục tính dục rất sớm nhưng biến động và chó cái chỉ biểu hiện tính dục sau 2 – 3 tháng khi đạt thể vóc trưởng thành Ngoài ra, trọng lượng cơ thể cũng ảnh hưởng đến tuổi thành thục: chó nặng dưới 15kg thành thục khoảng 6 – 8 tháng tuổi, trong khi các chó nặng hơn sẽ động dục khoảng 8 – 10 tháng tuổi và khả năng thụ tinh thành công thường rơi vào chu

kỳ thứ hai hoặc thứ ba (trích dẫn của Đỗ Hiếu Liêm, 2007)

Từ kết quả khảo sát một số chỉ tiêu sinh lý sinh sản trên 50 chó cái German Shepherd, Nguyễn Văn Thanh (2005) ghi nhận 60 % chó cái thành thục về tính tập trung từ 11 – 13 tháng tuổi

2.2.2 Các giai đoạn trong chu kỳ động dục của chó cái

Ở chó, chu kỳ động dục thuộc nhóm đơn động dục (chỉ rụng trứng một lần

trong mỗi chu kỳ động dục) và chỉ xảy ra một cách tự phát Từ khi bắt đầu trưởng thành tính dục, chó cái có những biểu hiện lên giống và quá trình biểu hiện này lập

đi lập lại theo tính chu kỳ, khoảng thời gian giữa lần lên giống này với lần lên giống tiếp theo được gọi là chu kỳ động dục (Đỗ Hiếu Liêm, 2006) Mỗi loài động vật có chu kỳ động dục với các đặc trưng khác nhau (Bảng 2.1)

Bảng 2.1 Đặc trưng chu kỳ động dục của một số động vật nuôi

Thời gian từ khi LH tối đa đến khi rụng trứng

Trung

bình Biến động

Trung bình

Biến động

Bò 21 ng 17 – 24 ng 15 g 6 – 24 g 24 – 32 g 28 g Cừu 17 ng 13 – 19 ng 30 g 18 – 48 g 24 – 30 g 26 g Heo 21 ng 17 – 25 ng 50 g 19 – 96 g 36 – 44 g 40 g Ngựa 21 ng 15 – 26 ng 7 ng 2 – 12 ng 5 ng 2 ng Chó 6 th 3 – 9 th 9 ng 4 – 21 ng 4 – 24 ng 2 – 3 ng

Chú thích: g giờ, ng ngày, th tháng

Chu kỳ động dục của chó cái được chia thành 4 giai đoạn: trước động dục, động dục, sau động dục và nghỉ ngơi Thời gian của chu kỳ và của mỗi giai đoạn trong chu kỳ động dục của chó rất biến động tùy theo giống, điều kiện chăm sóc – quản lý, nuôi dưỡng và bệnh lý (trích dẫn của Đỗ Hiếu Liêm, 2006) England và Concannon (2002) đã xác nhận khoảng thời gian giữa 2 lần động dục trung bình là

7 tháng (31 tuần) nhưng cũng rất khác nhau, chu kỳ động dục bình thường biến đổi

từ 4,5 – 13 tháng hoặc lâu hơn Các dấu hiệu lâm sàng biểu hiện ở từng giai đoạn trong chu kỳ động dục của chó cái được trình bày ở Bảng 2.2

2.2.3 Các yếu tố ảnh hưởng đến chu kỳ động dục

Tuổi thành thục tính dục cũng như chu kỳ động dục của chó cái rất biến động tùy thuộc vào nhiều yếu tố:

 Giống: giống chó vóc nhỏ thường thành thục sớm hơn chó vóc lớn, giống lai thành thục cũng sớm hơn giống thuần

 Khí hậu: chó được nuôi ở vùng có khí hậu nóng thường trưởng thành sinh dục sớm hơn so với chó nuôi ở vùng khí hậu lạnh

 Tuổi: chó lớn tuổi (trên 6 năm) thường động dục lại chậm và thời gian động dục cũng ngắn hơn chó đang ở tuổi trưởng thành

 Chăm sóc và dinh dưỡng: chó được chăm sóc và nuôi dưỡng tốt với chế độ dinh dưỡng phù hợp thì sự thành thục tính dục sẽ đúng với khả năng của giống, đồng thời khi động dục trở lại, số lượng trứng rụng sẽ nhiều hơn

 Pheromone: chó cái mẫn cảm với mùi pheromone trong nước tiểu chó đực

Do đó, trong trại nuôi nếu đặt chuồng đực gần chuồng cái hoặc thường xuyên dắt chó đực đi dạo quanh chuồng chó cái sẽ kích thích chó cái động dục lại sớm hơn

 Stress: chu kỳ động dục của chó cái cũng bị ảnh hưởng bởi stress

 Hormone: LH, FSH, LTH, estrogen, progesterone là các hormone sinh dục gây ảnh hưởng đến quá trình động dục của chó cái

 Bệnh lý: các bệnh lý trên đường sinh dục như các rối loạn sinh sản, u nang buồng trứng, viêm âm đạo, viêm tử cung, tồn hoàng thể…làm ảnh hưởng đến chu

kỳ động dục

2.3 XÉT NGHIỆM TẾ BÀO ÂM ĐẠO

2.3.1 Lớp biểu mô âm đạo

Lớp biểu mô âm đạo là lớp niêm mạc (màng niêm) lót mặt trong của âm đạo, có nguồn gốc từ lá phôi trong, được cấu tạo từ các biểu mô lát kép có thể hóa sừng (Lâm Thị Thu Hương, 2005)

Concannon và DeGregario (1986) (trích dẫn của Đỗ Hiếu Liêm, 2006) ghi nhận sự biến đổi ở lớp màng nhầy âm đạo là kết quả của quá trình gia tăng nồng độ

estrogen trong huyết thanh của chó cái trong suốt giai đoạn trước động dục và kéo dài sang giai đoạn động dục Sự biến đổi này được phản ánh qua các tế bào biểu mô

âm đạo bị bong tróc Vào giai đoạn trước động dục, nang noãn thành thục và tăng tiết estrogen Estrogen làm lớp niêm mạc âm đạo tăng sinh, đẩy dần lớp tế bào ở ngoài xa dần mạch quản, chúng không được cung cấp máu nên chết dần và bong tróc Hiện tượng chết của các tế bào biểu mô âm đạo được gọi là sự hoá sừng

2.3.2 Các loại tế bào biểu mô âm đạo

Tế bào biểu mô âm đạo gồm tế bào nền, tế bào cận nền, tế bào trung gian nhỏ, tế bào trung gian lớn (trung gian-bề mặt) và tế bào bề mặt

 Tế bào nền (tế bào mầm) là các tế bào non nhất trong lớp biểu mô âm đạo và đóng vai trò như là tiền thân của các loại tế bào biểu mô khác Các tế bào này có tỉ

lệ nhân/tế bào chất cao, nhân tròn đều và một ít tế bào chất ưa base, hiếm khi nhìn thấy trên vết phết âm đạo (Beimborn và ctv., 2003)

 Tế bào cận nền là tế bào biểu mô có kích thước nhỏ nhất trong các loại tế bào nhìn thấy được trong vết phết âm đạo, tế bào hình tròn hoặc bầu dục, tỉ lệ nhân/tế bào chất cũng cao, nhân rất to và tròn đều, tế bào chất ưa base và có thể chứa các không bào (Beimborn và ctv., 2003) Lớp tế bào cận nền nằm trong cùng, gần lớp tế bào nền, được cung cấp máu đầy đủ

 Tế bào trung gian có kích thước rất thay đổi, thường lớn hơn tế bào cận nền, nhưng nhân nhỏ hơn rất nhiều, tỷ lệ nhân/tế bào chất giảm và chúng có lượng lớn tế bào chất màu xanh – xanh lá, hóa sừng (Beimborn và ctv., 2003) Hình dạng các tế bào này có thể có góc cạnh Sự thay đổi hình thái tế bào biểu mô từ dạng cận nền chuyển sang trung gian là giai đoạn mở đầu cho sự chết của tế bào biểu mô âm đạo

Tế bào trung gian có thể phân làm 2 loại, tế bào trung gian nhỏ và tế bào trung gian lớn

 Tế bào trung gian – bề mặt là tế bào biểu mô âm đạo chết điển hình, chúng xuất hiện trong vết phết âm đạo của chó cái vào cuối giai đoạn trước động dục, tế bào có nhiều góc cạnh, dẹp, vách tế bào không còn rõ ràng, tế bào chất và nhân bị tiêu hủy,

vì thế nhân rất nhỏ Eilts (2006) gọi tế bào này là tế bào bề mặt (tế bào bề mặt có nhân)

 Tế bào bề mặt hay tế bào vảy, là các tế bào biểu mô chết hoàn toàn, không còn nhân, hình dạng dẹp và phẳng; vì thế trong vết phết, các tế bào bề mặt thường

bị gấp nếp và hiện diện vào giai đoạn chó cái động dục Eilts (2006) gọi tế bào này

là tế bào không nhân (tế bào bề mặt không nhân) Ngoài ra, tác giả chia các tế bào biểu mô trong vết phết âm đạo dựa vào sự sừng hoá thành 2 nhóm: nhóm tế bào biểu mô không sừng hoá (tế bào cận nền và trung gian) và nhóm tế bào sừng hoá (tế bào bề mặt và tế bào không nhân)

Chú thích: a Tế bào cận nền,

b Tế bào trung gian,

c Tế bào trung gian – bề mặt,

d Tế bào bề mặt

Hình 2.4 Các loại tế bào biểu mô âm đạo

(Nguồn: Bowen, 1998)

2.3.3 Một số ứng dụng của xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo

Johnson (1989) (trích dẫn của Đỗ Hiếu Liêm, 2006) đã ghi nhận sự hữu dụng của xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo đối với công tác phối giống trên chó, bao gồm xác định thời điểm phối giống, xác định mang thai, phát hiện tình trạng sinh lý sinh sản bất thường, nhất là động dục thầm lặng hoặc các vấn đề liên quan đến thụ tinh, dự đoán ngày sinh

Ngoài ra, xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo còn có thể phát hiện được một

số trường hợp rối loạn sinh sản và bệnh lý ở đường sinh dục của chó cái như xác định chu kỳ động dục bất thường, chẩn đoán viêm hoặc bướu ở đường sinh dục

2.4 LƯỢC DUYỆT MỘT SỐ CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI

Bảng 2.3 Tỉ lệ các loại tế bào biểu mô trong vết phết âm đạo của chó cái

theo khảo sát của một số tác giả

Giai đoạn

Tỉ lệ các loại tế bào biểu mô (%)

Tác giả (năm) Cận nền Trung gian Trung gian

– bề mặt Bề mặt

Nguyễn Phạm Minh Phương (2003)

Bảng 2.4 Tỉ lệ các loại tế bào biểu mô trong vết phết âm đạo

của chó Greyhound theo kết quả nghiên cứu của Hoàng Như Quỳnh (2005)

Giai đoạn n Tỉ lệ các loại tế bào biểu mô (%)

Cận nền Trung gian Trung gian – bề mặt Bề mặt

Tính đến ngày 30/05/2012 tổng đàn chó của trại là 614 con, trong đó:

 Chó giống (≥ 3,5 tuổi và không đua): 45 con, gồm 8 đực và 37 cái

 Chó con (< 1,5 tuổi): khoảng 254 con, gồm 135 đực và 119 cái

 Chó đua (≥ 1,5 tuổi): 266 con, gồm 163 đực và 103 cái

2.4.3.2 Giống chó Greyhound

 Nguồn gốc:

Đây là giống chó săn cổ xưa, một giống chó chạy nhanh nhất thế giới Chúng có thể đạt tới vận tốc 65 – 72 km/giờ Chó Greyhound có nguồn gốc từ giống chó Arabian Sloughi và những nhà buôn đã mang chúng đến Anh vào khoảng năm 900 trước công nguyên

Đã nhiều thế kỷ qua, người ta sử dụng chúng trong việc săn hươu nai và lợn lòi hoang dã Chó Greyhound có thể chộp con mồi, vật ngã chúng rồi lôi xềnh xệch không ngừng nghỉ Giống chó này cũng là kẻ thù muôn đời của thú nuôi trong nhà, đặc biệt là mèo và ngỗng Ngày nay, người ta sử dụng chúng chủ yếu trong những cuộc đua chó (ở nơi có những con thỏ máy để chúng săn đuổi) (Hình 2.5)

Hình 2.5 Con thỏ máy chạy phía trước và các chú chó lao theo

Khi không còn thi đấu nữa, chúng thường bị giết hoặc được giao nhiệm vụ giữ nhà và cứu hộ Ở vai trò mới này, chúng vẫn luôn thành công xuất sắc Một số tài năng của giống chó Greyhound: săn bắt, quan sát, giữ nhà và chạy đua…

 Ngoại hình: Giống chó Greyhound có ngoại hình đẹp, gọn gàng, cao ráo với

bộ ngực nở nang, xương sống cong và một sự mềm dẻo phi thường Đầu dài, mõm thon Hộp sọ rộng Đôi tai nhỏ, màu hồng, gấp về phía sau Mắt sậm, cổ dài tao

nhã Hai chân trước thẳng hoàn toàn Thân sau đầy cơ bắp, mạnh mẽ với phần thắt lưng thon Đuôi dài, hạ thấp và hơi cong lên một chút ở phần đầu của đuôi Bộ lông ngắn, mịn, có nhiều màu khác nhau, kể cả những mảng, đốm (Hình 2.6)

 Bản tính: Greyhound là giống chó nhạy cảm, hòa nhã và dịu dàng, can đảm

và trung thành nhưng có thể hơi bướng bỉnh Chúng rất thông minh nhưng lại rụt

rè, kín đáo trước cả chủ lẫn người lạ Nhìn chung, chó Greyhound có khả năng chịu đựng và không sủa nhiều Phần lớn chó Greyhound có bản năng săn mồi tự nhiên Chúng luôn săn đuổi bất kỳ vật gì với sự chuyển động rất nhanh

 Chiều cao, trọng lượng

Chó đực cao 71 – 100 cm, cân nặng 29 – 38 kg

Chó cái cao 68 – 71 cm, cân nặng 27 – 29 kg

Chiều dài thân: 80 – 150 cm

 Sức khỏe: Giống chó này có khuynh hướng bị sưng phù Chúng nhạy cảm với thuốc men, kể cả thuốc trừ sâu Nhịp tim 60 – 90 lần/phút và 120 – 240 lần/phút sau khi đua Nhịp thở 20 – 35 lần/phút và 50 – 90 lần/phút sau khi đua

 Điều kiện sống: Chó Greyhound dễ bị tác động trước cái lạnh, nhưng chúng chịu được thời tiết rét buốt lâu đến mức nào thì còn tùy thuộc vào bộ lông bên ngoài của chúng

 Đặc điểm sinh sản và sinh trưởng: Chu kỳ động dục của chó cái khoảng 6 tháng, trường hợp bất thường 1 – 2 năm Từ lúc đậu thai đến khi sinh con khoảng

63 – 72 ngày Số chó con mỗi lứa đẻ từ 3 – 13 con Chó con được 6 tuần tuổi thì cai sữa và cho ăn súp Đến 9 – 10 tháng tuổi bắt đầu huấn luyện và 15 – 16 tháng thì trưởng thành và có thể đua được

 Tuổi thọ: Giống chó Greyhound có tuổi thọ trung bình khoảng 10 – 12 năm

Hình 2.6 Các loại màu lông của chó Greyhound (Nguồn: Marnie)

Chuồng chó đẻ: chó trước khi đẻ một tuần cho đến khi sinh và nuôi con đến khi cai sữa được nuôi ở các chuồng này Gồm 3 dãy chuồng được thiết kế song song tạo sự thông thoáng, dễ vệ sinh, hạn chế lây lan mầm bệnh Mỗi chuồng có 8 ngăn, mỗi ngăn được thiết kế tránh mưa tạt gió lùa nhưng vẫn đảm bảo được sự thông thoáng

Chuồng chó con (> 3 tháng tuổi): ở tuổi này, chó vẫn sống theo từng bầy cùng một mẹ Chuồng có tổng cộng 12 dãy, mỗi dãy 8 ngăn Từng dãy đều có chỗ

ăn, ngủ, vệ sinh và sân tập chạy rộng 3 x 10 m

Chuồng chó đua: có 10 dãy chuồng, mỗi dãy có 36 ô, mỗi con được nhốt riêng một ô có chỗ ăn, ngủ (ngăn tường 2 x 2 m), phơi nắng và đi vệ sinh (ngăn lưới rào)

2.4.5 Huấn luyện và chăm sóc

Chó con được 9 – 10 tháng tuổi, đạt > 20 kg thì bắt đầu thành thục và cần được chuyển lên khu vực tập luyện có sân tập vận động dài 50 m Sau 4 tuần thì tập bơi hồ 12 – 13 tháng tuổi tập chạy 100 m đường thẳng và ôm cua đường chạy tròn Sau 2 tuần thì tập xuất phát từ hộc và mỗi tuần được tập chạy 2 lần ở đường tròn

14 tháng tuổi tập chạy cự ly dài hơn ở đường đua thật 5 – 6 tuần là có thể chính thức đua (15 – 16 tháng tuổi)

 Chế độ tập luyện:

Sáng 6 giờ: dọn vệ sinh chuồng, dẫn chó đi hoặc chạy bộ khoảng 1,5 – 2 km; hàng tuần, thứ tư dợt chạy đường dài (400 m) và thứ năm dợt đường tròn thì không phải dẫn chó đi bộ

8 giờ: chó được massage bằng cồn ngâm thuốc bắc

10 giờ: chăm sóc vết thương

14 giờ: cho chó bơi hồ có tạo dòng chảy khoảng 100 – 150 m

 Chế độ dinh dưỡng:

Chó đua: mỗi ngày ăn 2 bữa chính và phụ Bữa phụ lúc 9 giờ 30 sáng gồm thực phẩm khô, chuối trái và 100 gr thịt trâu loại II (10 % mỡ) Bữa chính lúc 16

giờ 15 gồm 450 – 500 gr thịt tùy theo trọng lượng chó, cộng thêm 300 – 350 gr thực phẩm khô trộn bằng nước hầm xương bò

Chó con đến tuổi tập luyện (9 – 10 tháng tuổi) đến khi đua (15 – 16 tháng tuổi) ăn như khẩu phần chó đua lớn

Chó cái giống: mỗi ngày ăn 2 bữa chính Bữa sáng lúc 9 giờ, khẩu phần gồm thực phẩm khô và cổ gà, mỗi thứ 100 gr (trường hợp không có cổ gà thì them 50 gr thực phẩm); bữa chiều lúc 3 giờ rưỡi, gồm thực phẩm khô và gạo lức, mỗi thứ 200

gr, thêm 3 gr calci và vitamin

Chó mẹ sau khi phối giống đậu thai thì khẩu phần ăn được tăng lên, sáng

100 gr thịt trâu loại II trộn với 200 gr thực phẩm khô và 150 gr cổ gà (nếu không có

cổ gà thì thêm 100 gr thịt trâu), thêm 3 gr calci và vitamin; chiều 300 gr thịt trâu,

200 gr thực phẩm khô, 70 gr gạo lức, 50 gr bí đỏ trộn với 5 ml dầu ăn, 3 gr calci, 1

gr vitamin và điện giải

Sau khi sinh con thì khẩu phần ăn của chó mẹ được tăng thành 3 bữa trong ngày để đủ sữa cho con bú: sáng 200 gr thịt trâu, 300 gr thực phẩm khô, 150 gr cổ

gà, 3 gr calcium và vitamin; chiều và tối, mỗi bữa 320 gr thịt, 220 gr thực phẩm khô, gạo lức, bí đỏ, calci và vitamin như khẩu phần lúc mang thai

Chó con sau khi sinh 1 tháng 15 ngày thì cai sữa, tập ăn súp và uống dặm thêm sữa bột hoặc sữa đậu nành

Chó con 4 tháng tuổi thì chuyển sang chuồng có sân tập chạy dài hơn với 3 –

5 con/chuồng và cho ăn ngày 2 bữa thực phẩm khô trộn với thịt bằm, bí đỏ và nước hầm xương bò vì chó đang phát triển nhanh

Bảng 2.5 Quy trình vaccine

Tuổi*

6 Vanguard Plus 5/CV-L Carré (Distemper virus)

Viêm gan truyền nhiễm (Adenovirus type 1)

Ho cũi chó (Adenovirus type 2) Phó cúm (Parainfluenza) Bệnh do Parvovirus, Leptospira, Coronavirus

Chương 3

NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP KHẢO SÁT

3.1 THỜI GIAN VÀ ĐỊA ĐIỂM KHẢO SÁT

Kính hiển vi quang học, máy chụp hình kỹ thuật số

Dụng cụ: phiến kính và tăm bông cotton

3.2.2 Hóa chất

Cồn 70o, methanol, dung dịch đệm phosphate pH 6,8

Dung dịch nhuộm Leishman

3.2.3 Thú khảo sát

Đối tượng khảo sát là các chó cái trưởng thành sinh dục tại trung tâm nuôi

và huấn luyện chó đua, gồm 2 nhóm:

(1) Nhóm chó cái không có biểu hiện lâm sàng bệnh lý đường sinh dục

(2) Nhóm chó cái có biểu hiện viêm đường sinh dục

3.3 NỘI DUNG KHẢO SÁT

3.3.1 NỘI DUNG 1: Khảo sát sự biến thiên tế bào biểu mô âm đạo trong các giai đoạn của chu kỳ động dục

3.3.1.1 Mục tiêu

Xác định tỉ lệ các loại tế bào biểu mô âm đạo trong từng giai đoạn của chu

kỳ động dục

3.3.1.2 Đối tượng và bố trí khảo sát

Các chó cái khỏe mạnh sắp động dục ở chuồng giống thuộc Trung tâm nuôi

và huấn luyện chó đua được khảo sát qua 3 bước:

Bước 1 Chẩn đoán lâm sàng

- Ghi nhận tuổi, thành tích sinh sản và tiền sử bệnh lý

- Quan sát các biểu hiện ở âm hộ và âm môn (mức độ trương phồng và dịch thải)

Bước 2 Thu thập vết phết

Sau khi kiểm tra lâm sàng, tiến hành thu thập mẫu vết phết âm đạo theo lịch trình 2 ngày 1 lần Các mẫu vết phết được liệt kê theo từng nhóm chó theo Bảng 3.1 Do điều kiện thực tế ở trại, các chó đang trong giai đoạn động dục chỉ được lấy vết phết cho đến ngày phối giống cho nên các vết phết ở giai đoạn sau động dục thu thập được rất ít (chỉ sau khi phối 7 ngày và sau khi xác nhận chó không mang thai sau 2 tháng kể từ ngày phối)

Bước 3 Xác định giai đoạn của chu kỳ động dục

Dựa vào đặc điểm của vết phết và tỉ lệ các loại tế bào biểu mô để ước định giai đoạn của chu kỳ động dục, đồng thời so sánh với dấu hiệu sinh lý bên ngoài của chó cái

Khảo sát được tiến hành trên 24 chó cái không có biểu hiện bệnh lý sinh sản

về lâm sàng với 428 mẫu vết phết âm đạo được phân chia theo nhóm tuổi (Bảng 3.1)

Bảng 3.1 Các nhóm chó khảo sát tại trung tâm nuôi và huấn luyện chó đua

(2) Khoảng thời gian từng giai đoạn trong chu kỳ động dục

3.3.2 NỘI DUNG 2: Ứng dụng xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo để xác định

thời điểm phối giống và mang thai trên chó Greyhound

3.3.2.1 Mục tiêu

So sánh tỉ lệ đậu thai trên chó Greyhound giữa 2 nhóm chó được phối giống

theo kết quả xét nghiệm tế bào âm đạo và phối giống theo kinh nghiệm của nhà

chăn nuôi Từ đó, đánh giá hiệu quả của công tác phối giống tại trung tâm

3.3.2.2 Đối tượng và bố trí khảo sát

Nội dung được khảo sát trên 16 chó cái ≥ 4 năm tuổi, không có dấu hiệu lâm

sàng biểu hiện bệnh lý sinh sản, phân làm 2 nhóm (Bảng 3.2):

(1) Nhóm I gồm 8 chó cái được phối giống theo kinh nghiệm của bác sĩ thú y trong

trung tâm nuôi và huấn luyện chó đua Bà Rịa Sau đó, đánh giá khả năng đậu thai

qua kết quả sinh con thực tế

(2) Nhóm II gồm 8 chó cái được phối giống theo kết quả phân tích tế bào âm đạo

khi tỉ lệ tế bào bề mặt ≥ 90 %

Cả 2 nhóm chó được cho phối trực tiếp với chó đực ngẫu nhiên trong 6 chó

đực 4 – 5 năm tuổi, mỗi chó phối 2 lần, cách nhau 1 ngày với cùng chó đực Đồng

thời, cả 2 nhóm chó được theo dõi vết phết mỗi ngày cho đến khi được phối giống

và tiếp tục lấy thêm một vết phết sau 7 ngày phối để đánh giá kết quả phối giống

3.3.2.3 Chỉ tiêu khảo sát

(1) Tỉ lệ đậu thai của từng nhóm chó khảo sát và tỉ lệ đậu thai chung

(2) Hiệu quả của xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo trong việc xác định thời điểm phối giống và mang thai

3.3.3 NỘI DUNG 3: Ứng dụng xét nghiệm tế bào biểu mô âm đạo để phát hiện một số trường hợp bệnh lý sinh sản

3.3.3.1 Mục tiêu

So sánh kết quả xét nghiệm tế bào âm đạo với chẩn đoán lâm sàng trong việc xác định một số bệnh lý trên đường sinh dục

Theo dõi liệu trình và kết quả điều trị các bệnh lý đường sinh dục

3.3.3.2 Đối tượng và bố trí khảo sát

Nội dung được tiến hành ngẫu nhiên trên 26 chó cái trưởng thành sinh dục trên chuồng giống Trong đó có 24 chó bình thường, không có biểu hiện bệnh lý và

2 chó được chẩn đoán lâm sàng có biểu hiện triệu chứng viêm đường sinh dục

3.3.3.3 Chỉ tiêu khảo sát

(1) Tỉ lệ chó có bệnh lý ở đường sinh dục

(2) Đặc điểm của vết phết âm đạo của chó viêm và bướu đường sinh dục

(3) Hiệu quả điều trị bệnh lý đường sinh dục: tình trạng và thời gian khỏi bệnh

3.4 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU

3.4.2 Xác định giai đoạn trong chu kỳ động dục dựa vào vết phết âm đạo

Các giai đoạn trong chu kỳ động dục của chó cái được dự đoán dựa vào các loại tế bào trong vết phết âm đạo theo kết quả nghiên cứu của Đỗ Hiếu Liêm (2006) (Bảng 3.3)

Bảng 3.3 Công thức tế bào biểu mô âm đạo qua các giai đoạn trong chu kỳ

động dục của chó cái (Nguồn: Đỗ Hiếu Liêm, 2006)

Giai đoạn n

Tỉ lệ các loại tế bào biểu mô âm đạo (%)

Cận nền Trung gian Trung gian –

bề mặt Bề mặt Trước động dục 974 7 ± 1 16 ± 1 22 ± 1 55 ± 1

Sau động dục 552 26 ± 1 15 ± 1 15 ± 1 44 ± 1

3.4.3 Phương pháp thu thập và phân tích mẫu vết phết âm đạo

Chú thích: CN: tế bào cận nền, TG: tế bào trung gian,

TG-BM: tế bào trung gian – bề mặt; BM: tế bào bề mặt; BC: bạch cầu

Hình 3.1 Các tế bào biểu mô trong vết phết âm đạo (Nguồn: Đỗ Hiếu Liêm, 2006)

Phương pháp thu thập mẫu và nhuộm vết phết được thực hiện theo Bowen (2001); Eilts (2006)

Phương pháp xác định các loại tế bào biểu mô dựa theo nghiên cứu của Đỗ Hiếu Liêm (2006)(Hình 3.1)

3.4.3.1 Thu thập vết phết

Hình 3.2 Cách thực hiện vết phết âm đạo (Nguồn: Eilts, 2006)

Bước 1: để thú đứng, vệ sinh vùng âm hộ bằng cồn 70 o

Bước 2: một tay dùng 2 ngón (ngón trỏ và ngón giữa) mở môi âm hộ, kéo

âm hộ về phía lưng, tay còn lại cầm tăm bông hướng về phía lưng từ phía sau, chếch một góc 30o (Hình 3.2a) đưa vào âm đạo sâu khoảng 5 – 10cm Nếu đầu tăm bông bị khựng lại giữa chừng thì thay đổi góc chếch về phía lưng để tiếp tục đưa sâu vào âm đạo (Hình 3.2b và 3.2c) Ấn nhẹ đầu tăm bông vào thành âm đạo và se

2 – 3 vòng, rồi từ từ rút tăm bông ra Lưu ý: nếu tăm bông đưa vào không đủ sâu thì chỉ lấy được tế bào ở tiền đình cho nên sự sừng hóa tế bào sẽ không chính xác; hoặc nếu nhầm lẫn đưa tăm bông vào bàng quang thì vết phết sẽ không có sự sừng hóa

Bước 3: đặt đầu tăm bông lên bề mặt lame kính đã được ký hiệu, vừa se tròn vừa kéo dài thành vệt (không trượt hoặc chà xát) (Hình 3.2d), tiếp tục thực hiện vết phết thứ 2 song song vết phết thứ nhất trên cùng một phiến kính với cùng tăm bông (Hình 3.2e)

Đọc kết quả dưới kính hiển vi với độ phóng đại 400 lần Các loại tế bào biểu

mô được ghi nhận bằng cách đếm theo hình zíc zắc trong tổng số 100 tế bào biểu

mô Mỗi mẫu được đếm 2 lần, lấy số trung bình

3.4.4 Phương pháp nghiên cứu, xử lý số liệu và phân tích thống kê

- Phương pháp nghiên cứu theo kiểu cắt ngang

- Kết quả được trình bày dưới dạng X ± SE Tỉ lệ tế bào biểu mô âm đạo được làm tròn mà không lấy số thập phân

- Tỉ lệ phần trăm các loại tế bào biểu mô âm đạo được biến đổi thành dạng arsin (a 0 , 5 )để so sánh thống kê

- So sánh số lượng các loại tế bào biểu mô âm đạo ở từng giai đoạn trong chu kỳ động dục bằng phân tích phương sai (ANOVA) theo mẫu hoàn toàn ngẫu nhiên 1 yếu tố (nhóm tuổi)

Các số liệu được xử lý và phân tích thống kê theo tài liệu “Thống kê ứng dụng trong nghiên cứu thú y” (Trịnh Công Thành, 2003) bằng phần mềm Minitab version 16