Bao cao de cuong tuong duong sinh hoc MAU Ibuprofen

mỤc lỤ MỤC LỤC ……………………………………………………………… i DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT … ……………………………………………… iii DANH MỤC CÁC BẢNG ……………………………………………………… iv DANH MỤC CÁC HÌNH …………………………………………………………iv ĐẶT VẤN ĐỀ …………………………….……………………………………… CHƯƠNG TỔNG QUAN TÀI LIỆU ………………………………………… 1.1 IBUPROFEN……………………………………………………………… 1.1.1 Lược sử Ibuprofen……………………………………………………….4 1.1.2 Mô tả……… ………………………………………………………… 1.1.3 Dược động học …………………………………………………………5 1.1.4 Dược lực học….…………………………………………………………5 1.1.5 Chỉ định 1.1.6 Chống định .7 1.1.7 Liều lượng cách dùng 1.1.8 Thận trọng .8 1.1.9 Tương tác thuốc .8 1.1.10 Quá liều xử trí 1.1.11 Tác dụng không mong muốn 1.2 TƯƠNG ĐƯƠNG SINH HỌC 1.3 MỘT SỐ NGHIÊN CỨU TĐSH IBUPROFEN TRÊN THẾ GIỚI ……….15 CHƯƠNG ĐỀ CƯƠNG NGHIÊN CỨU 16 2.1 ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU (THUỐC THỬ NGHIỆM VÀ THUỐC ĐỐI CHIẾU) .16 2.2 CƠ SỞ NGHIÊN CỨU, NGƯỜI NGHIÊN CỨU 17 2.3 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 17 2.4 NGƯỜI TÌNH NGUYỆN 20 2.4.1 Tiêu chuẩn chọn lựa .20 2.4.2 Tiêu chuẩn loại trừ .21 2.5 ĐIỀU KIỆN QUẢN LÝ .22 2.6 LẤY MẪU, LƯU MẪU .23 2.7 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH – THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 23 2.7.1 Khảo sát tính tương đương dược học 23 2.7.2 Thử nghiệm độ hòa tan in vitro .24 2.7.3 Thử nghiệm TĐSH in vivo phương pháp dược động học 26 2.7.4 Phương pháp thẩm định .28 2.8 THỐNG KÊ, XỬ LÝ KẾT QUẢ 29 2.8.1 Xác định thông số dược động học 29 2.8.2 Xử lý thống kê đánh giá điều kiện thử nghiệm đánh giá tương đương sinh học 29 2.9 ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU 31 2.9.1 Trình hội đồng đạo đức 31 2.9.2 Trình hội đồng khoa học công nghệ .32 2.10 KẾ HOẠCH THỰC HIỆN NGHIÊN CỨU 32 TÀI LIỆU THAM KHẢO .35 PHỤ LỤC Mẫu số Bản cam kết……………………………………………………… PL-1 Mẫu số Đơn xin đánh giá đạo đức nghiên cứu …………………… PL-2 Mẫu số Giấy chấp thuận tình nguyện tham gia nghiên cứu………………… PL-3 Mẫu số Báo cáo kiểm tra sức khỏe tình nguyện viên trước thử nghiệm………………………………………………………………………… PL-5 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT STT Chữ tắt Từ nguyên Ý nghĩa AUC Area under the curve Diện tích đường cong ANOVA Analysis of Variance Phân tích phương sai Cmax The maximum concentration Nồng độ cực đại GCP Good Clinical Practice Thực hành lâm sàng tốt GLP Good Laboratory Practice Thực hành phòng thí nghiệm tốt HPLC High performance chromatography Ke RSD Relative Standard Deviation Độ lệch chuẩn tương đối SD Standard Deviation Độ lệch chuẩn 10 Tmax 11 T1/2 Half-life 12 US-FDA United State – Food and Drug Cơ quan quản lý thực dược Administration phẩm Hoa Kỳ 13 EMEA European Medicines Evaluation Cơ quan thẩm định thuốc Châu Agency Âu 14 TĐSH Tương đương sinh học 15 NTN Người tình nguyện liquid Sắc ký lỏng hiệu cao Hằng số tốc độ thải trừ Thời gian đạt nồng độ tối đa Thời gian bán thải DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Mơ hình thiết kế chéo trình tự, thời kỳ 18 Bảng 2.2 Kế hoạch thực 20 Bảng 2.3 Kế hoạch thực thử nghiệm tương đương sinh học 32 DANH MỤC CÁC HÌNH Hình 1.1 Cơng thức phân tử Ibuprofen Hình 1.2 A B tương đương sinh học 10 Hình 1.3 A B không tương đương sinh học .10 ĐẶT VẤN ĐỀ Dược phẩm hàng hóa đặc biệt dùng để phòng, chữa bệnh, thay đổi chức sinh lý người Chính ảnh hưởng trực tiếp tới thể nên nhà khoa học nhà quản lý cần giải điều chỉnh mối quan hệ hiệu lực điều trị giá cho hợp lý, an toàn, hiệu quả, kinh tế Tương đương sinh học (TĐSH) vũ khí sắc bén để giải tốt mối quan hệ này, thể quyền lợi nhân dân; vừa có ý nghĩa khoa học, vừa hành lang pháp lý cho nhà chuyên môn quản lý thực nghiệp chăm sóc bảo vệ sức khỏe nhân dân TĐSH chứng khoa học chứng minh thuốc generic (thuốc phiên bản) có tác dụng tương tự biệt dược gốc (thuốc phát minh) Biệt dược gốc thuốc phát minh đầu tiên, xuất thị trường với nhãn hiệu quyền bảo hộ đăng ký; thuốc tiêu tốn nhiều tiền của, công sức, thời gian trình nghiên cứu, phát triển; đó, giá thành thường cao Khi hết hạn, công ty khác quyền chép công thức tạo loại thuốc tương tự; loại thuốc mang thương hiệu khác khơng có quyền, gọi chung thuốc generic; thuốc generic đầu tư nghiên cứu hoạt chất nên giá thành thường thấp biệt dược gốc nhiều lần, nhiên với nguy khả trị liệu bị suy giảm Khi thực tế, nhiều thuốc generic xuất nhà điều trị sử dụng thấy có số thuốc phiên không cho tác dụng điều trị hiệu lâm sàng giống biệt dược gốc, thuốc generic tương đương bào chế (tức có cơng thức, hàm lượng dược chất, dạng bào chế, cách dùng, liều lượng) với biệt dược gốc lại không đạt hiệu điều trị thuốc biệt dược gốc thể Trong khứ, tai biến xảy điều trị liên quan tới khác biệt sinh khả dụng (đó trường hợp digoxin, phenytoin, primidon) chứng cho thấy cần thiết phải xác định hiệu cuả dạng thuốc việc chuyển giao dược chất từ dạng bào chế tới tuần hoàn chung tới nơi tác động Để đảm bảo chất lượng thuốc đạt độ tin cậy cần thiết thị trường dược phẩm, thuốc generic cần phải chứng minh tính hiệu an tồn điều trị thử nghiệm chứng minh tương đương sinh học với biệt dược gốc TĐSH vấn đề không xã hội có cơng nghiệp dược phát triển như: Mỹ, Úc, Cộng đồng Châu Âu, Đây thử nghiệm bắt buộc tất thuốc generic trước lưu hành Trong năm gần đây, công nghiệp dược Việt Nam có hội lớn thị trường dược phẩm nước thị trường tăng trưởng mạnh khu vực châu Á Được biết, thị trường dược phẩm Việt Nam có giá trị 4.2 tỷ USD tính đến năm 2015, tốc độ tăng trưởng giai đoạn 2010-2015 17-20% đến năm 2017, tốc độ tăng trưởng thị trường cao 17% Cơ cấu thị trường thuốc chủ yếu thuốc generic Năm 2014, thuốc generic chiếm tới 51,2% biệt dược gốc chiếm khoảng 22,3% lượng thuốc lưu hành, đến thuốc generic chiếm tới 70% thị phần (theo số liệu kết nghiên cứu Vietnam Report hãng nghiên cứu thị trường IBM) Với tảng đó, dựa Thông tư 22/2009/TT-BYT 08/2010/TT-BYT quy định việc Hướng dẫn thử nghiệm TĐSH đăng ký thuốc Bộ Y tế, ngày có nhiều cơng ty tiến hành việc thử nghiệm TĐSH đem lại nhiều lợi ích: - Các nhà sản xuất tự khẳng định chất lượng đích thực cho sản phẩm mình; khuyến khích cơng ty đầu tư sản xuất, phát triển thuốc generic nội địa (sẽ mạnh Việt Nam thời kì hội nhập) - Nhà quản lý có chứng hiệu điều trị tính an tồn thuốc xem xét, thẩm định cấp phép lưu hành - Tạo hành lang pháp lý sở chuyên môn để bác sĩ yên tâm kê đơn thuốc generic cho bệnh nhân, đẩy mạnh vận động “Người Việt Nam ưu tiên dùng hàng Việt Nam” - Xuất thuốc generic doanh nghiệp Việt Nam nước ngoài, nâng cao vị thể Việt Nam thị trường quốc tế - Phát triển Dịch vụ kiểm nghiệm - Người dân tiếp cận với thuốc đạt hiệu quả, chất lượng thuốc biệt dược gốc giá rẻ hơn, phù hợp với điều kiện kinh tế thu nhập họ Ibuprofen dược chất thuộc nhóm II hệ thống phân loại sinh dược học BCS (Biopharmaceutical Classification System), có tính chất khó tan, có sinh khả dụng biến thiên theo kỹ thuật bào chế, nên việc đánh giá sinh khả dụng TĐSH cho chế phẩm cần thiết cấp phép lưu hành Do đó, chuyên đề tiến hành đánh giá sinh khả dụng thuốc Ibuprofen Stada 600mg (Ibuprofen 600 mg), viên nén bao phim, quy cách: vỉ x 10 viên, nhà sản xuất: Chi nhánh công ty liên doanh TNHH Stada – Việt Nam, số đăng ký: VD-26564-17, so sánh với thuốc Brufen Forte® (Ibuprofen 600 mg), viên nén bao phim, quy cách: 10 vỉ x 10 viên, số đăng ký: VN-14886-12, nhà sản xuất: công ty PT Abbott Indonesia, trực thuộc Abbott Laboratories – Mỹ * Mục tiêu tổng quát: Xây dựng qui trình đánh giá TĐSH in vivo phương pháp định lượng dược chất huyết tương (phương pháp dược động học) viên nén bao phim Ibuprofen Stada 600mg (Ibuprofen 600 mg) công ty liên doanh TNHH Stada – Việt Nam sản xuất nước so với thuốc đối chiếu chế phẩm ngoại nhập, viên nén bao phim Brufen Forte® (Ibuprofen 600 mg) công ty PT Abbott Indonesia sản xuất; * Mục tiêu cụ thể: So sánh Tmax, Cmax, AUC viên nén bao phim Ibuprofen Stada 600mg công ty liên doanh TNHH Stada – Việt Nam với thuốc đối chiếu viên nén bao phim Brufen Forte® cơng ty PT Abbott Indonesia uống liều đơn (1 viên 600 mg) người tình nguyện bình thường tình trạng đói Trong đó: - Tmax: Thời gian ứng với nồng độ thuốc máu cực đại đạt - Cmax: Nồng độ thuốc máu cực đại ứng với thuốc - AUC: Diện tích đường cong thuốc Kết thu thể bảng sau: Thơng số Ibuprofen Stada 600mg Brufen Forte® Tmax (giờ) Cmax (ng/ml) ± S.D % so với thuốc đối chiếu Khoảng tin cậy 90% AUC0- inf ±S.D.(ng.h/mL) % so với thuốc đối chiếu Khoảng tin cậy 90% Từ số liệu thống kê trên, rút kết luận TĐSH in vivo viên nén bao phim Ibuprofen Stada 600mg công ty liên doanh TNHH Stada – Việt Nam với thuốc đối chiếu viên nén bao phim Brufen Forte® cơng ty PT Abbott Indonesia CHƯƠNG 1.1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU IBUPROFEN [3] 1.1.1 Lược sử Ibuprofen [5] Ibuprofen bắt nguồn từ propionic axit Tập đồn Boots nghiên cứu năm 1960 Nó Stewart Adams đồng John Nicholson, Andrew RM Dunlop, Jeffery Bruce Wilson & Colin Burrows phát cấp sáng chế năm 1961 Thuốc đưa vào điều trị cho viêm đa khớp dạng thấp Anh năm 1969, Hoa Kỳ năm 1974 1.1.2 Mô tả [2] Ibuprofen thuốc chống viêm không steroid (NSAID), loại NSAIDs có dẫn xuất từ acid propionic đưa vào sử dụng [7] Ibuprofen có tác dụng giảm đau, hạ sốt chống viêm Hình 1.1 Cơng thức phân tử Ibuprofen - Công thức phân tử: C13H18O2 - Tên khoa học: (RS)-2-(4-(2-methylpropyl)phenyl)propanoic acid - Khối lượng phân tử: 206.28 g/mol - Tính chất: Viên nén bao phim, bề mặt nhẵn bóng, khơng nứt cạnh, khơng dính tay - Nhiệt độ nóng chảy: 75 – 780C - Ibuprofen phân tử chiral (có đồng phân quang học), hai đồng phân enantiomers (R)-ibuprofen (S)-ibuprofen Trong thể người, có chất (S)-ibuprofen hoạt động, chí chuẩn bị dùng hỗn hợp racemic, (R) -ibuprofen chuyển thành dạng (S)-ibuprofen [14], [10] 1.1.3 Dược động học - Ibuprofen hấp thu tốt ống tiêu hóa, hấp thu nhanh sau uống Nồng độ tối đa thuốc huyết tương đạt sau uống từ đến Thuốc gắn nhiều với protein huyết tương T1/2 thuốc ngắn, khoảng - Ibuprofen đào thải nhanh qua nước tiểu, 90% liều hấp thụ tiết qua nước tiểu chất chuyển hóa hợp chất chúng, chất chuyển hóa chủ yếu hợp chất hydroxyl hóa cacboxyl hóa (1% dạng không đổi, 14% dạng liên hợp) [8], [13], [16] 1.1.4 Dược lực học - Như chất ức chế cyclooxygenase (COX), làm thay đổi chức tiểu cầu kéo dài thời gian chảy máu [6], [8] - Cơ chế tác dụng chống viêm ibuprofen ức chế tổng hợp chất trung gian hóa học gây viêm, đặc biệt prostaglandin; cách ức chế không chọn lọc COX-1 COX-2, enzyme chuyển đổi số acid béo thành prostaglandin sau loạt phản ứng dây chuyền Prostaglandins gây tăng nhạy cảm với sốt, đau, tăng lưu lượng máu viêm Và Ibuprofen ngăn tạo prostaglandin, thromboxan sản phẩm khác cyclooxygenase, làm giảm triệu chứng ảnh hưởng chúng gây nên [15], [18], [20] - Ngồi ra, thuốc đối kháng hệ enzyme phân hủy protein, ngăn cản trình biến đổi protein làm bền vững màng lysozome đối kháng tác dụng chất trung gian hoạt hóa bradykinin, serotonin, histamine, ức chế hóa hướng động bạch cầu, ức chế bạch cầu tới tổ chức bị viêm - Cơ chế tác dụng giảm đau Ibuprofen thuốc giảm đau chống viêm khơng steroid khác, chúng có tác dụng giảm đau nhẹ vừa cách làm giảm tổng hợp prostaglandin F2, vừa làm giảm tính cảm thụ dây thần kinh cảm giác với chất gây đau phản ứng viêm bradykinin, serotonin, … - Ibuprofen ức chế tổng hợp prostacyclin thận gây nguy ứ nước làm giảm dòng máu tới thận Cần phải để ý đến điều người bệnh bị suy thận, suy tim, suy gan bệnh có rối loạn thể tích huyết tương - Tác dụng chống viêm Ibuprofen xuất sau hai ngày điều trị Ibuprofen có tác dụng hạ sốt mạnh aspirin, indomethacin Tác dụng chống tập kết tiểu cầu yếu aspirin Thuốc có tác dụng chống viêm tốt có tác dụng giảm đau tốt điều trị viêm khớp dạng thấp thiếu niên 1.1.5 Chỉ định - Điều trị triệu chứng gây đau như: đau đầu, đau răng, đau hệ thống quan vận động, đau bụng kinh - Điều trị triệu chứng bệnh lý gây sốt - Điều trị dài hạn triệu chứng trường hợp thấp khớp mạn tính, số bệnh lý hư khớp gây đau tàn phế - Điều trị ngắn hạn triệu chứng cấp đau khớp, đau vai, viêm gân cơ, đau thắt lưng đau rễ thần kinh nặng - Người tình nguyện phải khơng ăn 10 giờ, uống thuốc với 240 ml nước, sau ăn sáng với suất ăn tiêu chuẩn Không uống nước trước sau dùng thuốc - Người tình nguyện khơng dùng thức ăn có cồn, sản phẩm có chứa cafein, xanthin (chè, café, soda có chứa cafein, socola, thức uống có xanthin,…), thuốc kháng acid chứa Nhơm hydroxyd, Magne hydroxyd 48 trước dùng thuốc lấy xong mẫu máu cuối - Các bữa ăn ngày phải giống nhau, theo tiêu chuẩn - Người tình nguyện khơng tham gia hoạt động nặng thể chất khoảng 48 trước uống thuốc sau lấy xong mẫu máu cuối Mọi sinh hoạt, vận động quản lý để tránh ảnh hưởng tạo khác biệt hòa tan hấp thu thuốc - Giám sát hoạt động người tình nguyện trình uống thuốc lấy mẫu Vận động nhẹ nhàng nằm nghỉ thời gian lấy mẫu để đảm bảo an toàn Nếu có triệu chứng buồn ngủ đau đầu nhẹ lấy máu, người tình nguyện nên ngồi nằm yên cảm thấy bình thường Nếu bị hạ đường huyết, cho người tình nguyện uống 100-200 ml dung dịch glucose 20 % Thông báo cho nghiên cứu viên thấy triệu chứng bất thường trình uống thuốc, lấy mẫu 2.6 LẤY MẪU, LƯU MẪU - Dùng kim vô khuẩn luồn vào tĩnh mạch cẳng tay NTN cố định cho khơng cản trở hoạt động bình thường cẳng tay Lấy máu bơm tiêm cho vào ống nghiệm có sẵn chất chống đơng (EDTA, 10 mg/ống) - Tổng cộng 38 mẫu máu lấy từ tĩnh mạch cánh tay vào thời điểm: (trước uống thuốc), 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0; 9,0; 11,0; 13,0; 15,0; 18,0; 21,0; 24,0 sau dùng thuốc giai đoạn, lần lấy ml máu - Trong vòng 20 phút sau lấy máu, mẫu máu ly tâm tốc độ 5500 vòng/phút phút, tách lấy huyết tương đem bảo quản -20 0C tiến hành phân tích 23 - Các ống đựng mẫu phải dán nhãn ghi rõ thơng tin: số hiệu người tình nguyện, số hiệu mẫu thuốc uống, ngày lấy mẫu - Ngày thời gian thực tế uống thuốc, lấy máu phải ghi chép đầy đủ vào hồ sơ thử nghiệm - Mẫu dạng thử dạng đối chiếu phải lưu đủ (khoảng 200 đơn vị liều) năm sau thuốc cấp phép 2.7 PHƯƠNG PHÁP PHÂN TÍCH – THẨM ĐỊNH PHƯƠNG PHÁP 2.7.1 Khảo sát tính tương đương dược học Khảo sát chất lượng thuốc thử thuốc đối chứng theo tiêu chuẩn chất lượng nhà sản xuất: - Tính chất: Nhận xét cảm quan, màu sắc, hình dạng viên nén bao phim Ibuprofen - Định tính: A Lắc lượng bột viên nghiền mịn tương ứng khoảng 0,40 g ibuprofen với 15 ml aceton (thuốc thử), lọc để bay dịch lọc tự nhiên tới khô Phổ hồng ngoại cắn thu phải phù hợp với phổ hồng ngoại ibuprofen chuẩn B Cắn thu trên, sau kết tinh lại với ether dầu hỏa (thuốc thử) (có khoảng sơi từ 40 °c đến 60 °C), có nhiệt độ nóng chảy khoảng 750C đến 780C - Độ đồng khối lượng - Định lượng: phương pháp sắc ký lỏng, hàm lượng hoạt chất thuốc thử thuốc đối chứng chênh lệch không % 2.7.2 Thử nghiệm độ hòa tan in vitro [4], [11] Mục đích: Xác định TĐSH in vitro Thử nghiệm hòa tan thực mơi trường có pH 1,2; 4,5; 6,8 cho thuốc thử thuốc đối chiếu, môi trường thử 12 đơn vị/1 thuốc Tiến hành song song điều kiện môi trường hòa tan, thể tích hòa tan, thời điểm lấy mẫu, nhiệt độ, thiết bị 24 Phương pháp thường dùng để đánh giá mức độ tương tự biểu đồ hòa tan thuốc thử thuốc đối chứng phương pháp so sánh phần trăm hòa tan trung bình thời điểm xác định, biểu thị hệ số tương đồng tính sau: F2 = 50 log [ + (1/n) #t= 1n (Rt - Tt)2]-0,5 100 Trong đó: F2 hệ số tương đồng, n số thời điểm lấy mẫu, R(t) độ hòa tan trung bình (%) thuốc đối chứng T(t) độ hòa tan trung bình (%) thuốc thử thời điểm t Yêu cầu - Không lấy q giá trị có độ hòa tan 85% cho thuốc để tính hệ số F2 - Độ lệch chuẩn tương đối giá trị độ hòa tan thời điểm phải nhỏ 10%, trừ điểm cho phép 20% - Giá trị f2 từ 50 đến 100 cho thấy thuốc thử thuốc đối chứng có biểu đồ hòa tan tương tự Nếu mơi trường thử nghiệm nào, hai thuốc có độ hòa tan 85% sau 15 phút thử nghiệm kết luận hai thuốc có biểu đồ hòa tan tương tự mà khơng cần tính f2 Tiến hành: Điều kiện thử nghiệm: - Dụng cụ thử: kiểu cánh khuấy, tốc độ: 50 vòng/ phút - Mơi trường: thực môi trường + Môi trường 1: đệm pH 1,2 : 900ml dung dịch HCl 0,1N + Môi trường 2: đệm pH 4,5: 900ml dung dịch đệm (2,99g NaC2H3O2.3H2O (1,8g NaC2H3O2 khan)+14ml CH3COOH 2N (1,956ml acid acetic băng) / 1000ml nước) + Môi trường 3: đệm pH 6,8: 900ml dung dịch đệm (6,8g KH 2PO4 + 112 ml NaOH 0,2N / 1000 ml nước) - Thời điểm lấy mẫu: 5, 10, 15, 30, 45, 60 phút - Cách tiến hành: 25 * UV – Vis: [2] Tại thời điểm lấy mẫu, hút 20ml, lọc qua giấy lọc Lọc qua màng lọc 0,45µm, bỏ dịch lọc đầu Pha lỗng dịch lọc với mơi trường hòa tan (nếu cần) đo độ hấp thụ dung dịch thu bước sóng 221 nm Tính hàm lượng ibuprofen, C13H18O2, hòa tan tính theo A (1 %, cm) Lấy 449 giá trị A (1 %, cm) bước sóng cực đại 221 nm [2], [22] * Phương pháp định lượng: Sắc ký lỏng [2] - Pha động: Dung dịch acid phosphoric 0,01 M - acetonitril (60 : 40) - Điều kiện sắc ký: + Cột thép không gỉ (25 cm x 4,6 mm) nhồi pha tĩnh C (5  m 10  m) + Detector quang phổ tử ngoại đặt bước sóng 224 nm + Tốc độ dòng: 1,5 ml/phút + Thể tích tiêm: 20  l 2.7.3 Thử nghiệm TĐSH in vivo phương pháp dược động học [9] - Tạo mẫu huyết tương có chứa Ibuprofen - Xây dựng phương pháp định lượng: Nồng độ Ibuprofen huyết tương định lượng phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao * Hóa chất: - Ibuprofen (R / S), Fenoprofen racemic (R / S) cung cấp Sigma-AldrichFlucka, Milan (Ý) - Các thuốc thử dung mơi, tất loại phân tích, mua từ Carlo Erba, Turin (Ý) Aldrich, Milan (Ý) - Pha động: Acetonitrile-axit nước-acetic-triethylamine (60: 40: 0.1: 0.02 ) (dung tích) - Dung dịch triethylamine 50 mmol (TEA) chuẩn bị acetonitrile acid acetic băng - Các dung dịch mmol ethyllorofomate (ECF) ethanolamine (EOA) 1:40 v/v chuẩn bị acetonitrile 26 - Dung dịch S - (-) 1- (1-naphthyl) ethylamine (S-NEA), 0.5 mL L, chuẩn bị acetonitrile-TEA (8:2, v/v) * Chuẩn bị dung dịch chuẩn dung dịch chuẩn nội: - Những chất hòa tan đồng acetonitrile, lấy dung dịch 0,2 mg / ml để làm dung dịch gốc - Dung dịch chuẩn: Hòa tan ibuprofen dung dịch gốc acetonitrile chuẩn bị trên, cách pha loãng nối tiếp chúng đến dung dịch có nồng độ xác khoảng 50 µg/ml đến 0,1 µg/ml - Dung dịch chuẩn nội: Hòa tan Fenoprofen chuẩn tương tự dung dịch chuẩn, dung dịch có nồng độ xác khoảng µg/ml * Trang thiết bị điều kiện sắc ký: - Ibuprofen R/S chất chuẩn nội Fenoprofen R/S tách cột sắc ký Symmetry C18 (4.6 mm x 150 mm,  m) với cột Sentry (4.6 x 20mm,  m), Water, Milan (Italy), hoạt động nhiệt độ phòng Rửa giải thực theo điều kiện gradient Pha động (pH = 5), bao gồm: Acetonitril : nước : acid acetic : triethylamine (60 : 40 : 0.1 : 0.02) (dung tích), sau chạy 20 phút thay đổi thành 100% acetonitrile chạy phút, hệ thống cân pha động phút trước bơm mẫu Tốc độ dòng, lưu lượng phân phối máy bơm Jasco 980-PU 1,6 ml/phút dịch rửa giải theo dõi bước sóng kích thích 280nm bước sóng phát xạ 320nm máy dò quang phổ kế Jasco 821-FP Tiêm mẫu 20  l thực máy lấy mẫu tự động Jasco 851-AS Dưới điều kiện này, thuốc rửa giải khoảng 9,50 phút Fenoprofen R (chất chuẩn nội), 14.40 phút Ibuprofen S (+) 16.50 phút Ibuprofen R (-) * Chuẩn bị dung dịch mẫu thử: - Việc chuẩn bị mẫu thực theo Lemko et al (1993) với sửa đổi nhỏ Để 0.5 mL huyết tương mẫu bổ sung mg / mL chất chuẩn nội 200 ml/ M axit sulfuric Sau lắc vortex giây, thêm vào mL dung dịch isooctane isopropyl (95: v/v) lắc vortex 15 giây, sau ly tâm 10 phút 1800 g Toàn 27 lớp hữu chuyển sang ống bốc đến khơ dòng nitơ bồn nước 400C Phần dư tái hòa tan 300 mL TEA sau trộn, 50 mL ECF thêm vào Sau lắc vortex 15 giây, thêm vào 25 mL S-NEA Hỗn hợp lắc vortex 40 giây, để yên phút 25 mL EOA thêm vào để ngăn chặn ECF phản ứng thêm Dung dịch chuyển sang lọ thủy tinh hổ phách cho phun tự động vào hệ thống HPLC Nitơ: 9,8 l/phút, áp suất khí phun: 35 psi Điện thế: 4000 V 2.7.4 Phương pháp thẩm định - Thẩm định phương pháp phân tích theo tiêu qui định dược điển hướng dẫn thẩm định phương pháp phân tích dịch sinh học US – FDA - Các tiêu thẩm định bao gồm: + Tính tương thích hệ thống + Tính đặc hiệu (chọn lọc): thử mẫu huyết tương trắng huyết tương NTN thời điểm trước uống thuốc, có tính đặc hiệu với Ibuprofen chuẩn nội Fenoprofen + Đường chuẩn khoảng tuyến tính + Giới hạn định lượng (LLOQ) + Độ xác (độ lệch so với giá trị thực) ngày khác ngày + Độ (độ lặp lại lần phân tích, biểu thị hệ số biến thiên, CV) ngày khác ngày + Tính ổn định thuốc huyết tương nhiệt độ phòng giờ, -20 0C 60 ngày, sau chu kỳ đông – rã đông sau xử lý mẫu Độ ổn định dung dịch chuẩn gốc nội chuẩn gốc ngày thời gian dài + Hiệu suất chiết (% so với mẫu chuẩn pha pha động, không qua giai đoạn chiết tách) 28 2.8 THỐNG KÊ, XỬ LÝ KẾT QUẢ [1], [4] 2.8.1 Xác định thông số dược động học Các thông số dược động học người tình nguyện thử nghiệm hai loại thuốc cần trình bày dạng bảng để dễ so sánh Các thông số dược động học Ibuprofen người thử nghiệm cần xác định Cmax, Tmax, AUC0-t, AUC0-, Ke, t1/2 Cách xác định thông số này: - Nồng độ thuốc tối đa (Cmax) xác định trực tiếp giá trị đo - Diện tích đường cong đường biểu diễn nồng độ theo thời gian từ đến t (AUC0-t) với t thời điểm cuối định lượng được, xác định theo quy tắc diện tích hình thang: C C  x t t   AUC  � i i 1 i 1 i t n 1 i 0 Với Ci nồng độ thuốc thời điểm lấy mẫu ti Diện tích đường cong đường biểu diễn nồng độ theo thời gian từ đến ∞: Cn ke Với Cn nồng độ thuốc thời điểm lấy mẫu cuối AUC0-∞ = AUC0-t + ke số tốc độ thải trừ Đơn vị AUC là: μg/l.h; μg/ml.h; ng/ml.h hay μg.h.ml-1 - Thời gian đạt nồng độ tối đa (T max): xác định trực tiếp giá trị đo Tính thống kê đánh giá tương đương sinh học theo hướng dẫn qui định US-FDA 2.8.2 Xử lý thống kê đánh giá điều kiện thử nghiệm đánh giá tương đương sinh học - Sử dụng phần mềm Microsoft Excel 2010 để xử lý thống kê liệu 29 - Dùng phép phân tích phương sai (ANOVA) để đánh giá ảnh hưởng yếu tố thử nghiệm trình tự, thời kỳ, đối tượng xử lý (thuốc) Nếu biến thiên lớn, khác giá trị trung bình bị che lấp gây nguy kết luận sai - Thống kê mơ tả (giá trị trung bình cộng (arithmetic mean), giá trị trung bình nhân (geometric mean), độ lệch chuẩn (Standard Deviation), Độ phân tán (RSD), giá trị nhỏ (Minimum), Giá trị lớn (Maximum) tính cho thông số dược động học thuốc thử thuốc đối chứng Các giá trị SD, RSD tình giá trị trung bình cộng Đồ thị biểu diền nồng độ thuốc huyết tương theo thời gian thể trình bày thang tuyến tính thang logarit - Phân tích phương sai ANOVA thông số C max, AUC0-t, AUC0- (giá trị chuyển sang dạng logarit) thuốc thử thuốc đối chứng, đánh giá khác biệt cá thể, thuốc, giai đoạn, trình tự - So sánh giá trị trung bình trắc nghiệm “two one sided t-test”, so sánh khoảng tin cậy 90% tỷ lệ hai giá trị trung bình thơng số dược động học thuốc thử thuốc đối chiếu Công thức tính khoảng tin cậy Cl 90%: 2MSE Cl = (µT - µR) ± t(0,1;n) x N Trong đó: µT: trung bình từ mẫu dùng thuốc thử µR: trung bình từ mẫu dùng thuốc đối chiếu t(0,1;n): kết tra từ bảng Student với mức ý nghĩa 0,1 n bậc tự MSE: bình phương sai số trung bình thu từ kết phân tích ANOVA N: Tổng số người tình nguyện tham gia đánh giá tương đương sinh học - So sánh giá trị Tmax theo phương pháp phân tích phi tham số Wilcoxon (Wilcoxon signe – rank test) Giá trị T max thuốc thử thuốc đối chứng khác khơng có ý nghĩa thống kê (p > 0,05) giá trị tổng thứ tự xếp hạng dương giá trị tổng thứ tự xếp hạng âm (sum of positive/negative rank) lớn giá trị tra bảng với cỡ mẫu n (n số lượng cặp giá trị Tmax thuốc thử thuốc đối chứng có sai khác) 30 - Hai chế phẩm đương tương sinh học có khoảng tin cậy 90% tỷ lệ C max AUC0-t trung bình, tính thống kê với giá trị chuyển đổi logarit thuốc thử so với thuốc đối chứng nằm khoảng chấp nhận tương ứng ln 0,8 – ln 1,25; số liệu gốc khoảng chấp nhận 80 -125% - Các trường hợp không chấp nhận thiết lập hồ sơ tương đương sinh học:  Số đo tốc độ mức độ hấp thu thuốc thử cao thấp thuốc đối chiếu  Sự thể thuốc thử thuốc đối chiếu biến thiên  Không đủ số đối tượng tham gia nghiên cứu liên quan đến độ lớn biến thiên đối tượng mà không sinh khả dụng cao thấp thuốc thử 2.9 ĐẠO ĐỨC TRONG NGHIÊN CỨU Thử nghiệm tuân thủ theo quy định đạo đức thử nghiệm y sinh học Việt Nam quốc tế, tuân theo pháp luật Việt Nam, quy định thực hành thử nghiệm lâm sàng tốt 2.9.1 Trình hội đồng đạo đức Thử nghiệm tiến hành chấp nhận Hội đồng đạo đức nghiên cứu y sinh học tiến hành theo điều khoản ghi tuyên bố Helsinski thử nghiệm thuốc người, uỷ quyền hợp pháp quan quản lý địa phương, theo hướng dẫn thực hành lâm sàng tốt 31 2.9.2 Trình hội đồng khoa học cơng nghệ Trước thử nghiệm, đề cương trình hội đồng khoa học công nghệ thẩm định đánh giá Sau thẩm định đề cương xem xét phiếu chấp thuận hội đồng đạo đức, hội đồng khoa học công nghệ định cho phép nghiên cứu 2.10 KẾ HOẠCH THỰC HIỆN NGHIÊN CỨU Thời gian cho nghiên cứu tương đương sinh học từ tháng – tháng Kế hoạch thực theo qui trình thử nghiệm tương đương sinh học nêu Bảng 2.3 Bảng 2.3 Kế hoạch thực thử nghiệm tương đương sinh học 32 Các Nội dung bước Người thực Thời gian (tuần) Quy định: - Dược chất thử, thuốc thử, thuốc đối chứng Ký hợp đồng thử TĐSH - Số lượng NTN - Trách nhiệm đơn vị yêu cầu, đơn vị nghiên - NTT - ĐVNC 1-2 cứu - Giá trị hợp đồng Xây dựng Xây dựng thẩm định tiêu theo quy định phương (có thể bỏ qua bước dùng phương pháp pháp sẵn có, thẩm định) ĐVNC – 10 phân tích Hai bên thống đưa đề cương nghiên cứu, xác định rõ nội dung: - Thiết kế nghiên cứu Xây - Số NTN, tiêu chuẩn NTN dựng đề cương - Chương trình lấy mẫu - ĐVNC - NTT 1–2 - Phương pháp tiêu chuẩn tính thống kê kết - Đảm bảo đạo đức nghiên cứu, tuân thủ theo GCP - Phương pháp phân tích cần thẩm định Đệ trình - Đơn vị nghiên cứu nộp hồ sơ đề nghị HĐĐĐ ĐVNC Hội đồng phê duyệt HĐĐĐ đạo 2–4 đức 33 (HĐĐĐ) Xin cấp phép nghiên cứu - HĐĐĐ họp, yêu cầu sửa chữa (nếu cần) - HĐĐĐ phiếu chấp thuận - Cơ quan có thẩm quyền xem xét sau có phiếu chấp thuận HĐĐĐ ĐVNC ĐVNC - Tổ chức uống thuốc, lấy mẫu máu NTN Phân tích - Định lượng nồng độ thuốc huyết tương mẫu NTN Phân tích - Phân tích thống kê thơng số dược động học thống kê Làm báo cáo - Đánh giá Tương đương sinh học Tổng hợp số liệu, báo cáo tương đương sinh học Thanh lý - Hoàn thành nghĩa vụ tài hợp đồng Ghi chú: 1–2 - Ra định cho phép nghiên cứu Pha lâm - Tuyển người tình nguyện (NTN) sang NTT 2– (giám sát) ĐVNC 1–3 ĐVNC 1–2 ĐVNC 1–2 NTT - Bàn giao báo cáo - NTT: Người tình nguyện NTT ĐVNC - HĐĐĐ: Hội đồng đạo đức - ĐVNC: Đơn vị nghiên cứu TÀI LIỆU THAM KHẢO Bộ Y tế (2013), Sổ tay hướng dẫn đăng ký thuốc, ngày 27/11/2013 Dược Điển Việt Nam IV 34 Dược thư quốc gia Việt Nam Lê Quan Nghiệm (2016), Sinh Dược Học Và Các Hệ Thống Trị Liệu Mới, NXB Y Học Adams SS (1992), “The propionic acids: a personal perspective”, J Clin Pharmacol 32 (4), pp 317–23 BP- British Pharmacopoeia (2007), CD-Rom Brunton L, Chabner B (2010), Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics 12th Edition, McGraw-Hill Medical, New York Brunton L, Lazo J, Parker K (2005), Goodman and Gilman’s The Pharmacological Basis of Therapeutics, McGraw Hill Medical, New York Canaparo R, Muntoni E, Zara GP, Della Pepa C, Berno E, Costa M, Eandi M (2000), “Determination of Ibuprofen in human plasma by highperformance liquid chromatography: validation and application in pharmacokinetic study”, Biomedical Chromatography 14, pp 219–226 10 Evans AM, Nation RL, Sansom LN, Bochner F, Somogyi AA (1989) “Stereoselective plasma protein binding of ibuprofen enantiomers”, Eur J Clin Pharmacol, pp 283 – 290 11 FDA, Center for Drug Evaluation and Research (1997), “Guidance for Industry Dissolution Testing of Immediate Release Solid Oral Dosage Forms”, pp 15-22 12 FDA (2001), “Guidance For Industry Bioanalytical Method Validation”, pp 1-22 13 Heyman E, Heyman E, Morag I, Batash D, Keidar R, Baram S, Berkovitch M (2003), “Closure of patent ductus arteriosus with oral ibuprofen suspension in premature newborns: a pilot study”, Neoreviews 122 (5):e354 14 Lee E, Williams K, Day R, Graham G, Champion D (2004), "Stereoselective disposition of ibuprofen enantiomers in man”, Br J Clin Pharmacol, pp 759–764 35 15 Mitchell JA (1993), “Selectivity of nonsteroidal antiinflammatory drugs as inhibitors of constitutive and inducible cyclooxygenase”, Proc Natl Acad Sci U S A 90 (24); pp.11693 – 11697 16 Olive G (2006), “Analgesic/antipyretic treatment: ibuprofen or acetaminophen? An update”, Therapie 61(2), pp 151–160 17 Peter Bramlage, Goldis A (2008), “Bioequivalence study of three ibuprofen formulations after single dose administration in healthy volunteers”, BMC Pharmacology, pp – 18 Tegeder I, Pfeilschifter J, Geisslinger G (2001), “Cyclooxygenase-independent actions of cyclooxygenase inhibitors”, FASEB J 15, 2057 – 2072 19 US Pharmacopoeia 32, CD-Rom 20 Vane J (2003), “The mechanism of action of anti-inflammatory drugs”, Int J Clin Pract 135 (2) 21 World Health Organization, “WHO guidelines for good clinical practice (GCP) for trials on pharmaceutical products, Division of drug management & policies” 22 Zeyad A Al-Talla,Sabah H Akrawi, Luke T Tolley, Salim H Sioud, Mohammed F Zaater (2011), “Bioequivalence assessment of two formulations of ibuprofen”, Drug Design, Development and Therapy, pp 427 – 433 36 ... bán thải DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Mơ hình thiết kế chéo trình tự, thời kỳ 18 Bảng 2.2 Kế hoạch thực 20 Bảng 2.3 Kế hoạch thực thử nghiệm tương đương sinh học 32 DANH MỤC CÁC... tiêu hóa, hấp thu nhanh sau uống Nồng độ tối đa thuốc huyết tương đạt sau uống từ đến Thuốc gắn nhiều với protein huyết tương T1/2 thuốc ngắn, khoảng - Ibuprofen đào thải nhanh qua nước tiểu,... cách: 10 vỉ x 10 Nhà sản xuất vỉ x 10 viên viên Công ty liên doanh TNHH Công Nhà đăng ký Stada – Việt Nam Indonesia Cơng ty liên doanh TNHH Tập đồn Stada – Việt Nam ty PT Abbott - Abbott Laboratories