Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)

Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng kháng khuẩn của dịch chiết lá Trầu không và Diếp cá (Khóa luận tốt nghiệp)

L I C

c khóa lu n t t nghi p này em xin g i l i c

n các th i H c Nông Lâm Thái Nguyên, các th y

cô khoa CNSH- y d , truy t nh ng ki n th c và kinh nghi m quý báu trong su c t p và rèn luy n t ng

b em trong su t quá trình th c hi n khóa lu n

trong su t th i gian th c hi n khóa lu n t t nghi p c a mình

V i vi c h n ch v ki n th m th c ti n nên bài khóa lu n không th tránh kh i nh ng thi u sót, r t mong nh n c ý ki n

a các Th y Cô và các b n

Em xin chân thành c

Sinh viên

Mông Th

15

26

37

41

42

44

47

48

50

DANH M C HÌNH

Hì 13

17

kh 42

43

45

46

47

Hình 4 49

51

52

DNA Axit Deoxyribo Nucleic

E ictaruli Edwardsiella ictaruli

n

PPVS

R

M C L C

Ph n 1 M U 1

1.1 1

1.2 3

1.3 3

4

4

4

Ph n 2 T NG QUAN TÀI LI U 5

5

5

5

9

9

9

11

12

13

2.3.1 T 13

20

32

32

33

Ph n 3 V T LI U, N I DUNG V U 36 36

36

36

37

37

3.4 Ph 37

37

38

38

38

39

39

PH N 4 K T QU NGHIÊN C U VÀ TH O LU N 41

E coli, S aureus, E ictaruli 41

4.1.2 E coli, S aureus, E ictaruli 44

4.2 46

E coli, S aureus, E ictaruli 46

E coli, S

aureus, E ictaruli 49

PH N 5 K T LU N 53

53

53

53

53

TÀI LI U THAM KH O

1.1 t v

c ta v i ngu c li u d i dào, phong phú là m t thu n l i trong vi c nghiên c u ch ra nh ng lo i thu c có ngu n g c

thu c r t hi u qu Có nh ng lo i th o m c h t s c thông d ng trong dân gian

c các nhà khoa h c ch ng minh là có tác d ng tr b nh không kém so

v i các lo i thu c hi n hình là Tr u không và Di p cá

Tr u không là m t lo i thân leo, thu c h c h c

Ngoài công d u, nhân dân ta còn s d ng lá Tr u không giã nh , cho

c sôi r i dùng r a nh ng v t loét, m n ng c pha

ngon mi p cá có v nh, giúp thanh nhi t

gi , l i ti u và sát trùng Theo Y khoa hi i trong thành

ph n c a Di p cá có ch t decanoyl-acetaldehyde mang tính kháng sinh, ngoài

coli- lo i vi khu ng ru ng gây ra b nh tiêu ch y, m t s ch ng khác có th gây ra r i lo n máu, suy th n, th m chí d n t vong;

Staphylococcus aureus- là m t lo i t c u khu i, gây ra các b nh nhi m trùng da và niêm m c, ti c t gây ng c th c

nhân làm gi t và ch ng lo i cá xu t kh u này c a Vi t Nam,

dài s gây ra tính kháng thu c ngày càng cao và khó ki m soát, tiêu bi

E coli kháng Ampicillin lên t i 81,4%, vi khu n Staphylococcus aureus

kháng Methicillin và các lo i kháng sinh liên quan, (Nguy n Thanh H i, Bùi

Th Tho, 2013) [6]

Vì v y vi c nghiên c u tính kháng khu n và tìm ra các ho t ch t kháng khu n t ngu n g c th c v t là m t bi n pháp hi u qu , v a kh c ph c tính

- Kh o sát ng c u ki n chi t và dung môi chi t t i kh

kháng khu n c a d ch chi t Tr i v i các ch ng vi sinh v t th nghi m

- Kh o sát ng c u ki n chi t và dung môi chi t t i kh

kháng khu n c a d ch chi t Di i v i các ch ng vi sinh v t th nghi m

1.3 Yêu c u

- u ki n chi t và dung môi chi t thích h tách chi t

c các ho t ch t có tính kháng khu n trong lá Tr u không và Di p cá

c

- thích h p khi ti n hành tách chi c ch vi khu n

- K t qu nghiên c u c s là ngu u b sung cho các nhà nghiên c u các ho t tính sinh h c c a th c v t

- i ti p c n v i các thao tác k thu t trong th c

t , c ng c các ki n th c

c ti n

cho các th nghi m s d ng các ho t ch t có tính kháng

cao giá tr s d ng c a 2 lo i th c v t này

2.1 T ng quan v các ch t có ho t tính sinh h c t th c v t

2.1.1 M t s ch t có ho t tính tính sinh h c t th c v t:

2008) [2]

- Sulfur (tinh d u t c hành- Allium fistuloseum) có ch a các thành

ph n là ch t kháng sinh allinin, allisufit Có tác d ng l i ti u, l i tiêu hóa,

- Các alkaloid có nhân isoquinolein trong các cây Ho ng, Hoàng

bá, Hoàng liên có tác d ng v i vi khu n hình c u Gram (+) và Gram (-)

- Các tinh d u S , Qu , H c xông tr c m cúm và cao dán m n nh t

- Các anthraglucosid trong các cây Mu i hoàng, Chút chít, Hà

+ Chuy n m ng nh ch t nghiên c u trong m t th tích l n dung môi này vào m t th tích nh dung môi khác nh m nâng cao n c a các

ch t nghiên c c g i là chi t làm giàu

t pha r tách các h p ch t trong h n h p ph c t p v u ki n thích h ng dùng trong phân tách các h p ch t t nhiên

- Nguyên t c: D a trên nguyên lý c t m t h n h p

- Nguyên t c:

a trên nguyên t c s d ng dung môi thích h

d ng thích h p nhi phòng Dung môi chi t s ng m qua thành t bào

c a nguyên li u, các h p ch t trong t bào s

xu t hi n quá trình th m th u gi a d ch chi t bên trong dung môi v i bên ngoài dung môi do chênh l ch n Sau khi chi t ph i th c hi n quá trình tách dung môi áp su t th thu tinh d u

- Yêu c u c a dung môi chi t:

môi và thu n l i trong vi

và ti t ki ng dùng là n-hexan (C6H14), diclometan (CH2Cl2), etanol ( C2H5OH).

2.1.2.4 Chi t ngâm c li u v i m t lo i dung môi

pháp tách chi t th c v n nh t, d th c hi n, thi t b

gi n, r ti n

m ki t: Chi t xu t ng m ki c ti n hành b ng

ng xuyên tác các ch t chi t ra kh i nguyên li

ng xuyên dùng dung môi s m là m t nhi u th i gian

2.1.2.6 Chi t siêu âm: Sóng siêu âm có tác d t

Dùng siêu âm có th rút ng n th i gian chi t nh tác d ng c a siêu âm, làm

n tích gi a 2 pha b ng cách phân tán chúng ra thành nh ng h t nh , phá v các màng t ng s xáo tr n c a h n h p

2.1.2.7 Chi t xu c dòng: Nguyên t c c a chi t xu c dòng là

d ch chi t có n ho t ch t gi m d n, nguyên li u ki t nh t s c chi t

xu t b ng dung môi m i và dùng làm dung môi chi t cho các bình ti p theo

2.1.2.8 Chi t xu t b ng khí hóa l ng siêu t i h n: Thay vì s d ng các lo i

dung môi h s d ng CO2 tr ng thái siêu t i h n (31,10 c tr ng thái siêu t i h n (3740C, 218 atm) hay ch t

l ng d ng ion t i nhi phòng, h 2 pha, h th ng không có dung môi s

d ng b m t bên trong c t sét, zeolit, silic oxit và nhôm S d

2.1.3 Các y u t n quá trình chi t: (Vi c Li u- B Y

- Khái ni m: N c ch t i thi u MIC là n th p nh t c a

m t ch t kháng sinh có kh c ch s phát tri n c a vi khu n sau kho ng 24h nuôi c y

18-:-

-

-:-

-(I) và kháng (S)

ch tán qua gi ng th ch

-Nguyên lý: K

- : T

khoa h c

2.3.1 T ng quan v Tr u không

- V trí phân lo i th c v t, T t L i, 2004) [3]: Tr u không còn có tên

g i khác là cây tr u, tr u cay, tr u mòlu (Campuchia), hruê ê ang ( Buôn Mê Thu t)

- Mô t : Tr u không là m t cây m c leo, thân nh n Lá m c so le,

cu ng có b , dài 1,5-3,5cm, phi n lá hình trái xoan, dài 10-13cm, r ng 9cm, phía cu i v i nh ng lá phía g u lá nh n, khi soi lên

4,5-th y r t nhi m ch a tinh d u r t nh ng 5 Hoa khác g c m c thành bông có cu ng dài b ng cu ng lá, m i di n v

c dài b ng phi n lá, tr c bông ph lông, lá b c không cu ng, không

có lông, hình tròn ho c hình tr c Nh 2, bao ph n hình b u d c, ch

nh ng n Bông cái ng c ph

m ng, l i, tròn, có nh ng lông m m

c tr ng nhi u c Châu Á , vùng nhi

T t L i, 2004) [3] Vi t Nam có 2 lo i tr u chính

là tr u m và tr u qu Lá tr u m to b n, d tr ng Tr u qu có v cay, nh lá,

i ta làm giàn cho nó leo Cây tr m và ch t vôi,

ng oxi hóa cao, c ch m t s nguyên nhân gây b nh loét d dày,

dùng làm thu c nh m t ch a viêm k t m c, ch a b nh chàm m t c a tr em

khô p lên ng ch a ho và hen, ho ch a b nh t c s a

Tr u không còn có tác d ng kháng sinh r t m i v i các vi trùng:

T c u, Subtilit và tr c trùng E.coli (Y h c t p chí, 2011) [19].

ng: K ng, dùng Tr u không s r t có công hi u L y

lá tr u không và ít hoa qu xay nhuy n l c tr n thêm m t ong r i ng m

th t lâu, n u u c thì càng t t, s gi m các kích thích gây ho

+ B c sôi: Lá Tr lá m m ra r i ph t 1 l p th u d u

r t nh lên v t b ng C sau vài gi l i thay 1 lá tr u m i Sau vài l n,

d ch trong v t b ng s tiêu h t, ch r p không m c, không gây m

sáng s m

+ Ch (viêm k t m c): L y 3 lá Tr u không, 5-10 lá dâu

5-10 phút, ngày 2 l n Thu c giúp chóng h t viêm, m t d u

+ R a v t b ng b nhi m khu n: Lá Tr u không và phèn

i th 20g vò nát ho c, s c l y 1 lít, r a t i chngày 1 l n

+ Ngoài ra Tr u không còn có tác d c, làm s

làm ng t mi ng

2.3.2.3 T ng quan v Di p cá

- V trí phân lo i th c v t: Cây Di p cá còn có tên là cây Gi p cá, Lá

gi o Tên khoa h c là Houttuynia cordata Thunb Saururaceae,

tôn vinh Marteen Houttuyn là th y thu c nhà th c v t h c Hà Lan, chuyên

v Rêu và Quy t th c v t, T t L i, 2004) [3]

Lá m c so le, có b ; phi n là hình tim, khi vò ra có mùi tanh c a cá Hoa nh ,

n vào tháng 5-8, không có bao hoa, màu vàng nh t, m c thành bông Qunang m nh, h t hình tr ng ho c trái xoan, nh n, ( n Vi t Nam,

- Phân b và thu hái: Di p cá có ngu n g c Hymalaya và phân b c

Trung Qu c, Nh t B n, Lào, Campuchia và Vi t Nam c ta, Di p cá

ph bi n tr ng thái hoang d i nh t, trên các bãi hoang, b

( c H c C Truy n, 2006) [18].

- Thành ph n hóa h c:

Trong Di p cá có kho ng 0,0049% tinh d u và m t ít ch t ankaloid g i

là cordalin Thành ph n ch y u c a tinh d u là metylnonylxeton

CH3CO(CH2)8CH3(có mùi r t khó ch u), ch t myrcen C10H46, axit caprinic C9

H19COOH và laurinaldehyde Hoa và qu ch a ch t isoquexitrin và không

ch tro trung bình là 11,4%, tro không tan trong HCl là 2,7%

- Alkaloid: M t s alkaloid có ho t tính sinh h c tìm th y trong cây

Di p cá là aristolactam A, aristolactam B, piperolactam A, norcepharadion B, cepharadion A, cepharadion B, splendidin

palmitic, axit stearic, axita heptanoic, axit nonanoic, axit aspartic, axit

di c Gonococuc (gây b nh l u m n s phát tri n c a các siêu vi trùng c m cúm.

+ Tác d ng kháng viêm: Ho t ch t trong Di p cá có kh ng

s t Là các acid béo trong lá khô có kh n

s t ng h p prostaglandin- th ph m gây ra ph n p cá còn

u tr hen suy ng do tác d ng c ch ph n

ng quá m n qua trung gian t bào Mast

+ Tác d ng trên h mi n nhi m : Ch t decanoyl acetaldehyde trong Di p

cá có kh c bào c a các t bào b ch c ng th

+ Tác d ng l i ti u: Tác d ng này có th n các ch t quercitrin, isoquercitrin và mu i kali trong cây Di p cá

+ Tác d ng trên h hô h p: Khi chích dung d c Di p cá qua màng phúc mô th tác d ng h c nh n th y rõ r t Kh b nh nhi m

ng hô h p c a Di c ch ng minh rõ ràng Khi dùng

li tr b i có ung nh t, k t qu r t t t, ung nh t bi n

+ Tác d ng ch ng oxy hóa : Di p cá có ch a h p ch t flavonoid có tác

d ng i v i s peroxy hóa lipid màng t bào gan b ng cách h n ch quá trình peroxy góp ph n b o v t bào và duy trì s ho ng c a t bào+ Tác d ng kháng t ch chi t Di p cá có tác d ng ch ng

ch chi t methanol, và kh t bi n gen c a d ch chi t

ch chi c tìm th y trong d ch chi t methanol c a cây Di p cá có tác d ng ch ng l i 5 dòng t bào u i

- M t s bài thu c dân gian t Di p cá: ( n Vi t Nam, 2002) [1]

vào m n nh t r i Ngày th c hi n 2 l n Làm trong 3 ngày, m n nh t

+ Ch do tr c khu n m xanh : 35g Di p cá, r a s ch,

ngu c, r i giã nát, ép vào 2 mi ng

r a s ch, giã nát l c trong Ngày u ng 3 l n Th c hi n trong 7-10 ngày

2.3.2 T ng quan v các vi sinh v t th nghi m

2.3.2.1 T ng quan v E coli (Lê Huy Chính, 2001) [4]

Escherichia do Escherich phát hi n l u ti ng này

có nhi E coli có vai trò quan tr ng nh t.

* m sinh h c:

E coli là tr c khu n Gram âm, có v ho c không có v , h u h u có

E coli có c 3 nhóm kháng nguyên: kháng nguyên O g m 160 y u t

c chia thành 3 lo i: A, B và L; kháng nguyên H g u t D a vào c u trúc kháng nguyên, E coli c chia thành các type huy t thanh V i s t h p c a các y u t kháng nguyên

s có r t nhi u type huy t thanh khác nhau, m i type huy c ký

hi u b ng kháng nguyên O và K, ví d O86B7

D a vào tính ch t gây b nh, E coli c chia thành các lo i:

EPEC (Enteropathogenic E coli): E coli gây b ng ru t

ETEC (Enterotoxigenic E coli): E coli c t ru t

EIEC (Enteroinvasive E coli): E coli xâm nh ng ru t

EAEC (Enteroadherent E coli): E coli ng ru t

EHEC (Enterohaemorrhagic E coli): E coli gây ch ng ru t

ng tiêu hóa, E coli chi m kho ng 80% các vi khu n hi u khí

m khu n huy t E coli có th gây nhi u b nh

i, viêm màng não, nhi m khu n v

- gây b nh c a E coli khác nhau tùy lo i:

+ ETEC: Gây b nh do ngo c t LT, là lo c t ru t gi c t

ngo c t c a S shiga Trong quá trình gây b nh, EHEC làm t

xu t huy t ru t

Ch c ti p: B nh ph m khác nhau tùy b nh: là phân v i nhi m

nhi m khu n máu Có th làm tiêu b n soi tr c ti i v i m t s lo i b nh

ng th ch máu, t c u vàng phát tri n nhanh, t o tan máu hoàn toàn T c u vàng ti t ra 5 lo i dung huy t t (hemolysin): , , , ,

- S t c u vàng kháng l i penicillin G do vi khu n này s n xu c men penicillinase nh gen c a R-plasmid M t s

c methicillin resistance S.aureus (vi t t t là MRSA), do nó t o

c các protein g n vào v ng c a kháng sinh Hi n nay m t s

m n vào polysaccharid vách t c

ph c hi u c a kháng nguyên O

+ Protein A: Là nh ng protein bao quanh b m t vách t c u vàng và là

m t tiêu chu nh t c u vàng 100% các ch ng t c u vàng có protein này S ang tên protein A, vì protein này g n

trên kháng nguyên c a t c u là r y vi c phân lo i t c u vàng là ch y u d a trên phage S ký sinh c a phage trên vi khu n mang tính

nh enterotoxin b ng các k thu t mi n d ch

kinh dùng bông dày b n ho c nh i b nhi m trùng v c tnày khó phân bi t v i enterotoxin F c a t c u vàng TSST kích thích gi i phóng TNF (Tumor necrosis factor, y u t ho i t u) và các interleukin I, II

- c t này gây tan các b ch c a hình và ti u

c u, t áp xe, gây ra ho i t da và tan máu Alphatoxin là m t protein là m t protein tr ng phân t 33000-36000 dalton Nó g n trên màng t bào và th hi n các thu c tính ho ng b m c t có tính kháng nguyên nh c a nó không có tác d ng ch ng nhi m khu n

- c t b ch c u (Leucocidin): M c dù m t s staphylosyn ch c

Leucocidin bao g m 2 m nh F và S và có th tách r i b ng s c ký in, tr ng

ng phân t là 32000 và 38000 dalton N u tách r i 2 m ng này thì m t tác

d ng gây c

- Ngo c t sinh m (pyogenic exotoxin): Vào 1979, Schlivent và

c t c t sinh m c a liên c u Protein ngo c t này có

Gây ho i t da th , gây ch t chu t và th c t bào nuôi c y

Ho i t nh da th và da chu t, gây ch t th

c y

c ch

- Hyaluronidase: Là enzyme phân gi i các aicd hyaluroic c a mô liên

k t, giúp vi khu n lan tràn vào mô

da Vi khu n này gây b i b suy gi kháng ho c chúng có

- Nhi m khu n ngoài da: Do t c u vàng ký sinh da và niêm m c

xâm nh p qua các l chân lông, chân tóc ho c các tuy n

áp xe (gan, phôi, não, t y

c viêm n i tâm m c Có th gây nên các vêm t ch M t

s nhi m trùng khu trú này tr thành viêm m

- Viêm ph i: Viêm ph i do t c u vàng ít g p Nó ch x y ra sau viêm

có viêm ph i tiên phát do t c u vàng, tr em ho c nh i suy y u T

l t vong c a b nh này khá cao, vì th c coi là b nh n ng

s ng Nguyên nhân là sau m t th i gian dài b nh nhân dùng kháng sinh

có ho t ph r ng, d n các vi khu ng c ng ru t nh y c m kháng sinh b tiêu di t và t u ki n thu n l i cho t c u vàng (kháng

ng v s ng Tri u ch ng c a ng c th

8 gi , b d i, phân l c, càng v sau phân và ch t nôn ch y c Do m t nhi n gi i có th d n t i shock.

- Nhi m khu n b nh vi n do t c u: R ng g p, nh i v i nhi m trùng v t m , v t b n t i nhi m khu n huy t Các ch ng

- ng mi n d ch qua trung gian t bào có x y ra v i vi c ti t ra các

s di t khu n

- Mi n d ch d ch th t hi ch ng l i các y u t c l c

xúc v i kháng th ho c t bào s n xu t kháng th Do vi khu ng n trú trong các áp xe, trong các c c fibrin và trong các t bào b ch c

-*Nguyên t c phòng b u tr :

- Phòng b nh: Phòng b nh nhi m khu n t c u ch y u là v sinh môi

ng, qu n áo và thân th vì t c u có r t nhi u nh c bi t là

- u tr : Kháng sinh tr li u là bi n pháp ch y u V

t c u r t kháng thu c, nên c n ph ch n l c thu c thích h p Dùng vacxin gây mi n d ch ch ng t c t bi n pháp c n thi t nh ng b nh nhân dùng kháng sinh ít k t qu ng vacxin ch t và có th c bào ch t ch ng t c u vàng phân l c chính b i là vacxin t li u), ho c dùng các ch ng t c u vàng

m u, là nh ng ch ng g p (g i là vacxin tr li u)

2.3.2.3 T ng quan v vi khu n Edwardsiella ictaruli (Ph m th Ng c Xuân,

2010),[8], (T Thanh Dung và cs, 2009) [11]

Vi khu n E ictaruli c mô t b i Hawke (1981) là m c

c nhóm Enterobacteriaceae, là vi khu n Gram âm, hình que ng n,

cao, lên men glucose, không sinh oxi hóa, ph n

tính trong ph n ng oxidase, phát tri n t t 280C và phát tri n y u 370C (T Thanh Dung và cs, 2004)[11] T Thanh Dung và cs (2004)[11] vi khu n

có th phân l p t m u cá b nh (gan, th ng TSA(Trytone Soya Agar) ho c NA (Nutrent Agar) sau 38 gi 280C t o thành khu n l c màu

tr m sinh hóa vi khu n E ictaruli cho h u h t ph n ng âm