Đánh giá khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh trên cây quế thu thập tại tỉnh Yên Bái (Khóa luận tốt nghiệp)

Đánh giá khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh trên cây quế thu thập tại tỉnh Yên Bái (Khóa luận tốt nghiệp)Đánh giá khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh trên cây quế thu thập tại tỉnh Yên Bái (Khóa luận tốt nghiệp)Đánh giá khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh trên cây quế thu thập tại tỉnh Yên Bái (Khóa luận tốt nghiệp)Đánh giá khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh trên cây quế thu thập tại tỉnh Yên Bái (Khóa luận tốt nghiệp)Đánh giá khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh trên cây quế thu thập tại tỉnh Yên Bái (Khóa luận tốt nghiệp)Đánh giá khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh trên cây quế thu thập tại tỉnh Yên Bái (Khóa luận tốt nghiệp)Đánh giá khả năng sinh kháng sinh của xạ khuẩn nội cộng sinh trên cây quế thu thập tại tỉnh Yên Bái (Khóa luận tốt nghiệp)

I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM - - HỒNG TH TRỊN tài: A X KHU N N I C NG SINH TRÊN CÂY QU THU TH P T I T NH YÊN BÁI KHÓA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Chuyên ngành : Công ngh sinh h c Khoa : CNSH - CNTP Khóa h c : 2011 - 2015 Thái Nguyên - 2015 I H C THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM - - HỒNG TH TRỊN tài: A X KHU N N I C NG SINH TRÊN CÂY QU THU TH P T I T NH YÊN BÁI KHÓA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Chun ngành : Cơng ngh sinh h c Khoa : CNSH - CNTP Khóa h c : 2011 - 2015 Gi ng d n : TS Phí Quy t Ti n TS Tr Thái Nguyên - 2015 Chí i Trong su t th i gian th c hi cs tài nghiên c n t n tình c a th y cán b khoa h c Phòng Cơng ngh lên men, Vi n Công ngh sinh h c, Vi n Hàn lâm Khoa h c Công ngh Vi t Nam V i lòng bi c tơi xin g i l i c TS Phí Quy t Ti n sinh h i th y giáo ng phòng Cơng ngh lên men, Vi n Công ngh ng d n ch cách ti p c n v th c hi su t trình tài ng th i il ic nh Nguyên, ThS Quách Ng c Tùng cán b Phòng Cơng ngh lên men, nh ch b ,t n tình u ki n cho tơi su t q trình th c t p t t nghi p il ic y giáo TS Tr y cô giáo Khoa Công ngh sinh h c Công ngh th c ph m, th y cô, cán b b ki n th c h ih trang ng hành su t th i gian h c t p nghiên c u Cu i cùng, xin g i l i tri ân t ng viên t n bè, nh u ki n cho su t trình th c t p Thái Ngun Sinh viên Hồng Th Tròn ii DANH M C B NG B ng 2.1: Các kháng sinh m i t x khu n n i c ng sinh c li u 11 B ng 3.1: Các thi t b s d ng nghiên c u 19 B ng 3.2: Trình t c p m c s d ng ph n ng PCR khu i gen 16S rDNA 24 B ng 4.1: S li u th ng kê kh t ki nh c a 105 ch ng x khu n n i c ng sinh 26 B ng 4.2: Khu i gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS kh anthracyline c a 36 ch ng x khu n n i c ng sinh 31 B m hình thái c a ch ng nuôi c y khác 34 B ng 4.4: Kh ngày nuôi c y B ng 4.5: ng hóa ngu a ch ng YBQ75 sau 7-10 30ºC 36 ng c a n mu i, nhi ng c a ch ng YBQ75 37 B ng 4.6: Phân tích trình t gen mã hóa gen mã hóa 16S rDNA c a ch ng x khu n YBQ75 40 iii DANH M C HÌNH Hình 2.1: nh quét hi nt c ab m t sau ngày gây nhi m v i Streptomyces sp MBCu-56 (A) H s i b m t (B) H s i c a x khu n xâm nh p phát tri i b m t c a l p bi u bì Hình 4.1: Ho t tính kháng P vulgaris (A), S epidermidis ATTC 12228 (B) c a m t s ch ng x khu n n i c ng sinh 28 s n ph m PCR khu x khu i di n 29 n di x khu s n ph m PCR khu i gen nrps c a m t s ch ng x i di n 30 Hình 4.5: S t i th i gen pks-II c a m t s ch ng i di n 29 s n ph m PCR khu khu i gen pks-I c a m t s ch ng i màu s ng c a ch ng YB50 YB80 c (A, C) sau (B, D) th ph n ng màu Hình 4.6: Hình thái khu n l ng ISP2 hình nh b m t 20.000 l n (C) c a ch ng YBQ75 35 s n ph m PCR gel agarose 1,0% 38 iv DANH M C CÁC KÍ HI U VÀ CH STT T vi t t t VI T T T y rDNA ADN ribosome Bp C DNR Daunorubicin DNA Deoxyribonucleic acid DOX Doxorubicin EPI Epirubicin IDA Idarumycin KTCC Khu n ty KTKS Khu n ty khí sinh 10 Kb 11 NRPS Nonribosomal peptide synthetase 12 PCR Ph n ng chu i polymerase (polymerase chain reaction) 13 PKS-II Polyketide synthase II 14 PKS-I Polyketide synthases I 15 VSV Vi sinh v t t v PH N 1: M tv U 1.2 M c tiêu nghiên c u tài PH N 2: T NG QUAN TÀI LI U 2.1 X khu n n i c ng sinh th c v t 2.1.1 X khu n n i c ng sinh m a x khu n v i ch m sinh h c phân lo i x khu n 2.1.3 Ti ng d ng c a x khu n n i c ng sinh 2.2 Kh t kháng sinh c a x khu n n i c ng sinh m t s gen ch 11 2.2.1 Kh t kháng sinh c a x khu n n i c ng sinh 11 2.2.2 M t s gen ch n sinh t ng h p kháng sinh 12 2.2.3 Kháng sinh thu c nhóm anthracycline 13 2.3 Tình hình nghiên c u x khu n n i c ng sinh 14 2.3.1 Tình hình nghiên c u th gi i 14 2.3.2 Tình hình nghiên c u 2.4 Cây qu ti PH N 3: V T LI Vi t Nam 16 khu n n i c ng sinh qu 17 18 3.1 V t li u nghiên c u 18 ng ph m vi nghiên c u 18 3.1.2 Hóa ch t 18 3.1.3 Thi t b 18 ng nuôi c y 19 3.2 m th i gian ti n hành 19 vi 3.3 N i dung nghiên c u 19 u 20 3.4.1 Tuy n ch n ch ng x khu n có ho t tính kháng vi sinh v t 20 nh kh 3.4.3 Khu 21 i gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS c a x khu n 21 3.4.4 Nghiên c m sinh h c c a m t ch ng x khu n 22 3.4.5 Phân lo i ch ng x khu n YBQ75 d a phân tích trình t gen 16S rDNA 24 PH N 4: K T QU VÀ TH O LU N 26 4.1 Tuy n ch n ch ng x khu n có ho t tính kháng vi sinh v t 26 nh gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS tham gia sinh t ng h p kháng sinh 28 4.3 Sàng l c x khu n sinh kháng sinh thu c nhóm anthraycycline 33 m sinh h c phân lo i c a ch ng x khu n YBQ75 33 m hình thái b m t chu i bào t c a x khu n YBQ75 34 m sinh hóa c a x khu n YBQ75 35 4.4.3 Khu i phân tích trình t gen 16S rDNA c a x khu n YBQ75 38 PH N 5: K T LU N VÀ KI N NGH 40 5.1 K t lu n 41 5.2 Ki n ngh 41 TÀI LI U THAM KH O 41 PH L C Vi khu n gây b nh có kh c m t v nghiêm tr ng m i quan tâm r t l n c a c vơ ng Vì v y, vi c nghiên c u, l a ch n tác nhân kháng khu n m i t t c a nhà khoa h c công u c ph m th gi i c u hi n t i, nhà khoa h ng nhu ng tìm ki m ngu n phân l p m i nh m thu nh n h p ch t t nhiên m phát tri n, bào ch lo i kháng sinh m i ch ng l i b nh vi sinh v t gây Nhi u nghiên c u ch ng minh th c v t m t ngu n t nhiên quan tr ng u tr b nh gây b i vi sinh v t M t s loài th c v t c s d ng ph bi n qu tinh d u c a qu Cây qu (Cinamomum loureirii) ch a c ch t tinh d u c a lá, v qu v i 90% cinnamaldehyde có ho t tính kháng khu i v i c vi khu n Gram (+) vi khu n Gram (-) (Staphylococcus, Micrococcus, Bacillus, Enterobacter) Các nghiên c ng minh tinh d u c a qu có tính ch t ch ng ng ru t, ch ng oxy hóa v i hi u qu 55,94 66,9% dùng n ho t ch 100 200 ppm [2] Ngoài m t s eugenol, cinnamaldehyde, carvacrol tinh d u qu có kh t gây b methicillin-resistant Staphylococcus aureus, Klebsiella pneumoniae Ngoài giá tr mang l i, qu c lý thành ph n c a ng c a x khu n n i sinh X khu n n i c ng sinh x khu n t vùng r xâm nh p vào r , thân, mà không gây h i hay c có ho t tính sinh h c t x khu n n i c ng v i ch [24] Các h p ch t c ch ng minh r d ng v m t s ng ho t tính sinh h t kháng sinh, kháng ung ng oxy hóa, ch t di t c [19] Polyketide nhóm ch t i di n cho s n ph m tr i ch t b c hai c s n xu t b i vi khu n, n m, x khu n th c v t [38] polyketide synthase II (PKS-II) tham gia t ng h p c n chu i polyketide polyketide synthase I (PKS-I) ch u trách nhi m t o khung polyketide hoàn ch nh Và nonribosomal peptide synthetase (NRPS) sinh t ng h p s n ph i ch t b c hai không thông qua ribosome t o d ng peptide nh trình t ng h p protein acid amin n nay, s ng nghiên c u v x khu n n i c ng sinh qu c li u nói chung r t h n ch ng th i, nh ng nghiên c u v gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS nh m sàng l giá kh ng h p s n ph m th c p t x khu n n i c ng sinh t i Vi t Nam v n b ng Xu t phát t nh th c hi n nghiên c ng trên, tài: ax khu n n i c ng sinh qu thu th p t i t nh Yên Bái" 1.2 t ki c nh s có m t n t ng h p kháng sinh c a ch ng x khu n n i công sinh phân l p qu t i t nh Yên Bái 1.3 c tài k th a k t qu c a m t s nghiên c c u, k th a nh ng k t qu nghiên c a nhóm nghiên cv c khai thác ngu n tài nguyên vi sinh v t, ngu n h p ch m nghiên c tài ch ng th c v t nghiên c u qu c bi t liê c nhi u n nghiên c u tách chi t tinh d u 37 L-Histidine monohydrate, L-Valin, L-Lysin, amino hydroxy-methyl 1,3 promo YBQ75 ng c a ch thí nghi ng Bennett iv n mu i, pH nhi u ki n c th hi n b ng 4.5 ng 4.5: YBQ75 u ki Nhi ng N Kh ng t 30 ng (oC) 15 40 mu i (%) u 10 B ng 4.5 cho th y, ch 15-40ºC t i thích ng t t d i nhi 30ºC Có th k t lu n ch ng thu t m k t qu phù h p v i ngu n g c phân l p m u (t nh Yên Bái) ng có n t i kh mu i cao, x y hi n d in i ch t c a x khu n Ch ng mu i t 5% phát ti n t i thích 2% Ch ng YBQ75 phát tri phát tri n t t nh t ng có d i pH t 5-10, pH p v i nghiên c ng x khu n thu c nhóm vi sinh v t phát tri n t t nh t trung tính Các giá tr pH c giá tr pH c n cho ho n c i ch t t bào, c ch kh ng hay t ng h p s n ph ng t t ng m ion H+ OH- ng sinh s ng c a nhi bi ng m c ng ng v i i dù nh c a n vi sinh v t Do v y vi c 38 nh pH thích h ho u vi c trì pH c n thi t th i gian ng c a vi sinh v t r t c n thi t ng c a pH lên trình ng c a vi sinh v t có th k t qu ng qua l i gi a ion H+ enzyme n i v i vi c ng d ng x khu n lên men thu nh n h p ch t có ho t tính kháng sinh, kháng u i chi m phân lo i c a ch ng x khu n YBQ75 d a vào nh tên loài x khu n c a Nomomura 1976 Gause 1983 cho th y YBQ75 thu c chi Streptomyces YBQ75 phân lo i ch ng YBQ75 t (Ph l c 2) n loài, nghiên c u gi i phân tích trình c th c hi n DNA t ng s c a ch ng x khu n YBQ75 c s d ng làm v t li u di truy n cho nghiên c u khu gen 16S rDNA, k t qu th hi n i hình 4.7 ng DNA chu n (Thermo scientific, M i ch n ph m PCR s d ng khuôn DNA b gen c a ch ng YBQ75 39 K t qu khu i gen 16S rDNA c a ch ng YBQ75 cho th y, s n ph m PCR cho m (Hình 4.7 t rõ nét nh y, s n ph c kho ng 1,4kb c thí nghi c hi u, ng yêu c u cho tinh s ch gi i trình t gen 16S rDNA 4.4.3.2 Phân tích trình t gen 16S rDNA YBQ75 ( c a ch ng x khu ) K t qu phân tích trình t gen 16S rDNA c trình bày b ng 4.6 B ng 4.6: Phân tích trình t gen mã hóa gen mã hóa 16S rDNA c a ch ng x khu n YBQ75 Trình t gen 16S rDNA c a ch ng x Mã s truy c p khu c so sánh GenBank Streptomyces cavourensis NRRL 2740 NR 043851.1 ng (%) 100 Streptomyces cavourensis NBRC 13026 NR 112345.1 100 Streptomyces albolongus NBRC 13465 NR 041144.1 99 Streptomyces sp SirexAA-E NR 074561.1 99 K t qu phân tích trình t gen 16S rDNA so sánh v i trình t cơng b Genbank b ng công c BLAST (NCBI) cho th y: gen 16S rDNA c a ch ng cao (100%) so v ng rDNA c a ch ng Streptomyces cavourensis (B ng 4.6) D a vào k t qu nghiên c u v m hình thái, sinh lý-sinh hóa phân tích trình t gen 16S rDNA, nh danh Streptomyces cavourensis YBQ75 ch ng x khu loài Streptomyces cavourensis Theo cơng b hi n l Ngồi ra, ch ng x , khu n có kh flavensomycin-lo b i vi khu n n c phát c s d ng r [42] u tr b nh gây 40 N5 5.1 K t lu n - nh c a 105 ch ng x khu n n i c ng sinh qu T n ch n c 36 ch ng x khu n có kh t m t lo i VSV s lo i VSV ki nh nh s có m t c a gen pks-I, pks-II, nrps tham gia sinh - t ng h p kháng sinh c a 36 ch ng x khu n n ch ch ng mang gen pks-I (chi m 25%), 19 ch ng mang gen pks-II (chi m 52,8%), 13 ch ng xu t hi n gen nrps (chi m 36,1%); 04 ch ng x khu n l t ký hi u: YBQ59, YBQ63, YBQ75, YBQ94 mang ba gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS kh nh c 30 ch ng t ng s 36 x khu n nghiên c u có sinh kháng sinh thu c nhóm anthracyline - Ch ng YBQ75 có kh r ng, ho t tính cao c phân lo i thu c lồi Streptomyces cavourensis d m sinh h c trình t c ng YBQ75 nh danh Streptomyces cavourensis YBQ75 5.2 Ki n ngh Ti p t c nghiên c u t u ki n lên men nh m thu nh n kháng sinh c a ch ng Streptomyces cavourensis YBQ75 41 Tài li u ti ng Vi t Nguy n Lâ (2007) Vi sinh v t n, Ph h c NXB Giáo d c Nguy n Minh Kh n Minh Ng c, Chi t xu t phân l p m t s phenollic glycosid t qu chi Vi t Nam (cinnamomum cassia blume) Quách Ng c Tùng, Khi u Th Nhàn, Chu K Th H m Thanh Huy c Phong, Nguy n Ti Trang, Phí Quy t Ti n (2014), ng di truy n c a x khu n n i c ng sinh phân l p t qu t i t nh Hòa Bình T p chí Khoa h c Cơng ngh , 52 (5B), 577-582 Quách Ng c Tùng, Khi u Th Nhàn, Chu K H nh Nguyên, t Ti n (2014), c x khu n n i c ng sinh qu có kh t gây b nh T p chí Cơng ngh Sinh h c, 12 (2), 365-371 p (2013), Phân l khu n n i c ng sinh lúa (Oryza sativa L.) tr c tính vi t c a t nh Phú Yên, Vi t Nam , H i ngh Khoa h c Cơng ngh sinh h c tồn qu c, (2), 450-454 Tài li u ti ng Anh Abebe B, Feleke M, Berhanu A (2013), Isolation and screening of antibiotic producing actinomycetes from soils in Gondar town, North West Ethiopia Asian Pac J Trop Dis 3(5), 375-381 Ajit K, Passari, Vineet K, Mishra, Ratul S, Vijai K, Gupta and Bhim P, Singh (2015), Isolation, abundance and phylogenetic affiliation of 42 endophytic actinomycetes associated with medicinal plants and screening for their in vitro antimicrobial biosynthetic potential Front Microbiol (273), 1-13 Bacon CW, White JF (2000) Microbial endophytes, New York, Marcel Dekker Bérdy J (2005), Bioactive microbial metabolites J Antibiot, (58),1-26 10 Cane DE (1997), A special thematic issue on polyketide and nonribosomal polypeptide biosynthesis, Chem Rev, (97), 2463-2706 11 Compant S, Duffy B, Nowak J, Clément C, Barka EA (2005), Use of plant growth-promoting bacteria for biocontrol of plant diseases: principles, mechanisms of action, and future prospects Appl Environ Microbiol, (71), 4951-4959 12 Duong Minh Lam, Nguyen Dinh Viet and Tong Thi Mo (2014), creening for anticancer producing endophytic actinomycetes in three mangrove plant species Chemical and Biological Sci, 59(9), 114-122 13 Franco C, Michelsen P, Percy N, Conn V, Listiana E, Moll S, Loria R, Actinobacterial endophytes for improved crop performance Australas Plant Pathol, (36), 524-531 14 Gangwar Antagonistic Bioactivity of Endophytic Actinomycetes Isolated from Medicinal Plants Journal of Advanced Laboratory Research in Biology, 2(4), 154-157 15 Gewirtz DA proposed for the antitumor effects of the anthracycline antibiotics Biochem Pharmacol, (57), pp 727-741 16 Giorgio M, Pierantonio M, Emanuela S, Gaetano C, Luca G (2004), Anthracycline: Molecular Advances and pharmacologic developments in antitumor activity and cardiotixicity Pharmacol Rew, (56), 185-229 43 17 Gontang EA, Gaudencio SP, Fenical W, Jense PR (2010), Sequencebased analysis of secondary-metabolite biosynthesis in marine actinobacteria Appl Environ Microbiol, 76(8), 2487-2499 18 Hadacek F, Greger H (2000), Testing of antifungal natural products: Methodologies, comparability of results and assay choice Phytochem Anal, (11), 137-147 19 Higashide E, Asai M, OotsuK TS, Kozay Y, Hasegawa T, Kishi T, Sugino Y, Yoneda M (1977) Ansamitocins, a group of novel maytansinoid antibiotics with antitumour properties from Nocardia Nature (270), 721-722 20 Igarashi Y (2004), Screening of novel bioactive compounds from plantActinomycetologica (18), 63-66 21 Jeffrey EJ and Guy TC (2010), Biosynthetic Potential of Phylogenetically Unique Endophytic Act Applied and environmental Microbiology p, 4377-4386 22 Kakadumycins, ovel antibiotics from Streptomyces sp NRRL 30566, an endo FEMS Microbiol Lett (234), 183-190 23 Kupchan SM, Komoda Y, Court WA, Thomas GJ, Smith RM, Karim A, Gilmore CJ, Haltiwanger RC, Bryan RF (1972), Maytansine, a novel antileukaemic ansa macrolide from Maytenus ovatus J Am Chem Soc (94), 1355-1356 24 Li J, Zhao GZ, Chen HH, Wang HB, Qin S, Zhu WY,Xu LH, Jiang CL, Li WJ (2008), Antitumour and antimicrobial activities of endophytic Streptomycetes from phar Microbiol (47), 574-580 Lett Appl 44 25 Li Y , Kam SL , Wang H , Wong EY , Ooi VE (2006), Antimicrobial activities of cinnamon oil and cinnamaldehyde from the Chinese medicinal herb Cinnamomum cassia Blume Am J Chin Med 34(3), 511-522 26 Loria R, Bukha Plant pathogenecity in the genus Streptomyces , Plant Dis (81), 836-846 27 Lu CH, Shen YM (2007), A novel ansamycin, naphthomycin K from Streptomyces sp J Antibiot (60), 649-653 28 Mahera MS, Sulaiman AA, Ismet A, Milton W (2013), Evaluation of antibiotic producing genes in Streptomyces isolated from a desert environment of Saudi Arabia Life Sci J 10(4), 974-980 29 Marahiel MA, Stachelhaus T, and Mootz HD (1997), Modular pep-tide synthetases involved in nonribosomal peptide synthesis Chem Rev (97), 2651-2673 30 Matsukuma S, okuda T, Watanabe J (199 Isolation of actinomycetes from pine litter layers Actinomycetologica (8) 57-65 31 Meguro A; Ohmura Y, Hasegawa S, Shimizu M, Nishimura T & Kunoh H An endophytic actinomycete, Streptomyces sp MBR-52, that accelerates emergence and elongatio Actinomycetologica (20), 1-9 32 ide-spectrum antibiotics produced by Streptomyces NRRL 30562, endophytic on Kennedia nigriscans Microbiology, (148), 2675-2685 33 Nduka O Modern Industrial Microbiology and Biotechnology , Science, Enfield, pp 429-453 34 Nimnoi P, Pongsilp N, Lumyong S (2010), Endophytic actinomycetes isolated from Aquilaria crassna Pierre ex Lec and screening of plant growth World J Microbiol Biotechnol (26), 193-203 45 Streptomyces Waksman and first and 35 second studies Int J Syst Bacteriol (18,) 279 36 Pullen C, Schmitz P, Meurer K, Bamberg DD, Lohmann S, Franc SDC, Groth I, Schlegel B, Möllmann U, Gollmick F, Gräfe U, Leistner E (2002), New and bioactive compounds from Streptomyces strains residing in the wood of Celastraceae Planta (216), 162-167 37 Qin S, Xing K, Jiang JH, Xu LH, Li WJ (2011), Biodiversity, bioactive natural products and biotechnological potential of plant-associated Appl Microbiol Biotechnol (89), 457-473 38 Rojas DJ, Sette LD, Araujo WL, Lopes MSG, Silva LF, Furlan RLA, Padilla G (2012), The diversity of polyketide synthase genes from Microb Ecol (63), 565-577 sugarcane- 39 Sambrook J, Russell DW (2001) manual, 3rd Molecular cloning A laboratory Cold Spring Harbor laboratory, NY 40 Shimizu M, Yazawa S, Ushijima Y (2009), A promising strain of endophytic Streptomyces sp for biological control of cucumber anthracnose J Gen Plant Pathol (75), 27-36 41 Shirling EB, Gotilieb D (1972) of Streptomyces International journual of systematic Bacteriology (22), 265-394 42 Skarbek JD, Brady LR (1978), Streptomyces cavourensis sp nov (nom Rev.) and Streptomyces cavourensis subsp Washingtonensis subsp Nov., a Chromomycin-producing subspecies International Journal of Systematic Bacteriology 28(1), 45-53 43 Snipes CE, Duebelbeis DO, Olson M, Hahn DR, Dent WH, Gilbert JR, Werk TL, Davis GE, Lee-Lu R, Graupner PR (2007), The endophytes in Microb Ecol (53), 700-707 46 44 Sun Y, Cheng Z, Glick BR (2009), The presence of a 1- aminocyclopropane-1-carboxylate (ACC) deaminase deletion mutation alters the physiology of the endophytic plant growth promoting bacterium Burkholderia phytofirmans PsJN FEMS Microbiol Lett (296), 131-136 45 Suwanborirux K, Chang C Ansamitocin P-3, a maytansinoid from Claopodium crispifolium and Anomodon attenuatus or associated actinomycetes Experientia (46), 117-120 46 Suzuki T, Shimizu M, Meguro A, Hasegawa S, Nishimura T, Kunoh H (2005), Visualization of infection of an endophytic actinomycete Streptomyces galbus in leaves of tissue-cultured rhodod Actinomycetologica (19),7-12 47 Thomson CJ, Bialphos SH (1995), Genetics and Biochemistry of antibiotic production 197-222 48 Trease GE, Evans WC (1996), A textbook of Pharmacognosy 14th ed Bailliere Tindall Ltd, London , 832 49 Trenser HD and Danga F (1958), Hydrogen sulfide production by Streptomyces as criteria for species differentiation J Bacteriol (76), 239 PH L C Ph l c 1: - ng nuôi c y ng YIM 38 (g/L): Cao malt 4; cao men 4; glucose 4; agar 20; H2O 1L; pH 7,2 - ng LBA (Luria-Bertani) (g/L): Cao n m men 5; Tryptone 10; NaCl 10; agar 15; H2O 1L; pH= 6,5-7,0 - ng MPA (g/L): Cao th t 3; peptone 10; NaCl 5; agar 18g; H2O 1L; pH - ng Hansen (g/L): Glucose 20; peptone 10; KH2PO4 2; MgSO4 2; cao n m men 3; agar 18g; H2O 1L; pH 6,5 - ng Bennett (g/L): Cao th t 1; glucose 10; cao men 1; Casamino acid 2; agar 18-20; H2O 1L; pH 7,3-7,5 - ng Gause-I (g/L): Tinh b t tan 20; K2HPO4 0,5; MgSO4.7H2O 0,5; NaCl 0,5; (NH4) 2SO4 2; KNO3 0,5; FeSO4 0,01; agar 18g; H2O 1L; pH 7-7,4 - ng Gause- c chi t th t 30ml; peptone 5; NaCl 5; glucose 10; agar 18g; H2O 1L; pH 7-7,4 - ng ISP-1 (g/L): Tryptone 5; cao n m men 3; agar 18g; H2O 1L; pH - ng ISP-2 (g/L): Cao n m men 3, cao malt 10; dextrose 4; agar 20g; H2O 1L; pH 7-7,2 - ng ISP-3 (g/L): B t ki u m ch 20; mu i A 1ml; agar 20g; H2O 1L; pH 7,2 - ng ISP-4 (g/L): Tinh b t tan 10; K2HPO4 1; MgSO4.7H2O 1; NaCl 1; (NH4)2SO4 2; CaCO3 2; mu i A 1ml; agar 18g; H2O 1L; pH - ng ISP-5 (g/L): Asparagin 1; glixerin 10; K2HPO4 1; mu i A 1ml; agar 20g; H2O 1L; pH 7-7,4 - ng ISP-6 (g/L): Peptone 10; cao n m men 1; xitrat s t 0,5; agar 18g; H2O 1L; pH 7-7,2 - ng ISP-7 (g/L): Glycerol 15; L-tyrosine 0,5; L-asparagine 1; FeSO4.7H2O 0,01; K2HPO4 0,5; MgSO4.7H2O 0,5; NaCl 0,5; mu i A 1ml; agar 20g; H2O 1L; pH 7,2-7,4 - ng ISP-9 (g/L): (NH4)2SO4 2,64; KH2 PO4 2,38; K2HPO4 5,65; MgSO4 1; dung d ch mu i B 1ml, ngu n cacbon 10; agar 20g; H2O 1L; pH 6,8-7 - Dung d ch mu i A (%): FeSO4 0,1; ZnSO4 0,15; MnCl2 0,1; H2O 100ml - Dung d ch mu i B (%): CuSO4 0,64; FeSO4 0,11; MgCl2 0,79; H2O 100ml Ph l c 2: DNA t ng s c a ch ng x khu n Hình s n ph m tách chi t DNA t ng s c a m t s ch ng x khu n n i c 3:YBQ40; 4:YBQ108; 5:YBQ26; 6:YBQ44; 7:YBQ80; 8:YBQ59; 9: YBQ118; 10: YBQ107; 11: YBQ88; 12: YBQ21; 13: YBQ19; 14: YBQ47; 15: YBQ65; 16: YBQ50; 17: YBQ1 Ph l c 3: B ng s li u kh i vi sinh v t ki nh c a 36 ch ng x khu n ng kính vòng kháng khu n (D-d, mm) STT Ký hi u ch ng YBQ01 0 0 0 0 YBQ02 0 0 0 7,2 ±0.16 0 YBQ19 15,9 ±0.1 0 0 0 11,3 ±0.12 YBQ21 0 0 16,5 ±0.35 0 YBQ25 0 0 12,8 ±0.28 14 ±0.17 0 YBQ36 0 0 ±0.17 YBQ40 0 15,7 ±0.12 YBQ44 0 ±0.05 0 YBQ46 9,2 ±0.13 17,3 ±0.12 10 YBQ47 19,1 ±0.32 8,8 ±0.08 11 YBQ50 0 0 12 YBQ56 13 YBQ59 15 ±0.05 10,1 ±0.05 21,3 ±0.12 22,7 ±0.12 14 0 20 ±0.26 19,3 ±0.12 9,1 ±0.07 22 ±0.12 0 0 0 18,7 ±0.06 15,8 ±0.49 10,8 ±0.18 4,7 ±0.15 8,2 ±0.15 16 ±0.35 2,6 ±0.07 18,8 ±0.3 15 ±0.1 18,8 ±0.46 1,2 ±0.04 0 0 21,5 ±0.11 0 0 23 ±0.21 21,3 ±0.14 15,5 ±0.28 16,7 ±0.12 8,5 ±0.21 12 ±0.26 16,6 ±0.42 14,9 ±0.14 YBQ63 0 0 15 YBQ65 16 YBQ75 18,8 ±0.33 16,3 ±0.28 17 YBQ76 0 18 YBQ80 14,5 ±0.06 22,9 ±0.31 16,7 ±0.21 17,7 ±0.15 8,5 ±0.13 23,3 ±0.12 19 YBQ88 0 20 YBQ90 14,2 ±0.07 14,6 ±0.45 0 0 7,3 ±0.21 12,3 ±0.23 19,5 ±0.13 ±0.17 19,3 ±0.15 15 ±0.26 5,3 ±0.03 12,3 ±0.06 17,3 ±0.12 13 ±0.14 23,2 ±0.08 22 ±0.35 5,1 ±0.13 17,6 ±0.16 0 0 0 6,3 ±0.06 16,7 ±0.12 15 ±0.14 19 ±0.42 0 11,7 ±0.08 0 10,3 ±0.06 0 STT Ký hi u ch ng ng kính vòng kháng khu n (D-d, mm) 13,8 ±0.14 12,5 ±0.94 4,9 ±0.40 9,8 ±0.46 14,7 ±0.14 17,5 ±0.05 0 0 0 23 YBQ101 0 0 0 24 YBQ104 1,5 ±0.05 0 0 0 14,5 ±0.26 20 ±0.35 14,7 ±0.32 2,1 ±0.14 12,1 ±0.1 25 YBQ105 26 YBQ106 0 0 0 0 7,2 ±0.13 27 YBQ107 0 12 ±0.53 10 ±0.14 12,3 ±0.25 12,3 ±0.23 0 28 YBQ108 0 0 0 0 7,8 ±0.08 29 YBQ115 30 YBQ116 6,8 ±0.08 31 YBQ118 32 YBQ119 0 0 33 YBQ121 11,4 ±0.05 15,8 ±0.28 15,5 ±0.09 12,3 ±0.06 19,3 ±0.42 34 YBQ122 0 0 0 0 7,5 ±0.09 35 YBQ125 1.21 ±0.13 1.7 ±0.13 1.2 ±0.14 2.07 ±0.42 1.6 ±0.21 1.83 ±0.21 1.64 ±0.34 36 YBQ128 0 1.43 ±0.06 0.33 ±0.18 0 0 0 21 YBQ92 22 YBQ94 11,2 0 ±0.03 11,2 13 ±0.09 ±0.14 5,8 5,7 16 ±0.2 ±0.04 ±0.07 17,5 ±0.09 15 ±0.42 7,8 ±0.28 6,8 ±0.44 0 0 7,8 ±0.03 9,6 ±0.12 7,9 ±0.04 10,5 0 ±0.05 11,6 4,2 ±0.23 ±0.09 18 7,4 ±0.1 ±0.14 ±0.40 9,7 ±0.15 15,7 ±0.06 0 0 0 Ghi chú:1 Escherichia coli ATCC 11105; Proteus vulgaris CNLM; Salmonella enterica ATCC 14028; Enterobacter aerogenes ATCC 13048; Pseudomonas aeruginosa CNLM; Sarcina lutea CNLM; Staphylococcus epidermidis ATCC 12228; Bacillus cereus ATCC 1177; Candida albicans ATCC 10231 Ph l c 4: Trình t 16S rDNA c a ch ng YBQ75 ... a x khu n n i c ng sinh m t s gen ch 11 2.2.1 Kh t kháng sinh c a x khu n n i c ng sinh 11 2.2.2 M t s gen ch n sinh t ng h p kháng sinh 12 2.2.3 Kháng sinh thu c nhóm anthracycline... t tính kháng vi sinh v t 26 nh gen mã hóa PKS-I, PKS-II, NRPS tham gia sinh t ng h p kháng sinh 28 4.3 Sàng l c x khu n sinh kháng sinh thu c nhóm anthraycycline 33 m sinh h... THÁI NGUYÊN I H C NÔNG LÂM - - HỒNG TH TRỊN tài: A X KHU N N I C NG SINH TRÊN CÂY QU THU TH P T I T NH YÊN BÁI KHÓA LU N T T NGHI H o IH C : Chính quy Chuyên ngành : Công ngh sinh h