Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan Hồ Điệp (Phalaenopsis Blume) từ mầm ngủ cành hoa bằng phương pháp in Vitro (Khóa luận tốt nghiệp)

Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan Hồ Điệp (Phalaenopsis Blume) từ mầm ngủ cành hoa bằng phương pháp in Vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan Hồ Điệp (Phalaenopsis Blume) từ mầm ngủ cành hoa bằng phương pháp in Vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan Hồ Điệp (Phalaenopsis Blume) từ mầm ngủ cành hoa bằng phương pháp in Vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan Hồ Điệp (Phalaenopsis Blume) từ mầm ngủ cành hoa bằng phương pháp in Vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan Hồ Điệp (Phalaenopsis Blume) từ mầm ngủ cành hoa bằng phương pháp in Vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan Hồ Điệp (Phalaenopsis Blume) từ mầm ngủ cành hoa bằng phương pháp in Vitro (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan Hồ Điệp (Phalaenopsis Blume) từ mầm ngủ cành hoa bằng phương pháp in Vitro (Khóa luận tốt nghiệp)

V N TÂN

(Phalaenopsis Blume) T M CÀNH HOA

LSD : Least Singnificant Difference Test

MT

Trang

13

19

HgCl 2 21

22

in vitro 23

23

24

24

25

2 28

29

B ng 4.3 K t qu ng c a .32

(sau 30 ngày) 34

cây lan 36

41

Trang

Hình 4.1 nh tái sinh lan H p các n BA khác nhau

Ph n 1: M U 1

t v 1

1.2 M u 2

1.3 Yêu c u c a tài 2

c và th c ti n c tài 2

Ph n 2: T NG QUAN TÀI LI U 3

2.1 Lan H p 3

2.1.1 Ngu n g c 3

2.1.2 Phân lo i 3

m th c v t c a lan H p 5

ng 5

n 7

ng thích h p cho lan H p 9

2.2.5 Tình hình nghiên c u 10

2.2.6.1 Tình hình nghiên c c 10

2.2.6.2 Tình hình nghiên c u trên th gi i 11

khoa h c c a nuôi c y mô-t bào th c v t 12

ng nuôi c y mô t bào th c v t 12

2.2.1.1 Ngu n Cacbon 12

2.2.1.2 Các nguyên t ng 13

2.2.1.3 Vitamin 13

2.2.1.4 Các ch t h t nhiên 14

2.2.1.5 Các thành ph n khác 14

2.2.1.6 pH c ng 14

2.2.1.7 Các ch ng 14

2.2.2 Nhân gi ng vô tính b ng cách tách chi t 16

3.2.3 Nhân gi ng vô tính b ng s d ng ch nh 16

PH N 3: NG, N U 18

3.1 V t li u, hóa ch t và thi t b nghiên c u 18

ng, v t li u nghiên c u 18

3.1.2 Hóa ch t s d ng 18

3.1.3 Thi t b nghiên c u 19

m và th i gian nghiên c u 19

m nghiên c u 19

3.2.2 Th i gian nghiên c u 19

3.3 N i dung nghiên c u 19

3.3.1 N i dung 1: Nghiên c u ng c a n và th i gian c a dung d ch HgCl 2 n kh o mô s ch n m, vi khu n 19

3.3.2 N i dung 2: Nghiên c u ng c a n n kh i lan H p t m n ng cành hoa 19

3.3.3 N i dung 3: Nghiên c u ng c c d n kh ng c a ch i lan H p in vitro 20

3.3.4 N i dung 4 Nghiên c u ng c a n n kh nhân nhanh ch i lan H p 20

3.3.4 N i dung 5: Nghiên c u ng c a n auxin và m t s ch ph m sinh h n kh cây lan H p 20

u 20

3.4.1.N i dung 1: Nghiên c u ng c a n và th i gian c a dung dich HgCl 2 n kh o mô s ch n m, vi khu n 20

3.4.2 N i dung 2: Nghiên c u ng c n kh ch i c a lan H p 21

3.4.3 N i dung 3 Nghiên c u ng c c d n kh ng c a ch i lan H p in vitro 22

3.4.4 N i dung 4: Nghiên c u ng c a n n kh nhân nhanh cây lan H p 23

3.4.4.1 Thí nghi m 4: Nghiên c u ng c a n n kh ân nhanh ch i lan H p 23

3.4.4.2 Thí nghi m 5: Nghiên c u ng k t h p c n kh

i lan H p 24

3.4.5 N i dung 5: Nghiên c u ng c a n auxin và m t s ch ph m sinh h n kh cây lan H p 24

: 27 4.1 Nghên c u ng c a n và th i gian c a dung dich HgCl 2 n kh o mô s ch n m, vi khu n 27

4.2 K t qu nghiên c u ng c n kh i c a cây lan H p 29

4.3 K t qu nghiên c u ng c c d ng ch i lan H p 32

4.4 K t qu nghiên c u ng c n kh i lan H 34

4.4.1 K t qu nghiên c u ng c a n n kh nhanh cây lan H p 34

4.4.2 Nghiên c u ng k t h p c n kh ch i lan H p 36

4.5 K t qu nghiên c u ng c n kh c a cây lan H p 38

4.6 K t qu nghiên c u ng c a m t s h p ch t sinh h i hóa d n kh c a cây lan H p 41

ph n 5: K T LU N VÀ KI N NGH 43

TÀI LI U THAM KH O

Tài li u Ti ng Vi t

Tài li u Ti ng Anh

P 1: M

Ph l c 2 K t qu s lý s li u

2.1 Lan H p

2.1

Lan H p có tên khoa h c là Phalaenopsis sp, có ngu n g c Ðông Nam

Á và châu Úc ây là loài lan có hoa l p và b n Chi H p g m 21 loài, h u

khí h u m và nhi bi ng trong kho ng 20 - 350 ng xu t hi n

o Malayxia, Indônêxia, Phillipin, các t n Ð , châu Úc và

nh danh v i tên g i là Angraccum album i l i là Epidendrum amabile, Sau cùng Blume - m t nhà th c v nh danh l i l n cu i cùng v i

Phalaenopsis

Hi n nay, có nhi u gi c lai v i Phalaenopsis c

m màu s c hoa có th chia thành các nhóm sau [18]:

- Nhóm hoa có màu tr ng: Hoa màu tr ng v i môi có nh ng d u m hay

- Nhóm hoa có s c: Hoa có màu tr ng, tím hay vàng và có s c m m,

t màu h n màu tím hay nâu, có s c toàn hoa hay rìa hoa

- Nhóm hoa có ch m tím: Hoa có ch i theo gi ng

- Nhóm hoa có màu m i: Ðây là nhóm m c lai t b m là nh ng gi ng

P.amboinensis; P fuscata; P gigantea

Theo tác gi Tr n Duy Quý và cs lan H p có th chia thành 2 nhóm chính[22]:

Ph.philippinensis, Ph.sanderiana, Ph.schilleriana, Ph.stuartiana Chúng có hoa to

Phalaenopsis stuartiana Phalaenopsis schilleriana Phalaenopsis amabilis

- Nhóm Stauroglottis: Hoa nh hoa trên m t cành ít

u màu k t h p nâu, vàng, hoa cà

th i k ng ngh rõ r ng r t ch m, thân phát tri n theo

ng, cành hoa m c rìa thân ho c n y ra t nách lá

H p r t khó có ch

nhân gi ng Thân c a lan H p, ngoài tác d ng gi cho cây th ng còn có

Hình 2.1: T

b R

H r c a lan H p không phân chia thành r chính, r ph , r nhánh, lông hút rõ ràng mà r c a nó th ng có d ng hình tròn, to m p Có nh ng nghiên

c u cho th y r cây thu c nhóm phong lan có kh ng quang h p Trong quá trình

ng c a cây, các loài n m ng s ng c ng sinh t i r ng tr l nnhau, vì th r c a hoa lan còn g i là r n m Bón phân cho lan ph i yêu c u bón phân n th t loãng, vì trên r cây có n m s ng c ng sinh [13], [16], [17]

Hình 2.2: R

c Lá

Lan H p có lá to dày, y d n, lá m c i x ng x p thành hai hàng, xen k

v i nhau, ôm l y thân cây S lá trên cây ng không nhi u, thông t ng m t cây

ng thành có t 4 lá tr lên Màu s c c a lá g m 3 lo i: lá màu xanh, m t trên lá

và m t i lá màu ; m t trên c a lá m và m t i lá màu D a vào màu s c

c a lá có th c màu s c hoa Lá màu ng ra hoa màu tr ng ho c hoa nh t màu Còn các lá màu khác ng cho hoa màu h ng [13], [16], [17]

Ð thích nghi v i i u ki n sinh thái nguyên sinh, lan không có khí kh ng

m t trên c a lá mà ch có m i Lan H p là loài th c v t CAM, vì v y lan

H p có kh ng ch u h n t t [13], [16], [17]

Hình 2.3:

a Hoa

Cành hoa c a lan H p m c ra t nách lá, thông ng m theo th t

t trên xu ng thì cành hoa b t u m c ra t lá th 3 ho c th 4 Các cành hoa có

th phân nhánh ho c không phân nhánh Cành hoa khi phân hóa các t hoa

150C và b b m ng n cành có th n y thành ch i hoa, n u nhi t cao trên

280C thì ch có th n y thành ch i nách [13], [16], [17]

Hình 2.4:

b Qu

Lan H p ch t o qu nh th ph n nhân t o ho c nh côn trùng V qu

có hình que, phát tri n ch ng ph i qua 4 tháng m i chín và tách v S

ng h t trong m t qu khác nhau do s khác nhau v cây b , m em th ph n

H t c a lan H p ng r t nh , có d ng b t, không có phôi , trong

i u ki n t nhiên r t khó t n y m ng ph i gieo h t trong môi t ng vô trùng thích h p m i có th thu c cây con v i s ng l n Khi gieo h t trong môi tru ng thích h p, th ng tr n protocorm

phát tri n thành cây con [8], [17]

Hình 2.5.

c Keiki

Keiki ch là m c m c t m t m u trên cành hoa Hi ng

nhi u loài lan Lan H p có kh n keiki t t phát hoa Keiki còn

có có th hình thành t r các loài Philippine p [8], [17]

Hình 2.6.

2.2.4.3 Môi tr ng thích h p cho lan H p

- Nhi : Lan H p có ngu n g c t mi n Nhi

ng 230C N u nhi th i 150C, thì r cây s ng ng hút ch t

ng, ng ng, th m chí n u g p rét h i 100C), n hoa r ng

ngày thích h p nh t là 250 -200C, kéo dài 3 - 6 tu n r t có l i cho sphân hóa hoa [10]

r t c n thi t trong quá trình phát tri n c a lan H p trong

các thành ph ng ch t Tuy nhiên, tùy thu c vào t ng th i k ng

c a cây mà nhu c i v i thành ph ng có khác nhau

10

-30-KH2PO4

hoa t

Các nguyên t chính c n thi t cho cây lan h p là: nhóm các nguyên tng: N, P, K Nhóm các nguyên t ng: Ca, Mg, S Nhóm các nguyên tng: Fe, Cu, Zn, Mn, B, Mo Cây lan c n các nguyên t ng v i li ng

và HL3) T chóp r là: VW l ng + 1,0 mg/l BAP + 1,5 mg/l TDZ ( i v i gi ng HL2) và VW l ng + 1,5 mg/lBAP + 1,0 mg/l TDZ ( i gi ng HL3)[23]

t o cây hoàn ch nh là VW + 50g/l khoai tây + 50g/l chu i (giai do n 1) và VW + 100g/l khoai tây/l + 100g/l chu o n 2), t c cây con tiêu chu

m[15]

Khi nghiên c u n ra ngoài , Ðoàn Thùy Vân và Cs ã xác

c giá th thích h p cho cây lan H p ngoài m các giai o n

o n cây t ng thành là rong bi d a + than hoa (1:1:1))

Tác gi Hoàng Th nghiên c u và ã t c phân bón t ch

h p cho t o n phát tri n c a cây

, tác gi Tr ng và Cs ã nghiên c u ng d ng k thu t chu oán và lo i b m m b nh do vi khu a m u lan H

p vào nuôi c y mô Tác gi ã phân l p c 15 m u khu n thu c 2 nhóm vi

khu n Ewinia cartovora và Pseudomonas gladioli [2].

2.2.5.2

h lan

-20].-

i auxin,

20]

trong

-3 là 20]

[4]

-inh

[4]

100

h c b ng ph n m m Microsoft office Excel 2003 và ph n m m IRRISTAT 4.0

T (%)

2 0,2

%

2 0.2% ,00 %

tái sinh (%)

V i giá tr LSD05 t 6.64 ta th y t t c các công th c thí nghi u có s sai khác so v i công th i ch ng (50,00 %) tin c u này cho th y BA có s

n 1,0 mg/l t l m u b t ch n t n 76,67% Trong khuôn kh thí nghi m này khi s d ng BA v i n 1,0 mg/l cho t l tái sinh ch i cao nh t ( t

thí nghi m gi m su ng 70,00 %

-Hình 4.1: nh tái sinh lan H p các n BA khác nhau

CT 5:N BA 2,0 mg/l (t l tái sinh ch t 70,00%)

CT 3:N BA 0,5 mg/l

(t l tái sinh ch t 73,33%)

CT 4:N BA 1,0 mg/l (t l tái sinh ch t 76,67%)

CT 2:N BA 0,3 mg/l (t l tái sinh ch t 60,00%)

CT 1:N BA 0,0 mg/l

(t l tái sinh ch t 50,00%)

c d a có ch a r t nhi u chTheo r t nhi u các nghiên c u trên th gi i v cây hoa lan nói

ng nuôi c y Ð c bi t là quá trình nuôi l n ch i lan H Ði p Các k t

c d a có ch a nhi u thành

Ti n hành so sánh các công th c thí nghi m v i công th i ch ng ta nh n

th y t t c các công th c thí nghi u có s sai khác so v i công th i ch ng,

ch i cao nh t 3,2 l n Ta ti n hành ho ch toán m t bài toán kinh t

v y khi s d nhân nhah ch i lan H p s ti t ki m g p 5 l n so v i

n xu t v i quy mô l n s ti t ki c m t kho n l n chi trcho hóa ch t

CT3: BA 1,0mg/l

Kinetin (mg/l)

Khi b sung Kinetin cho h s nhân ch i có ng Các công th c

không b sung Kinetin (công th c i ch ng có h s nhân ch t 3,06

ch tiêu ch ng ch i cho th y Kinetin có ng tích c n ch t

Kinetin t n 1 mg/l

Tuy nhiên xét c 2 ch tiêu h s nhân ch i và ch ng ch i cho th y n u

ng Kinetin trong thí nghi m b u cho h s nhân ch i và ch t

T thí nghi m 4 và 5 có th th y công th c t t nhât thí nghi m 4 cho h

s nhân ch t 3,06 l n trong khi công th c t t nh t thí nghi m 5 cho h snhân ch i lên t i 3,43 l n Các công th c thí ngi m cho k t qu th

phát sinh

trung bình

dài (cm)

5 mg/l u

CT5: NAA 2,0 mg/l

cm)

25 Koch (1974), Untersuchgen zur vegetativen Vermchrung bei Phalaenopsis in vitro Diss, Technical Univ, Hannover, Germany

26 M.L.Chai CJX, K.K Senthil J.Y.Kim, D.H.Kim (2002), Stable transformation of protocorm - like bodies in Phalaenopsis Acta horticulturae sinica, 732 734

27 Michio Tanaka YS (1978), Factors affecting the growth of in vitro cultured

lateral buds from Phalaenopsis is flower stalks Scientia Horticulrae, 117

126

28 So - Young Park HNM, Kee Yoeup (2002), Rapid propagation of Phalaenops is from floral - stalk leayes derive Invitro cell development biolology, 168 172

29.Dennis Kao, 2012 President of Taiwan Orchid Growers Association The developments and trends of orchid in Taiwan

30.ICOGO manual 2009 A Message from the President [Sourse: Meeting 5 March 2009

31 Tanaka et al, (1974) Studies on the clonal propagationof monopodial orchid

by tissue culture I.Formation of protocorm -like bodies from leaftissue in Phlaenopsis and Vanda in vitro J Jpn Soc Hortic Sci (Citied in Tanaka et al., 1976)

MgSO4.7H2O MnSO4.4H2O ZnSO4.7H2O CuSO4.5H2O

37 2,23 1,058 0,0025

10

370,0 22,3 10,6 0,025

III

CaCl2.2H2O KI CoCl2.6H2O

44 0,083 0,0025

10

440,0 0,83 0,025

10

170,0 6,2 0,25

Vitamin

Nicotinic acid Glycine Thiamine acid Pyridocine HCl

100 100 100 100

0,5 2,0 0,1 0,5

0,5 2,0 0,1 0,5

Tên sinh viên:

Ý

3

4.2

Khá Trung bình

Ghi chú: -7): Trung bình; [7-8): Khá; [8-9)