Đang tải... (xem toàn văn)
Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)Nghiên cứu khả năng nhân nhanh giống lan hài giáp Paphiopedilum malipoense bằng phương pháp in vitro. (Khóa luận tốt nghiệp)
ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - TRẦN THI ̣PHƢƠNG NHUNG Tên đề tài NGHIÊN CƢ́U KHẢ NĂNG NHÂN NHANH GIỐNG LAN HÀ I GIÁP (Paphiopedilum malipoense) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hê ̣ đào ta ̣o : Chính quy Chuyên ngành : Công nghê ̣ sinh ho ̣c Khoa: : CNSH-CNTP Khoá học : 2012-2016 Thái Nguyên, năm 2016 ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM - - TRẦN THI ̣PHƢƠNG NHUNG Tên đề tài NGHIÊN CƢ́U KHẢ NĂNG NHÂN NHANH GIỐNG LAN HÀ I GIÁP (Paphiopedilum malipoense) BẰNG PHƢƠNG PHÁP IN VITRO KHOÁ LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC Hê ̣ đào tạo : Chính quy Chuyên ngành: Công nghê ̣ sinh ho ̣c Khoa : CNSH-CNTP Khoá học : 2012-2016 Giảng viên hƣớng dẫn 1: ThS Nguyễn Thi Ti ̣ ̀nh Giảng viên hƣớng dẫn 2: ThS Nguyễn Xuân Vũ Thái Nguyên - năm 2016 i LỜI CẢM ƠN Đƣợc sự đồng ý của Ban giám hiệu nhà trƣờng , Ban chủ nhiê ̣m khoa Công nghê ̣ sinh ho ̣c và Công nghê ̣ thƣ̣c phẩ m , thời gian thƣ̣c tâ ̣p tố t nghiê ̣p em đã thƣ̣c hiê ̣n đề tài : “Nghiên cƣ́u khả nhân nhanh giố ng lan hài G iáp (Paphiopedilum malipoense) bằ ng phƣơng pháp in vitro” Trang đầ u tiên của khoá luâ ̣n này em xin gƣ̉i lời cảm ơn tới Ban giám hiê ̣u nhà trƣờng, Ban chủ nhiê ̣m khoa Công nghê ̣ S inh ho ̣c và Công nghê ̣ T hƣ̣c phẩ m cù ng các thầy cô giáo Khoa đã tạo điều kiện thuận lợi cho em hoàn thành đề tài nghiên cƣ́u này Đặc biệt, em xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc , em xin gƣ̉i lời cảm ơn chân thành tới cô giáo ThS Nguyễn Thi Ti ̣ ̀nh và thầy giáo T hS Nguyễn Xuân Vũ , giảng viên khoa Công nghê ̣ Sinh ho ̣c và Công nghê ̣ Thƣ̣c phẩ m đã tâ ̣n tình chỉ bảo , giúp đỡ và hƣớng dẫn em thời gian thƣ̣c hiê ̣n đề tài Đồng thời, em xin cám ơn tha ̣c si ̃ Ma Thi ̣Hoàn đã giúp đỡ và tạo điều kiện tốt nhấ t cho em ś t q trình thƣ̣c tâ ̣p tố t nghiê ̣p Cuố i cùng, em xin cảm ơn gia đình đã tạo điều kiện vật chất và là chỗ dƣ̣a tinh thầ n cho em suố t thời gian thƣ̣c tâ ̣p , cảm ơn bạn bè đã hết lòng động viên, giúp đỡ suốt thời gian qua Trong quá triǹ h thƣ̣c tâ ̣p , cũng nhƣ là quá trình làm báo cáo thƣ̣c tâ ̣p thời gian có ̣n , trình độ và kỹ bản thân còn nhiều hạn chế nên đề tài không thể tránh khỏi nhƣ̃ng sai sót Em rấ t mon g nhâ ̣n đƣơ ̣c nhƣ̃ng ý kiế n đó ng góp của thầ y cô và các bạn để đề tài của em đƣợc hoàn thiện Lời cuố i em xin kiń h chúc các thầ y , cô giáo nhà trƣờng , khoa Công nghê ̣ Sinh ho ̣c và Công n ghê ̣ thƣ̣c phẩ m , cùng các bạn đồng nghiệp sức khoẻ , thành công cuộc sống Em xin chân thành cảm ơn! Thái Nguyên, ngày 21 tháng năm 2016 Sinh viên thƣc̣ hiêṇ Trầ n Thi Phƣơng Nhung ̣ ii DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 2.1 Các nhóm lan Hài Việt Nam theo thứ hạng bảo tồn của Tổ chức Bảo tồn Thiên nhiên Quố c tế (IUCN) [1] Bảng 3.1 Thiế t bi,dụng cụ nghiên cƣ́u .23 ̣ Bảng 3.2 Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng cuả nồ ng đô ,̣ thời gian của chấ t khƣ̉ trùng của HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng lan hài Giáp 26 Bảng 4.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian khƣ̉ trùng của HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng (sau ngày nuôi cấy) 32 Bảng 4.2 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA đế n khả tái sinh chồ i lan hài Giáp (sau 40 ngày nuôi cấy) 35 Bảng 4.3 Kế t quả nghiên cƣ́u ản h hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả nhân nhanh giố ng lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 Bảng 4.4 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin và TDZ đến khả nhân nhanh giống lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 40 Bảng 4.5 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 43 Bảng 4.6 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA kế t hơ ̣p với than hoa ̣t tính đế n khả rễ lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 45 iii DANH MỤC CÁC HÌ NH Hình 2.1 Hình ảnh về lan hài Giáp (Paphiopedilum malipoense) .12 Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu ảnh hƣởng của mợt số chất kích thích sinh trƣởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi rễ của lan hài Giáp 25 Hình 4.1 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣, thời gian của HgCl đến khả tạo vật liê ̣u vô trùng (sau ngày nuôi cấy) 33 Hình 4.2 Biể u đồ ảnh hƣởng của BA đế n khả tái sinh giố ng lan hài Giáp sau 40 ngày nuôi cấy .35 Hình 4.3 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA tố t nhấ t kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả nhân nhanh giố ng lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 38 Hình 4.4 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA tố t nhấ t kế t hơ ̣p với Kinetin và TDZ đến khả nhân nhanh giống lan hài Giáp (sau 40 ngày nuôi cấy) 40 Hình 4.5 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 43 Hình 4.6 Biể u đồ ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA tố t nhấ t kế t hơ ̣p với THT đế n khả rễ lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 46 iv DANH MỤC CÁC TƢ̀, CỤM TỪ VIẾT TẮT BA : 6-Benzyladenine BT : Bình thƣờng Cs : Cô ̣ng sƣ̣ CT : Công thƣ́c CV : Coeficient of Variation Đ/C : Đối chứng Kinetin : 6-Furfurylaminopurine LSD : Least Singnificant Difference Test MS : Murashige & Skoog’s, 1962 MT : Môi trƣờng NAA : α-Naphthalene acetic acid ND : Nƣớc dƣ̀a PLB : Protocorm like body RE : Robert Ernst TDZ : Thidiazol THT : Than hoa ̣t tính TN : Thí nghiệm v MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC CÁC BẢNG ii DANH MỤC CÁC HÌNH iii DANH MỤC CÁC TƢ̀, CỤM TỪ VIẾT TẮT iv MỤC LỤC v Phần 1: MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục đích nghiên cứu 1.3 Yêu cầ u của đề tài 1.4 Ý nghĩa khoa học và thực tiễn của đề tài .2 Phần 2: TỔNG QUAN TÀ I LIỆU 2.1 Tổ ng quan về lan Hài 2.1.1 Phân loa ̣i và nguồ n gố c .3 2.1.1.1 Phân loa ̣i 2.1.1.2 Nguồ n gố c 2.1.2 Đặc điểm hình thái 2.1.3 Sinh thái 2.1.4 Hiê ̣n tra ̣ng lan Hài Viê ̣t Nam 2.2 Giới thiê ̣u về giố ng lan Hài Giáp .10 2.2.1 Nguồ n gố c và sƣ̣ phân bố 10 2.2.2 Hình thái 11 2.2.3 Các điều kiện bản để nuôi trồng giống lan hài P malipoense 13 2.2.3.1 Nhiê ̣t đô ̣, đô ̣ ẩ m, ánh sáng 13 2.2.3.2 Nhu cầ u bón phân 13 2.2.3.3 Giá thể trồng 13 2.2.4 Các phƣơng pháp nhân giống vô tính lan hài Giáp 13 2.3 Cơ sở khoa học của nuôi cấy mô tế bào thực vật .14 vi 2.3.1 Tính toàn của tế bào thực vật 14 2.3.2 Sƣ̣ phân hoá tế bào 14 2.3.3 Sƣ̣ phản phân hoá tế bào 15 2.3.4 Mô ̣t số yế u tố ảnh hƣởng đế n quá trin ̀ h nuôi cấ y mô tế bào thƣ̣c vâ ̣t .15 2.3.4.1 Vâ ̣t liê ̣u nuôi cấ y 15 2.3.4.2 Điề u kiê ̣n nuôi cấ y .16 2.3.5 Môi trƣờng dinh dƣỡng 16 2.3.5.1 Nguồ n Cacbon 16 2.3.5.2 Các nguyên tố khoáng đa lƣợng, vi lƣơ ̣ng 16 2.3.5.3 Vitamin 17 2.3.5.4 Các chất hữu tự nhiên 17 2.3.5.5 Các thành phần khác 18 2.3.5.6 pH của môi trƣờng .18 2.3.5.7 Các chất điều hoà sinh trƣởng 18 2.4 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô lan Hài thế giới và nƣớc .20 2.4.1 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô lan Hài tr ên thế giới 20 2.4.2 Tình hình nghiên cứu về nuôi cấy mô lan Hài nƣớc .22 Phần 3: ĐỐI TƢỢNG, NỘI DUNG VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CƢ́U 23 3.1 Vâ ̣t liê ̣u, hoá chất và thiết bị nghiên cứu 23 3.1.1 Đối tƣơ ̣ng, vâ ̣t liê ̣u nghiên cƣ́u 23 3.1.2 Hoá chất sử dụng .23 3.1.3 Thiế t bi,dụng cụ nghiên cứu 23 ̣ 3.2 Phạm vi, điạ điể m và thời gian nghiên cƣ́u 24 3.2.1 Phạm vi nghiên cứu 24 3.2.2 Điạ điể m nghiên cƣ́u .24 3.2.2 Thời gian nghiên cƣ́u 24 3.3 Nô ̣i dung nghiên cƣ́u 24 3.3.1 Nô ̣i dung 1: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian của chấ t khƣ̉ trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng lan hài Giáp .24 vii 3.3.2 Nô ̣i dung 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ BA đến khả tái sinh chồi lan hài Giáp từ đoạn thân mang chồi ngủ 24 3.3.3 Nô ̣i dung 3: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ n g đô ̣ BA, Kinetin, TDZ đế n khả nhân nhanh chồ i lan hài Giáp 24 3.3.4 Nô ̣i dung 4: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA và than hoa ̣t tính đế n khả rễ của lan hài Giáp 24 3.4 Phƣơng pháp nghiên cƣ́u 25 3.4.1 Chuẩ n bi môi trƣờng nuôi cấ y in vitro 25 ̣ 3.4.2 Phƣơng pháp nghiên cƣ́u 25 3.4.3 Phƣơng pháp bố trí thí nghiê ̣m 25 3.4.3.1 Nô ̣i dung 1: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian của chấ t khƣ̉ trùng HgCl2 đến khả tạo vật liệu vô trùng lan hài Giáp .26 3.4.3.2 Nô ̣i dung 2: Nghiên cứu ảnh hƣởng của nồng độ BA đến khả tái sinh chồi lan hài Giáp từ đoạn thân chứa mắt ngủ 27 3.4.3.3 Nô ̣i dung 3: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của của nồng độ BA, Kinetin, TDZ đế n khả nhân nhanh chồ i lan hài Giáp 27 3.4.3.4 Nô ̣i dung 4: Nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA và hoa ̣t tin ́ h đế n khả rễ của lan hài Giáp 28 3.5 Phƣơng pháp đánh giá và xƣ̉ lý số liê ̣u 29 Phần 4: KẾT QUẢ NGHIÊN CƢ́U VÀ THẢO LUẬN 31 4.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ,̣ thời gian của chấ t khƣ̉ trùng HgCl đến khả tạo vật liệu vô trùng 31 4.2 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng củ a nồ ng đô ̣ BA đế n khả tái sinh chồ i lan hài Giáp .34 4.3 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ BA, Kinetin, TDZ đế n khả nhân nhanh giố ng lan hài Giáp 37 4.3.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả nhân nhanh giố ng lan hài Giáp 37 viii 4.3.2 Kế t quả nghiên cứu ảnh hƣởng của BA kết hợp với Kinetin và TDZ đến khả nhân nhanh giố ng lan hài Giáp 39 4.4 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA và hoa ̣t tin ́ h đế n khả rễ của lan hài Giáp 42 4.4.1 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của nồ ng đô ̣ NAA đế n khả rễ của lan hài Giáp .42 4.4.2 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của NAA kế t hơ ̣p với than hoa ̣t tính đế n khả nhân nhanh lan hài Giáp 45 Phầ n 5: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHI 48 ̣ 5.1 Kế t luâ ̣n 48 5.2 Kiế n nghi 48 ̣ TÀI LIỆU THAM KHẢO I Tiế ng Viê ̣t II Dịch từ tiếng nƣớc ngoài III Tiế ng Anh PHỤ LỤC ... ảnh về lan hài Giáp (Paphiopedilum malipoense) .12 Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu ảnh hƣởng của mợt số chất kích thích sinh trƣởng đến khả tái sinh, nhân nhanh chồi rễ của lan hài... quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin đế n khả nhân nhanh giố ng lan hài Giáp 37 viii 4.3.2 Kế t quả nghiên cứu ảnh hƣởng của BA kết hợp với Kinetin... Bảng 4.4 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh hƣởng của BA kế t hơ ̣p với Kinetin và TDZ đến khả nhân nhanh giống lan hài Giáp (sau 30 ngày nuôi cấy) 40 Bảng 4.5 Kế t quả nghiên cƣ́u ảnh