BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH ….W U X… PHẠM VĂN BÌNH ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN LỒI MẮM TRẮNG (Avicennia alba BL.) Ở RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ BẰNG KỸ THUẬT AFLP LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Thành phố Hồ Chí Minh Tháng / 2010 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM TP HỒ CHÍ MINH ….W U X… PHẠM VĂN BÌNH ĐÁNH GIÁ ĐA DẠNG DI TRUYỀN LỒI MẮM TRẮNG (Avicennia alba BL.) Ở RỪNG NGẬP MẶN CẦN GIỜ BẰNG KỸ THUẬT AFLP Chuyên ngành: Công nghệ Sinh học Mã số : 60.42.80 LUẬN VĂN THẠC SĨ CÔNG NGHỆ SINH HỌC Hướng dẫn khoa học: TS BÙI MINH TRÍ Lý lịch cá nhân Tơi tên Phạm Văn Bình, sinh ngày 02 tháng 04 năm 1982, xã Phước Diêm, huyện Ninh Phước, tỉnh Ninh Thuận Con Ông Phạm Văn Là Bà Tăng Diệu Liếm Tốt nghiệp Tú tài Trường Trung học phổ thông Nguyễn Trãi, Thị xã Phan Rang - Tháp Chàm, tỉnh Ninh Thuận năm 2001 Tốt nghiệp Đại học ngành Công nghệ Sinh học hệ quy Trường Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh năm 2005 Tháng 09 năm 2006 theo học Cao học ngành Công nghệ Sinh học Trường Đại học Nơng Lâm Thành phố Hồ Chí Minh Tình trạng gia đình: đính ngày 11- – 2010 (ngày – AL) Địa liên lạc: Lạc Tân, Phước Diêm, Thuận Nam, Ninh Thuận Điện thoại: 0683.860259 0983.889796 Email: phambinhbio@gmail.com pvbinh@vnuhcm.edu.vn ii Lời cam đoan Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác Phạm Văn Bình iii Lời cảm ơn ¾ Ngàn lời biết ơn xin gởi đến Cha Mẹ Cô, người nuôi dạy khơn lớn có hơm ¾ Thành tâm cảm ơn hai bên Nội Ngoại ln ủng hộ, động viên giúp đỡ ¾ Trân trọng cảm ơn Thầy Cơ phòng Sau Đại học Bộ môn Công nghệ Sinh học xếp, bố trí để tơi hồn thành khóa học ¾ Lời tri ân sâu sắc xin gởi đến Thầy - TS Bùi Minh Trí, hướng dẫn khoa học, tận tình giúp đỡ, bảo tơi quảng đường Đại học lẫn Cao học ¾ Chân thành cảm ơn Thầy Viên Ngọc Nam, cảm ơn Thầy Cô, anh chị em làm việc thực Đề tài Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hóa Sinh Trường Đại học Nơng Lâm Tp Hồ Chí Minh ¾ Chân thành cảm ơn chị Võ Thị Thúy Huệ, anh Hà Trần Minh Dũng, anh Nguyễn Thanh Tùng, em Văn Ngọc Dung, Nguyễn Minh Nam, em Huỳnh Quốc Thái, Trần Văn Trường bạn Phi, Lê, Dương, Trà, Phượng, Vũ, Lẫm,… giúp đỡ thực đề tài chia lúc buồn vui ¾ Chân thành cảm ơn em Bùi Thế Kiệt anh em Ban quản lý rừng ngập mặn Cần Giờ nhiệt tình giúp đỡ tơi suốt thời gian thu thập mẫu ¾ Đồng cảm ơn anh chị bạn lớp Cao học Công nghệ Sinh học 2006, lớp CNSH 27 bạn bè gần xa bên cạnh, chia sẻ, động viên giúp đỡ ¾ Lời cảm ơn sau xin dành cho Em Gia đình em, tạo điểm tựa tinh thần để tơi tiến bước PHẠM VĂN BÌNH iv TÓM TẮT Đề tài nghiên cứu “Đánh giá đa dạng di truyền loài Mắm trắng (Avicennia alba BL.) rừng ngập mặn Cần Giờ kỹ thuật AFLP” tiến hành Trung tâm Phân tích Thí nghiệm Hóa Sinh trường Đại học Nơng Lâm TP Hồ Chí Minh, thời gian từ tháng năm 2008 đến tháng 12 năm 2009 Mắm trắng xem loài tiên phong, đóng vai trò quan trọng rừng ngập mặn Cần Giờ Trong đề tài này, 80 mẫu Mắm trắng thuộc 15 tiểu khu thu nhận phân tích AFLP Chúng tơi bố trí thí nghiệm để hồn thiện quy trình AFLP sử dụng phần mềm Statgraphics centurion, NTSYSpc 2.1 Popgene 1.32 để xử lý số liệu đánh giá mức độ đa dạng di truyền quần thể Mắm trắng rừng ngập mặn Cần Giờ Với quy trình ổn định, chúng tơi ly trích 75 mẫu có chất lượng DNA tốt khảo sát thành công việc thay adaptor primer tiền chọn lọc khơng theo kit quy trình AFLP Đồng thời, thực thành công việc kết hợp primer phản ứng PCR khuếch đại chọn lọc gồm primer MseI-CNN primer EcoRI-ANN Tuyển chọn tổ hợp primer chọn lọc có tính đa hình cao để phân tích AFLP, đa hình cao tổ hợp primer AM-CTG/E-AGC số PIC tổ hợp primer biến thiên từ 0,395 đến 0,415 Phân tích AFLP 75 mẫu với tổ hợp primer chọn lọc thu nhận 289 band, có 228 band đa hình, chiếm tỷ lệ 78,89% Phân tích phần mềm NTSYSpc 2.1 cho hệ số tương đồng di truyền 75 mẫu biến thiên từ 0,63 đến 0,965 Với phần mềm Popgene 1.32, kết cho khoảng cách di truyền mẫu Mắm trắng thuộc 12 tiểu khu biến thiên từ 0,005 đến 0,175 Từ di truyền cho thấy quần thể Mắm trắng rừng ngập mặn Cần Giờ có mức độ đa dạng di truyền thấp có lai tạo phức tạp v ABSTRACT The thesis: “Assessing genetic diversity of Avicennia alba in Can Gio mangrove by AFLP marker” This thesis was carried out at Chemical and Biological Analysis and Experiment Center, Nong Lam University, from April 2008 to October 2009 Avicennia alba is considered the major specie It plays an important role in Can Gio mangrove In this study, 80 samples were collected at 15 sub-areas in Can Gio mangrove and analyzed by using AFLP marker We arranged the experiments to complete AFLP protocol Then using Statgraphics centurion, NTSYSpc 2.1 and Popgene 1.32 software to analyze data and evaluate the genetic diversity of Avicennia alba in Can Gio mangrove With stabilization of protocol, 75 high quality DNA samples were extracted from 80 Avicennia alba leaf samples and applied for AFLP analysis Adaptor and pre-selective primer of Invitrogen manufacturer were successfully interchanged to those in AFLP kit Simultaneously, successful combination of primers which were two EcoRI-ANN and one MseI-CNN in a multiplex selective PCR amplification reaction was approached Eight selective primer combinations with high polymorphism were chosen from 64 combinations for AFLP analysis Among of them, AM-CTG/E-ACC complex showed the highest polymorphism The PIC index varied from 0.395 to 0.415 Based on data of 75 AFLP analyses using primer combinations, 289 variable DNA fragment were recorded 228 of them (78.89%) were considered polymorphic By using the NTSYSpc 2.2, the coefficient of similarity of 75 samples ranged between 0.63 and 0.965 Through Popgene 1.32 software, the genetic distance of Avicennia alba from 12 sub-areas varied from 0.005 to 0.175 The phylogenic trees showed the low level of genetic diversity but complex crossing of Avicennia alba population in Can Gio mangrove vi MỤC LỤC CHƯƠNG TRANG Lý lịch cá nhân ii Lời cam đoan iii Lời cảm ơn iv TÓM TẮT v MỤC LỤC vii DANH SÁCH CÁC CHỮ VIẾT TẮT xi DANH SÁCH CÁC HÌNH VÀ BIỂU ĐỒ xiii DANH SÁCH CÁC BẢNG xv Chương GIỚI THIỆU 1.1 Đặt vấn đề 1.2 Mục tiêu mục đích 1.2.1 Mục tiêu 1.2.2 Mục đích Chương TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Giới thiệu rừng ngập mặn 2.1.1 Phân bố 2.1.2 Đặc trưng đa dạng sinh học rừng ngập mặn 2.1.3 Tầm quan trọng lợi ích rừng ngập mặn 2.1.4 Rừng ngập mặn Việt Nam 2.1.5 Rừng ngập mặn Cần Giờ 2.2 Đặc điểm Mắm trắng (Avicennia alba) 11 2.3 Đa dạng sinh học 13 2.3.1 Đa dạng di truyền 13 2.3.2 Đa dạng loài 14 vii 2.3.3 Đa dạng hệ sinh thái 14 2.3.4 Lợi ích đa dạng sinh học 14 2.4 Các phương pháp nghiên cứu tính đa dạng di truyền 15 2.4.1 Thông tin di truyền 15 2.4.2 Phương pháp ly trích DNA 16 2.4.3 PCR (Polymerase Chain Reaction) 16 2.4.4 Các marker phân tử dùng nghiên cứu đa dạng di truyền 18 2.4.4.1 RFLP (Restriction Fragment Length Polymorphism) 18 2.4.4.2 SSCP (Single - Strand Conformation Polymorphism) 19 2.4.4.3 SSR (Simple Sequence Repeat) 20 2.4.4.4 RAPD (Random Amplified Polymorphic DNA) 20 2.4.4.5 AFLP (Amplified Fragment Length Polymorphism) 22 2.4.5 Các phần mềm dùng việc đánh giá đa dạng di truyền 28 2.4.5.1 NTSYSpc 2.1 28 2.4.5.2 Popgene 1.32 29 2.5 Các nghiên cứu nước đa dạng di truyền thực vật rừng ngập mặn 30 2.5.1 Các nghiên cứu giới 30 2.5.2 Các nghiên cứu nước 31 Chương 32 VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 32 3.1 Thời gian địa điểm 32 3.1.1 Thời gian 32 3.1.2 Địa điểm 32 3.2 Nội dung nghiên cứu 32 3.3 Vật liệu hóa chất 33 3.3.1 Các mẫu thí nghiệm 33 3.3.2 Hóa chất thí nghiệm 34 3.3.2.1 Hóa chất dùng ly trích DNA .34 viii 3.3.2.2 Hóa chất dùng điện di 34 3.3.2.3 Hóa chất dùng để chạy AFLP .34 3.4 Phương pháp nghiên cứu 34 3.4.1 Phương pháp ly trích DNA 34 3.4.2 Định tính định lượng DNA 35 3.4.2.1 Định tính DNA phương pháp điện di 35 3.4.2.2 Định lượng DNA phương pháp đo mật độ quang (OD) .36 3.4.3 Phương pháp AFLP (Quy trình theo Applied Biosystems) 36 3.4.3.1 Cắt DNA kiểm tra gel agarose 37 3.4.3.2 Chuẩn bị hỗn hợp enzyme 37 3.4.3.3 Thực phản ứng cắt gắn .37 3.4.3.4 Nhân tiền chọn lọc 39 3.4.3.5 Nhân chọn lọc 41 3.4.3.6 Điện di sản phẩm nhân chọn lọc máy giải trình tự DNA (máy sequencer ABI 3100) .42 3.4.3.7 Tối ưu hóa phản ứng PCR chọn lọc .43 3.4.3.8 Chọn tổ hợp primer chọn lọc thích hợp cho việc phân tích AFLP Mắm 43 3.4.4 Phân tích kết 44 Chương 45 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 45 4.1 Kết thu thập mẫu 45 4.2 Ly trích DNA 46 4.3 Tối ưu hóa số thành phần hóa chất kỹ thuật AFLP 48 4.3.1 Kết cắt DNA 48 4.3.2 Hiệu adaptor giai đoạn cắt gắn DNA 49 4.3.3 Hiệu primer tiền chọn lọc 50 4.3.4 Hiệu adaptor primer tiền chọn lọc nhân chọn lọc 51 4.3.5 Tối ưu hóa phản ứng PCR chọn lọc 54 ix Phụ lục 2: Thành phần hóa chất ly trích DNA Dung dịch rửa WB: ¾ WB1 gồm thành phần : 100 mM Tris/HCl, pH 7.5, 1.4 M NaCl, 2% PVP-40, 20 mM EDTA, pH 8.0 1% b-mercaptoethanol Cách pha: cho 100 ml dd EB 28 ml 5M NaCl 20 ml 0,5M Tris-HCl ml 0,5M EDTA 47 ml H2O g PVP Cho vào ml b-mercaptoethanol trước sử dụng ¾ WB2: NaCl 1M Dịch trích EB gồm : 2% CTAB, 100 mM Tris/HCl, pH 7.5, 1.4 M NaCl, 2% PVP-40, 20 mM EDTA, pH 8.0 1% b-mercaptoethanol Cách pha: 100 ml dd EB - 28 ml 5M NaCl - 47 ml H2O - 20 ml 0,5M Tris-HCl - g PVP - ml 0,5M EDTA - g CTAB Ủ 650 C Cho vào ml b-mercaptoethanol trước sử dụng TE (1X): pH = 8, V = 100 ml (10 mM Tris – HCl; mM EDTA) Cách pha : ml Tris – HCl 0,5M 0,2 ml EDTA 0,5 M 97,8 ml H2O Phụ lục 3: Kết điện di DNA mẫu ly trích 5_1 6_4 2_2 NT1a 6_5 NT1b 5_2 NT1a NT1b 6_6 6_7 3_1 13_1 3_2 7_1 3_3 7_2 3_4 2_1 7_3 2_3 2_4 14_1 2_5 2_6 14_2 2_7 14_3 14_4 23_1 Lad 23_2 23_3 23_4 Phụ lục 4: Kết đo OD mẫu DNA ly trích STT 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 Tên mẫu 5_1 5_2 5_3 5_4 5_5 5_6 10_1 10_2 10_3 10_4 10_5 10_6 10_7 10_8 11_1 11_2 11_3 11_4 11_5 11_6 11_7 17_1 17_2 17_3 17_4 17_5 17_6 17_7 17_8 17_9 8_1 15_1 9_1 9_2 15_2 9_3 15_3 Tỷ số Nồng độ OD260/280nm DNA(ng/µl) 2,10 1,96 2,01 1,85 2,03 1,90 2,01 1,95 1,95 1,80 1,87 2,18 2,13 1,95 2,12 1,84 2,01 1,85 1,72 1,48 1,84 2,17 2,11 1,85 2,01 1,96 1,87 2,18 1,80 1,82 1,82 2,05 1,84 1,78 2,19 1,73 1,75 153,62 147,56 188,30 220,72 273,00 330,27 168,70 214,62 249,40 133,56 208,90 102,08 140,60 112,05 99,60 135,85 142,26 87,30 153,70 38,46 124,80 127,90 98,60 165,50 208,46 190,93 184,32 124,00 175,90 237,56 128,52 101,00 368,00 321,20 185,71 280,50 232,86 STT 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 Tên mẫu 10_11 10_12 16_2 10_13 10_14 11_8 11_9 11_10 10_15 10_16 6_1 6_2 6_3 6_4 6_5 6_6 6_7 3_1 13_1 3_2 7_1 3_3 7_2 3_4 2_1 2_2 7_3 2_3 2_4 14_1 2_5 2_6 14_2 2_7 14_3 14_4 23_1 Tỷ số Nồng độ OD260/280nm DNA(ng/µl) 2,03 1,95 1,84 1,90 1,88 2,01 1,73 1,70 1,71 1,76 1,80 1,86 2,00 1,96 1,82 2,05 1,53 1,92 1,36 2,13 2,19 2,05 1,98 2,05 1,98 1,90 1,82 1,89 1,90 2,04 2,11 2,18 1,8 1,80 1,81 1,8 1,90 264,00 175,00 243,26 220,00 248,65 182,60 235,40 287,00 290,30 302,19 350,05 326,08 176,02 37,95 468,62 261,00 51,06 131,02 28,32 186,05 517,51 157,93 240,50 265,00 241,92 435,50 605,00 410,60 374,10 406,80 245,70 330,00 207,45 185,20 330,08 290,19 402,04 38 39 40 10_9 10_10 16_1 2,17 1,9 2,11 138,00 152,30 171,53 78 79 80 23_2 23_3 23_4 1,71 1,76 1,81 60,20 101,42 98,78 Phụ lục 5: Kết điện di thí nghiệm Mẫu 5_1 Mẫu 5_2 NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 58 61 63 68 72 73 78 79 93 94 115 120 121 132 143 150 156 167 169 184 189 302 336 50 63 81 98 106 149 152 182 214 280 50 62 63 73 79 81 106 149 152 182 214 302 336 50 58 62 63 73 79 81 93 94 107 115 149 150 152 179 182 214 280 302 336 50 58 61 63 63 68 72 73 78 79 81 93 94 106 115 120 121 132 143 149 150 152 57 61 68 79 85 93 94 98 115 120 132 143 150 154 156 167 169 179 184 188 197 156 51 86 98 106 140 149 154 182 202 273 280 296 315 Mẫu 5_3 NT1 NT2 NT3 NT4 NT5 58 61 68 72 73 79 93 94 115 120 132 137 143 150 156 167 172 184 189 302 336 51 81 98 106 145 149 154 178 182 273 315 61 68 81 94 98 106 115 149 150 58 61 72 79 81 93 94 98 106 115 120 132 137 143 145 149 150 154 167 172 184 51 58 61 72 73 79 81 93 94 98 106 115 120 132 137 143 145 149 150 154 156 51 57 61 68 79 86 93 94 98 106 115 120 132 140 149 150 156 167 169 179 182 51 58 62 68 79 86 93 94 98 115 121 132 140 143 149 150 154 167 169 179 182 51 57 61 68 79 85 93 94 98 98 115 120 132 140 143 149 150 154 154 156 167 262 189 189 169 302 167 302 202 202 179 315 172 167 336 262 273 182 336 182 169 352 273 280 188 189 182 383 280 296 202 315 184 420 296 302 262 189 447 302 315 273 214 280 315 336 336 280 296 302 383 302 336 447 315 336 352 383 447 154 156 167 182 273 302 315 336 Phụ lục 6: Kết thống kê số liệu thí nghiệm ANOVA Table for So sản phẩm khuếch đại by NT Source Sum of Df Mean F-Ratio Squares Square Between 634.667 158.667 4.92 groups Within groups 322.667 10 32.2667 Total (Corr.) 957.333 14 P-Value 0.0188 Table of Means for So sản phẩm khuếch đại by NT with 95.0 percent LSD intervals Stnd error NT Count Mean (pooled s) Lower limit Upper limit 24.0 3.27957 18.8329 29.1671 11.3333 3.27957 6.16626 16.5004 3 20.6667 3.27957 15.4996 25.8337 24.3333 3.27957 19.1663 29.5004 31.3333 3.27957 26.1663 36.5004 Total 15 22.3333 Multiple Range Tests for So sản phẩm khuếch đại by NT Method: 95.0 percent LSD NT Count Mean Homogeneous Groups 11.3333 X 3 20.6667 XX 24.0 XX 24.3333 XX 31.3333 X Contrast Sig Difference +/- Limits 1-2 * 12.6667 10.3341 1-3 3.33333 10.3341 1-4 -0.333333 10.3341 1-5 -7.33333 10.3341 2-3 -9.33333 10.3341 2-4 * -13.0 10.3341 2-5 * -20.0 10.3341 3-4 -3.66667 10.3341 3-5 * -10.6667 10.3341 4-5 -7.0 10.3341 * denotes a statistically significant difference Phụ lục : Kết thống kê số liệu 64 tổ hợp primer chọn lọc ANOVA Table for So sản phẩm khuếch đại by Primer Source Between groups Within groups Total (Corr.) Sum of Squares 11335.9 2349.33 13685.3 Df 63 128 191 Mean Square 179.935 18.3542 F-Ratio 9.80 P-Value 0.0000 Table of Means for So sản phẩm khuếch đại by Primer with 95.0 percent LSD intervals Primer 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 Count 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 Mean 5.66667 3.0 10.3333 2.0 24.0 1.33333 11.3333 11.6667 2.33333 10.6667 16.3333 28.6667 7.66667 19.0 4.33333 10.6667 0.666667 0.333333 4.33333 1.33333 0.333333 3.66667 0.666667 2.66667 2.66667 10.3333 1.33333 6.0 26.6667 9.33333 5.66667 10.0 1.0 4.0 1.0 2.0 0.0 1.66667 0.0 3.0 0.333333 2.0 2.0 Stnd error (pooled s) 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 Lower limit 2.20595 -0.460717 6.87262 -1.46072 20.5393 -2.12738 7.87262 8.20595 -1.12738 7.20595 12.8726 25.2059 4.20595 15.5393 0.872616 7.20595 -2.79405 -3.12738 0.872616 -2.12738 -3.12738 0.205949 -2.79405 -0.794051 -0.794051 6.87262 -2.12738 2.53928 23.2059 5.87262 2.20595 6.53928 -2.46072 0.539283 -2.46072 -1.46072 -3.46072 -1.79405 -3.46072 -0.460717 -3.12738 -1.46072 -1.46072 Upper limit 9.12738 6.46072 13.7941 5.46072 27.4607 4.79405 14.7941 15.1274 5.79405 14.1274 19.7941 32.1274 11.1274 22.4607 7.79405 14.1274 4.12738 3.79405 7.79405 4.79405 3.79405 7.12738 4.12738 6.12738 6.12738 13.7941 4.79405 9.46072 30.1274 12.7941 9.12738 13.4607 4.46072 7.46072 4.46072 5.46072 3.46072 5.12738 3.46072 6.46072 3.79405 5.46072 5.46072 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 Total 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 192 2.0 2.0 0.333333 0.0 0.0 1.66667 0.333333 0.0 0.0 1.0 0.333333 1.66667 0.666667 1.33333 1.33333 1.33333 0.333333 26.6667 4.33333 16.6667 30.0 5.6875 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 2.47347 -1.46072 -1.46072 -3.12738 -3.46072 -3.46072 -1.79405 -3.12738 -3.46072 -3.46072 -2.46072 -3.12738 -1.79405 -2.79405 -2.12738 -2.12738 -2.12738 -3.12738 23.2059 0.872616 13.2059 26.5393 5.46072 5.46072 3.79405 3.46072 3.46072 5.12738 3.79405 3.46072 3.46072 4.46072 3.79405 5.12738 4.12738 4.79405 4.79405 4.79405 3.79405 30.1274 7.79405 20.1274 33.4607 Multiple Range Tests for So sản phẩm khuếch đại by Primer Method: 95.0 percent LSD Primer Count Mean 64 30.0 12 28.6667 61 26.6667 29 26.6667 24.0 14 19.0 63 16.6667 11 16.3333 11.6667 11.3333 10 10.6667 16 10.6667 26 10.3333 3 10.3333 32 10.0 30 9.33333 13 7.66667 28 6.0 31 5.66667 5.66667 62 4.33333 15 4.33333 19 4.33333 34 4.0 22 3.66667 40 3.0 3.0 25 2.66667 24 2.66667 2.33333 2.0 Homogeneous Groups X X X X XX XX XX XX XX XX XXX XXX XXXX XXXX XXXX XXXX XXXXX XXXXXX XXXXXX XXXXXX XXXXX XXXXX XXXXX XXXXX XXXX XXX XXX XXX XXX XX XX 43 44 45 42 36 55 49 38 57 59 20 58 27 53 33 35 23 56 17 46 50 60 21 54 41 18 51 48 47 39 37 52 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 3 2.0 2.0 2.0 2.0 2.0 1.66667 1.66667 1.66667 1.33333 1.33333 1.33333 1.33333 1.33333 1.33333 1.0 1.0 1.0 0.666667 0.666667 0.666667 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.333333 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 0.0 XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX XX X X X X X X X X X X X X X X X X Phụ lục 8: Bảng mã hóa số liệu 12 tiểu khu Kích thước sản phẩm khuếch đại (bp) 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 68 69 70 71 72 73 74 75 76 77 78 79 80 81 82 83 84 85 86 87 88 89 90 91 92 93 Tiểu Khu TK5 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 TK10 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 TK11 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 TK17 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 TK15 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 TK9 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 TK6 1 1 1 1 1 0 0 1 1 0 1 1 1 1 0 0 1 0 TK3 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 TK7 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 TK2 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 TK14 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 TK23 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 0 1 94 95 96 97 98 99 100 101 102 103 104 105 106 107 108 109 110 111 112 113 114 115 116 117 118 119 120 121 122 123 124 125 126 128 129 130 132 133 134 135 136 137 138 139 140 141 142 143 144 145 146 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 0 1 1 0 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 0 1 0 1 1 0 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 0 0 0 147 148 149 150 151 152 153 154 155 156 157 158 159 160 162 163 164 165 166 167 168 169 170 172 175 176 177 178 179 181 182 183 184 185 186 187 188 189 190 191 192 196 197 199 200 202 203 204 205 207 208 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 0 0 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 0 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 1 1 0 0 0 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 1 0 1 0 1 1 1 0 1 0 1 1 1 0 0 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 0 1 0 1 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1 0 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 0 209 211 212 213 215 217 218 219 220 221 222 223 224 225 227 228 229 230 231 234 235 238 239 240 241 242 243 244 247 248 249 250 251 252 253 254 257 262 263 264 267 268 269 270 271 272 273 274 276 281 282 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 0 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 0 0 1 0 1 1 0 1 0 1 0 0 1 1 1 0 0 1 0 0 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 1 1 1 0 0 1 1 1 0 1 0 1 0 0 1 0 1 0 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 0 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 1 0 1 1 0 0 0 1 0 1 0 1 0 1 1 0 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 283 286 288 289 290 293 295 297 300 301 302 303 308 309 310 312 318 319 320 322 323 325 327 328 329 333 335 336 340 343 344 345 350 351 352 353 366 368 369 374 376 377 378 379 380 387 392 398 404 408 409 0 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 0 0 0 1 1 0 1 0 1 0 1 0 1 1 0 1 0 0 0 1 0 0 0 0 0 1 0 0 1 0 1 0 0 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 0 0 1 0 0 0 1 0 0 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 0 0 0 1 0 1 1 0 0 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 1 1 0 1 1 0 0 1 0 0 1 1 0 1 1 0 1 0 0 0 1 1 1 0 1 0 0 1 1 0 1 1 1 410 411 412 413 414 419 421 422 425 428 430 438 441 442 449 453 457 467 471 475 476 477 493 497 523 524 525 529 534 553 554 555 566 569 571 610 623 624 656 658 660 1 0 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 0 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 1 1 1 1 0 1 0 0 1 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 0 1 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 1 0 0 1 0 0 0 0 0 0 1 0 0 0 1 1 1 0 1 1 1 0 1 0 0 0 1 0 1 0 1 1 1 1 0 1 0 0 0 1 0 0 1 1 0 1 0 1 1 0 0 1 0 1 0 1 0 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1 0 1 0 1 0 1 1 1 0 1 1 0 1 1 1 1 0 0 0 1 1 0 1 1 0 0 1 0 1 1 0 1 ... Lạc Tân, Phước Diêm, Thuận Nam, Ninh Thuận Điện thoại: 0683.860259 0983.889796 Email: phambinhbio@gmail.com pvbinh@vnuhcm.edu.vn ii Lời cam đoan Tơi cam đoan cơng trình nghiên cứu Các số liệu, kết