DSpace at VNU: Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LC-MS MS) xác định dư lượng một số kháng sinh nhóm Sulfonamides trong thịt gia súc gia cầm

Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ (LCMS/MS) xác định dư lượng số kháng sinh nhóm Sulfonamides thịt gia súc gia cầm Vũ Thị Trang Trường Đại học Khoa học Tự nhiên Luận văn Thạc sĩ ngành: Hóa phân tích; Mã số: 60.44.29 Người hướng dẫn: PGS.TS Nguyễn Xuân Trung Năm bảo vệ: 2012 Abstract: Trình bày tổng quan: giới thiệu kháng sinh nhóm sulfonamid (SAs); phương pháp xác định Sas Nghiên cứu tối ưu điều kiện chạy máy LC-MS/MS để tách xác định Sas; tối ưu trình xử lý mẫu; ứng dụng phân tích số mẫu thực tế Tìm hiểu kết nghiên cứu: tối ưu điều kiện tách xác định Sulfonamid thiết bị LC/MS/MS; tối ưu q trình xử lý mẫu phân tích Sas; đánh giá phương pháp phân tích Keywords: Hóa phân tích; Phương pháp sắc ký lỏng khối phổ; Dư lượng kháng sinh; Nhóm sulfonamides; Thịt gia súc; Thịt gia cầm Content I Mở đầu: Sulfonamid (SAs) nhóm thuốc kháng sinh tổng hợp đóng vai trò quan trọng hiệu việc hạn chế nhiễm trùng vi khuẩn vi sinh vật hệ thống tiêu hóa vật ni Vì vậy, chúng sử dụng thức ăn chăn ni nhằm kích thích tăng trưởng, ngăn chặn điều trị loạt bệnh gia súc gia cầm bệnh tiêu hóa hay hô hấp Song hệ tránh khỏi sử dụng nhóm chất kháng sinh tồn dư chúng thịt gia súc gia cầm, gây nguy kháng thuốc kháng sinh vi sinh vật, làm giảm sức đề kháng vật nuôi, gây hại cho sức khỏe người Việt nam, Hoa Kỳ liên minh Châu Âu cho phép dư lượng tối đa tất SAs thịt phủ tạng động vật 100 µg/kg, đó, Nhật Bản cho phép 20 µg/kg Hàn Quốc 10 µg/kg [1, 3, 4] Rất nhiều tác giả tiến hành nghiên cứu nhóm kháng sinh nhiều phương pháp khác đối tượng thịt, sữa, trứng, mật ong Tác giả W Hela [8] cộng phát triển phương pháp HPLC với detector DAD để xác định 12 SAs thịt, gan, thận động vật (lợn, bò, gà) Mẫu đồng với acetonitril, loại béo với n-hexan, làm qua cột chiết pha rắn trao đổi cation OASIS MCX Giới hạn phát phương pháp 1ppb cho tất SAs Tác giả T.A Gehring cộng [7] phát triển thẩm định phương pháp xác định 14 SAs thịt cá trê, cá hồi tôm Các SAs dẫn xuất với fluorescamine phát detector huỳnh quang Tác giả Ming-Ren S Fuh [6] cộng phát triển phương pháp điện di mao quản vùng CE kết hợp với chiết pha rắn để chiết định lượng SAs thịt lợn, bò, gà Giới hạn phát cho SAs khoảng 10µg/kg Theo nghiên cứu tác giả Zengxuan Cai cộng [10] sau trình chiết lỏnglỏng, 24 SAs tách 15 phút hệ thống UPLC-MS/MS chế độ ion hóa phun electron ESI+ Đường chuẩn có hệ số tương quan tuyến tính tốt R2= 0,991-0,999 khoảng tuyến tính rộng từ 0,2-50ng/g, độ thu hồi đạt 67,8-113,9% cho tất sulfonamid Bằng tương tác trực tiếp chiết pha rắn phân tán cột C18-Silica với sắc ký lỏng khối phổ chế độ bẫy tứ cực nhóm tác giả Yanbin Lu, Quing Shen [9] tiến hành xác định 13 SAs phút với độ nhạy cao, LOQ từ 2-10 ppb Tác giả George Stubbings cộng [5] ứng dụng kỹ thuật QuEChERS phương pháp sắc ký lỏng khối phổ để phát triển thẩm định phương pháp phân tích dư lượng 30 thuốc thú y thịt gia súc, gia cầm Tác giả thẩm định phương pháp theo hướng dẫn Council Directive 96/23/EC với thông số: độ thu hồi, hệ số biến thiên CV%, CCα, CCβ đạt yêu cầu theo qui định Tại Việt nam, TCVN 83452010 [2] qui định phương pháp xác định 10 SAs thủy sản sản phẩm thủy sản sắc ký lỏng hiệu cao HPLC Các SAs dẫn xuất với fluorescamin phát detector huỳnh quang Giới hạn phát phương pháp nhỏ g/kg Trong cơng trình chúng tơi cơng bố kết nghiên cứu tách xác định 10 SAs thịt gia súc gia cầm phương pháp LC-MS/MS kỹ thuật xử lý mẫu QuEChERS II Hóa chất thiết bị 2.1 Hóa chất: Tất loại hóa chất thuộc loại hóa chất tinh khiết phân tích dùng cho sắc ký hãng Merck (Đức ): Acetonitril, methanol, acid formic, acid acetic… Các chất chuẩn nội chuẩn (sulfisomidine-SIM, sulfadiazine-SD sulfathiazole-STZ, sulfapyridine-SP, sulfamerazine-SM, sulfamonomethoxine-SMM, sulfachloropyridazine-SCP, sulfamethoxazole-SMX, sulfisoxazole-SSA, sulfadimethoxine-SDM, sulfadimethoxine-d4 – IS) cung cấp hãng Sigma 2.2 Trang thiết bị : Hệ thống sắc ký lỏng khối phổ khối phổ LC/MS/MS bao gồm: HPLC 20 AXL Shimadzu khối phổ ABI 5500 QQQ Aplied Biosystem Cột sắc ký loại C18 (150mm x 2,1mm x 3,5µm) Agilent Pha động bao gồm nước chứa 0,1% acid formic acetonitril, tốc độ pha động 0,4 ml/phút, nhiệt độ cột tách 30 0C III Kết thảo luận 3.1 Tối ưu điều kiện tách xác định Sulfonamid thiết bị LC/MS/MS 3.1.1 Điều kiện khối phổ Điều kiện phân mảnh, điều kiện nguồn khí tự động tối ưu hệ thống MS (bảng 1) Bảng 1: Các thơng số tối ưu hóa điều kiện phân mảnh STT Ion mẹ Ion DP (eV) CE (eV) CXP (eV) 124 186 156 SD - 251 92 156 STZ - 256 92 92 SP - 250 156 156 SM - 265 92 156 SMM - 281 108 156 SCP - 285 92 156 SMX - 254 108 156 SSA - 268 113 156 10 SDM - 311 92 156 11 IS - 315 96 Mảnh ion m/z có cường độ lớn SIM - 279 80 80 80 80 85 85 85 85 80 80 85 85 80 80 80 80 80 80 80 80 80 80 dùng để định 29 16 23 12 21 20 31 16 19 18 33 14 31 10 28 12 23 12 35 14 23 10 33 14 21 14 37 16 21 18 31 16 19 16 21 16 27 20 41 14 29 20 39 14 lượng, mảnh thứ có cường độ thấp dùng để xác nhận chất phân tích 3.1.2 Điều kiện sắc ký 3.1.2.1 Chương trình gradient: chương trình gradient đưa để khảo sát trình tách SAs (bảng 3) Bảng 3: Các chương trình gradient tách SAs Gradient Gradient Gradient Gradient Gradient t t t t t (phút) 4,6 10,5 10,7 11,7 % ACN 20 27 37 100 100 12 18 (phút) 10,5 10,7 11,7 12 18 % ACN 37 100 100 4 % ACN (phút) 10 11 13 16 20 25 80 100 100 25 25 (phút) 10 11 12 12,1 18 % ACN 15 60 100 100 15 15 (phút) 10 11 12 12.1 % ACN 30 60 100 100 Khi tăng nhanh thành phần ACN (gradient 2, 5), SAs rửa giải nhanh Tuy nhiên, chất rửa giải (SIM, SD, STZ, SP, SM) bị ảnh hưởng, pic bị vai, tù Khi thành phần ACN tăng lên từ đầu (gradient 3, 4), toàn SAs rửa giải sớm (bắt đầu từ phút), phân tích mẫu thực dễ bị lẫn tạp chất Mặt khác, có SAs bị ảnh hưởng rõ rệt: pic vị trí số 3, 4, (bao gồm: STZ, SP, SM), pic bị chẻ tù Do đó, thành phần ACN phải tăng cách từ từ (từ 4% lên 100% 10 phút, giữ cố định 100% phút, quay trở lại tỉ lệ đầu ổn định phút) Gradietn cho hiệu tách tốt 3.1.2.2 Nồng độ acid formic pha động: Các SAs có giá trị pKa khác nhau, khoảng 4,83 – 8,54 Do đó, thành phần acid formic pha động ảnh hưởng lớn đến khả tách cường độ pic Khảo sát nồng độ acid formic pha động khoảng – 0,2% (hình 1) 1.20E+06 SIM diện tích pic 1.00E+06 STZ SD 8.00E+05 SP 6.00E+05 SM 4.00E+05 SMX SSA 2.00E+05 SDM 0.00E+00 SCP 0.05 0.1 0.15 0.2 0.25 SMM nồng độ acid formic (%) Hình 1: Ảnh hưởng nồng độ acid formic tới diện tích píc SAs Nếu pha động khơng chứa acid formic, cường độ tín hiệu tất SAs thấp Khi tăng nồng độ acid formic từ 0,05 – 0,2%, diện tích pic tăng, mức độ tăng SAs khác giá trị pKa chúng khác Khi nồng độ acid formic cao, số lượng ion vào buồng ion detector MS tăng, gây cạnh tranh với ion chất phân tích, làm giảm tín hiệu Tất SAs cho tín hiệu cao nồng độ acid formic 0,1% (ngoại trừ SIM cho tín hiệu cao nồng độ 0,05%) Chúng định chọn nồng độ acid formic 0,1% Nồng độ phù hợp với hệ LC/MS/MS 3.2 Tối ưu hóa điều kiện xử lý mẫu phân tích SAs Tiến hành khảo sát q trình chiết SAs theo phương pháp QuEChERS với nguyên tắc: Chiết SAs khỏi mẫu ACN, loại nước MgSO khan, làm dịch chiết phân tán pha rắn với bột PSA (primary secondary amine) bơm vào hệ LCMS/MS Hệ đệm chiết khối lượng pha rắn cần nghiên cứu cho qui trình 3.2.1 Khảo qui trình chiết: Tiến hành khảo sát số qui trình chiết sau: Bảng 4: Các qui trình chiết dự kiến chiết SAs Quy trình chiết Dung môi chiết Đệm chiết Khối lượng PSA E1 15ml ACN Không 200mg 10ml acid acetic 1% E2 Không 200mg ACN 10ml acid acetic 1% E3 1,5g natri acetat 200mg ACN E4 10ml acid acetic 1% 1,5g natri acetat 200mg ACN : MeOH (75/25) Sử dụng mẫu thịt lợn không phát SAs, thêm chuẩn hỗn hợp SAs (để thu nồng độ 10 ng/ml dịch chiết cuối trước bơm vào máy LC/MS/MS) Bảng 5: Ảnh hưởng qui trình chiết đến hiệu suất thu hồi SAs Hiệu suất thu hồi (%) Quy trình chiết E1 E2 E3 E4 SIM STZ SD SP SM SMX SSA SDM SCP SMM 13,7 56,6 50,2 83,5 41,5 58,1 68,3 59,0 55,8 50,0 39,3 105,3 100,2 100,7 96,6 109,0 98,4 103,0 97,6 94,9 28,7 106,0 101,3 105,0 108,0 100,5 91,5 108,0 89,0 96,3 56,7 74,7 69,0 83,6 66,1 63,5 86,0 69,4 71,4 85,1 Nếu dung mơi chiết ACN hiệu suất chiết thấp (13,7 - 83,5%) Khi thêm acid acetic vào dung môi chiết, hiệu suất chiết tăng lên rõ rệt (39,3 – 109,0%) Điều giải thích: hợp chất nhóm SAs có nhóm –NH2 phân tử Khi thêm H+ vào dung môi chiết, chuyển hợp chất thành dạng NH3+, dễ tan dung dịch Khi thêm thành phần đệm chiết (natri acetate) hiệu suất chiết khơng bị ảnh hưởng nhiều Tuy nhiên, dung môi chiết acid acetic ACN SIM bị ảnh hưởng nhiều nhất, hiệu suất đạt 39,3% Khi bổ sung thêm thành phần MeOH vào dung môi chiết, hiệu suất chiết tất hợp chất SAs đồng đều, thấp (56,7-86,0%) 3.2.2 Khảo sát nồng độ acid acetic dung môi chiết Bảng 6: Ảnh hưởng nồng độ acid acetic đến hiệu suất thu hồi SAs Nồng Hiệu suất thu hồi (%) độ acid acetic SIM STZ SD SP SM SMX SSA SDM SCP SMM (%) 0,05 55,8 56,8 63,8 67,7 62,3 57,3 51,2 58,9 48,5 49,2 0,1 59,7 65,2 70,4 76,7 64,5 63,4 57,8 68,1 55,2 57,1 0,5 72,3 76,3 75,8 63,7 81,7 77,4 65,1 81,3 67,6 69,8 1,0 76,5 85,3 82,7 86,6 84,8 74,5 69,7 85,9 72,4 69,6 1,5 67,7 63,3 95,7 80,8 78,0 87,5 77,0 83,6 83,0 65,1 Khi tăng nồng độ acid acetic, hiệu suất thu hồi SAs tăng Tuy nhiên, nồng độ tăng cao (1,5%), số SAs bị ảnh hưởng, hiệu suất thu hồi giảm xuống (SIM, STZ, SMM) Khi nồng độ acid acetic cao, nồng độ ion mẫu cao, lượng ion vào buồng ion tăng, cạnh tranh với ion chất phân tích, làm giảm tín hiệu Tại nồng độ 1%, hiệu suất thu hồi SAs đồng đạt ≥70% Lựa chọn nồng độ acid acetic 1% nồng độ tối ưu 3.2.3 Khảo sát thành phần MeOH dung môi chiết 120 SIM hiệu suất thu hồi (%) 100 STZ 80 SD SP 60 SM SMX 40 SSA 20 SDM SCP 0 SMM tỉ lệ MeOH Hình 3: Đồ thị ảnh hưởng nồng độ MeOH đến hiệu suất thu hồi SAs Việc thêm MeOH vào thành phần dung môi chiết làm cho hiệu suất thu hồi SAs đồng hơn, đặc biệt, làm tăng hiệu suất thu hồi SIM Khi thành phần MeOH từ 10 – 30%, hiệu suất thu hồi SAs đạt > 70% (từ 70,7 – 110%) Khi tăng tiếp thành phần MeOH, hầu hết hiệu suất thu hồi số SAs giảm xuống Mặt khác, thành phần MeOH cao làm tăng khả chiết chất gây ảnh hưởng Do đó, lựa chọn tỉ lệ ACN/MeOH (80/20) điều kiện tối ưu 3.2.4 Khảo sát khối lượng pha rắn PSA Pha rắn PSA đóng vai trò hấp thụ chất ảnh hưởng trình chiết Tiến hành khảo sát khối lượng khác PSA: 50, 100, 150, 200, 250, 300mg Sử dụng dịch chiết tỉ lệ ACN/MeOH (80/20) từ trình khảo sát thành phần MeOH hiệu suất thu hồi (%) 120 SIM 100 STZ 80 SD SP 60 SM SMX 40 SSA 20 SDM SCP 0 50 100 150 200 250 300 SMM khối lượng PSA (mg) Hình 4: Ảnh hưởng khối lượng PSA đến hiệu suất thu hồi SAs Tại khối lượng PSA từ 50 - 200mg, hiệu suất thu hồi SAs tốt Tuy nhiên, tăng lượng PSA lên > 200mg (250mg), hiệu suất thu hồi số SAs bị giảm xuống, SAs bị hấp thụ vào PSA Để hiệu suất thu hồi tốt tăng khả loại tạp chất, lựa chọn khối lượng PSA 200mg Sơ đồ 1: Quy trình tối ưu chiết SAs Mẫu (5g)/ống ly tâm 50ml + 200µL IS + 10ml acid acetic 1% ACN/MeOH (80/20) Đồng nhất, Lắc 20 phút máy lắc + 5g MgSO4 khan + 1,5g Natri acetat Lắc 20 phút máy lắc Ly tâm, 6000v/ph, 10oC, 10 phút 1,5 ml phần trên/ống nghiệm 2ml chứa 200mgPSA Lắc vortex 30s Ly tâm, 14.000v/ph, 10oC, 10 phút Phần chuyển vào vial 1,8ml Tiêm 10µL vào LC/MS/MS 3.3 Đánh giá phương pháp 3.3.1 Khoảng tuyến tính đường chuẩn Trong khoảng nồng độ từ 0,5÷500 ng/ml 10 SAs cho hệ số tương quan R > 0,9990 Lập đường chuẩn SAs khoảng - 50 ng/ml chứa 20 ng/ml nội chuẩn SDM-d4 3.3.2 Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lượng (LOQ) phương pháp Bảng 8: Giới hạn phát giới hạn định lượng SAs LOD Chất phân dịch chiết tích SIM (ng/ml) 0,025 LOD phương pháp (5g mẫu/10ml) (µg/kg) LOQ dịch chiết (ng/ml) 0,083 0,05 LOQ phương pháp (µg/kg) 0,17 SD 0,015 0,03 0,05 STZ 0,025 0,05 0,083 SP 0,015 0,03 0,05 SM 0,005 0,01 0,017 SMM 0,025 0,05 0,083 SCP 0,025 0,05 0,083 SMX 0,025 0,05 0,083 SSA 0,025 0,05 0,083 SDM 0,005 0,01 0,017 Giới hạn phát SAs tương đối thấp (0,01 – 0,05 µg/kg), nhạy nhất, LOD = 0,01 µg/kg 0,1 0,17 0,1 0,034 0,17 0,17 0,17 0,17 0,034 SM SDM 3.3.3 Đánh giá độ chụm (độ lặp lại) độ (độ thu hồi) Tiến hành thêm chuẩn mẫu thịt lợn không phát SAs, thêm chuẩn mức nồng độ (MRL/2; MRL; 2MRL) chất là: µg/kg; 10 µg/kg; 20 µg/kg Mỗi mức tiến hành làm lặp lại lần Bảng 9: Độ lặp lại hiệu suất thu hồi SAs mẫu thịt lợn µg/kg Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Trung Chất Thông số bình C (µg/kg) 4,29 4,51 4,35 4,42 4,34 4,32 4,37 SIM H (%) 85,8 90,1 87,0 88,4 86,8 86,4 C (µg/kg) 4,55 4,32 4,21 4,42 4,26 4,74 4,41 STZ H (%) 90,9 86,3 84,1 88,3 85,2 94,8 C (µg/kg) 4,50 4,45 5,05 4,75 4,65 4,95 4,73 SD H (%) 90,0 89,0 101,0 95,0 93,0 99,0 C (µg/kg) 3,91 3,61 3,58 3,91 3,89 3,55 3,74 SP H (%) 78,2 72,2 71,5 78,1 77,8 70,9 C (µg/kg) 3,64 3,60 3,70 3,50 3,61 3,74 SM H (%) 72,7 71,9 74,0 70,0 72,1 74,8 C (µg/kg) 4,97 4,81 4,93 4,97 4,78 5,15 4,93 SMX H (%) 99,3 96,2 98,6 99,4 95,6 103,0 C (µg/kg) 4,15 4,28 4,57 4,37 4,11 4,48 4,32 SSA H (%) 82,9 85,6 91,3 87,4 82,1 89,5 C (µg/kg) 4,77 4,91 4,90 4,55 4,57 4,91 4,77 SDM H (%) 95,3 98,2 97,9 90,9 91,3 98,2 SCP C (µg/kg) 4,41 4,09 4,26 3,99 4,36 4,56 4,28 SD RSD 0,08 1,84 0,2 4,54 0,24 5,09 0,18 4,80 0,13 2,67 0,18 4,20 0,17 3,60 0,21 4,89 H (%) 88,1 81,8 85,2 79,9 87,3 91,2 C (µg/kg) 4,83 5,06 4,68 4,81 4,97 5,13 4,91 0,17 3,45 SMM H (%) 96,7 101,2 93,6 96,2 99,5 102,6 Bảng 10: Độ lặp lại hiệu suất thu hồi SAs mẫu thịt lợn 10 µg/kg Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Trung Chất Thông số SD RSD bình C (µg/kg) 7,76 7,79 8,19 7,58 8,12 8,06 7,92 0,24 3,04 SIM H (%) 77,6 77,9 81,9 75,8 81,2 80,6 C (µg/kg) 9,65 9,31 9,13 8,92 10,0 9,46 9,41 0,38 4,08 STZ H (%) 96,5 93,1 91,3 89,2 100 94,6 C (µg/kg) 10,5 10,2 10,5 9,96 10,4 10,6 10,4 0,24 2,30 SD SP SM SMX SSA SDM SCP H (%) C (µg/kg) H (%) C (µg/kg) H (%) C (µg/kg) H (%) C (µg/kg) H (%) C (µg/kg) H (%) 105 8,83 88,3 8,86 88,6 9,38 93,8 10,1 101 9,84 98,4 102 8,84 88,4 9,18 91,8 8,74 87,4 9,97 99,7 9,35 93,5 105 8,78 87,8 8,63 86,3 9,85 98,5 10,3 103 9,37 93,7 99,6 8,47 84,7 8,58 85,8 9,57 95,7 10,1 101 9,24 92,4 104 9,47 94,7 8,87 88,7 10,2 102 10,6 106 9,47 94,7 106 8,56 85,6 9,13 91,3 9,66 96,6 9,97 99,7 9,67 96,7 C (µg/kg) 8,79 8,45 8,14 8,68 9,18 8,50 8,82 0,35 3,97 8,87 0,25 2,78 9,57 0,49 5,14 10,2 0,24 2,37 9,49 0,22 2,36 8,62 0,35 4,08 H (%) 87,9 84,5 81,4 86,8 91,8 85,0 C (µg/kg) 10,6 9,55 10,2 10,5 9,57 9,82 10,0 0,46 SMM H (%) 106 95,5 102 105 95,7 98,2 Bảng 11: Độ lặp lại hiệu suất thu hồi SAs mẫu thịt lợn 20 µg/kg Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Mẫu Trung Chất Thông số SD bình C (µg/kg) 14,4 14,9 14,3 11,5 16,9 15,0 14,5 1,73 SIM H (%) 72,0 74,7 71,9 57,6 84,3 75,2 C (µg/kg) 18,3 17,1 15,9 16,0 19,8 16,6 17,3 1,51 STZ H (%) 91,3 85,4 79,6 79,8 99,0 82,9 C (µg/kg) 18,6 17,6 17,0 17,9 20,4 17,6 18,2 1,20 SD H (%) 93,1 87,9 85,1 89,8 102 88,1 C (µg/kg) 18,8 17,2 16,3 17,9 20,0 17,1 17,9 1,33 SP H (%) 94,0 86,0 81,6 89,4 100 85,4 C (µg/kg) 18,7 17,7 17,4 18,1 21,0 17,7 18,4 1,34 SM H (%) 93,7 88,4 86,8 90,4 105 88,6 C (µg/kg) 19,2 18,2 17,2 16,2 20,2 17,7 18,1 1,44 SMX H (%) 96,1 91,1 86,1 80,9 101 88,1 C (µg/kg) 16,5 16,4 16,0 17,0 18,9 16,6 16,9 1,04 SSA H (%) 82,4 82,0 80,2 84,9 94,7 82,8 C (µg/kg) 19,7 20,4 20,2 21,2 19,8 18,7 20,0 0,82 SDM H (%) 98,5 102 101 106 99,3 93,7 SCP C (µg/kg) 15,2 16,0 15,6 14,1 17,7 15,6 15,7 1,18 4,63 RSD 11,9 8,56 6,59 7,45 7,29 7,92 6,18 4,08 7,51 H (%) 76,3 80,1 77,9 70,7 88,8 78,2 C (µg/kg) 18,9 19,3 19,5 16,5 20,2 19,5 19,0 1,27 6,68 SMM H (%) 94,5 96,5 97,8 82,8 101 97,5 Theo qui định Châu Âu 2002/657/EC [11], cấp độ từ 10 – 100 µg/kg, hệ số biến thiên CV ≤ 20%; hiệu suất thu hồi cấp độ từ – 10 µg/kg phải nằm khoảng 70 – 110% Như vậy, phương pháp có độ độ chụm đạt yêu cầu Châu Âu 3.4 Phân tích mẫu thực Sau hồn thành q trình khảo sát đánh giá phương pháp, ứng dụng phương pháp để phân tích số mẫu thịt phủ tạng gia súc gia cầm địa bàn nội thành Hà nội: 18 mẫu đối tượng: thịt lợn, thịt gà, thịt bò, thận lợn, gan lợn, phủ tạng gà lấy chợ: chợ Nguyễn Cao, chợ Mơ, chợ Lĩnh Nam Các mẫu đồng phân tích theo sơ đồ Kết cho thấy có mẫu nhiễm SAs: mẫu thịt gà phủ tạng gà mua từ chợ Nguyễn Cao nhiễm SDM với hàm lượng 11,1 9,82 µg/kg, mẫu thịt bò mua chợ Mơ nhiễm SD với hàm lượng 6,00 µg/kg, khơng có mẫu nhiễm SAs lại Tuy nhiên, tất mẫu nhiễm nằm giới hạn dư lượng tối đa cho phép (100 µg/kg) IV Kết luận Các kết nghiên cứu phương pháp phân tích có độ nhạy cao, phân tích nhanh xác, áp dụng phân tích dư lượng 10 SAs với độ tin cậy cao References [1] Thông tư số 03/2012/TT-BNNPTNT ban hành danh mục thuốc, hóa chất, kháng sinh cấm sử dụng, hạn chế sử dụng Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn [2] TCVN 8345-2010 “Thủy sản sản phẩm thủy sản Xác định dư lượng Sulfonamid Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao” [3] Barbara Chiavarino (1998), “Determination of sulfonamid antibiotics by gas chromatography coupled with atomic emission detection”, Journal of Chromatography B, 706, pp 269–277 [4] Dal-Ho Kim, Dai Woon Lee (2003), “Comparison of separation conditions and ionization methods for the liquid chromatography–mass spectrometric determination of sulfonamid”, Journal of Chromatography A, 984, pp 153–158 [5] George Stubbings, Timothy Bigwood (2009) “The development and validation of a multiclass liquid chromatography tandem mass spectrometry (LC–MS/MS) procedure for the determination of veterinary drug residues in animal tissue using a QuEChERS (QUick, Easy, CHeap, Effective, Rugged and Safe) approach”, Analytica Chimica Acta 637 , p 68–78 [6] Ming-Ren S Fuh et al (2003), “Quantitative determination of sulfonamid in meat by solidphase extraction and capillary electrophoresis”, Analytica Chimica Acta, 499, pp 215–221 [7] Theresa A Gehring et al (2006), “Multiresidue determination of sulfonamid in edible catfish, shrimp and salmon tissues by high-performance liquid chromatography with postcolumn derivatization and fluorescence detection”, Journal of Chromatography B, 840, pp 132–138 [8] W Hela et al (2003), “Determination of sulfonamid in animal tissues using cation exchange reversed phase sorbent for sample cleanup and HPLC–DAD for detection”, Food Chemistry 83, pp 601–608 [9] Yanbin Lu, Qing Shen, Zhiyuan Dai, Hong Zhanghai, Honghai Wang (2011), “Development of an on-line matrix solid-phase dispersion/fast liquid chromatography-tandem mass spectrometry system for the rapid and simultaneous determination of 13 Sulfonamid in grass carp tissue”, Journal of Chromationgraphy A, 1218, pp 929-937 [10] Zengxuan Cai, Yu Zhang, Hongfeng Pan, Xiaowei Tie, Yiping Ren (2008), “Simultaneous dertermination of 24 sulfonamid residues in meat by ultra-permance liquid chromatography tandem mass spectrometry”, Journal of Chromationgraphy A, 1200, pp 144-155 [11] 2002/657/EC implementing Council Directive 96/23/EC concerning the performance of analytical methods and the interpretation of results 10 ... dụng kỹ thuật QuEChERS phương pháp sắc ký lỏng khối phổ để phát triển thẩm định phương pháp phân tích dư lượng 30 thuốc thú y thịt gia súc, gia cầm Tác giả thẩm định phương pháp theo hướng dẫn Council... khảo sát đánh giá phương pháp, chúng tơi ứng dụng phương pháp để phân tích số mẫu thịt phủ tạng gia súc gia cầm địa bàn nội thành Hà nội: 18 mẫu đối tượng: thịt lợn, thịt gà, thịt bò, thận lợn,... phát detector huỳnh quang Giới hạn phát phương pháp nhỏ g/kg Trong cơng trình công bố kết nghiên cứu tách xác định 10 SAs thịt gia súc gia cầm phương pháp LC-MS/MS kỹ thuật xử lý mẫu QuEChERS