CẤY VI KHUẨN VÀO MÔI TRƯỜNG CHUẨN ĐOÁN

Buổi CẤY VI KHUẨN VÀO MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN BS Trần Minh Anh Đào BM Vi sinh MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN Mục tiêu: Giới thiệu số dụng cụ, môi trường nuôi cấy vi khuẩn Giới thiệu phương pháp nuôi cấy vào loại môi trường chẩn đoán Biện luận kết cầu khuẩn MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Dụng cụ mơi trường: o Que cấy trùng/ống Pasteur o Đèn cồn o Bình dung dịch thuốc sát trùng o Bút chì kính/ bút lông o Các môi trường giá ống nghiệm MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Cách cấy: Chuẩn bị: Kiểm tra lại môi trường→ sử dụng tốt Đánh dấu ống hay đĩa mơi trường chẩn đốn Chọn khuẩn lạc/mơi trường phân lập→ cấy vào mơi trường chẩn đốn MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Cách cấy: Chuẩn bị: Đánh dấu theo thứ tự giá ống nghiệm/mỗi vi khuẩn Cho vào tủ ấm 37ºC 18 – 24 đọc kết Lưu ý: Mơi trường chẩn đốn tùy thuộc Bệnh phẩm Vi khuẩn cần định danh MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN Bệnh phẩm Cầu Cầu Trực khuẩn khuẩn khuẩn Gr(+) Gr(-) Gr(+) Máu (+) Mủ (++) Đàm (+) (±) Trực khuẩn Gr(-) VK Môi Tº kỵ trường thời gian khí phân ủ lập (+) (+) BA CA, 37º/CO2 / 24h (+) (+) MC BA MSA BHI, 37º/CO2 / 24h Lên men(+/-) H.Influen za MC BA CA 37º/CO2 / 24h MƠI TRƯỜNG CHẨN ĐỐN Bệnh phẩm Cầu Cầu Trực khuẩn khuẩn khuẩn Gr(+) Gr(-) Gr(+) Phân S aureu s Nước tiểu (+) Các loại dịch (++) (±) Trực khuẩn Gr(-) VK Môi Tº kỵ trường thời gian khí phân ủ lập TK MC 35ºđường SS(HE) 37ºC/24 ruột Camp42ºC CAP Lên MC 37º/CO2 / men(+/-) BA 24h (+) (+) MC BA MSA BHI, 37º/CO2 / 24h Môi trường chẩn đốn o Mơi trường lỏng/đặc chứa hóa chất o Phát một/nhiều tính chất sinh lý, sinh hóa → chủng vi khuẩn Mơi trường chẩn đốn Mannitol Salt Agar Streak-sta Blood Agarb Bile Esculin Glucose broth Plates (MSA: with Durham tu Agar technique (BAP) 7,5%NaCl) bes (SS) Kliger’s Iron Agar Nitrate Broth (KIA) Taxo P ( optochin sensitivity te sting) CAMP Test MacConkey agar (MC) Urease test Catalase Test Oxidase Test Coagulase Test Sulfur Indole Motility Media (SIM) Taxo A (bacitracin sensitivity testing ) Methyl Red / Simmon’s Spirit Blue Starch hydroVoges-Proskauer Citrate Ag agar lysis test (MR/VP) ar Di động       Mơi trường chẩn đốn • Khả sinh sắc tố: SS Salmonella Enterobacter-kit oSinh Durham/Glucose broth(*) Đường oLên men đường (a) (b) Phenol red (a) P aeruginosa (b) Shigella dysenteriae (c) Escherichia coli Proteus mirabilis (*)glucose, lactose, mannitol Trực khuẩn gram (-) đường ruột (c) CẦU KHUẨN Gram(+) Staphylococci Streptococci Cầu khuẩn Gram(-) Neisseria N gonorrhoeae N meningitidis Tính chất sinh hóa Staphyl ococci Catalase Coagulase Oxidase Tan máu Cầu khuẩn Streptococ cci N gonorrhoeae N meningitidis (+) (+) (-) (+) (-) (-) (-) (+) (+) (-) (+) (-) (+) (-) (+) (-) Taxo A (-) (+) Taxo P (-) (-) Glucose (-) (+) (+) Maltose (+) (+) (-) Esculin (-) (+) 22 Cầu khuẩn Gram (+) catalase (+) (-) Staphylococci Streptococci Coagulase (+) (-) toxo A (+) (-) S aureus S epidermidis S saprophyticus S haemolyticus S silulam,… toxo P (+) (-) Strep pyogene Strep.pneumoniae Chẩn đoán cầu khuẩn gram (+)  Catalase  Bile Esculin  VPYR & LAP  6.5% NaCl  Camp  Coagulase  Vancomycin positive  Taxos A  Bile solubility  Taxos P or Optochin BA Khả tiêu huyết Streptococcus pyogenes Streptococcus mitis Staphylococcus epidermidis Ure Chapman Xác định: Enterococcus (E faecalis and E faecium) Streptococcus Bile Esculin Agar Mật: ức chế Gram(+) Sodium azide: ức chế Gr(-) Esculin/ mật hydrolyze/VK, esculetin +ferric citrate- phenolic iron →đen Esculin (-) Esculin (+) 3% hydrogen peroxide streptococci staphylococci β-hemolytic streptococci: Toxo A (bacitracin sensitivity testing) Toxo P (optochin sensitivit y testing) o Streptococcus agalactiae (kháng bacitracin) oStreptococcus pyogenes (nhạy bacitracin) α-hemolytic streptococci: oStreptococcus pneumoniae oStreptoco ccus mitis (nhạy optochin) Camp (+) Group B β-streptococci: Streptococcus agalactiae Camp (-) Spirit Blue agar TK Gr(+) có lipase hydrolyzes triglycerides Bacillus subtilis Vầng hào quang Starch hydrolysis test Clostridium and Bacillus Có enzymes a-amylase oligo-1,6-glucosidase để hydrolyze amylose amylopectin Bacillus subtilis PHẦN THỰC HÀNH Đọc kết buổi 4: Ria cấy hộp thạch Xem mơi trường chẩn đốn chưa cấy Xem hướng dẫn cấy tự thực tập cấy Tự đọc kết qủa chẩn đốn mơi trường cấy: S aureus,