Baif giảng môi trường chuẩn đoán

Buổi CẤY VI KHUẨN VÀO MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN BS. Trần Minh Anh Đào BM. Vi sinh MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN Mục tiêu: 1.Giới thiệu số dụng cụ, môi trường nuôi cấy vi khuẩn 2.Giới thiệu phương pháp nuôi cấy vào loại môi trường chẩn đoán 3.Cách đọc kết sinh lý, sinh hóa số chủng vi khuẩn sau nuôi cấy, phân tích MÔI TRƯỜNG PHÂN LẬP/CHẨN ĐOÁN Bệnh Cầu Cầu Trực phẩm khuẩn khuẩn khuẩn Gr(+) Gr(-) Gr(+) Máu (+) Mủ (++) Đàm (+) (±) Trực khuẩn Gr(-) VK Môi Tº kỵ trường thời gian khí phân ủ lập (+) (+) BA CA, 37º/CO2 / 24h (+) (+) MC BA MSA BHI, 37º/CO2 / 24h Lên men(+/-) H.Influen za MC BA CA 37º/CO2 / 24h MÔI TRƯỜNG PHÂN LẬP/ CHẨN ĐOÁN Bệnh Cầu Cầu Trực phẩm khuẩn khuẩn khuẩn Gr(+) Gr(-) Gr(+) Trực khuẩn Gr(-) VK Môi Tº kỵ trường thời gian khí phân ủ lập Phân S. aureu s TK đường ruột MC 35ºSS(HE) 37ºC/24 Camp42ºC CAP Nước tiểu (+) Lên men(+/-) Các loại dịch (++) (±) (+) (+) MC BA 37º/CO2 / 24h MC BA MSA BHI, 37º/CO2 / 24h Môi trường phân lập MC crystal violet /phenol red Ức chế phát triển vi khuẩn gram(+) Phân lập phân biệt Enterobacteriaceae lên men không lên men (lactose) Lactose →acid→đỏ Lactose(+) Lactose(+) Lactose(-) E. coli BA Khả tiêu huyết Streptococcus pyogenes Streptococcus mitis Staphylococcus epidermidis HE Agar Thuốc nhuộm (-) Gr(+) Lên men acid (+):hồng/cam E.coli (-):lục Phân lập&phân biệt •Salmonella •Shigella Salmonella (a) Mannitol salt agar (b) Nutrient agar MSA Phân lập vk gram (+) Ức chế vk gram(-) Staphylococci Coagulase Coagulase(+) (+) Coagulase Coagulase(-) (-) (c) Blood agar Ure Ure Urease NH3(alkalin) Ure Phenol red Phenol red hồng cánh sen Glucose Lysin/orthinine Glucose, A.amine(lysin/orthinine) Bromo crésol purple Dầu Paraffin (+) (-) men lysin (+) (-) khử CO2 / A. amin Kiềm hóa Tím, đục vàng Tím, Durham/Glucose broth(*) Đường Phenol red (a) P. aeruginosa (b) Shigella dysenteriae (c) Escherichia coli Proteus mirabilis (*)glucose, lactose, mannitol (a) (b) (c) Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) không lên men đường • Triple Sugar Iron agar (TSI) • Nitrate (+/-) • OF sugar (+/-) • Oxidase (Kovacs reagent) (+/-) • Di động • Acetamide (+/-) • Decarboxylase Broth (Moeller) • Mọc 42° C (+/-) Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) không lên men đường Enterobacteriacea e Pseudomadaceae có enzyme cytochrome oxidase/vk? Escherichia coli ( E.coli ) Enterobacter aerogenes Chẩn đoán cầu khuẩn gram (+) • Catalase • Bile Esculin • VPYR & LAP • 6.5% NaCl • Camp • Coagulase • Vancomycin positive • Taxos A • Bile solubility • Taxos P or Optochin Ure Chapman Xác định: Enterococcus (E faecalis and E. faecium) Streptococcus Bile Esculin Agar Mật: ức chế Gram(+). Sodium azide: ức chế Gr(-) Esculin/ mật hydrolyze/VK, esculetin +ferric citrate- phenolic iron →đen Esculin (-) Esculin (+) 3% 3%hydrogen hydrogenperoxide peroxide streptococci staphylococci β-hemolytic streptococci: Toxo A (bacitracin sensitivity testing) Toxo P (optochin sensitivit y testing) o Streptococcus agalactiae (kháng bacitracin) oStreptococcus pyogenes (nhạy bacitracin) α-hemolytic streptococci: oStreptococcus pneumoniae oStreptoco ccus mitis Camp (+) Camp (-) Spirit Blue agar TK Gr(+) có lipase hydrolyzes triglycerides Bacillus Bacillussubtilis subtilis Vầng hào quang Starch hydrolysis test Clostridium and Bacillus Có enzymes a-amylase oligo-1,6-glucosidase để hydrolyze amylose amylopectin Bacillus subtilis PHẦN THỰC HÀNH 1.Đọc kết buổi 4: Ria cấy hộp thạch 2.Xem môi trường chẩn đoán chưa cấy 3.Xem hướng dẫn cấy tự thực tập cấy 4.Tự đọc kết qủa chẩn đoán môi trường cấy: S. aureus, E. coli, Shigella flexneri, Salmonella paratyphi A, [...]... meginitidis MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN 1 Dụng cụ và môi trường: o Que cấy trùng/ống Pasteur o Đèn cồn o Bình dung dịch thuốc sát trùng o Bút chì kính/ bút lông o Các môi trường và các giá ống nghiệm MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN 2 Cách cấy: Chuẩn bị: Kiểm tra lại các môi trường sử dụng tốt Đánh dấu các ống hay đĩa môi trường chẩn đoán Chọn khuẩn lạc /môi trường phân lập→ cấy vào môi trường chẩn đoán MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN... MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN 2 Cách cấy: Chuẩn bị: Đánh dấu và sắp theo thứ tự trên giá ống nghiệm/mỗi vi khuẩn Cho vào tủ ấm 37ºC 18 – 24 giờ đọc kết quả Lưu ý: Môi trường chẩn đoán tùy thuộc Bệnh phẩm Vi khuẩn cần định danh Môi trường chẩn đoán o Môi trường lỏng/đặc chứa hóa chất o Phát hiện một/nhiều tính chất sinh lý, sinh hóa → một chủng vi khuẩn Môi trường chẩn đoán Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) đường... agar (LIA) • Decarboxylase Broth (Moeller) • Voges-Proskauer • Christensen Urea agar • Phenylalanine • Malonate Broth • Phenyl Red Carbohydrate Brot h Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) đường ruột Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) đường ruột MÔI TRƯỜNG ĐẶC Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) đường ruột KIA Glucose Lactose acid phenol red->vàng Hơi TSI Natri sulfit→H2S Ferric ammonium sulfat →FeS Mannitol di động Simmon’s... Citrase/VK > oxaloacetic acid + acetic acid Oxaloacetic acid > Pyruvic acid + Carbon dioxide Carbon dioxide + Sodium ions > Sodium Carbonate(↑pH: 7,6; đổi màu Brom) Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) đường ruột MÔI TRƯỜNG LỎNG Indol/pepton Tryptophan/pepton-Tryptophanase/vk  Indole + Pyruvic Acid + Ammonia Indole + thuốc thử Indole + thuốc thử Kovac’s(aldehyde) = Kovac’s(aldehyde) = màu đỏ màu... Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) không lên men đường • Triple Sugar Iron agar (TSI) • Nitrate (+/-) • OF sugar (+/-) • Oxidase (Kovacs reagent) (+/-) • Di động • Acetamide (+/-) • Decarboxylase Broth (Moeller) • Mọc 42° C (+/-) Chẩn đoán trực khuẩn gram (-) không lên men đường Enterobacteriacea e Pseudomadaceae có enzyme cytochrome oxidase/vk? Escherichia coli ( E.coli ) Enterobacter aerogenes Chẩn đoán . nghiệm MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN 2. Cách cấy: Chuẩn bị: Kiểm tra lại các môi trường sử dụng tốt Đánh dấu các ống hay đĩa môi trường chẩn đoán Chọn khuẩn lạc /môi trường phân lập→ cấy vào môi trường. khuẩn cần định danh Môi trường chẩn đoán o Môi trường lỏng/đặc chứa hóa chất o Phát hiện một/nhiều tính chất sinh lý, sinh hóa → một chủng vi khuẩn Môi trường chẩn đoán Chẩn đoán trực khuẩn gram. chẩn đoán MÔI TRƯỜNG CHẨN ĐOÁN 2. Cách cấy: Chuẩn bị: Đánh dấu và sắp theo thứ tự trên giá ống nghiệm/mỗi vi khuẩn Cho vào tủ ấm 37ºC 18 – 24 giờ đọc kết quả Lưu ý: Môi trường chẩn đoán