NGHIÊN cứu xác ĐỊNH một số THÀNH PHẦN hóa học QUAN TRỌNG TRONG nấm THƯỢNG HOÀNG TRỒNG tại VIỆT NAM

Xác định được các nhóm hợp chất hữu cơ quan trọng: polysaccharide, triterpenoid, flavonoid, phenolic, steroid, alkaloid, đường khử, glycoside tim, acid hữu cơ. Định lượng nhóm chất kháng oxy hóa: tổng phenolic: 4,60 ± 0,08 mg gallicg mẫu; tổng flavonoid: 2,30 ± 0,08 mg querceting mẫu. Định lượng nhóm hoạt chất chính: triterpenoid (0,27 ± 0,06%) và polysaccharide (7,15  0,14%, cao hơn các loại nấm dược liệu khác). Phân đoạn được PS thành các phân đoạn khác nhau, tách được hai phân đoạn: giàu protein và giàu polysaccharide. Xác định được bộ khung PS chính: mannan với các liên kết chủ yếu: liên kết 1→6Dmannoside, 1→6Dglucoside, 1→6Dgalactoside.

ĐẠI HỌC KHOA HỌC HUẾ KHOA HÓA HỌC BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH MỘT SỐ THÀNH PHẦN HÓA HỌC QUAN TRỌNG TRONG NẤM THƯỢNG HOÀNG – Phellinus linteus (Berk Curt.) Teng – TRỒNG TẠI VIỆT NAM Giáo viên hướng dẫn: Nhóm sinh viên thực hiện: Lê Lâm Sơn Nguyễn Thị Phương Nhi Trần Thị Vẽ Hoàng Ngọc Sỹ 01/2016 MỞ ĐẦU Polysaccharide Cấu trúc phong phú Đa dạng hoạt tính sinh học Nghiên cứu xác định thành phần Nấm Thượng hồng hóa học nấm Thượng hoàng Nấm dược liệu Lần trồng Việt Nam NỘI DUNG CHÍNH Kết luận Phương pháp – Kết Tổng quan nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 Tổng quan nấm Thượng hoàng 1.2 Tổng quan polysaccharide 1.3 Tổng quan triterpenoid 1.1 Tổng quan nấm thượng hồng Phân loại Hình Nấm Thượng hồng thu hoạch - Giới Fungi - Ngành Basidiomycota - Lớp Basidiomycetes - Bộ Hymenochaetales - Họ Hymenochaetaeae - Chi Phellinus - Loài P linteus 1.1 Tổng quan nấm thượng hồng Hình Phân bố địa lý nấm Thượng hồng Phellinus linteus 1.1 Tổng quan nấm thượng hoàng Đặc điểm ‒ ‒ ‒ Quả thể không cuống dạng quạt đến thon dài, gỗ cứng Kích thước thể: – 10 × 11 – 15 × – cm Mặt mũ: màu nâu hạt dẻ đậm, có lơng mịn Hình Nấm Thượng hồng sấy khơ sau thu hoạch 1.1 Tổng quan nấm thượng hồng Bảng Một số cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học nấm Thượng hồng STT Nguồn gốc nấm Nội dung Năm Đài loan Secquiterpene 2013 Cam pu chia Phenolic 2011 Hàn quốc Cấu trúc polysaccharide (PS) 2008 Hàn quốc Acidic polysaccharide 2003 Hàn quốc Acidic proteo-heteroglycan 2003 1.1 Tổng quan nấm thượng hồng Cơng dụng • • • • Chống ung thư Kháng khuẩn, kháng u, kháng virus Điều hòa miễn dịch Chống đơng máu, nghẽn tĩnh mạch Đặc biệt, trung tâm nghiên cứu ung thư Tokyo (1976), tỉ lệ ức chế khối u nấm Thượng hoàng cao 1.2 Tổng quan polysaccharide Homo-PS ‒ ‒ Glycan Heteroglycan Polysaccharide Hetero-PS ‒ ‒ N-heteropolysaccharide S-heteropolysaccharide 10 Tách chiết định lượng số hoạt chất mẫu nấm Thượng hồng e arid h c sac Poly Flav o noid no Tri ter pe c oli en id Ph 38 Định lượng phenolic flavonoid Hàm lượng tổng phenolic ‒ ‒  Chất chuẩn: acid gallic Phương trình đường chuẩn: y = 0,0652 + 10,5530x (R2 = 0,9993)   Hàm lượng tổng flavonoid ‒ ‒ Chất chuẩn: quercetin Phương trình đường chuẩn: y = 0,0384 8,4214x (R2 = 0,9965) 39 Định lượng phenolic flavonoid Bảng Hàm lượng tổng phenolic tổng flavonoid Hàm lượng tổng phenolic (P=0,95, n=3) (quy mg acid gallic) Hàm lượng tổng flavonoid (P=0,95, n=3) (quy mg quercetin) g cao methanol g nấm Thượng hoàng g cao methanol g nấm Thượng hoàng 22,29 ± 0,36 4,60±±0,08 0,08 4,60 11,15 ± 0,37 2,30 ± ± 0,08 2,30 0,08 Đây nhóm chất có hoạt tính kháng oxy hóa cao, cần phát triển nghiên cứu ứng dụng, đặc biệt dược phẩm 40 Định lượng triterpenoid dạng phytosterol Chất chuẩn: cholesterol    Phương trình đường chuẩn: y = 0,1184 0,0615x (R2 = 0,9939) Bảng Hàm lượng tổng triterpenoid-phytosterol nấm Thượng hoàng Hàm lượng tổng triterpenoid dạng phytosterol, (P = 0,95; n=3), (mg cholesterol/ g mẫu nấm) Lần TN Kết 2,67 2,71 2,70 Trung bình 2,70 ± 0,06 41 H àm lư ợ ng t rit e rp e n o id (% ) Định lượng triterpenoid dạng phytosterol Hình 13 Hàm lượng triterpenoid-phytosterol mẫu nấm  Hàm lượng triterpenoid thấp so với nấm dược liệu khác 42 Định lượng polysaccharide Chất chuẩn: D-glucose Phương trình đường chuẩn: y = 0,0216 + 0,0084x (R = 0,9999) Hàm lượng loại carbohydrate mẫu nấm (%) Hàm lượng PS Lần TN PS thô (%) Tổng Đường phân tử PS carbohydrate lượng thấp 58,21 9,60 3,01 7,16 57,65 9,60 3,05 7,09 58,56 9,72 3,10 7,20 TB 58,14 ± 1,14 9,64 ± 0,17 3,05 ± 0,11 7,15 ± 0,14 43 Định lượng polysaccharide Hàm lượng trit erpenoid (%) Cao Thượng Linh chi Linh chi Linh chi Linh chi Lim hồng Phú Lương Quảng Bình Hàn Quốc Gia Lai Quảng Bình Hình 14 Hàm lượng polysaccharide mẫu nấm dược liệu 44 Quá trình phân đoạn theo độ phân cực dung mơi Bảng Hàm lượng PS protein phân đoạn PS tổng Hàm lượng PS (%) Hàm lượng protein (%) Số lần TN PS PS2 PS3 PS tổng PS1 PS2 PS3 PS tổng 36,19 64,62 47,64 31,10 72,56 38,35 23,11 7,16 36,69 62,60 46,29 31,08 71,73 39,03 22,23 7,09 34,71 65,42 44,09 31,50 72,44 38,17 22,23 7,20 TB 35,24±0,98 64,21±3,61 46,01±4,45 31,23±0,59 72,04±1,73 38,52±1,13 22,52±1,26 7,15±0,14 45 Quá trình phân đoạn theo độ phân cực dung môi Tỉ lệ protein:PS 2,30:1 Chọn PS-E48 tiếp tục phân đoạn 0,42:1 Hàm lượng (%) 0,69:1 Protein PS 46 Hình 14 Hàm lượng PS protein phân đoạn Quá trình phân đoạn theo tương tác điện tích Bảng Hàm lượng PS protein hai phân đoạn PS-E48 PS-E48-a PS-E48-b Lần TN Protein (%) PS (%) Protein (%) PS (%) 2,87 32,87 71,62 33,10 2,78 32,28 72,41 32,00 2,95 32,96 72,82 32,19 TB 2,87 ± 0,21 32,70 ± 0,92 72,28 ± 1,52 32,43 ± 1,46 47 Quá trình phân đoạn theo tương tác điện tích Tỉ lệ protein:PS 80 70 0,088:1 2,229:1 60 PS-E48a: giàu PS PS-E48b: giàu protein 50 Hàm lượng (%) - 40 30 20 10 PS-E48a PS-E48b Hình 14 Hàm lượng PS protein hai phân đoạn PS-E48 48 Xác định cấu trúc polysaccharide phân đoạn PS-E48 STT Hợp chất Thời gian lưu Diện tích peak Liên kết 2,5-Di-O-methyl-D-mannitol 11,092 2936700 13,6 -D-mannoside 1,5,6-Tri-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl-D-glucitol 25,173 1202748 16- D-glucoside 5,6-Di-O-acetyl-2,3,4-tri-O-methyl-D-mannonitrile 23,652 756432 16- D-mannoside 5-C-hydroxy-2,3,4-tri-O-methyl-D-xylopyranose 22,551 496907 D-xyloside 2,3,4-tri-O-methyl-1,5,6-triacetate-D-Galactitol 24,237 436343 16-D-Galactoside 2,3,4,6-tetra-O-methyl-α-D-Mannopyranoside, 21,644 353855 1-D-manoside 2,3,4,5-tetraacetate-D-Arabinononitrile 27,600 282635 D-arabinoside 49 Xác định cấu trúc polysaccharide phân đoạn PS-E48 Bảng 10 Tỉ lệ thành phần monosaccharide PS-E48 PS-E48 Thành phần Tỷ lệ Quy (%) D-mannose 1,00 62,59% D-Glucose 0,29 18,60% D-xylose 0,12 7,68% D-Galactose 0,08 6,74% D-Arabinose 0,06 4,37% - Thành phần chính: D-mannose - Bộ khung chính: mannan 50 CHƯƠNG KẾT LUẬN Xác định nhóm hợp chất hữu quan trọng: polysaccharide, triterpenoid, flavonoid, phenolic, steroid, alkaloid, đường khử, glycoside tim, acid hữu Định lượng nhóm chất kháng oxy hóa: tổng phenolic: 4,60 ± 0,08 mg gallic/g mẫu; tổng flavonoid: 2,30 ± 0,08 mg quercetin/g mẫu Định lượng nhóm hoạt chất chính: triterpenoid (0,27 ± 0,06%) polysaccharide (7,15 ± 0,14%, cao loại nấm dược liệu khác) Phân đoạn PS thành phân đoạn khác nhau, tách hai phân đoạn: giàu protein giàu polysaccharide Xác định khung PS chính: mannan với liên kết chủ yếu: liên kết 1→6-D-mannoside, 1→6-D-glucoside, 1→6-D-galactoside 51 CẢM ƠN THẦY CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ LẮNG NGHE 52 ... sinh học Nghiên cứu xác định thành phần Nấm Thượng hồng hóa học nấm Thượng hồng Nấm dược liệu Lần trồng Việt Nam NỘI DUNG CHÍNH Kết luận Phương pháp – Kết Tổng quan nghiên cứu CHƯƠNG TỔNG QUAN. .. đậm, có lơng mịn Hình Nấm Thượng hồng sấy khơ sau thu hoạch 1.1 Tổng quan nấm thượng hồng Bảng Một số cơng trình nghiên cứu thành phần hóa học nấm Thượng hoàng STT Nguồn gốc nấm Nội dung Năm Đài... thử Shinoda 27 Định tính số nhóm hợp chất quan trọng mẫu nấm Thượng hoàng Dịch nước Dịch cồn Flavonoid: thuốc thử FeCl3 5% 28 Định tính số nhóm hợp chất quan trọng mẫu nấm Thượng hoàng Dịch nước