NGHIÊN cứu TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE TỪ NẤM SÒ TRẮNG

4. Thành phần monosaccharide và liên kết glycoside giữa các monosaccharide trong PSE32, PSE46, PSE68 rất phức tạp và khác nhau. 5. Các cao phân đoạn bằng (NH4)2SO4 gồm PSE681 giàu PS và PSE682 giàu protein. Cấu trúc PSE682 khác cấu trúc PSE68 ban đầu. 6. Tạo được dẫn xuất sulfate của mẫu PSE46: định tính bằng phổ FTIR và định lượng bằng phương pháp BaCl2gelatin

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC HUẾ KHOA HÓA BÁO CÁO NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN NGHIÊN CỨU TÁCH CHIẾT POLYSACCHARIDE TỪ NẤM SÒ TRẮNG – Pleurotus Florida TRỒNG TẠI THỪA THIÊN HUẾ VÀ TẠO DẪN XUẤT SULFATE HÓA Giảng viên cố vấn: Sinh viên thực hiện: Nguyễn Tường Diễm Châu Phạm Thị Khánh Linh Huỳnh Thị Kim Anh ThS Lê Trung Hiếu Huế, 01/ 2016 TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI - Nấm sò trắng: quan tâm nghiên cứu - Bị thu hút hoạt tính hợp chất PS - Cấu trúc phong phú tính chất; hoạt tính sinh học đa dạng: kháng khuẩn, ức chế ung thư, - Nghiên cứu cung cấp thơng tin thành phần hóa học loài nấm cần thiết MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Cung cấp thông tin thành phần, cấu trúc loại polysaccharide tách chiết từ nấm Sò trắng tạo dẫn xuất PS - sulfate (Pleurotus florida) ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Polysaccharide tách chiết từ nấm Sò trắng (Pleurotus florida) trồng Thừa Thiên Huế TỔNG QUAN Tổng quan nấm Sò trắng Danh pháp khoa học - Bộ Agaricales - Họ Pleurotaceae - Chi Pleurotus - Loài Pleurotus Florida Phân bố thực vật chi Pleurotus Thế giới: vùng ôn đới nhiệt đới Ở Việt Nam có điều kiện tốt cho nấm Sò trắng sinh trưởng phát triển quanh năm - Thành phần nhà khoa học quan tâm polysaccharide với hoạt tính sinh học kỳ diệu Polysaccharide Tách chiết, phân đoạn, tinh chế định lượng PS nấm Sò • Nghiên cứu cấu trúc heteropolysaccharide • Tạo dẫn xuất PS – sulfate • NỘI DUNG NGHIÊN CỨU trắng PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Chiết rắn-lỏng, lỏng-lỏng: chiết xuất tinh chế nhóm hợp chất Định lượng: tổng carbohydrate, protein hữu Tạo dẫn xuất sulfate từ PS nấm Sò trắng Phân đoạn PS Xác định thành phần monosaccharide vị trí liên kết glycoside PS Phương pháp chiết rắn - lỏng chiết lỏng - lỏng m (g) mẫu nấm - Chiết: dung môi khác nhau, lần - Nhiệt độ chiết: nhiệt độ sôi dung môi - Thời gian: Bã nấm Dịch Cất đuổi dung môi Cao tương ứng với dung mơi sử dụng Hình Sơ đồ chiết cao chứa nhóm hợp chất hữu từ mẫu nấm Sò trắng Phương pháp chiết rắn - lỏng chiết lỏng - lỏng m (g) mẫu nấm o Loại tạp sơ EtOH 96 , lần 100 C, Mẫu loại tạp o Chiết hồi lưu nước 100 , 5-6 lần Bã nấm Dịch nước Tủa ethanol 96 Dịch o o Để qua đêm nhiệt độ – C Cao PS Hình Sơ đồ tách chiết PS thô từ mẫu nấm Phương pháp chiết rắn - lỏng chiết lỏng - lỏng Cao PS Hòa tan nước vừa đủ Dịch nước Cô CHCl : n-butanol = 1:4 o Tủa EtOH 96 theo tỉ lệ xác định Rửa EtOH, acetone, sấy khô PS tinh chế Hình Sơ đồ tinh 10 chế PS 6.2 Định tính sản phẩm PS – sulfate2 phổ FT-IR Hình 13 Phổ FT – IR PS 34 Hình 14 Phổ FT – IR PS - sulfate2 35 6.3 Hàm lượng sulfate PS-sulfate Bảng 14 Độ hấp thụ quang dung dịch kali sulfate chuẩn nồng độ khác STT Nồng độ (μg/mL) Độ hấp thụ quang 40 0.23 80 0.45 120 0.61 160 0.8 200 0.94 Phương trình đường chuẩn K2SO4 khoảng nồng độ 40-200 μg/mL y= 0,004x + 0,075 với R= 0,9969 36 Bảng 15 Hàm lượng sulfate dẫn xuất sulfate Hàm lượng sulfate STT PS-sulfate2 (%) TB 35,16 35,11 35,21 35,16 Từ phổ FT-IR mẫu PS-sulfate2 kết hợp với kết hàm lượng sulfate, chứng tỏ nhóm sulfate gắn vào PS Như phản ứng sulfate hóa PS thành cơng 37 KẾT LUẬN Chúng tơi rút kết luận sau: Nấm Sò trắng (Pleurotus Florida) khảo sát chứa hàm lượng (%) PS: 3,77 ± 0,06% Cao PS chiết xuất từ nấm Sò trắng có hàm lượng PS 32,70 ± 1,14% protein 54,74 ± 1,77% Các cao nhận từ phân đoạn hỗn hợp ethanol: nước với tỷ lệ mol khác gồm: PS-E32, PS-E46, PS-E68 38 Thành phần monosaccharide liên kết glycoside monosaccharide PS-E32, PS-E46, PS-E68 phức tạp khác Các cao phân đoạn (NH 4)2SO4 gồm PS-E68-1 giàu PS PS-E68-2 giàu protein Cấu trúc PSE68-2 khác cấu trúc PS-E68 ban đầu Tạo dẫn xuất sulfate mẫu PS-E46: định tính phổ FT-IR định lượng phương pháp BaCl2-gelatin 39 KIẾN NGHỊ Để tiếp tục hồn thiện đề tài, chúng tơi xin phép kiện nghị sau: Tiếp tục tiến hành trình phân đoạn ammonium sulfate, để ổn định phương pháp Tiến hành xác định thành phần amino acid protein gắn với polysaccharide 40 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu Tiếng Việt [1] Võ Hoàng Kim Anh (2012), “Nghiên cứu thành phần tính chất polysaccharide tách chiết từ nấm Linh chi - Ganoderma lucidum nuôi trồng tỉnh Thừa Thiên Huế”, Luận văn Thạc sĩ Khoa học Hóa học, Đại học Khoa học Đại Học Huế [2] Lê Vĩnh Chương (2008), “Nghiên cứu bảo quản dầu mỡ chất chống oxy hóa tự nhiên”, Luận văn Thạc sĩ Khoa học Hóa học, Đại học Bách khoa, Đại học Quốc gia TP Hồ Chí Minh [3] Lê Trung Hiếu (2011), “Nghiên cứu tách chiết định lượng hoạt chất polysaccharide triterpenoid nấm Linh chi Ganoderma lucidum”, Luận văn Thạc sĩ khoa học Hóa học, Đại học Khoa học Huế [4] Cao Đăng Nguyên, Đỗ Q Hai (2007), “Giáo trình cơng nghệ protein”, Nxb Đại học Huế 41 Tài liệu tiếng anh [5] Bao X., Jinian Fang and Xiaoyu Li (2001), “Structural characterization and immunomodulating activity of a complex glucan from spores of Ganoderma lucidum”, Bioscience Biotechnology and Biochemistry, Vol 65, No 11, pp 2384-2391 [6] Cinthia B.S Tellesa, Diego A Sabrya, Jailma Almeida-Limaa, Mariana S.S.P Costaa, Raniere F Melo-Silveira, Edvaldo S Trindade, Guilherme L Sassaki, Elisabeth Wisbeckd, Sandra A Furlan, Edda L Leite, Hugo A.O Rocha (2011), “Sulfation of the extracellular polysaccharide produced by the edible mushroom Pleurotus sajor-caju alters its antioxidant, anticoagulant and antiproliferative properties in vitro”, Carbohydrate Polymer, Vol 85, pp 514-521 [7] Cristos A., Antonopoulos (1962), “A modification for the determination of sulphate in mucopolysaccharide by the benzidine method”, Acta Chemica Scandinavica, Vol 16, pp.1521-1522 [8] Dilip Rout, Soumitra Mondal, Indranil Chakraborty, Malay Pramanik and Syed S Islam (2005), “Chemical analysis of a new (1 →3)-, (1→6)branched glucan from an edible mushroom, Pleurotus florida”, Carbohydrate Research, Vol 340, pp 2533–2539 42 [9] Doina Mihai, Georgeta Mocanu, Adrian Carpov (2001), “Chemical reactions on polysaccharides I Pullulan sulfatio”, European Polymer Journal, Vol 37, pp 541-546 [10] Hedge J E., Hofreiter B T (1962), Carbohydrate Chemistry, 17 (Eds Whistler R.L and Be Miller, J.N.), Academic Press, New York [11] Ho Young Jung, In Young Bae, Suyong Lee, Hyeon Gyu Lee (2011), “Effect of the degree of sulfation on the physicochemical and biological properties of Pleurotus eryngii polysaccharide”, Food Hydrocolloids, Vol 25, pp 1291-1295 [12] Jing-Kun Yan , Wen-Qiang Wang , Hai-Le Ma and Jian-Yong Wu (2013), “Sulfation and enhanced antioxidant capacity of an exopolysaccharide produced by the medicinal fungus Cordyceps sinensis”, Molecules, Vol 18, pp 167-177 [13] Juliana C Santos-Neves, Maria Izabel Pereira, Elaine R Carbonero, Ana Helena P Gracher, Philip A J Gorin, Guilherme L Sassaki and Marcello Iacomini (2008), “A gel-forming β-glucan isolated from the fruit bodies of the edible mushroom Pleurotus florida”, Carbohydrate Research, Vol 343, pp 1456–1462 43 [14] Junlong Wang, Hongyun Guo, Ji Zhang, Xiaofang Wang, Baotang Zhao,Jian Yao, Yunpu Wang (2010), “Sulfated modification, characterization and structure–antioxidant relationships of Artemisia sphaerocephala polysaccharides”, Carbohydrate Polymers, Vol 81, pp 897–905 [15] Krishnaa C., Kuppuraj M., Satishkumar S., Seshagopal G (2008), Extraction of sulfated polysaccarides from cuttlefish (Sepia sp.) bone, Department of biotechnology shool of bioengineering faculty of engineering and technology SPM university Kattankulathur [16] Li Yan-Qua, Lu Fang, Zhang Ke-Chang (2007), “Structure and bioactivities of a galactose rich extracellular polysaccharide from submergedly culture Ganoderma lucidum”, Carbohydrate polymers, Vol 68, pp 312-317 [17] Liu, Y H., Liu, C H., Tan, H N., Zhao, T., Cao, J C., & Wang, F S (2009), “Sulfation of a polysaccharide obtained from Phellinus ribis and potential biological activities of the sulfated derivatives”, Carbohydrate Polymers, Vol 77, pp 370–375 44 18] Lowry O H., Rosenbrough N J., Farr A L., Randall R J (1951), “Protein measurement with the Folin Phenol Reagent”, Journal of Biological Chemistry, Vol 193, pp 265-275 [19] Miller, Jane Miller (2009), Statistics and Chemometrics for Analytiscal chemistry, Ashford Colour Press Ltd., Gosport, UK [20] Saikat Maity, Eshita Kar Mandal, Kousik Maity, Sanjoy K Bhunia, Birendra Behera, Tapas K Maiti, Pijush Mallick, Samir R Sikdar, Syed S Islam (2013), “Structural study of an immunoenhancing polysaccharide isolated from an edible hybrid mushroom of Pleurotus florida and Lentinula edodes”, Bioactive Carbohydrates and Dietary Fibre, pp 72-80 [21] Sato K., Nishijima M (1989), “Structural analysis of an acidic polysaccharide from Ganoderma lucidum”, Chemical and Pharmaceutical Bulletin, Vol 37, No 11, pp 3134-3136 [22] Shiguo Chen, Jingfeng Wang, Changhu Xue, Hui Li, Beibei Sun, Yong Xue, Wengang Chai (2010), “Sulfation of a squid ink polysaccharide and its inhibitory effect on tumor cell metastasis”, Carbohydrate Polymers, Vol 81, pp 560-566 45 [23] Sukesh Patra, Kankan K Maity, Sanjay K Bhunia, Biswajit Dey, Soumitra Mandal, Tapas K Maiti, Samir R Sikda, Syed S Islam (2011), “Structural characterization and study of immunoenhancing properties of heteroglycan isolated from a somatic hybrid mushroom (PfloVv1aFB) of Pleurotus florida and Volvariella volvacea”, Carbohydrate Research, Vol 346, pp 1967–1972 [24] Wanga, Zhongshan Zhanga, Zhiyun Yao, Mingxing Zhao, Huimin Qi (2013), “Sulfation, anticoagulant and antioxidant activities of polysaccharide from green algae Enteromorpha linza”, International Journal of Biological Macromolecules, Vol 58, pp 225-230 [25] Yuhong Liu, Liu Chunhui, Tan Haining, Zhao Ting, Cao Jichao, Wang Fengshan (2009), “Sulfation of a polysaccharide obtained from Phellinus ribis and potential biological activities of the sulfated derivatives”, Carbohydrate Polymers, Vol 77, pp 370-375 [26] Zhang Lixia, Zhang Yajun, Zhang Liping (2011), “Structure and immunological activity of a novel polysaccharide from the spores of Ganoderma lucidum”, African Journal of Biotechnology, Vol 10, No 53, pp 10923-10929 46 [27] Mei Zhanga, Lin Zhu, Steve W Cui, Qi Wang, Ting Zhou, Hengsheng Shen (2011), “Fractionation, partial characterization and bioactivity of water-soluble polysaccharides and polysaccharide–protein complexes from Pleurotus geesteranus”, International Journal of Biological Macromolecules, Vol 48, pp 5-12 Tài liệu Internet [28] http://en.wikipedia.org/wiki/Flavonoid (15/12/2015) [29] http://agriviet.com/threads/nuoi-trong-nam-bao-ngu.180148/ (15/12/2015) [30] http://en.wikipedia.org/wiki/Pleurotus (16/12/2015)   47 CẢM ƠN QUÝ THẦY CÔ VÀ CÁC BẠN ĐÃ CHÚ Ý LẮNG NGHE! 48 ... Brazil 9,20 Nấm Sò trắng (Pleurotus floride) Nấm Sò xám (Pleurotus sajor-caju) Nấm Tràm (Boletus feulles) Nấm Sò trắng (Pleurotus floride) 18 Nghiên cứu cao PS tách chiết từ mẫu nấm Sò trắng Bảng... Lực kháng oxy hóa tổng cao phân đoạn tách chiết từ nấm Sò trắng, cao PS nấm Sò trắng nấm Linh chi Phú Lương Lực kháng oxy hóa tổng PS-E32 > PS-E68 > PS nấm Sò trắng > PS-E46 > PS Linh chi Phú Lương... loài nấm cần thiết MỤC TIÊU ĐỀ TÀI Cung cấp thông tin thành phần, cấu trúc loại polysaccharide tách chiết từ nấm Sò trắng tạo dẫn xuất PS - sulfate (Pleurotus florida) ĐỐI TƯỢNG NGHIÊN CỨU Polysaccharide