Một hợp chất hóa học được sử dụng để phát hiện, xác định hay để tách trong quá trình phân tích hóa học một chất hay hỗn hợp của nhiều chất được gọi là thuốc thử phân tích. Do đó thuốc thử phân tích bao gồm cả những chất chỉ thị, chất điều chỉnh pH, dung dịch rửa kết tủa… Vậy một số chất chứa carbon (CO2, CO, CaCO3 ) bất kì hoặc trực tiếp hoặc gián tiếp được sử dụng trong hóa phân tích được gọi là chất phản ứng phân tích hữu cơ hoặc gọi gọn hơn là thuốc thử hữu cơ.Nghiên cứu phản ánh giữa thuốc thử hữu cơ và ion vô cơ va ứng dụng của nó va phân tích thực chất là nghiên cứu quá trình tạo phức .Sự phát triển lý thuyết hoá học trong những năm gần đây và đặc biệt là sử dụng thuyết trường phối tử và việc nghiên cứu các kim loại chuyển tiếp và phức của chúng đã giúp các nhà khoa học nói chung và phân tích nói riêng hiểu sâu sắc những yếu tố ảnh hưởng đến độ bền của phức chất ,bản chất phổ hấp thụ của chúng vẫn giữ tính chất quý giá khác .Chúng ta sẽ nghiên cứu thuốc thử hữu cơ trong khung cảnh của những lý thuyết hiện đại này.
ĐẠI HỌC HUẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC KHOA HÓA TIỂU LUẬN HÓA PHỨC CHẤT ỨNG DỤNG VAI TRÒ CỦA EDTA TRONG NUÔI TRỒNG THỦY SẢN VÀ TÁCH CHIẾT ADN GVHD.PGSTS:TRẦN NGỌC TUYỀN SV:TRẦN THỊ VẼ HUẾ 12/2014 MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG I.TỔNG QUAN VỀ THUỐC THỬ HỮU CƠ 1.Định nghĩa 2.Ưu điểm thuốc thử hữu so với thuốc thử vô 3.Đặc tính thuốc thử hữu CHƯƠNG II.THUỐC THỬ EDTA 1.Giới thiệu EDTA 2.Một số ứng dụng thuốc thử EDTA 3.Hàm lượng chất lượng EDTA CHƯƠNG III.SỬ DỤNG EDTA TRONG NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 1.Khả tạo phức EDTA nước 2,Ảnh hưởng EDTA môi trường thủy sinh vật CHƯƠNG IV.TÁCH CHIẾT ADN 1.Nguyên tắc yêu cầu 2.Các bước tách chiết ADN 3.Một số hóa chất thông dụng dùng tách chiết axit nucleic CHƯƠNG V.PHƯƠNG PHÁP SỬ DỤNG EDTA CHƯƠNG VI.KẾT LUẬN TÀI LIỆU THAM KHẢO CHƯƠNG1 TỔNG QUAN VỀ THUỐC THỬ HỮU CƠ 1.Định nghĩa - Một hợp chất hóa học sử dụng để phát hiện, xác định hay để tách trình phân tích hóa học chất hay hỗn hợp nhiều chất gọi thuốc thử phân tích - Do thuốc thử phân tích bao gồm chất thị, chất điều chỉnh pH, dung dịch rửa kết tủa… - Vậy số chất chứa carbon (CO 2, CO, CaCO3 ) trực tiếp gián tiếp sử dụng hóa phân tích gọi chất phản ứng phân tích hữu gọi gọn thuốc thử hữu -Nghiên cứu phản ánh thuốc thử hữu ion vô va ứng dụng va phân tích thực chất nghiên cứu trình tạo phức Sự phát triển lý thuyết hoá học năm gần đặc biệt sử dụng thuyết trường phối tử việc nghiên cứu kim loại chuyển tiếp phức chúng giúp nhà khoa học nói chung phân tích nói riêng hiểu sâu sắc yếu tố ảnh hưởng đến độ bền phức chất ,bản chất phổ hấp thụ chúng giữ tính chất quý giá khác Chúng ta nghiên cứu thuốc thử hữu khung cảnh lý thuyết đại 2.Ưu điểm thuốc thử hữu so với thuốc thử vô -Thuốc thử hữu có số ưu điểm bật so với thuốc thử vô ,vì sử dụng rộng rãi thực tế phân tích • Trước hết cần ý đến độ tan nhỏ hợp chất tạo thuốc thử hữu ion vô cơ.Vì vậy,người ta rửa kết tủa cẩn thận để tách hết chất mà không sợ lượng đáng kê ion cần xác định.Ngoài ra,hiện tượng kết tủa theo dùng thuốc thử hữu • Thuốc thử hữu thường có lượng phân tử lớn thành phần phần trăm ion xác định hợp chất tạo thành với thuốc thủ hữu thấp hợp chất tạo thành thuốc thử vô Ion cần xác định Al3+ Tl+ Hợp chất tạo thành ion cần xác định với thuốc thử Thành phần % ion cần xác định hợp chất tạo thành với thuốc thử Oxit nhôm Oxyquinolinat Iodua Tali 53.0 5.8 61.7 3.Một số đặc tính thuốc thử hữu - Độ tinh khiết : trừ số thuốc thử, hầu hết hợp chất hữu thị trường không tinh khiết Tùy theo trường hợp, yêu cầu làm - Ví dụ : Chloranil thuốc thử dịch chuyển điện tích với - amino acid nên phải làm trước sử dụng - Đây yêu cầu nghiên cứu thuốc thử hữu Độ tan: độ tan thuốc thử dung môi định phương pháp phân tích thuốc thử ấy.biết độ tan chủ động nghiên cứu Ví dụ: EDTA không tan tốt nước (môi trường trung tính).Để thay đổi độ tan cần trung hòa bazơ 8- hydroxyquinoline tan yếu nước, thường tan yếu acid acetic dạng băng pha loãng nước, phối tử hay phức - không tan nước Áp suất hơi: Một phức có áp suất cao phức khác Nhưng dẫn xuất metoxy hay etoxy có áp suất cao hợp chất “bố mẹ “ chúng, số chất tách phương - pháp sắc kí phổ Độ bền: Một số phức chelate bền dung môi trơ phức hình thành Tuy nhiên, số phức bền với nhiệt tách phương pháp chưng cất mà không bị phân hủy.Một số phức nhạy với ánh sáng không khí phải bảo quản cẩn thận Độ phân cực: Độ phân cực phân tử cho biết độ tan dung môi Một phân tử phân cực có thuận lợi dung môi chiết Bên cạnh đó, tách dựa phân cực hay không phân cực phân tử chất chiết sử dụng cách rộng rãi CHƯƠNG II:THUỐC THỬ EDTA 1,GIỚI THIỆU EDTA EDTA acid etylendiamin tetraaxetic kí hiệu H4Y,có phân tử lượng M=292,1.Là chất rắn màu trắng,ít tan nước ,có khả tạo nhiều phức bền với nhiều kim loại chuyển tiếp nên dùng phân tích để nhận biết hoắc tách chất gây cản trở Tính chất vật lý: - Dạng lỏng màu vàng nhạt, bột trắng ngà, tinh thể Tùy thuộc vào cấu trúc hóa học có độ tan khác Tính chất hóa học: -Thông thường EDTA cung cấp thị trường gồm dạng EDTA-H4, EDTA-H2Na2, EDTA-HNa3, EDTA-Na4 : +Nhờ vào khả tạo phức bền với ion kim loại (cô lập hoạt tính ion kim loại nặng - chelation), người ta thường sử dụng EDTA xuất ion kim loại gây ảnh hưởng xấu cho trình sản xuất +Khả hóa (chelate hóa - tạo phức với ion kim loại) tùy thuộc vào cấu trúc hóa học +Phức EDTA với kim loại tan hoàn toàn nước (không phải tạo kết tủa EDTA thường thấy hai dạng muối sau: +Hai muối: EDTA.2Na - Disodium ethylen diamin tetraacetate - Công thức: - Trọng lượng phân tử: 280 - Dạng bột trắng, không mùi, tan nước +Bốn muối: EDTA.4Na -Tetrasodium ethylen diamin tetraacetate) - Công thức: - Trọng lượng phân tử: 324 - Dạng bột màu trắng, hút ẩm, tan nhiều nước +EDTA phân li cho nấc acid: Pka1=1,99;pKa2=2.67:pKa3=6,16;pKa4=10,26 +5 dạng EDTA (H4Y,H3Y-,H2Y2-,HY3-,Y4-) +EDTA kết hợp hầu hết ion kim loại theo tỉ lệ :1 Mn+ + Y4- -> MY(n-4) Khả tạo phức EDTA : + EDTA có khả tạo phức bền với hầu hết kim loại phức tan tốt nước Tất cation phản ứng với EDTA,trừ kim loại kiềm (Na+,K+……) + Nguyên tử oxi nhóm acid (-COOH) có khả tạo liên kết cộng hóa trị với ion kim loại Nguyên tử N nhóm amin có khả tạo liên kết phối trí với ion kim loại Do đó,EDTA có khả tạo muối nội phức với hầu hết kim loại Mô tả giải thích trình phản ứng cation kim loại với EDTA : +Sự tạo thành phức kim loại với Amoniac (NH3) :phân tử NH3 kết hợp với ion kim loại liên kết với ion kim loại liên kết cho nhận cặp electron tự N với ion kim loại tạo thành chất tan dung dịch +Đối với Ethylendiamin hai phân tử amoniac liên kết với ion kim loại Mỗi nito cho nhận cặp điện tử ,như hình thành liên kết đồng hóa trị với kim loại +Đối với EDTA hidro thay ion axetat.MôtTrong oxi axetat lại có khả hình thành mối liên kết khác với ion kim loại (trong ion axetat có hai nguyên tử oxi với bốn cặp điện tử ,nhưng có ion hướng phía ion kim loại ion axetat hidro để hình thành liên kết C-N) Độ bền phức EDTA: Độ bền phức chelate kim loại phụ thuộc vào Ph dung dịch cấu trúc electron ion trung tâm.Trong phản ứng tạo phức đẩy ion H+,do độ bền phức chịu ảnh hưởng pH môi trường lớn Hằng số bền phức: β'MY= Một số phức độ bền phức: Phức NaY3LiY3AgY3MgY2CaY2BaY2MnY2FeY2- LgKb 1,66 2,79 7,20 8,69 10,96 7,76 14,04 14,33 Phức NiY2CdY2ZnY2PbY2CuY2HgY2AlYFeY- LgKb 18,62 16,46 16,50 18,04 18,80 21,80 16,13 25,10 CoY2- 16,31 ThY 23,20 Một số ứng dụng phức EDTA: Thực tế, EDTA có nhiều ứng dụng nhiều lĩnh vực khác nhau, như: Công nghiệp tẩy rửa: Tạo phứa với ion Ca 2+, Mg2+, kết hợp với kim loại nặng Làm nước: Tạo phức với ion Ca2+, Mg2+ (giảm độ cứng nước) Trong nhiếp ảnh: Sử dụng Fe(III)EDTA chất oxi hóa Trong công nghiệp sản xuất giấy: Tạo phức với kim loại nặng trình tẩy trắng, ổn định hydro peoxit Công nghiệp dệt: Tạo phức với kim loại nặng, máy tẩy trắng vải Hóa học nông nghiệp: Phân bón sắt, kẽm đồng, đặc biệt vùng đá vôi Kỹ thuật trồng nước : Fe(III)EDTA sử dụng để hòa tan sắt rong dung dịch dinh dưỡng cho trồng 3.Hàm lượng chất lượng EDTA -Tùy thuộc vào hàm lượng ion kim loại nặng có môi trường sản xuất cần xử lý để xác định hàm lượng EDTA tương ứng -Hiện thị trường xuất EDTA với nhiều nguồn gốc (xuất xứ) khác Người có nhu cầu sử dụng phân vân chọn lựa loại hàng nào, sản xuất, hàng thật, hàng giả Điều cần quan tâm chất lượng hàng hóa đảm bảo, dịch vụ kỹ thuật, hậu tốt Để an tâm hàng hóa mua, người mua nên xác định chất lượng sau: + Yêu cầu trung tâm kiểm định có uy tín xác định lại chất lượng hàng hóa +Tìm hiểu nhà phân phối Việt Nam, nhà sản xuất Có thể tìm hiểu thông tin nhà sản xuất cách dễ dàng qua công cụ tìm kiếm internet, danh bạ điện thoại nước gọi đến lãnh quán nước để nhờ xác minh +Đề nghị nhà phân phối cung cấp chứng nhận chất lượng (Certificate of Analysis), xuất xứ hàng hóa (Certificate of origin), có kèm theo để đối chiếu tốt Trên bao bì sản phẩm có số lô (batch number) tương ứng theo chứng nhận chất lượng nhà sản xuất +Nếu cảm thấy nghi ngờ nguồn hàng đó, đừng ngần ngại tiếp xúc với nhà sản xuất để kiểm tra xem nhà phân phối Việt Nam +Kiểm tra bao bì xem có dấu hiệu bất ổn không Chữ in bao bì, hình ảnh phải rõ nét, không bị nhòe Ví dụ: EDTA-Na2 (Dissolvine NA-2) EDTA-Na4 (Dissolvine NA) Akzo Nobel sản xuất Hà Lan đóng gói bao nhựa 25kg với hình ảnh nhiều màu sắc in rõ nét Lưu ý: thông thường EDTA-Na4 có khả tan nước tốt, tan tượng bất thường sủi bọt, tỏa nhiệt CHƯƠNG III.Sử dụng EDTA nuôi trồng thủy sản: Khả tạo phức EDTA nước: +Đặc tính EDTA tạo phức với kim loại tỉ lệ 1:1 Khả tạo phức với kim loại phụ thuộc vào pH nước, Ca2+ Mg2+ yêu cầu pH khoảng 10 Mặt khác tạo phức với kim loại phụ thuộc vào số hình thành phức, số cao khả tạo phức cao Đối với chì (Pb) số K=1018, Ca2+, K108 Trong môi trường nước, có nhiều Ca2+, Pb2+ cạnh tranh với Ca2+ +EDTA di chuyển vào đất tạo phức với kim loại vết kim loại kiềm thổ (Na+, K+, Ca2+,…), từ làm tăng độ hòa tan kim loại Đặc biệt đất phèn, EDTA tạo phức kẹp (chelate) Fe-EDTA từ làm giảm trình hoạt động Fe 3+ Trong môi trường kiềm, EDTA lại tạo phức chủ yếu với Ca2+ Mg2+ tạo thành CaMg-EDTA làm giảm độ cứng nước Một khía cạnh khác phân tử EDTA có 10% nitơ, sử dụng EDTA góp phần cung cấp thêm nitơ cho môi trường kích thích tảo phát triển Trong nước Ca3(PO4)2 FePO4 thường dạng không hòa tan làm lượng lớn PO43- nước làm hạn chế phát triển tảo, từ làm môi trường khó gây màu nước Khi sử dụng EDTA tạo phức với Ca, Fe chuyển PO43- vào nước dạng hòa tan, từ kích thích tảo phát triển Tương tác complexon II với cation Ca 2+ Mg2+ trình bày dạng sơ đồ: Tổng quát sau: Ảnh hưởng EDTA môi trường thủy sinh vật: +EDTA tạo phức với kim loại, mức độ ổn định phức tùy thuộc vào kim loại khác Các muối EDTA tan nước, số hấp thụ vào lớp bùn đáy ao, không bay khả phân hủy sinh học chậm Sự phân hủy sinh học EDTA môi trường phụ thuộc vào loại đất, nhiệt độ, pH, vật chất hữu thành phần vi sinh vật +Hiện nay, chưa có báo cáo ảnh hưởng EDTA lên sức khỏe người Tuy nhiên, EDTA chứng minh có ảnh hưởng lên ức chế tổng hợp ADN vào thể, EDTA tồn thận 95%, 5% lại túi mật +CaNa2EDTA cho phép sử dụng bảo quản thực phẩm nước Châu Âu Mỹ giới hạn cho phép từ 25-800 ppm HO qui định giới hạn hấp thụ tối đa 2,5 mg/kg Điều có nghĩa là giới hạn để theo dõi hàm lượng EDTA nước uống +EDTA muối thường không gây độc cho động vật cạn Hàm lượng EDTA tìm thấy nước mặt tự nhiên nồng độ thấp (0-1,0 ppm) không ảnh hưởng cho động vật thủy sinh Tuy nhiên, sử dụng nhiều thúc đẩy trình phát tán ô nhiễm kim loại +Tảo động vật không xương sống nhạy cảm với EDTA nhiều chúng ảnh hưởng lên phân chia tế bào, sắc tố quang hợp chlorophyll-a Tuy nhiên, điều thú vị môi trường có hàm lượng dinh dưỡng với lượng EDTA EDTA tính độc, cảnh báo phức với kim loại có tính tự phân hủy sinh học chậm nước lại tan nhanh đất, điều dẫn đến tích lũy kim loại tồn lâu đất Một số nghiên cứu ứng dụng EDTA: -Nghiên cứu Licop (1988) ấu trùng tôm sú Penaeus monodon cho thấy bổ sung Na-EDTA nồng độ 5,0 10ppm nước ương vào thứ 1, có tác dụng nâng cao tỉ lệ sống ấu trùng.Với cường độ sử dụng hàng ngày hàm lượng 10ppm cho tỉ lệ sống tốt -Thí nghiệm Cd cá Hồi, Part Wikmark (1984) cho Cd 2+ di chuyển trực tiếp vào mang cao gấp 1000 lần so với phức Cd-EDTA Như vậy, EDTA có tác dụng tốt làm giảm ảnh hưởng kim loại nặng lên thủy sinh vật -Trong xử lý nước thải, nghiên cứu Mayenkar Lagvankar (1983) cho thấy EDTA có khả loại bỏ Niken (Ni) 60%, đồng (Cu) la 100% sắt (Fe) khoảng 85% -EDTA có tác động lên vi khuẩn gram âm có khả phá màng tế bào thông qua xâm nhập làm nhóm acetyl (COCH 3),từ làm giảm thiểu lượng Ca Mg tế bào làm chức vách lipopolysarcharide (Oviedo Rodriguez, 2003) CHƯƠNG IV.TÁCH CHIẾT ADN 1.NGUYÊN TẮC VÀ YÊU CẦU Tách chiết ADN cần thiết công nghệ gen tiến hành với ADN (hay ARN) - thực nghiệm - ADN tách chiết cần đảm bảo độ tinh khiết độ nguyên vẹn cấu trúc để thực khâu nghiên cứu công nghệ gen thực vật * Có nhiều phương pháp tách chiết AND, tuỳ thuộc mục đích nghiên cứu mà lựa chọn phương pháp tách ADN cho phù hợp 2,CÁC BƯỚC CHÍNH TRONG TÁCH CHIẾT ADN Phá vỡ vật liệu ban đầu (tế bào, mô) để mở tế bào giải phóng axit nucleic (ADN ARN) (nghiền ni tơ lỏng hòa đệm chiết) Bổ sung chất chống chất hoạt hoá ADNase làm biến tính phân tử protein2, dịch hữu cơ.v.v enzyme 3.Tách ADN khỏi tạp chất khác (bằng máy ly tâm) 4.Kết tủa , rửa hòa tan ADN (rửa dung dịch cồn, hòa tan TE nước cất) 3.MỘT SỐ HÓA CHẤT THÔNG DỤNG DÙNG TRONG TÁCH CHIẾT AXIT NUCLEIC - Ni tơ lỏng: Thông thường để phá màng/vỏ tế bào phải dùng nitơ lỏng, nitơ lỏng có tác dụng là: + Làm cho màng bị cứng giòn, dễ bị vỡ nghiền + Và ni tơ lỏng giữ cho mẫu trạng thái lạnh, trạng thái mà enzym phá huỷ axít nucleic không hoạt động chúng bị ức chế hoá chất Một số qui trình sử dụng vật liệu đông khô, vật liệu đông khô dễ phá vỡ màng hơn, mặt khác sử dụng vật liệu đông khô không cần giữ mẫu trạng thái lạnh, môi trường khô tuyệt đối ezim phá huỷ axít nucleic vô tác dụng - EDTA: Khi màng bị phá vỡ, loạt chất đựơc giải phóng dung dịch, số chúg có loại emzim thuỷ phân axít nucleic thành mảnh vụn, cần phải ức chế hoạt động enzym EDTA Các ion hoá trị hai như: Mg2+,Ca2+ cần thiết cho hoạt động enzym thuỷ phân axít nucleic Nếu dung dịch có EDTA, chất liên kết với ion hoá trị hai nói trên, liên kết dẫn tới ức chế hoạt động enzym thuỷ phân axít nucleic, mà axít nucleic không bị phân huỷ -Tris: Axít nucleic bị ảnh hưởng lớn độ axít kiềm dung dịch sử dụng tách chiết, axít làm cho axít nucleic bị gãy, chẳng hạn axít clohydric (HCl) làm cho ADN bị đứt vị trí purin, nồng độ kiềm cao ADN bị tách thành sợi đơn Để loại trừ ảnh hưởng axít kiềm người ta sử dụng Tris để điều chỉnh pH dung dịch -CTAB (Cetryl Ammonium Bromide): Là hoá chất dùng chiếtsuất axít nucleic có hiệu cao sử dụng phổ biến CTAB dung dịch dung môi có khả hoà tan cao axít nucleic, mà CTAB dùng với vai trò chất tách chiết axít nucleic Để tăng hiệu hoạt động CTAB, mẫu đựơc xử lý với nhiệt khoảng từ 550C đến 650C Ở nhiệt độ vậy, có tác dụng làm rách thêm màng tế bào màng nhân để giải phóng tối đa lượng axít nucleic dung dịch làm biến tính số protein, đặc biệt enzym thuỷ phân axít nucleic Chloroform: Trong dung dịch tách chiết, ADN tạo thành liên kết với CTAB, để loại bỏ CTAB đồng thời làm biến tính protein dung dịch cần sử dụng chloroform Sau dung dịch tách chiết ly tâm,loại bỏ tạp chất (bị kéo xuống phần phía ống nghiệm) lại axít nucleic hoà tan lớp dung dịch nằm phía chuyển sang ống nghiệm Ethanol isopropanol - Ethanol thường dùng môi trường dung dịch có lực ion, hay nồng độ muối cao, điều kiện axít nucleic dễ dàng bị kết tủa, kết tủa axít nucleic đạt hiệu cao xử lý môi trường lạnh - Isopropanol dùng để kết tủa axít nucleic môi trường không cần có muối, tỷ lệ lượng isopropanol/mẫu theo thể tich là: 1/1 Sử dụng isopropanol có ưu việt axít nucleic có trọng lượng phân tử thấp như: mảnh gãy ADN ARN.v.v không bị kết tủa chúng dễ dàng bị loại bỏ dung dịch Enzym RNnase enzym Dnase: Khi kết tủa thu axít nucleic gồm: ADN ARN: - Nếu mục tiêu thu ADN, chúng cần phải loại bỏ ARN Để loại bỏ ARN, ta dùng enzym RNase Enzym RNase cắt ARN thành mảnh vụn, sau ly tâm ADN lắng tủa giữ đáy ống nghiệm, mảnh vụn ARN nằm dung dịch, loại bỏ dung dịch ARN bị loại bỏ theo - Ngược lại cần loại bỏ ADN, dùng enzym DNase, tương tự việc loại bỏ ARN, ADN bị cắt vụn DNase chúng bị loại bỏ dung dịch - Nước cất TE: Axít nucleic đựơc hoà tan nước cất khử trùng dung dịch TE Axít nucleic bảo quản tốt hơn, hoà tan dung dịch TE, dung dịch chứa Tris EDTA CHƯƠNG V:Phương pháp sử dụng: -EDTA sử dụng xử lý nước cấp sản xuất giống thủy sản nước lợ sản nước lợ, ương cá giống nuôi thương phẩm tôm, cá Đối với xử lý nước trại giống, liều thường áp dụng từ 5-10 ppm Trong xử lý nước nuôi tôm, cá thương phẩm, ao nuôi vùng có độ mặn thấp đất nhiễm phèn Khi cấp nước vào ao khoảng 0,8-1 m, độ kiềm thấp, nước có màu vàng nhạt, sử dụng EDTA liều 2-5 kg/1.000 m2 để xử lý trước bón vôi để nâng độ kiềm ao Tùy theo tình cụ thể mà người nuôi tư vấn thêm cán kỹ thuật Trong trình nuôi sử dụng EDTA với liều thấp 0,5-1 ppm Trên thị trường có nhiều sản phẩm phối chế có chứa thành phần EDTA, người nuôi chọn lựa sử dụng theo dẫn nhà sản xuất CHƯƠNG VI:TỔNG KẾT 1.Ưu điểm: -EDTA tác dụng tức kim loại chuyển tiếp Ca2+, Mg2+, Fe2+, Cd2+,…mà khả tác dụng với kim loại nên khả hao mòn hoàn toàn không xảy -EDTA-4Na tan vô hạn nước nên khả tạo phức với kim loại nặng tốt, không ảnh hưởng đến đời sống thủy sinh nước -Giá thành tương đối phù hợp -Phức EDTA có vai trò nhiều ứng dụng, đặc biệt giảm độ cứng nước, 2.Nhược điểm: - Nhưng chất tạo phức có chứa phosphor cung cấp dinh dưỡng cho thực vật sống nước tảo, làm cho chúng phát triển nhanh nên tiêu thụ nhiều O2 hòa tan nước vào ban đêm làm sinh vật chết hàng loạt nên hạn chế dùng TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] Lê Thị Mùi (2009) Bài giảng thuốc thử hữu phân tích,trường Đại học Sư phạm Đà Nẵng [2] Từ Vọng Nghi (2001) hóa học phân tích, NXB Đại học Quốc gia Hà Nội [...]... bào thông qua xâm nhập và làm mất nhóm acetyl (COCH 3),từ đó làm giảm thiểu lượng Ca và Mg trong tế bào và làm mất chức năng của vách lipopolysarcharide (Oviedo và Rodriguez, 2003) CHƯƠNG IV.TÁCH CHIẾT ADN 1.NGUYÊN TẮC VÀ YÊU CẦU Tách chiết ADN là cần thiết bởi các công nghệ gen đều tiến hành với ADN (hay ARN) - thực nghiệm của - ADN tách chiết được cần đảm bảo về độ tinh khiết và độ nguyên vẹn về cấu... xử lý nước cấp trong sản xuất giống thủy sản nước lợ sản nước lợ, ương cá giống và trong nuôi thương phẩm tôm, cá Đối với xử lý nước trong trại giống, liều thường áp dụng từ 5-10 ppm Trong khi xử lý nước trong nuôi tôm, cá thương phẩm, đối với những ao nuôi trong vùng có độ mặn thấp và đất nhiễm phèn Khi cấp nước vào ao khoảng 0,8-1 m, nếu độ kiềm thấp, nước có màu vàng nhạt, có thể sử dụng EDTA ở liều... tiếp theo trong công nghệ gen thực vật * Có rất nhiều phương pháp tách chiết AND, tuỳ thuộc mục đích nghiên cứu mà lựa chọn các phương pháp tách ADN cho phù hợp 2,CÁC BƯỚC CHÍNH TRONG TÁCH CHIẾT ADN 1 Phá vỡ vật liệu ban đầu (tế bào, mô) để mở tế bào và giải phóng axit nucleic (ADN và ARN) (nghiền trong ni tơ lỏng và hòa trong đệm chiết) 2 Bổ sung các chất chống các chất hoạt hoá ADNase và làm biến... sử dụng trong tách chiết, axít có thể làm cho axít nucleic bị gãy, chẳng hạn axít clohydric (HCl) làm cho ADN bị đứt ở những vị trí purin, trong khi đó nếu ở nồng độ kiềm cao thì ADN sẽ bị tách thành sợi đơn Để loại trừ ảnh hưởng của axít và kiềm người ta đã sử dụng Tris để điều chỉnh pH của dung dịch -CTAB (Cetryl Ammonium Bromide): Là hoá chất dùng trong chiếtsuất axít nucleic có hiệu quả cao và. .. hủy sinh học chậm trong nước nhưng lại tan nhanh trong đất, điều này có thể dẫn đến sự tích lũy kim loại và tồn tại lâu trong đất Một số nghiên cứu ứng dụng về EDTA: -Nghiên cứu của Licop (1988) trên ấu trùng tôm sú Penaeus monodon cho thấy khi bổ sung Na-EDTA ở nồng độ 5,0 và 10ppm và trong nước ương vào thứ 1, 4 và 7 có tác dụng nâng cao tỉ lệ sống của ấu trùng.Với cường độ sử dụng hàng ngày ở hàm... cơ.v.v enzyme 3 .Tách ADN khỏi các tạp chất khác (bằng máy ly tâm) 4.Kết tủa , rửa và hòa tan ADN (rửa bằng dung dịch cồn, hòa tan trong TE hoặc nước cất) 3.MỘT SỐ HÓA CHẤT THÔNG DỤNG DÙNG TRONG TÁCH CHIẾT AXIT NUCLEIC - Ni tơ lỏng: Thông thường để phá màng/vỏ tế bào chúng ta phải dùng nitơ lỏng, vì nitơ lỏng có 2 tác dụng chính đó là: + Làm cho màng bị cứng giòn, dễ bị vỡ khi nghiền + Và ni tơ lỏng giữ... thụ vào lớp bùn đáy ao, không bay hơi và khả năng phân hủy sinh học chậm Sự phân hủy sinh học của EDTA trong môi trường phụ thuộc vào loại đất, nhiệt độ, pH, vật chất hữu cơ và thành phần vi sinh vật +Hiện nay, chưa có báo cáo về ảnh hưởng của EDTA lên sức khỏe con người Tuy nhiên, EDTA được chứng minh là có ảnh hưởng lên sự ức chế sự tổng hợp ADN và khi vào cơ thể, EDTA tồn tại trong thận 95%, và. .. ADN, chúng ta dùng enzym DNase, cũng tương tự như việc loại bỏ ARN, ADN sẽ bị cắt vụn bởi DNase và chúng cũng bị loại bỏ cùng dung dịch - Nước cất và TE: Axít nucleic có thể đựơc hoà tan trong nước cất khử trùng hoặc dung dịch TE Axít nucleic sẽ được bảo quản tốt hơn, nếu nó được hoà tan trong dung dịch TE, vì dung dịch này chứa Tris và EDTA CHƯƠNG V:Phương pháp sử dụng: -EDTA có thể được sử dụng trong. .. nước Khi sử dụng EDTA sẽ tạo phức với Ca, Fe chuyển PO43- vào trong nước ở dạng hòa tan, từ đó kích thích tảo phát triển Tương tác của complexon II với cation Ca 2+ và Mg2+ có thể trình bày dưới dạng sơ đồ: Tổng quát sau: 2 Ảnh hưởng của EDTA đối với môi trường và thủy sinh vật: +EDTA tạo phức với kim loại, mức độ ổn định của phức sẽ tùy thuộc vào từng kim loại khác nhau Các muối của EDTA tan trong nước,... khi bón vôi để nâng độ kiềm trong ao Tùy theo tình huống cụ thể mà người nuôi có thể tư vấn thêm cán bộ kỹ thuật Trong quá trình nuôi có thể sử dụng EDTA với liều thấp hơn 0,5-1 ppm Trên thị trường hiện nay có nhiều sản phẩm phối chế có chứa thành phần EDTA, người nuôi có thể chọn lựa và sử dụng theo chỉ dẫn của nhà sản xuất CHƯƠNG VI:TỔNG KẾT 1.Ưu điểm: -EDTA là hầu như tác dụng ngay tức thì đối với ... ứng dụng thuốc thử EDTA 3.Hàm lượng chất lượng EDTA CHƯƠNG III.SỬ DỤNG EDTA TRONG NUÔI TRỒNG THỦY SẢN 1.Khả tạo phức EDTA nước 2,Ảnh hưởng EDTA môi trường thủy sinh vật CHƯƠNG IV.TÁCH CHIẾT ADN. .. (Oviedo Rodriguez, 2003) CHƯƠNG IV.TÁCH CHIẾT ADN 1.NGUYÊN TẮC VÀ YÊU CẦU Tách chiết ADN cần thiết công nghệ gen tiến hành với ADN (hay ARN) - thực nghiệm - ADN tách chiết cần đảm bảo độ tinh khiết... pháp sử dụng: -EDTA sử dụng xử lý nước cấp sản xuất giống thủy sản nước lợ sản nước lợ, ương cá giống nuôi thương phẩm tôm, cá Đối với xử lý nước trại giống, liều thường áp dụng từ 5-10 ppm Trong