Nghiên cứu phân lập và chuyển gen liên quan đến tính chịu hạn vào giống lúa ở việt nam

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN _ Cao Lệ Quyên NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ CHUYỂN GEN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN VÀO GIỐNG LÚA Ở VIỆT NAM LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC Hà Nội – 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN _ Cao Lệ Quyên NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ CHUYỂN GEN LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN VÀO GIỐNG LÚA Ở VIỆT NAM Chuyên ngành: Di truyền học Mã số: 62 42 01 21 LUẬN ÁN TIẾN SĨ SINH HỌC NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: PGS.TS Phạm Xuân Hội PGS.TS Đinh Đoàn Long Hà Nội – 2017 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan: Luận án cơng trình nghiên cứu thực cá nhân, đƣợc thực dƣới hƣớng dẫn khoa học PGS.TS Phạm Xuân Hội PGS.TS Đinh Đoàn Long Các số liệu, kết luận án trung thực chƣa đƣợc tác giả công bố cơng trình khác Tơi xin chịu trách nhiệm nghiên cứu Hà Nội, ngày 20 tháng 09 năm 2017 Nghiên cứu sinh Cao Lệ Quyên LỜI CẢM ƠN NCS xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới PGS TS Phạm Xuân Hội (Viện Di truyền Nông nghiệp), PGS TS Đinh Đoàn Long (Khoa Y Dược, Trường Đại học Quốc Gia Hà Nội) TS Michel Nicole (Trung tâm Nghiên cứu Vì Sự Phát triển, Montpellier, Pháp) người thầy tận tình hướng dẫn, giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho NCS suốt thời gian học tập, thực hoàn thành luận án NCS xin trân trọng cảm ơn Ban giám hiệu Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Phòng Sau Đại học , Ban Chủ nhiệm Khoa Sinh học (Trường ĐH KHTN) Ban lãnh đạo Viện Di truyền Nông nghiệp tạo điều kiện thuận lợi q trình học tập, nghiên cứu hồn luận án NCS xin chân thành cảm ơn thầy,các cô Bộ môn Di truyền (Khoa Sinh học, Trường ĐH KHTN) giảng dạy NCS trình học tập tập thể cán nghiên cứu Bộ môn Bệnh học Phân tử (Viện DTNN) bạn bè, đồng nghiệp giúp đỡ, đóng góp ý kiến để NCS hồn thiện luận án Tơi xin cảm ơn gia đình người thân ln bên cạnh tôi, quan tâm, cảm thông giúp đỡ suốt thời gian học tập thực luận án Hà Nội ngày 20 tháng 09 năm 2017 NCS Cao Lệ Quyên MỤC LỤC MỤC LỤC DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG 12 MỞ ĐẦU 14 Chƣơng TỔNG QUAN 20 1.1 HÁN HẠN-YẾU TỐ KÌM HÃM TRONG SẢN XUẤT NƠNG NGHIỆP 20 1.1.1 Khái niện hạn hán 20 1.1.2 Tác động tiêu cực hạn hán đến sản xuất nông nghiệp 21 1.2 PHẢN ỨNG CỦA THỰC VẬT TRONG ĐIỀU KIỆN HẠN 24 1.2.1 Ảnh hƣởng hạn hán thực vật 24 1.2.2 Đáp ứng chống, chịu hạn thực vật 26 1.2.3 Cơ sở phân tử đáp ứng chống chịu hạn thực vật 29 1.3 CÁC NHÂN TỐ PHIÊN MÃ LIÊN QUAN ĐẾN TÍNH CHỊU HẠN Ở THỰC VẬT 34 1.3.1 Nhóm nhân tố phiên mã NAC 36 1.3.2 Nhóm nhân tố phiên mã MYB/MYC 37 1.3.3 Nhóm nhân tố phiên mã bZIP 38 1.3.4 Nhóm nhân tố phiên mã AP2/ERF 40 1.4 TÌNH HÌNH NGHIÊN CỨU TẠO GIỐNG LÚA CHUYỂN GEN CHỊU HẠN TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM 41 1.4.1 Nghiên cứu tạo giống lúa chuyển gen chịu hạn giới 44 1.4.2 Tình hình nghiên cứu tạo giống lúa chuyển gen Việt Nam 50 Chƣơng VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 53 2.1 VẬT LIỆU VÀ ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 53 2.1.1 Đối tƣợng nghiên cứu 53 2.1.2 Vật liệu nghiên cứu 54 2.1.3 Thiết bị 57 2.2 PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 57 2.2.1 Xƣ̉ lý lúa điều kiện hạn 57 2.2.2 Tách chiết, định lƣợng DNA/RNA 58 2.2.3 Sinh tổng hợp DNA bổ sung hoàn chỉ nh (full-length cDNA) 60 2.2.4 Nhân đoạn DNA đặc hiệu kĩ thuật PCR 62 2.2.5 Thiết kế vector chuyển gen 65 2.2.6 Biến nạp plasmid vào tế bào vi khuẩn A tumefaciens 67 2.2.7 Đánh giá khả hình thành callus tái sinh lúa 68 2.2.8 Chuyển gen vào lúa thông qua vi khuẩn Agrobacterium 69 2.2.9 Đánh giá số lƣợng bản của gen chuyển 71 2.2.10 Đánh giá sinh trƣởng, phát triển, khả chịu hạn lúa chuyển gen 74 2.2.11 Đánh giá biểu gen OsDREB1A phƣơng pháp PCR định lƣợng 75 2.2.12 Đánh giá biểu gen phƣơng pháp PCR bán định lƣợng76 Chƣơng KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 77 3.1 PHÂN LẬP VÀ THIẾT KẾ VECTOR CHUYỂN GEN OsDREB1A/OsDREB2A 77 3.1.1 Phân lập trình tự mã hóa OsDREB1A/OsDREB2A 77 3.1.2 Thiết kế vector chuyển gen OsDREB1A/OsDREB2A 92 3.1.3 Biến nạp vector biểu vào A tumefaciens chủng LBA4404 94 3.2 NGHIÊN CỨU QUI TRÌNH CHUYỂN GEN VÀO GIỐNG LÚA Ở VIỆT NAM 95 3.2.1 Khả hình thành callus tập đồn giống lúa Việt Nam 95 3.2.2 Khả tái sinh tập đoàn giống lúa Việt Nam 99 3.2.3 Khảo sát khả tiếp nhận gen giống lúa Việt Nam 103 3.3 TẠO GIỐNG LÚA CHÀNH TRỤI CHUYỂN GEN 108 3.3.1 Biến nạp trình tự mã hóa OsDREB1A/OsDREB2A vào lúa Chành trụi 108 3.3.2 Sàng lọc dòng Chành Trụi chuyển gen 108 3.4 ĐÁNH GIÁ KIỂU HÌ NH CÂY CHUYỂN GEN 118 3.4.1 Đánh giá sinh trƣởng phát triển dòng lúa chuyển gen T2 118 3.4.2 Đánh giá khả giữ nƣớc phục hồi dòng lúa chuyển gen T2 120 3.4.3 Đánh giá khả chịu hạn và tạo hạt của các dòng chuyển gen T3 124 3.4.4 Đánh giá biểu OsDREB1A gen liên quan chịu hạn khác chuyển gen hệ T3 127 KẾT LUẬN 130 KIẾN NGHỊ 132 DANH MỤC CƠNG TRÌNH KHOA HỌC CỦA TÁC GIẢ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN ÁN 133 TÀI LIỆU THAM KHẢO 134 PHỤ LỤC 151 DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid 3-AT 3-Amino-1, 2, 4-triazole A thaliana Arabidopsis thaliana A tumefaciens Agrobacterium tumefaciens ABA Abscisic acid ABRE Yếu tố đáp ứng acid abscisic chứa trình tự ACGT (ACGT-containing abscisic acid response element) AD Vùng tác động (acting domain) ADB Ngân hàng phát triển châu Á (Asian Development Bank) AMP Adenosine monophosphate ADP Adenosine diphosphate ATP Adenosine triphosphate BAP 6-Benzylaminopurine BD Vùng liên kết (binding domain) BĐKH Biến đổi khí hậu bp Cặp bazơ (base pair) CBB Coomassie Brilliant Blue cDNA DNA bổ sung (complementary deoxyribonucleic acid) CDBK protein kinase phụ thuộc canxi (calciumdependent protein kinase) Ct Chu kỳ ngƣỡng (threshold cycle) dCTP Deoxycytidine triphosphate DEPC Diethylpyrocarbonate DMSO Dimethyl sulfoxide dNTP Deoxyribonucleoside Triphosphate DRE Yếu tố đáp ứng hạn (dehydration responsive element) DREB Protein liên kết với yếu tố đáp ứng hạn DRE (dehydration responsive element-binding protein) E coli Escherichia coli EDTA Ethylenediaminetetraacetic acid EtBr Ethidium bromide FAO Tổ chức lƣơng thực Nông nghiệp Liên Hợp quốc (Food and Agriculture Organization of United Nations) GMP Guanosine monophate HSP Protein sốc nhiệt (Heat shock protein) HK Histidine Kinase IPCC Ủy ban liên phủ Biến đổi khí hậu (Intergovernmental Panel on Climate Change) IPTG Isopropyl β-D-1-thiogalactopyranoside Phụ lục 05 Kết giải trình tự vector tái tổ hợp pBIG-Ubi:OsDREB2A Phụ lục 06 Kết giải trình tự vector tái tổ hợp pBIG-Lip9:OsDREB2A 155 Phụ lục 07 Đánh giá hiệu suất qRT-PCR cho hai cặp mồi Hyg-Fw/Rv REF#3 156 Phụ lục 08 Kết kiểm tra số lƣợng copy dòng lúa chuyển trình tự mã hóa OsDREB1A STT Av 2ΔCt±SD (Lip9) 0.53±0.002 0.95±0.057 0.52±0.028 0.93±0.026 0.51±0.017 0.59±0.040 0.47±0.020 1.25±0.017 0.52±0.029 10 0.51±0.008 11 1.37±0.015 12 0.53±0.044 13 0.41±0.027 14 0.57±0.014 15 1.29±0.035 16 0.49±0.013 17 0.54±0.027 18 0.49±0.043 19 1.01±0.212 20 0.53±0.002 21 0.95±0.057 22 0.52±0.028 23 0.93±0.026 Số copy 2 1 3-4 1 4-5 1 1 2-3 2-3 157 STT (Ubi) 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 Av 2ΔCt±SD 0.44±0.048 1.17±0.126 0.50±0.053 0.54±0.027 0.51±0.008 0.48±0.031 1.01±0.212 1.10±0.159 0.49±0.035 0.50±0.049 0.47±0.020 0.51±0.033 0.47±0.015 0.41±0.022 0.52±0.029 0.41±0.057 0.93±0.026 1.17±0.126 0.61±0.212 1.20±0.159 Số copy 3-4 1 1 2-3 2-3 1 1 1 1 3-4 1-2 3-4 Phụ lục 09 Kết kiểm tra số lƣợng copy dòng lúa chuyển trình tự mã hóa OsDREB2A STT Av 2ΔCt±SD (Lip9) 0.63±0.012 0.105±0.057 0.55±0.029 0.113±0.016 0.41±0.018 0.49±0.030 0.48±0.021 1.15±0.019 0.42±0.025 10 0.61±0.009 11 1.27±0.014 12 0.53±0.044 13 0.111±0.027 14 0.57±0.014 15 0.49±0.029 Số copy 2 1 1 2 1 158 STT (Ubi) 10 11 12 Av 2ΔCt±SD 0.64±0.023 1.27±0.026 0.60±0.033 0.44±0.021 0.51±0.008 0.58±0.021 1.21±0.012 0.52±0.059 0.49±0.035 0.50±0.049 0.107±0.025 0.51±0.033 Số copy 1 1 1 Phụ lục 10 Kết kiểm tra số lƣợng copy dòng lúa chuyển gen mang vector trống STT Av 2ΔCt ±SD (Lip9) 1.53±0.032 0.99±0.027 0.62±0.023 0.98±0.016 0.61±0.012 0.49±0.032 0.52±0.020 1.15±0.019 1.52±0.029 10 0.41±0.015 11 1.25±0.025 12 1.53±0.029 13 1.41±0.034 14 1.37±0.024 15 1.39±0.025 Số copy 2 1 2 2 2 159 STT (Ubi) 10 11 12 Av 2ΔCt±SD 0.64±0.024 1.35±0.036 1.50±0.043 1.44±0.037 0.41±0.028 0.68±0.037 1.61±0.112 1.26±0.059 1.49±0.027 1.52±0.069 0.57±0.012 1.31±0.037 Số copy 2 1 2 2 Phụ lục 11 Kết kiểm tra kiểu gen dòng lúa chuyển gen cấu trúc Lip9:OsDREB1A STT Av 2ΔCt±SD Kiểu gen STT Av 2ΔCt±SD Kiểu gen L11 1.39±0.032 AA L34 0.44±0.022 Aa L12 0.99±0.027 AA L35 0.38±0.026 Aa L13 0.62±0.023 Aa L36 0.50±0.023 Aa L14 0.48±0.021 Aa L41 1.44±0.037 AA L15 0.51±0.012 Aa L42 0.51±0.028 Aa L16 0.49±0.012 Aa L43 0.48±0.037 Aa L17 0.55±0.020 Aa L44 0.61±0.012 Aa L18 0.43±0.019 Aa L51 1.16±0.059 AA L21 1.52±0.029 AA L52 0.49±0.027 Aa L22 0.42±0.015 Aa L53 0.52±0.069 Aa L23 1.05±0.024 AA L54 0.57±0.012 Aa L24 0.53±0.039 Aa L55 0.61±0.037 Aa L25 0.41±0.034 Aa L56 0.46±0.059 Aa L31 1.37±0.024 AA L57 0.49±0.027 Aa L32 1.29±0.025 AA L58 1.06±0.029 AA L33 0.46±0.028 Aa 160 Phụ lục 12 Kết kiểm tra kiểu gen dòng lúa chuyển cấu trúc Ubi:OsDREB1A STT Av 2ΔCt±SD Kiểu gen STT Av 2ΔCt±SD U11 1.43±0.032 AA U31 0.64±0.024 Aa U12 1.09±0.027 AA U32 1.35±0.036 AA U13 0.62±0.023 Aa U33 1.50±0.043 AA U14 0.98±0.016 AA U34 0.44±0.037 Aa U15 0.61±0.012 Aa U35 0.41±0.028 Aa U16 0.44±0.037 Aa U36 0.68±0.037 Aa U17 0.52±0.041 Aa U41 0.61±0.042 Aa U21 1.15±0.019 AA U42 1.26±0.059 AA U22 0.48±0.029 Aa U43 0.49±0.027 Aa U23 0.51±0.015 Aa U44 0.52±0.069 Aa U24 0.65±0.025 Aa U45 0.57±0.012 Aa U46 1.31±0.037 AA 161 Kiểu gen Phụ lục 13 Kết qRT-PCR xác định số lƣợng copy chuyển gen Phụ lục 14 Đánh giá hệ rễ lúa chuyển gen giai đoạn sinh trƣởng 162 Phụ lục 15: Kết kiểm định giá trị trung bình khả tái sinh 26 giống lúa nghiên cứu có khả tạo callus tốt phần mềm GraphPad Prism 6.0 Compare row means (main row effect) Number of families Number of comparisons per family Alpha Tukey's multiple comparisons test vs vs vs vs vs vs 10 vs 14 vs 15 vs 17 vs 19 vs 20 vs 23 vs 24 vs 25 vs 26 vs 27 vs 28 vs 33 vs 34 vs 35 vs 41 vs 42 vs 44 vs 46 vs 47 vs vs vs vs vs 10 vs 14 vs 15 vs 17 vs 19 vs 20 vs 23 vs 24 vs 25 vs 26 325 0,05 Mean Diff, 6,335 20,88 5,378 -9,912 8,432 -5,016 6,309 -3,307 -0,2017 0,6358 -6,053 19,17 0,1725 8,155 -7,855 -1,510 -7,765 13,10 -15,40 -0,8550 2,075 -3,823 -7,083 -2,113 -19,36 14,55 -0,9575 -16,25 2,097 -11,35 -0,02583 -9,642 -6,537 -5,699 -12,39 12,83 -6,163 1,820 -14,19 163 95% CI of diff, -2,827 to 15,50 11,72 to 30,04 -3,785 to 14,54 -19,07 to -0,7497 -0,7303 to 17,59 -14,18 to 4,146 -2,853 to 15,47 -12,47 to 5,855 -9,364 to 8,960 -8,526 to 9,798 -15,21 to 3,110 10,01 to 28,33 -8,990 to 9,335 -1,007 to 17,32 -17,02 to 1,307 -10,67 to 7,652 -16,93 to 1,397 3,940 to 22,26 -24,56 to -6,240 -10,02 to 8,307 -7,087 to 11,24 -12,98 to 5,340 -16,24 to 2,080 -11,28 to 7,049 -28,53 to -10,20 5,384 to 23,71 -10,12 to 8,205 -25,41 to -7,085 -7,065 to 11,26 -20,51 to -2,189 -9,188 to 9,136 -18,80 to -0,4797 -15,70 to 2,625 -14,86 to 3,463 -21,55 to -3,225 3,671 to 22,00 -15,32 to 3,000 -7,342 to 10,98 -23,35 to -5,028 Significant? No Yes No Yes No No No No No No No Yes No No No No No Yes Yes No No No No No Yes Yes No Yes No Yes No Yes No No Yes Yes No No Yes Summary ns **** ns * ns ns ns ns ns ns ns **** ns ns ns ns ns *** **** ns ns ns ns ns **** **** ns **** ns ** ns * ns ns *** *** ns ns **** vs 27 vs 28 vs 33 vs 34 vs 35 vs 41 vs 42 vs 44 vs 46 vs 47 vs vs vs vs 10 vs 14 vs 15 vs 17 vs 19 vs 20 vs 23 vs 24 vs 25 vs 26 vs 27 vs 28 vs 33 vs 34 vs 35 vs 41 vs 42 vs 44 vs 46 vs 47 vs vs vs 10 vs 14 vs 15 vs 17 vs 19 vs 20 vs 23 vs 24 vs 25 vs 26 vs 27 vs 28 vs 33 vs 34 vs 35 vs 41 -7,845 -14,10 6,767 -21,74 -7,190 -4,260 -10,16 -13,42 -8,448 -25,70 -15,50 -30,79 -12,45 -25,90 -14,57 -24,19 -21,08 -20,25 -26,93 -1,712 -20,71 -12,73 -28,74 -22,39 -28,65 -7,778 -36,28 -21,74 -18,81 -24,70 -27,96 -22,99 -40,24 -15,29 3,054 -10,39 0,9317 -8,684 -5,579 -4,742 -11,43 13,79 -5,205 2,778 -13,23 -6,888 -13,14 7,725 -20,78 -6,233 -3,303 164 -17,01 to 1,317 -23,26 to -4,938 -2,395 to 15,93 -30,90 to -12,58 -16,35 to 1,972 -13,42 to 4,902 -19,32 to -0,9955 -22,58 to -4,255 -17,61 to 0,7137 -34,86 to -16,54 -24,67 to -6,341 -39,95 to -21,63 -21,61 to -3,287 -35,06 to -16,73 -23,73 to -5,410 -33,35 to -15,03 -30,24 to -11,92 -29,41 to -11,08 -36,10 to -17,77 -10,87 to 7,450 -29,87 to -11,55 -21,89 to -3,564 -37,90 to -19,57 -31,55 to -13,23 -37,81 to -19,48 -16,94 to 1,384 -45,45 to -27,12 -30,90 to -12,57 -27,97 to -9,644 -33,87 to -15,54 -37,13 to -18,80 -32,16 to -13,83 -49,41 to -31,08 -24,45 to -6,127 -6,108 to 12,22 -19,56 to -1,231 -8,230 to 10,09 -17,85 to 0,4778 -14,74 to 3,583 -13,90 to 4,420 -20,59 to -2,268 4,629 to 22,95 -14,37 to 3,957 -6,385 to 11,94 -22,39 to -4,070 -16,05 to 2,275 -22,30 to -3,980 -1,437 to 16,89 -29,94 to -11,62 -15,39 to 2,930 -12,46 to 5,860 No Yes No Yes No No Yes Yes No Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes No Yes Yes Yes Yes Yes No Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes No Yes No No No No Yes Yes No No Yes No Yes No Yes No No ns **** ns **** ns ns * *** ns **** **** **** *** **** **** **** **** **** **** ns **** *** **** **** **** ns **** **** **** **** **** **** **** **** ns * ns ns ns ns ** **** ns ns *** ns *** ns **** ns ns vs 42 vs 44 vs 46 vs 47 vs vs 10 vs 14 vs 15 vs 17 vs 19 vs 20 vs 23 vs 24 vs 25 vs 26 vs 27 vs 28 vs 33 vs 34 vs 35 vs 41 vs 42 vs 44 vs 46 vs 47 vs 10 vs 14 vs 15 vs 17 vs 19 vs 20 vs 23 vs 24 vs 25 vs 26 vs 27 vs 28 vs 33 vs 34 vs 35 vs 41 vs 42 vs 44 vs 46 vs 47 10 vs 14 10 vs 15 10 vs 17 10 vs 19 10 vs 20 10 vs 23 -9,200 -12,46 -7,491 -24,74 18,34 4,896 16,22 6,605 9,710 10,55 3,859 29,08 10,08 18,07 2,057 8,402 2,147 23,01 -5,491 9,057 11,99 6,089 2,829 7,798 -9,452 -13,45 -2,123 -11,74 -8,633 -7,796 -14,48 10,74 -8,259 -0,2767 -16,29 -9,942 -16,20 4,671 -23,83 -9,287 -6,357 -12,25 -15,51 -10,55 -27,80 11,33 1,709 4,814 5,652 -1,037 24,18 165 -18,36 to -0,03798 -21,62 to -3,298 -16,65 to 1,671 -33,90 to -15,58 9,181 to 27,51 -4,266 to 14,06 7,059 to 25,38 -2,557 to 15,77 0,5480 to 18,87 1,385 to 19,71 -5,303 to 13,02 19,92 to 38,24 0,9222 to 19,25 8,905 to 27,23 -7,105 to 11,22 -0,7603 to 17,56 -7,015 to 11,31 13,85 to 32,18 -14,65 to 3,671 -0,1053 to 18,22 2,825 to 21,15 -3,073 to 15,25 -6,333 to 11,99 -1,364 to 16,96 -18,61 to -0,2897 -22,61 to -4,285 -11,28 to 7,040 -20,90 to -2,576 -17,80 to 0,5287 -16,96 to 1,366 -23,65 to -5,322 1,575 to 19,90 -17,42 to 0,9028 -9,439 to 8,885 -25,45 to -7,125 -19,10 to -0,7797 -25,36 to -7,035 -4,491 to 13,83 -33,00 to -14,67 -18,45 to -0,1247 -15,52 to 2,805 -21,42 to -3,092 -24,68 to -6,352 -19,71 to -1,383 -36,96 to -18,63 2,163 to 20,49 -7,453 to 10,87 -4,348 to 13,98 -3,510 to 14,81 -10,20 to 8,125 15,02 to 33,35 Yes Yes No Yes Yes No Yes No Yes Yes No Yes Yes Yes No No No Yes No No Yes No No No Yes Yes No Yes No No Yes Yes No No Yes Yes Yes No Yes Yes No Yes Yes Yes Yes Yes No No No No Yes * *** ns **** **** ns **** ns * ** ns **** * **** ns ns ns **** ns ns ** ns ns ns * *** ns ** ns ns **** ** ns ns **** * **** ns **** * ns *** **** ** **** ** ns ns ns ns **** 10 vs 24 10 vs 25 10 vs 26 10 vs 27 10 vs 28 10 vs 33 10 vs 34 10 vs 35 10 vs 41 10 vs 42 10 vs 44 10 vs 46 10 vs 47 14 vs 15 14 vs 17 14 vs 19 14 vs 20 14 vs 23 14 vs 24 14 vs 25 14 vs 26 14 vs 27 14 vs 28 14 vs 33 14 vs 34 14 vs 35 14 vs 41 14 vs 42 14 vs 44 14 vs 46 14 vs 47 15 vs 17 15 vs 19 15 vs 20 15 vs 23 15 vs 24 15 vs 25 15 vs 26 15 vs 27 15 vs 28 15 vs 33 15 vs 34 15 vs 35 15 vs 41 15 vs 42 15 vs 44 15 vs 46 15 vs 47 17 vs 19 17 vs 20 17 vs 23 5,188 13,17 -2,839 3,506 -2,749 18,12 -10,39 4,161 7,091 1,193 -2,067 2,903 -14,35 -9,616 -6,511 -5,673 -12,36 12,86 -6,137 1,846 -14,16 -7,819 -14,07 6,793 -21,71 -7,164 -4,234 -10,13 -13,39 -8,422 -25,67 3,105 3,943 -2,746 22,48 3,479 11,46 -4,548 1,797 -4,458 16,41 -12,10 2,452 5,382 -0,5158 -3,776 1,193 -16,06 0,8375 -5,851 19,37 166 -3,974 to 14,35 4,009 to 22,33 -12,00 to 6,323 -5,656 to 12,67 -11,91 to 6,413 8,956 to 27,28 -19,55 to -1,225 -5,001 to 13,32 -2,071 to 16,25 -7,969 to 10,36 -11,23 to 7,095 -6,260 to 12,06 -23,51 to -5,185 -18,78 to -0,4538 -15,67 to 2,651 -14,84 to 3,489 -21,52 to -3,200 3,697 to 22,02 -15,30 to 3,025 -7,316 to 11,01 -23,33 to -5,002 -16,98 to 1,343 -23,24 to -4,912 -2,369 to 15,96 -30,87 to -12,55 -16,33 to 1,998 -13,40 to 4,928 -19,29 to -0,9697 -22,55 to -4,230 -17,58 to 0,7395 -34,83 to -16,51 -6,057 to 12,27 -5,220 to 13,10 -11,91 to 6,416 13,31 to 31,64 -5,683 to 12,64 2,300 to 20,62 -13,71 to 4,614 -7,365 to 10,96 -13,62 to 4,704 7,247 to 25,57 -21,26 to -2,934 -6,710 to 11,61 -3,780 to 14,54 -9,678 to 8,646 -12,94 to 5,386 -7,969 to 10,36 -25,22 to -6,895 -8,325 to 10,00 -15,01 to 3,311 10,21 to 28,53 No Yes No No No Yes Yes No No No No No Yes Yes No No Yes Yes No No Yes No Yes No Yes No No Yes Yes No Yes No No No Yes No Yes No No No Yes Yes No No No No No Yes No No Yes ns *** ns ns ns **** * ns ns ns ns ns **** * ns ns *** *** ns ns **** ns **** ns **** ns ns * *** ns **** ns ns ns **** ns ** ns ns ns **** ** ns ns ns ns ns **** ns ns **** 17 vs 24 17 vs 25 17 vs 26 17 vs 27 17 vs 28 17 vs 33 17 vs 34 17 vs 35 17 vs 41 17 vs 42 17 vs 44 17 vs 46 17 vs 47 19 vs 20 19 vs 23 19 vs 24 19 vs 25 19 vs 26 19 vs 27 19 vs 28 19 vs 33 19 vs 34 19 vs 35 19 vs 41 19 vs 42 19 vs 44 19 vs 46 19 vs 47 20 vs 23 20 vs 24 20 vs 25 20 vs 26 20 vs 27 20 vs 28 20 vs 33 20 vs 34 20 vs 35 20 vs 41 20 vs 42 20 vs 44 20 vs 46 20 vs 47 23 vs 24 23 vs 25 23 vs 26 23 vs 27 23 vs 28 23 vs 33 23 vs 34 23 vs 35 23 vs 41 0,3742 8,357 -7,653 -1,308 -7,563 13,30 -15,20 -0,6533 2,277 -3,621 -6,881 -1,912 -19,16 -6,688 18,53 -0,4633 7,519 -8,491 -2,146 -8,401 12,47 -16,04 -1,491 1,439 -4,458 -7,718 -2,749 -20,00 25,22 6,225 14,21 -1,803 4,543 -1,713 19,16 -9,350 5,197 8,127 2,230 -1,030 3,939 -13,31 -19,00 -11,01 -27,02 -20,68 -26,93 -6,066 -34,57 -20,02 -17,09 167 -8,788 to 9,536 -0,8053 to 17,52 -16,82 to 1,509 -10,47 to 7,854 -16,73 to 1,599 4,142 to 22,47 -24,36 to -6,039 -9,815 to 8,509 -6,885 to 11,44 -12,78 to 5,541 -16,04 to 2,281 -11,07 to 7,250 -28,32 to -10,00 -15,85 to 2,474 9,370 to 27,69 -9,625 to 8,699 -1,643 to 16,68 -17,65 to 0,6712 -11,31 to 7,016 -17,56 to 0,7612 3,305 to 21,63 -25,20 to -6,876 -10,65 to 7,671 -7,723 to 10,60 -13,62 to 4,704 -16,88 to 1,444 -11,91 to 6,413 -29,16 to -10,84 16,06 to 34,38 -2,937 to 15,39 5,045 to 23,37 -10,96 to 7,360 -4,620 to 13,70 -10,87 to 7,450 9,993 to 28,32 -18,51 to -0,1880 -3,965 to 14,36 -1,035 to 17,29 -6,932 to 11,39 -10,19 to 8,132 -5,223 to 13,10 -22,47 to -4,149 -28,16 to -9,834 -20,18 to -1,851 -36,19 to -17,86 -29,84 to -11,52 -36,10 to -17,77 -15,23 to 3,096 -43,73 to -25,41 -29,19 to -10,86 -26,26 to -7,931 No No No No No Yes Yes No No No No No Yes No Yes No No No No No Yes Yes No No No No No Yes Yes No Yes No No No Yes Yes No No No No No Yes Yes Yes Yes Yes Yes No Yes Yes Yes ns ns ns ns ns *** **** ns ns ns ns ns **** ns **** ns ns ns ns ns *** **** ns ns ns ns ns **** **** ns **** ns ns ns **** * ns ns ns ns ns *** **** ** **** **** **** ns **** **** **** 23 vs 42 23 vs 44 23 vs 46 23 vs 47 24 vs 25 24 vs 26 24 vs 27 24 vs 28 24 vs 33 24 vs 34 24 vs 35 24 vs 41 24 vs 42 24 vs 44 24 vs 46 24 vs 47 25 vs 26 25 vs 27 25 vs 28 25 vs 33 25 vs 34 25 vs 35 25 vs 41 25 vs 42 25 vs 44 25 vs 46 25 vs 47 26 vs 27 26 vs 28 26 vs 33 26 vs 34 26 vs 35 26 vs 41 26 vs 42 26 vs 44 26 vs 46 26 vs 47 27 vs 28 27 vs 33 27 vs 34 27 vs 35 27 vs 41 27 vs 42 27 vs 44 27 vs 46 27 vs 47 28 vs 33 28 vs 34 28 vs 35 28 vs 41 28 vs 42 -22,99 -26,25 -21,28 -38,53 7,982 -8,028 -1,683 -7,938 12,93 -15,58 -1,028 1,902 -3,995 -7,255 -2,286 -19,54 -16,01 -9,665 -15,92 4,948 -23,56 -9,010 -6,080 -11,98 -15,24 -10,27 -27,52 6,345 0,09000 20,96 -7,548 7,000 9,930 4,033 0,7725 5,742 -11,51 -6,255 14,61 -13,89 0,6550 3,585 -2,313 -5,573 -0,6033 -17,85 20,87 -7,637 6,910 9,840 3,943 168 -32,15 to -13,83 -35,41 to -17,09 -30,44 to -12,12 -47,69 to -29,37 -1,180 to 17,14 -17,19 to 1,135 -10,84 to 7,480 -17,10 to 1,225 3,768 to 22,09 -24,74 to -6,413 -10,19 to 8,135 -7,260 to 11,06 -13,16 to 5,167 -16,42 to 1,907 -11,45 to 6,876 -28,70 to -10,37 -25,17 to -6,848 -18,83 to -0,5030 -25,08 to -6,758 -4,215 to 14,11 -32,72 to -14,40 -18,17 to 0,1520 -15,24 to 3,082 -21,14 to -2,815 -24,40 to -6,075 -19,43 to -1,106 -36,68 to -18,36 -2,817 to 15,51 -9,072 to 9,252 11,80 to 30,12 -16,71 to 1,615 -2,162 to 16,16 0,7680 to 19,09 -5,130 to 13,19 -8,390 to 9,935 -3,420 to 14,90 -20,67 to -2,346 -15,42 to 2,907 5,450 to 23,77 -23,05 to -4,730 -8,507 to 9,817 -5,577 to 12,75 -11,47 to 6,850 -14,73 to 3,590 -9,765 to 8,559 -27,02 to -8,691 11,71 to 30,03 -16,80 to 1,525 -2,252 to 16,07 0,6780 to 19,00 -5,220 to 13,10 Yes Yes Yes Yes No No No No Yes Yes No No No No No Yes Yes Yes Yes No Yes No No Yes Yes Yes Yes No No Yes No No Yes No No No Yes No Yes Yes No No No No No Yes Yes No No Yes No **** **** **** **** ns ns ns ns *** **** ns ns ns ns ns **** **** * **** ns **** ns ns ** **** * **** ns ns **** ns ns * ns ns ns ** ns **** **** ns ns ns ns ns **** **** ns ns * ns 28 vs 44 28 vs 46 28 vs 47 33 vs 34 33 vs 35 33 vs 41 33 vs 42 33 vs 44 33 vs 46 33 vs 47 34 vs 35 34 vs 41 34 vs 42 34 vs 44 34 vs 46 34 vs 47 35 vs 41 35 vs 42 35 vs 44 35 vs 46 35 vs 47 41 vs 42 41 vs 44 41 vs 46 41 vs 47 42 vs 44 42 vs 46 42 vs 47 44 vs 46 44 vs 47 46 vs 47 0,6825 -8,480 to 9,845 5,652 -3,510 to 14,81 -11,60 -20,76 to -2,436 -28,51 -37,67 to -19,34 -13,96 -23,12 to -4,795 -11,03 -20,19 to -1,865 -16,93 -26,09 to -7,763 -20,19 -29,35 to -11,02 -15,22 -24,38 to -6,054 -32,47 -41,63 to -23,30 14,55 5,385 to 23,71 17,48 8,315 to 26,64 11,58 2,418 to 20,74 8,320 -0,8420 to 17,48 13,29 4,127 to 22,45 -3,961 -13,12 to 5,201 2,930 -6,232 to 12,09 -2,967 -12,13 to 6,195 -6,228 -15,39 to 2,935 -1,258 -10,42 to 7,904 -18,51 -27,67 to -9,346 -5,897 -15,06 to 3,265 -9,157 -18,32 to 0,004516 -4,188 -13,35 to 4,974 -21,44 -30,60 to -12,28 -3,260 -12,42 to 5,902 1,709 -7,453 to 10,87 -15,54 -24,70 to -6,379 4,969 -4,193 to 14,13 -12,28 -21,44 to -3,119 -17,25 -26,41 to -8,088 169 No No Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes Yes No Yes No No No No No Yes No No No Yes No No Yes No Yes Yes ns ns ** **** **** ** **** **** **** **** **** **** ** ns *** ns ns ns ns ns **** ns ns ns **** ns ns **** ns *** **** ... HÌNH NGHIÊN CỨU TẠO GIỐNG LÚA CHUYỂN GEN CHỊU HẠN TRÊN THẾ GIỚI VÀ Ở VIỆT NAM 41 1.4.1 Nghiên cứu tạo giống lúa chuyển gen chịu hạn giới 44 1.4.2 Tình hình nghiên cứu tạo giống lúa chuyển gen. .. khiển thay vài trăm gen chức vào để tăng cƣờng tính chống chịu trồng Chính lí mà nghiên cứu phân lập, đặc tính hố gen điều khiển liên quan đến tính chịu hạn trở thành định hƣớng nghiên cứu đầy tiềm... cứu đầy tiềm việc chuyển gen/ chọn tạo giống chịu hạn Ở Việt Nam, khoảng 10 năm trở lại đây, nghiên cứu phân lập gen chịu hạn tạo giống trồng chống chịu hạn công nghệ chuyển gen thực vật bắt đầu