Nghiên cứu phân lập và xây dựng phương pháp đánh giá các flavonoid trong cao lá bạch quả

ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA PHAN HUY VŨ NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CÁC FLAVONOID TRONG CAO LÁ BẠCH QUẢ Chun ngành : Cơng nghệ hóa học Mã số:605275 LUẬN VĂN THẠC SĨ TP HỒ CHÍ MINH, tháng 07 năm 2014 CƠNG TRÌNH ĐƯỢC HỒN THÀNH TẠI TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA –ĐHQG -HCM Cán hướng dẫn khoa học : TS Huỳnh Khánh Duy TS Tống Thanh Danh Cán chấm nhận xét : Cán chấm nhận xét : Luận văn thạc sĩ bảo vệ Trường Đại học Bách Khoa, ĐHQG Tp HCM ngày tháng năm Thành phần Hội đồng đánh giá luận văn thạc sĩ gồm: (Ghi rõ họ, tên, học hàm, học vị Hội đồng chấm bảo vệ luận văn thạc sĩ) Xác nhận Chủ tịch Hội đồng đánh giá LV Trưởng Khoa quản lý chuyên ngành sau luận văn sửa chữa (nếu có) CHỦ TỊCH HỘI ĐỒNG TRƯỞNG KHOA………… ĐẠI HỌC QUỐC GIA TP.HCM TRƯỜNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA CỘNG HÒA XÃ HỘI CHỦ NGHĨA VIỆT NAM Độc lập - Tự - Hạnh phúc NHIỆM VỤ LUẬN VĂN THẠC SĨ Họ tên học viên: Phan Huy Vũ MSHV:11050160 Ngày, tháng, năm sinh: 22/10/1986 Nơi sinh: Tp Hồ Chí Minh Chun ngành: Cơng nghệ hóa học Mã số : 605275 I TÊN ĐỀ TÀI: « NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CÁC FLAVONOID TRONG CAO LÁ BẠCH QUẢ » II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Thiết lập sắc ký đồ vân tay dược liệu bạch - Cô lập chất đánh giá cao ethanol - Xác định cấuu trúc chất đánh giá - Ứng dụng chất đánh dấu để đánh dấu xác định hàm lượng chất chế phẩm III NGÀY GIAO NHIỆM VỤ : 20/01/2014 IV NGÀY HOÀN THÀNH NHIỆM VỤ: 20/06/2014 V CÁN BỘ HƯỚNG DẪN : TS Huỳnh Khánh Duy TS Tống Thanh Danh Tp HCM, ngày tháng năm 20 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN (Họ tên chữ ký) CHỦ NHIỆM BỘ MÔN ĐÀO TẠO (Họ tên chữ ký) TRƯỞNG KHOA….……… (Họ tên chữ ký) Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch LỜI CẢM ƠN  Trong q trình thực luận văn này, tơi nhận giúp đỡ vô quý báu quý thầy cô trường Đại học Bách khoa Tp.HCM, anh chị, bạn Vật lý Đo lường – Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp HCM, gia đình bạn bè động viên, giúp đỡ suốt trình thực luận văn Tơi xin tỏ lịng biết ơn chân thành đến: - TS Huỳnh Khánh Duy, TS Tống Thanh Danh tận tình hướng dẫn giúp đỡ tơi nhiều q trình nghiên cứu thực đề tài - Quý thầy cô trường Đại học Bách khoa Tp.HCM tận tình giảng dạy giúp đỡ tơi q trình học tập thực đề tài - Phòng Đào tạo Sau đại học – Đại học Khoa Học Bách khoa Tp.HCM tạo điều kiện tốt cho tơi suốt khóa học thời gian thực đề tài - Các anh chị, bạn khoa Vật lý Đo lường – Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp.HCM giúp đỡ nhiều trình thực đề tài - Ban lãnh đạo, anh chị khoa Đông dược - Dược liệu, , khoa Thiết lập Chất chuẩn - Viện Kiểm nghiệm thuốc Tp.HCM cộng tác tạo điều kiện cho thực luận văn - Gia đình bạn bè động viên tạo điều kiện thuận lợi cho tơi suốt q trình học tập nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn -i- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch TÓM TẮT Đề tài “ Nghiên cứu xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch quả” phân lập hai flavonoid cao bạch isorhamnetin kaempferol Từ đó, xây dựng quy trình đánh giá chất lượng cao bạch góp phần phục vụ cho cơng tác kiểm tra chất lượng chế phẩm có thành phần cao bạch thị trường SUMMARY Thesis “Study and establishment validation method of flavonoids in Ginkgo biloba extract” isolated two main flavonoids in ginkgo biloba extract which are isorhamnetin and kaempferol Therefrom, quality validate procedure of ginkgo biloba extract was established for contribution of quality control of ginkgo biloba extract-containing products in the market -ii- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng tơi Các số liệu, kết nêu luận văn trung thực chưa công bố cơng trình khác -iii- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i TÓM TẮT ii LỜI CAM ĐOAN iii MỤC LỤC iv DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT vi DANH MỤC CÁC BẢNG viii DANH MỤC CÁC HÌNH x ĐẶT VẤN ĐỀ xii CHƯƠNG 1: 1.1 TỔNG QUAN I Giới thiệu chung cao bạch I 1.1.1 Tên gọi I 1.1.2 Mô tả thực vật I 1.2 Thành phần hóa học III 1.3 Dược tính cơng dụng VII 1.3.1 Dược tính VII 1.3.2 Công dụng VIII 1.4 Những nghiên cứu khoa học gần đây: IX 1.5 Một số chế phẩm sử dụng bạch làm nguyên liệu thành phần XXI CHƯƠNG 2: 2.1 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU XXII Đối tượng nghiên cứu XXII 2.1.1 Nguyên liệu XXII 2.1.2 Dung mơi, hóa chất XXIII 2.1.3 Thiết bị - Dụng cụ XXIII -iv- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch 2.2 Phương pháp nghiên cứu .XXIV 2.2.1 Chiết xuất phân lập flavonoid bạch XXIV 2.2.2 Định tính, định lượng flavonoid cao bạch CP1 XXVIII CHƯƠNG 3: 3.1 KẾT QUẢ - NHẬN XÉT XXXIII Chiết xuất phân lập flavonoid bạch XXXIII 3.1.1 Định danh dược liệu bạch XXXIII 3.1.2 Chiết xuất cao flavonoid toàn phần từ bạch XXXIV 3.1.3 Định tính cao FL1 sắc ký lớp mỏng XXXV 3.1.4 Thiết lập sắc ký đồ vân tay cao FL1 XXXVIII 3.1.5 Chiết xuất flavonoid từ cao FL1 LV 3.1.6 Xác định cấu trúc chất phân lập LXIII 3.2 Thẩm định quy trình định lượng quercetin, kaempferol isorhamnetin phương pháp HPLC LXXII 3.2.1 Khảo sát tính tuyến tính LXXIII 3.2.2 Giới han phát (LOD) giới hạn định lượng (LOQ) LXXVI 3.2.2 Khảo sát tính tương thích hệ thống .LXXVIII 3.2.3 Khảo sát tính chọn lọc LXXXI 3.2.4 Khảo sát độ lặp lại LXXXII 3.2.5 Khảo sát độ LXXXIV 3.3 Ứng dụng quy trình xây dựng để định tính định lượng quercetin, kaempferol isorhamnetin chế phẩm LXXXVII CHƯƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ XC TÀI LIỆU THAM KHẢO XCII PHỤ LỤC XCV -v- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch DANH MỤC CÁC CHỮ VIẾT TẮT ACN Acetonitrile d Doublet (mũi đôi) dd Doublet of doublet (mũi đôi đôi) DĐVN Dược điển Việt Nam DSC Differential scanning calorimetry (Phân tích nhiệt vi sai) EtOAc Ethyl acetate HPLC High perfomance liquid chromatography (Sắc ký lỏng hiệu cao) IR Infrared spectroscopy J Hằng số ghép kl Khối lượng LOD Limit of detection (Giới hạn phát hiện) LOQ Limit of quantitation (Giới hạn định lượng) M Khối lượng phân tử MeOH Methanol MS Mass spectrometry (Khối phổ) NMR Nuclear magnetic resonance (Cộng hưởng từ hạt nhân) RSD Độ lệch chuẩn S Singlet (mũi đơn) S/N Signal/Noise sp Sản phẩm -vi- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch sx Sản xuất TLC Thin layer chromatography (sắc ký mỏng) t Triplet (mũi ba) tt Thể tích UV Ultraviolet- visible -vii- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch  Tính tương thích hệ thống Mục đích: để đảm bảo hệ thống sắc ký có hiệu phù hợp xác định độ phân giải độ lặp lại hệ thống sắc ký phép phân tích thực Tính tương thích hệ thống thực cách chạy lặp lại lần cho mẫu chuẩn theo điều kiện xác định Ghi nhận thông số sau: - Rt: thời gian lưu (phút) - S: diện tích đỉnh - N: số đĩa lý thuyết biểu kiến cột sắc ký hay hiệu cột - As: hệ số đối xứng hay hệ số kéo đuôi - Rs: độ phân giải - Rt, S, N: RSD ≤ - 0,8 ≤ As ≤ 1,55 - Rs ≥ 1,5  Khảo sát tính chọn lọc Xác định tính đặc hiệu theo qui trình sau: - Dung dịch mẫu trắng: dung dịch methanol : HCl đậm đặc (85 : 15) - Dung dịch chuẩn hỗn hợp Triển khai dung dịch hệ HPLC với điều kiện khảo sát, quan sát so sánh thời gian lưu , phổ UV peak quercetin, kaempferol isorhamnetin mẫu Yêu cầu: - Thời gian lưu thành phần cần định lượng mẫu thử phải tương đương thời gian lưu mẫu đối chiếu, đồng thời mẫu trắng khơng có đỉnh trùng với đỉnh thành phần định lượng XXX Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch - Phổ UV peak quercetin, kaempferol isorhamnetin mẫu chuẩn mẫu thử thêm chuẩn phải tương đồng - Khi thêm lượng chất đối chiếu vào mẫu thử, diện tích peak hợp chất cần định lượng phải tăng lên so với trước thêm chất đối chiếu peak cần định lượng khơng có thành phần khác sử dụng chức kiểm tra độ tinh khiết peak  Khảo sát độ lặp Khảo sát mức độ phù hợp kết kiểm nghiệm phương pháp áp dụng lặp lại nhiều lần mẫu Độ lặp phương pháp thường thể độ lệch chuẩn (standard deviation - SD) hay độ lệch chuẩn tương đối (Relative standard deviation - RSD) lần đo mẫu Để xác định độ lặp lại, tiến hành định lượng lần điều kiện tính độ lệch chuẩn tương đối RSD%  Khảo sát độ hay độ phục hồi Xác định hàm lượng quercetin, kaempferol isorhamnetin mẫu trắng phương pháp khảo sát sau thêm chuẩn vào mẫu định lượng Lượng chuẩn thêm vào 40%, 100%, 120% hàm lượng chất so với nồng độ định lượng, thực lần cho nồng độ.Các mẫu xử lý phân tích theo điều kiện sắc ký chọn Từ xác định tỷ lệ phục hồi Y Tỷ lệ phục hồi tính theo cơng thức: [Xr] [Y] = x 100 [Xa] Trong đó: Xr : lượng tìm thấy Xa: lượng thêm vào c Định lượng quercetin, kaempferol, isorhamnetin chế phẩm XXXI Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch Hàm lượng quercetin, kaempferol isorhamnetin tính theo cơng thức: St X= k x Cc x p x 100 Sc m (1-h) Trong đó: X: hàm lượng chất định lượng có dược liệu (%) Sc: diện tích đỉnh thu mẫu chuẩn (µV x s) St: diện tích thu mẫu thử (µV x s) Cc: nồng độ mẫu chuẩn (mg/ml) k: độ pha loãng mẫu đo (ml) m: khối lượng mẫu thử (mg) h: độ ẩm mẫu thử p: độ tinh khiết chất chuẩn (%) XXXII Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch CHƯƠNG 3: KẾT QUẢ - NHẬN XÉT 3.1 Chiết xuất phân lập flavonoid bạch 3.1.1 Định danh dược liệu bạch Thực vi phẫu bạch Mục 2.2.1.1 Kết trình bày Hình 3.1 Hình 3.1 Vi phẫu bạch Kết quả: quan sát vi phẫu cuống bạch quả, nhận thấy lớp biểu bì (1, 9) tế bào hình chữ nhật xếp theo chiều dài cuống phía ngồi có tầng cutin Mảnh mơ dày (2) nằm sát lớp biểu bì có nhiệm vụ nâng đỡ cho cuống Mơ giậu (3) nằm phía XXXIII Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch lớp biểu bì Mơ mềm (6) gồm tế bào có màng mỏng, xen kẽ có chứa khoang nội tiết (4) tinh thể canxi oxalat (5) Các bó libe (7) nằm gân lá, xung quanh có nhiều bó gỗ bao bọc (8) Nhận xét: so sánh kết vi phẫu với tài liệu cơng bố trước [24], cho thấy dược liệu khảo sát bạch 3.1.2 Chiết xuất cao flavonoid toàn phần từ bạch Bột bạch trích kiệt phương pháp chiết Soxlet thu cao FL, sau cao tiếp tục chiết loại tạp theo quy trình Hình 3.2, thu cao FL1 Hình 3.2 Quy trình chiết cao flavonoid toàn phần từ bạch Từ kg bột bạch khô sau chiết với ethanol thu 52 g cao FL (hiệu suất 2,6 %), tiến hành loại tạp theo quy trình thu 7,8 g FL1 (hiệu suất chiết 15%) Cao FL1 thu chất đặc, màu vàng nâu, mùi thơm đặc trưng 24 http://www.usp.org/sites/default/files/usp_pdf/EN/dietarySupp/dsc2012sample_image.pdf XXXIV Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch 3.1.3 Định tính cao FL1 sắc ký lớp mỏng Khảo sát hệ dung môi sắc ký Thực theo Mục 2.2.1.3 Kết trình bày Bảng 3.1 XXXV Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch Bảng 3.1 Kết khảo sát hệ dung môi phân tích cao FL1 STT Hệ dung mơi Khả tách n-hexane – ethyl acetate (99: 1) - acetone – ethyl acetate – nước (8:2:0,05) + toluene – chloroform (8:2) - toluene – ethyl acetate + chloroform – ethyl acetate (8:2) ++ benzene – ethyl acetate (9:3) + chloroform – methanol – acetic acid (6:1:1) +++ ethyl acetate – nước –formic acid –acetic acid (23:7:3:3) ++ butyl acetate – formic acid –acetic acid (29:0,5:0,5) + 10 chloroform – ethyl acetate – formic acid (90:9:1) +++  Ghi chú: - : không xuất vết phát quang bước sóng UV 365 nm +: xuất vết phát quang bước sóng UV 365 nm ++: xuất vết phát quang bước sóng UV 365 nm +++: xuất vết phát quang bước sóng UV 365 nm Kết quả: Qua khảo sát tìm hệ dung mơi phân tích cao FL1 sắc ký lớp mỏng gồm: - Chloroform – ethyl acetate – formic acid (90:9:1) - Chloroform – methanol – acetic acid (6:1:1) Tuy nhiên hệ chloroform – ethyl acetate – formic acid (90:9:1) có khả tách tốt, vết tách gọn Rf thích hợp nên chọn để triển khai sắc ký cột cổ điển XXXVI Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch Phân tích cao chiết FL, FL1: Tiến hành: cao FL, FL1 chiết xuất Mục 2.2.1.2 kiểm tra sắc ký lớp mỏng với điều kiện khảo sát Kết trình bày Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.3 Sắc ký mỏng dịch chiết cao FL Phát hiện: UV 365 nm (A), TT FeCl3 10%/MeOH (B) XXXVII Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch Hình 3.4 Sắc ký mỏng dịch chiết cao FL1 Phát hiện: UV 365 nm (A), TT FeCl3 10%/MeOH (B) Nhận xét: Quan sát đèn UV bước sóng 365nm, nhận thấy sắc ký đồ cao FL khơng có vết phát quang, sắc ký đồ cao thuỷ phân FL1 thấy xuất vết phát quang đồng thời cho phản ứng dương tính với thuốc thử FeCl3 Vậy suy luận cao FL1 có chứa flavonoid Ngồi ra, kết cịn cho thấy flavonoid cao bạch không tồn dạng tự do, mà tồn chủ yếu dạng glycoside, để phân lập flavonoid từ dịch chiết bạch việc thủy phân cần thiết 3.1.4 Thiết lập sắc ký đồ vân tay cao FL1 3.1.4.1 Khảo sát thành phần pha tĩnh sắc ký Dịch chiết FL1 tiến hành triển khai hệ sắc ký lỏng cao áp với điều kiện sắc ký sau: - Tốc độ dòng: 1,0 mL/phút XXXVIII Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch - Nhiệt độ buồng cột: 40 ºC - Pha động: ACN : H3PO4 1,0% - Đầu dò: UV-370 nm - Cột: C18 Gemini (150 mm x 4,6 mm x 5µm) C8 Luna (150 mm x 4,6 mm x 5µm) Ph-3 Apollo (150 mm x 4,6 mm x 5µm) Kết trình bày Bảng 3.2 XXXIX Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch Bảng 3.2 Kết khảo sát cao FL1 theo thành phần pha tĩnh Thời gian Tên Hệ số Độ tinh khiết Số đĩa kéo đuôi peak lý thuyết Độ phân giải lưu C18 Gemini, ACN : H3PO4 1,0 % (40:60) A 25,774 0,000 1,408 1,00000 3772,025 B 42,232 8,116 1,287 1,00000 5051,106 C 49,808 2,713 1,246 1,00000 3858,020 D 55,705 1,726 1,273 0,99999 3774,989 Ph-3 Apollo, ACN : H3PO4 1,0 % (15:85) A 14,171 0,000 1,088 1,00000 4468,978 B 19,434 5,085 1,253 1,00000 4044,771 C 22,796 2,560 1,108 1,00000 4215,230 D 27,788 3,268 1,164 0,99999 4535,889 C8 Luna, ACN : H3PO4 1,0 % (20:80) A 19,482 0,000 1,471 0,54065 3445,573 B 33,104 7,968 1,042 1,00000 4007,87 C 39,655 2,735 1,175 1,00000 3454,39 D 44,840 1,912 1,195 0,99996 4330,69 XL Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch Hình 3.5 Sắc ký đồ cao FL1 triển khai pha tĩnh khác (i) cột C18 (ii) cột Ph-3 (iii) cột C8 Nhận xét: Cột C8 có hiệu tách kém, hệ số phân giải peak C D nhỏ (hệ số phân giải 1,9) Cột C18 Ph-3 đạt thông số hệ số phân giải, hệ số kéo đuôi, độ tinh khiết peak số đĩa lý thuyết, nên dùng đề khảo sát cao chiết bạch Tuy nhiên tổng thời gian phân tích cột C18 (55 phút) dài cột Ph-3 (27 phút), khả tách peak Do cột Ph-3 chọn để tiến hành khảo sát dịch chiết FL1 3.1.4.2 Khảo sát thành phần pha động Điều kiện tiến hành sắc ký : XLI Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch - Cột Ph-3 Apollo (150 mm x 4,6 mm x 5µm) - Tốc độ dịng: 1,0 mL/phút - Nhiệt độ buồng cột: 40 ºC - Đầu dò: UV-370 nm - Pha động: ACN : H3PO4 1,0% ACN : HCOOH 1,0% ACN : H2O MeOH : H3PO4 1,0% Kết trình bày Bảng 3.3 XLII Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch Bảng 3.3 Kết khảo sát cao FL1 theo thành phần pha động Thời gian Tên Hệ số Độ tinh khiết Số đĩa kéo đuôi peak lý thuyết Độ phân giải lưu ACN : H3PO4 1,0 % (15:85) A 14,171 0,000 1,088 1,00000 4468,978 B 19,434 5,085 1,253 1,00000 4044,771 C 22,796 2,560 1,108 1,00000 4215,230 D 27,788 3,268 1,164 0,99999 4535,889 ACN : HCOOH 1,0 % (15:85) A 11,609 0,000 1,013 0,74771 2480,723 B 15,901 4,019 1,195 0,70776 2791,144 C 18,299 1,018 1,018 0,77700 2714,874 D 22,313 2,667 1,122 0,98889 3093,137 ACN : H2O (15:85) A 13,022 0,000 0,988 0,87264 2296,534 B 17,838 3,992 0,950 1,00000 2896,668 C 20,754 1,972 0,995 1,00000 2589,790 D 25,280 2,578 1,071 1,00000 2891,352 MeOH : H3PO4 1,0 % (15:85) A 43,504 0,000 2,862 1,00000 977,566 C 17,838 4,641 2,078 0,99998 838,369 XLIII Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch Hình 3.6 Sắc ký đồ cao FL1 triển khai pha động khác (i) ACN : H3PO4 (ii) ACN : HCOOH (iii) ACN : H2O (iv) MeOH : H3PO4 Nhận xét: Pha động ACN: HCOOH peak A, B C không đạt độ tinh khiết (độ tinh khiết peak nhỏ 0,9) khả tách peak B C (độ phân giải 1,08) Pha động ACN: H2O khả tách peak tốt peak A bị lẫn tạp, độ tinh khiết peak đạt 0,87 Pha động MeOH: H3PO4 khả tách kém, peak C D không tách hệ pha động Pha động ACN: H3PO4 khả tách peak tốt peak có độ tinh khiết cao Do chọn hệ pha động ACN: H3PO4 XLIV ... tập nghiên cứu Xin chân thành cảm ơn -i- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch TÓM TẮT Đề tài “ Nghiên cứu xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch quả? ?? phân. .. TÀI: « NGHIÊN CỨU PHÂN LẬP VÀ XÂY DỰNG PHƯƠNG PHÁP ĐÁNH GIÁ CÁC FLAVONOID TRONG CAO LÁ BẠCH QUẢ » II NHIỆM VỤ VÀ NỘI DUNG: - Thiết lập sắc ký đồ vân tay dược liệu bạch - Cô lập chất đánh giá cao. .. -iv- Nghiên cứu phân lập xây dựng phương pháp đánh giá flavonoid cao bạch 2.2 Phương pháp nghiên cứu .XXIV 2.2.1 Chiết xuất phân lập flavonoid bạch XXIV 2.2.2 Định tính, định lượng flavonoid