Nghiên cứu một số yếu tố ảnh hưởng đến kích thước tiểu phân hỗn dịch phức hợp lipid amphotericin b

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI CHU THỊ HẠNH MÃ SINH VIÊN: 1201166 NGHIÊN CỨU MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN KÍCH THƯỚC TIỂU PHÂN HỖN DỊCH PHỨC HỢP LIPID – AMPHOTERICIN B KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI CHU THỊ HẠNH MÃ SINH VIÊN: 1201166 NGHIÊN CỨU MỘT SỐ YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN KÍCH THƯỚC TIỂU PHÂN HỖN DỊCH PHỨC HỢP LIPID – AMPHOTERICIN B KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Trần Thị Hải Yến ThS Nguyễn Văn Khanh Nơi thực hiện: Bộ môn bào chế Khoa Y Dược – ĐHQGHN HÀ NỘI – 2017 LỜI CÁM ƠN Đầu tiên, em xin gửi lời cám ơn chân thành sâu sắc đến: TS Trần Thị Hải Yến Là người thầy tận tình hướng dẫn em suốt trình nghiên cứu, thực đề tài, dẫn dắt em bước để em hoàn thành khóa luận tốt nghiệp Sau đó, em xin gửi lời cám ơn đến anh Nguyễn Văn Khanh chị Phạm Thị Lê Na, người trực tiếp bảo em thao tác thực nghiệm, hướng dẫn em cách sử dụng thiết bị, sở để em tự thực nghiên cứu Em xin cám ơn toàn thể thầy cô, anh chị kỹ thuật viên môn Bào chế - Đại học Dược Hà Nội tạo điều kiện giúp đỡ em thời gian nghiên cứu thực nghiệm Nhân đây, em xin gửi lời cám ơn thầy cô ban giám hiệu, phòng ban cán nhân viên trường Đại học Dược Hà Nội, người tạo điều kiện giúp em tiếp thu tri thức suốt năm học tập trường Cuối cùng, em xin gửi lời cám ơn sâu sắc tới gia đình, bạn bè quan tâm, động viên, giúp em đến bước cuối công việc nghiên cứu hoàn thành khóa luận Hà Nội, tháng năm 2017 Sinh viên Chu Thị Hạnh MỤC LỤC ĐẶT VẤN ĐỀ Chương TỔNG QUAN 1.1 Amphotericin B 1.2 1.3 1.1.1 Công thức hóa học 1.1.2 Đặc tính lý hóa .2 1.1.3 Tác dụng dược lý Phức hợp phospholipid chứa AMB 1.2.1 Nguyên lý hình thành phức hợp phospholipid AMB .3 1.2.2 Tá dược tạo phức 1.2.3 Một số nghiên cứu phức hợp lipid AMB Sự ổn định KTTP hỗn dịch .7 1.3.1 DLVO lý thuyết ổn định hệ keo 1.3.2 Sự ổn định tĩnh điện – chế ổn định electrostatic .10 1.3.3 Sự ổn định lực đẩy bề mặt hydrat hóa – chế ổn định steric 12 1.3.4 Sự ổn định phân tử polyme tự – chế ổn định depletion .13 1.3.5 Ảnh hưởng nồng độ tiểu phân đến độ ổn định 14 1.3.6 Ảnh hưởng nhiệt độ tới độ ổn định 15 1.3.7 Ảnh hưởng KTTP tới độ ổn định 15 Chương ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu, nguyên vật liệu, thiết bị nghiên cứu 16 2.2 Phương pháp nghiên cứu 17 2.2.1 Phương pháp bào chế phức hợp lipid AMB .17 2.2.2 Phương pháp làm giảm KTTP 19 2.2.3 Phương pháp tinh chế hỗn dịch 19 2.2.4 Phương pháp đánh giá hỗn dịch phức hợp lipid AMB 20 Chương KẾT QUẢ THỰC NGHIỆM 23 3.1 Khảo sát phương pháp làm giảm KTTP 23 3.1.1 Phương pháp đồng hóa áp suất cao .23 3.1.2 Phương pháp đồng hóa áp suất cao kết hợp đùn qua màng 25 3.2 Khảo sát môi trường pha loãng phương pháp đo KTTP 26 3.3 Khảo sát ảnh hưởng MTPT đến độ ổn định hỗn dịch phức hợp lipid – AMB 28 3.3.1 Khảo sát ảnh hưởng MTPT lên số đặc tính hỗn dịch phức hợp lipid – AMB 28 3.3.2 Theo dõi độ ổn định mẫu tạo MTPT khác 31 3.4 Khảo sát ảnh hưởng nồng độ tiểu phân đến độ ổn định hỗn dịch phức hợp lipid – AMB .34 3.5 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện bảo quản đến độ ổn định chế phẩm 37 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮT AMB Amphotericin B DSPG Distearoylphosphatidylcholin HSPC Phosphatidylcholin đậu nành hydrogen hóa (Hydrogenated soy phosphatidylcholine) DMPC Dimyristoylphosphatidylcholin DMPG Dimyristoylphosphatidylglycerol DPPC Dipalmitoylphosphatidylcholin KTTP Kích thước tiểu phân LTT Lọc tiếp tuyến TFR Tổng tốc độ dòng (Total flow rate) DMSO Dimethyl sufoxid TKHH Tinh khiết hóa học PDI Chỉ số đa phân tán (Polydispersity index) DĐVN IV Dược điển Việt Nam IV NSX Nhà sản xuất BP Dược điển Anh USP Dược điển Mĩ DMHC Dung môi hữu MTPT Môi trường phân tán DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Nguyên liệu .16 Bảng 3.1 KTTP phân bố KTTP mẫu sau chu kì đồng khác 23 Bảng 3.2 KTTP phân bố KTTP mẫu sau làm giảm KTTP phương pháp đồng hóa áp suất cao kết hợp đùn qua màng 25 Bảng 3.3 KTTP phân bố KTTP mẫu môi trường đo KTTP khác 27 Bảng 3.4 Một số đặc tính hỗn dịch phức hợp lipid – AMB với MTPT khác 29 Bảng 3.5 KTTP, phân bố KTTP hiệu suất tạo phức hợp mẫu CT1, CT3, CT4 thời điểm khác .32 Bảng 3.6 KTTP phân bố KTTP mẫu trước LTT sau LTT thời điểm khác 35 Bảng 3.7 Một số đặc tính mẫu bảo quản nhiệt độ – 8oC nhiệt độ phòng thí nghiệm thời điểm khác 38 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ Hình 1.1 Cấu trúc giả định phức hợp lipid AMB Hình 1.2 Phân tử HSPC DSPG .4 Hình 1.3 Biểu đồ DLVO điển hình Hình 1.4 Ảnh hưởng biểu đồ DLVO khi: A Thêm chất điện ly đến nồng độ thấp; B.Thêm chất điện ly đến nồng độ trung bình; C.Thêm chất điện ly đến nồng độ cao 10 Hình 1.5 Quá trình chuyển đổi từ dạng “hỗn loạn” sang dạng ổn định hỗn dịch latex theo chế tĩnh điện .11 Hình 2.1 Mô hình thiết bị trộn vi dòng chảy tạo phức hợp lipid AMB 18 Hình 2.2 Quy trình bào chế phức hợp lipid – AMB theo phương pháp vi dòng chảy 18 Hình 2.3 Cơ chế phương pháp LTT [16] 19 Hình 2.4 Hệ thống LTT Sartoflow Slice 200 Benchtop 20 Hình 3.1 Biểu đồ biểu diễn thay đổi KTTP phân bố KTTP mẫu sau chu kì đồng khác .24 Hình 3.2 Biểu đồ KTTP phân bố KTTP mẫu sau đồng hóa áp suất cao kết hợp đùn qua màng .25 Hình 3.3 Biểu đồ KTTP phân bố KTTP mẫu với môi trường đo KTTP khác thời điểm ban đầu sau tháng bảo quản 27 Hình 3.4 Biểu đồ KTTP phân bố KTTP hỗn dịch phức hợp lipid – AMB với MTPT khác .30 Hình 3.5 Biểu đồ hiệu suất tạo phức hợp phức hợp lipid – AMB với MTPT khác 30 Hình 3.6 Biểu đồ biểu diễn thay đổi KTTP phân bố KTTP mẫu CT1, CT3, CT4 theo thời gian 32 Hình 3.7 Mẫu phức hợp lipid AMB với MTPT dung dịch NaCl 0,9% trước sau LTT đến nồng độ mg/ml 35 Hình 3.8 Biểu đồ biểu diễn thay đổi KTTP phân bố KTTP mẫu trước sau LTT theo thời gian 36 Hình 3.9 Biểu đồ biểu diễn thay đổi KTTP phân bố KTTP mẫu sau LTT bảo quản hai điều kiện khác 38 Hình 3.10 Biểu đồ biểu diễn thay đổi hiệu suất tạo phức hợp mẫu sau LTT bảo quản hai điều kiện khác 39 ĐẶT VẤN ĐỀ Amphotericin B (AMB) kháng sinh polyen định trường hợp nhiễm nấm nặng toàn thân hoạt tính kháng nấm mạnh phổ tác dụng rộng Do không tan nước nên muốn bào chế thuốc tiêm cần sử dụng biện pháp đặc biệt, ví dụ tạo hệ mang thuốc liposome hay phức hợp lipid Dạng chế phẩm tiêm ban đầu AMB dạng micell (chế phẩm Fungizone) Nhưng hệ mang dược chất này, AMB không bền hệ tuần hoàn nhanh chóng chuyển từ dạng micell sang dạng lipoprotein gây độc cho tế bào vật chủ, đặc biệt độc tính thận Hai hệ mang dược chất AMB liposome phức hợp lipid có khả làm giảm độc tính thận so với thuốc tiêm quy ước dạng micell So với hệ mang dược chất liposome, phức hợp lipid có hàm lượng AMB cao hơn, quy trình bào chế đơn giản nên giá thành thấp Tuy nhiên, với cấu trúc hóa lý hỗn dịch, hệ mang dược chất có nguy ổn định mặt vật lý Tại Việt Nam có nhiều nghiên cứu hệ mang dược chất khác AMB ThS Dương Thị Thuấn nghiên cứu bào chế phức hợp lipid AMB theo phương pháp tiêm polyol Phương pháp bào chế nhiều hạn chế cách tiến hành phức tạp, quy trình phối hợp hai pha kéo dài gây thời gian, khó nâng cấp quy mô sản xuất Để khắc phục nhược điểm trên, DS Phạm Thị Lê Na nghiên cứu phương pháp bào chế tiêm vi dòng chảy thu kết tích cực Mặc dù vậy, kích thước tiểu phân (KTTP) tạo thành theo hai phương pháp lớn độ ổn định vật lý chưa nghiên cứu Vì vậy, để góp phần ứng dụng phức hợp lipid làm chất mang cho dược chất trị nấm có độc tính cao, thực đề tài: “Nghiên cứu số yếu tố ảnh hưởng đến kích thước tiểu phân hỗn dịch phức hợp lipid – Amphotericin B” nhằm mục tiêu: - Nghiên cứu phương pháp làm giảm KTTP đạt tiêu chuẩn thuốc tiêm hỗn dịch - Nghiên cứu số yếu tố hạn chế tăng KTTP trình bảo quản Hình 3.7 Mẫu phức hợp lipid AMB với MTPT dung dịch NaCl 0,9% trước sau LTT đến nồng độ mg/ml Nhận xét: - Mẫu trước LTT có màu vàng sáng, để sau thời gian quan sát thấy tượng sa lắng rõ ràng, lắc, hỗn dịch phân tán đồng trở lại - Mẫu sau LTT có màu vàng đậm hơn, thể chất đặc hơn, không quan sát thấy sa lắng Về KTTP phân bố KTTP Kết thể bảng 3.6 hình 3.8 Bảng 3.6 KTTP phân bố KTTP mẫu trước LTT sau LTT thời điểm khác Mẫu trước LTT Mẫu sau LTT t=0 t = tháng t = tháng Dv[4,3] (μm) 4,32 5,88 17,6 Dv(90) (μm) 10,1 15,1 34,4 Span 2,288 3,639 1,948 Dv[4,3] (μm) 0,833 0,868 0,901 Dv(90) (μm) 2,15 2,29 2,46 Span 4,013 4,618 4,668 35 Dv(90) (μm) 40 Span 30 20 10 0 t=0 t = tháng t = tháng Dv(90) trước LTT Dv(90) sau LTT Span trước LTT Span sau LTT Hình 3.8 Biểu đồ biểu diễn thay đổi KTTP phân bố KTTP mẫu trước sau LTT theo thời gian Nhận xét: Trong thời gian theo dõi tháng, mẫu trước LTT có KTTP lớn tăng nhanh, giá trị span dao động khoảng – 4, phân bố KTTP tương đối tập trung Trong đó, mẫu sau LTT có KTTP giảm rõ rệt so với mẫu trước LTT, KTTP tăng theo thời gian tăng chậm, phân bố KTTP thay đổi Sau LTT, nồng độ chất điện ly giảm, dẫn tới KTTP giảm Điều tương tự với kết nghiên cứu: nghiên cứu Amro M El Badawy cộng tiểu phân nano bạc nghiên cứu J Sabin cộng liposome phosphatidylcholin lòng đỏ trứng gà trình bày mục 1.3.2 Như vậy, KTTP hỗn dịch phức hợp giảm nguyên nhân sau: - Thứ nhất, tiểu phân phức hợp lipid – AMB tăng tương tác lực ion tăng (tương ứng với việc tăng nồng độ ion), dẫn đến kết tụ, tăng KTTP ngược lại [9] - Thứ hai, nồng độ chất điện ly giảm, số lượng ion hấp thụ màng phức hợp giảm dẫn đến loại bỏ phân tử nước khỏi phức hợp giảm KTTP [24] 36 - Thứ ba, phức hợp lipid – AMB có dạng chuỗi tạo nhiều phức hợp nhỏ hình trụ Do chuyển động liên tục va chạm với thành dây dẫn với màng lọc, chuỗi bị phân cắt phức hợp lipid bị chia nhỏ Để làm sáng tỏ vấn đề cần đến kĩ thuật xác định hình thái cấu trúc phức hợp nghiên cứu sâu Độ ổn định hệ thay đổi giải thích hỗn dịch cô đặc, hệ chuyển thành dạng kết bông, tránh sa lắng hợp tiểu phân Đồng thời KTTP giảm nồng độ tiểu phân tăng làm tăng độ nhớt hỗn dịch, hỗn dịch có cấu trúc cố định hơn, tiểu phân dao động với biên độ nhỏ, đặc tính hỗn dịch phụ thuộc vào thời gian, dẫn đến kết hệ ổn định [7], [27] Kết luận: Mẫu sau LTT có KTTP giảm đáng kể, độ ổn định cao mẫu trước LTT Vì vậy, chọn mẫu sau LTT để tiếp tục thực khảo sát 3.5 Khảo sát ảnh hưởng điều kiện bảo quản đến độ ổn định chế phẩm a Bố trí thí nghiệm Mẫu bào chế với MTPT dung dịch NaCl 0,9%, đồng hóa áp suất cao lần, áp suất đồng 5000 psi đem LTT hệ thống LTT Sartoflow Slice 200 Benchtop (Satorius, Đức) đến đạt nồng độ mg/ml Mẫu sau LTT chia làm phần: phần để điều kiện – 8oC, phần để điều kiện thường phòng thí nghiệm Tiến hành theo dõi yếu tố: cảm quan, KTTP phân bố KTTP, hiệu suất tạo phức hợp thời điểm t = 0, tháng, tháng, tháng b Kết Về cảm quan Sau khoảng thời gian tháng, tháng, tháng, quan sát thấy hỗn dịch đồng nhất, màu vàng sáng, tinh thể kết tủa hai điều kiện bảo quản Về KTTP phân bố KTTP Kết thể bảng 3.7 hình 3.9 37 Bảng 3.7 Một số đặc tính mẫu bảo quản nhiệt độ – 8oC nhiệt độ phòng thí nghiệm thời điểm khác t=0 t = tháng kiện Dv[4,3] (μm) 0,833 0,868 0,901 1,00 nhiệt độ – Dv(90) (μm) 2,15 2,29 2,46 2,99 8oC 4,013 4,168 4,668 5,809 100% 89,7% 86,0% 94,5% Điều Span Hiệu suất tạo phức hợp t = tháng t = tháng Điều kiện Dv[4,3] (μm) 0,833 1,11 1,17 4,52 phòng thí Dv(90) (μm) 2,15 3,44 3,75 12,1 4,013 6,532 7,121 5,432 100% 87,0% 93,5% 89,9% nghiệm Span Hiệu suất tạo phức hợp Dv(90) (μm) 14 Span 12 10 t=0 t = tháng t = tháng t = tháng Dv(90) nhiệt độ lạnh Dv(90) nhiệt độ thường Span nhiệt độ lạnh Span nhiệt độ thường Hình 3.9 Biểu đồ biểu diễn thay đổi KTTP phân bố KTTP mẫu sau LTT bảo quản hai điều kiện khác Nhận xét: Hai mẫu có xu hướng tăng KTTP trình bảo quản Mẫu bảo quản nhiệt độ lạnh (2 – 8oC) tăng KTTP chậm, sau tháng KTTP không thay đổi nhiều 38 (Dv[4,3] = 1,00 μm, Dv(90) = 2,99 μm) Mẫu bảo quản nhiệt độ thường tăng KTTP nhanh, tháng thứ ba KTTP tăng đột biến Ở thời điểm theo dõi, KTTP mẫu bảo quản nhiệt độ thường lớn KTTP mẫu bảo quản nhiệt độ lạnh Tại nhiệt độ thấp, độ nhớt MTPT tăng hạt tiểu phân dao động (năng lượng chuyển động nhiệt giảm) Hơn nữa, nhiệt độ thấp giúp cố định cấu trúc màng phức hợp, ngăn cản kết tụ tiểu phân Kết KTTP tăng lên chậm mẫu bảo quản lạnh Về hiệu suất tạo phức hợp Hiệu suất tạo phức hợp (%) Kết trình bày bảng 3.7 hình 3.10 100 100 100 89,7 87,0 86,0 93,5 94,5 89,9 80 60 40 20 0 Thời gian bảo quản (tháng) Nhiệt độ lạnh Nhiệt độ thường Hình 3.10 Biểu đồ biểu diễn thay đổi hiệu suất tạo phức hợp mẫu sau LTT bảo quản hai điều kiện khác Nhận xét: Hai mẫu có hiệu suất tạo phức hợp giảm so với thời điểm t = 0, dao động xung quanh giá trị 90% Có thể sai số phương pháp thẩm tích nên không phát xu hướng hiệu suất tạo phức hợp tăng hay giảm theo thời gian Nhưng thấy rằng, nhiệt độ không tác động nhiều đến hiệu suất tạo phức hợp 39 Kết luận: Mẫu bảo quản điều kiện khác ổn định hiệu suất tạo phức hợp Mẫu bảo quản nhiệt độ lạnh (2 – 8oC) ổn định KTTP mẫu bảo quản nhiệt độ thường Vì chọn điều kiện để bảo quản mẫu là: nhiệt độ – 8oC, tránh ánh sáng (bảo quản mẫu tủ lạnh), phù hợp với hướng dẫn sử dụng chế phẩm Ampholip [11] 40 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ XUẤT Kết luận: Nghiên cứu đạt kết sau: Đã tìm hai phương pháp làm giảm KTTP đạt tiêu thuốc tiêm truyền Phương pháp thứ nhất: đồng hóa áp suất cao kết hợp đùn qua màng PTFE μm, sản phẩm thu có KTTP 0,829 μm với số phân bố tiểu phân span 1,699 Phương pháp thứ hai: LTT hỗn dịch sau đồng hóa áp suất cao, sản phẩm thu có KTTP 2,15 μm với số phân bố tiểu phân span 4,013 Đã tìm chế phương pháp ổn định hỗn dịch phức hợp lipid - AMB mặt vật lý Hỗn dịch ổn định thời gian ngắn (1 tháng) nhờ tác động zeta, độ nhớt tỷ trọng MTPT Tuy nhiên, để ổn định thời gian dài, hỗn dịch cần cô đặc tinh chế phương pháp LTT, đồng thời bảo quản điều kiện nhiệt độ lạnh – 8oC Đề xuất: - Tiếp tục theo dõi độ ổn định thuốc tiêm hỗn dịch phức hợp lipid AMB mg/ml thời gian dài - Tiếp tục nghiên cứu, tìm hiểu rõ chế ổn định hỗn dịch sau LTT 41 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Bộ môn Hóa dược - Trường Đại học Dược Hà Nội (2007), Hóa dược, NXB Y học, pp 196 - 196 Bộ Y tế (2002), Dược thư Quốc gia Việt Nam, NXB Y học, pp 146 - 148 Phạm Thị Minh Huệ, Võ Xuân Minh (2013), Kỹ thuật nano liposome ứng dụng dược phẩm mỹ phẩm, NXB Y học, pp Nguyễn Thị Mỹ (2014), Nghiên cứu bào chế phức hợp lipid chứa amphotericin B, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Phạm Thị Lê Na (2016), Nghiên cứu quy trình bào chế phức hợp lipid amphotericin B, Khóa luận tốt nghiệp dược sĩ, Trường Đại học Dược Hà Nội Dương Thị Thuấn (2016), Nghiên cứu bào chế thuốc tiêm hỗn dịch chứa phức hợp lipid amphotericin B, Luận văn thạc sĩ dược học, Trường Đại học Dược Hà Nội Tiếng Anh Alok K Kulshreshtha, Onkar N Singh, et al (2010), "From Formulation Development to Manufacturing", Pharmaceutical Suspensions, pp 30 - 65 Arczewska M., Gagos M (2011), "Molecular organization of antibiotic amphotericin B in dipalmitoylphosphatidylcholine monolayers induced by K(+) and Na(+) ions: the Langmuir technique study", Biochim Biophys Acta, 1808(11), pp 2706-13 Badawy Amro M El, Luxton Todd P., et al (2010), "Impact of Environmental Conditions (pH, Ionic Strength, and Electrolyte Type) on the Surface Charge and Aggregation of Silver Nanoparticles Suspensions", Environmental Science & Technology, 44(4), pp 1260-1266 10 Beatrice Heurtault, Patrick Saulnier, et al (2003), "Physico-chemical stability of colloidal lipid particles", Biomaterials, pp 4294 - 4297 11 Bharat serums and vaccines ltd, Amphotericin B lipid complex injection I.V Ampholip p 1-1 12 Florence Alexander T, Attwood David (2008), "Emulsions, suspensions and other dispersed systems ", FASTtrack Physical Pharmacy, pp 63-68 13 Florence Alexander T, Attwood David (2006), "Emulsions, suspensions and other disperse systems", Physicochemical Principles of Pharmacy, pp 231231 14 Formulary U.S Pharmacopeia National (2013), USP 36 NF31, pp 15 G Storm E van Etten (1997), "Biopharmaceutical aspects of lipid formulations of amphotericin B", European Journal of Clinical Microbiology and Infectious Diseases, 16, pp 64-73 16 GmbH Sartorius Stedim Biotech, Business unit Crossflow, Cross Flow Filtration Technology 2002 17 GmbH Sartorius Stedim Biotech, Business unit Crossflow, Operating Instructions SARTOFLOW® Slice 200 Benchtop System p - 18 Hope M.J., Nayar, R., Mayer, L.D., and Cullis, P.R (1993), "Reduction of liposome size and preparation of unilamellar vesicles by extrusion techniques", Liposome technology, 1, pp 123-139 19 Janoff A., Perkins, W., Saletan, S., and Swenson, C (1993), "Amphotericin B lipid complex (ABLC™): a molecular rationale for the attenuation of amphotericin B related toxicities", Journal of liposome research, pp 451-471 20 Janoff A S., Boni L T., et al (1988), "Unusual lipid structures selectively reduce the toxicity of amphotericin B", Medical Sciences, pp 6122-6126 21 Janoff Andrew S, Madden Thomas D, et al (2002), "Methods of preparing low-toxicity drug-lipid complexes", US patent 22 Larabi Malika, Annette Gulik, et al (2004), "New lipid formulation of amphotericin B: spectral and microscopic analysis", Biochimica et Biophysica Acta, pp 172-181 23 Richard T.P., Arcadia, Jill, A.-M., Altadena, Su-Ming, C., Canoga, P., and Calif, a.o., Amphotericin B liposome preparation, in United State Patent 1999 24 Sabin J., G Prieto, et al (2006), "Size and stability of liposomes: A possible role of hydration and osmotic forces", The European physical journal E, pp 401 - 408 25 Shi Jingyu (2002), "Steric Stabilization", pp 43 26 Tadros Th.F (1986), Control of the properties of suspensions, Elsevier Scientific Publishing Company, pp 27 Tadros Th.F (1986), Control of the properties of suspensions, Elsevier Scientific Publishing Company, pp 137 - 173 28 Tadros Th.F (1980), Physical stability of suspension concentrates, pp 182 202 PHỤ LỤC Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP CT3 đo môi trường khác thời điểm t = Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP CT3 đo môi trường khác thời điểm t = tháng Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP mẫu CT1 Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP mẫu CT3 Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP mẫu CT4 Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP mẫu sau LTT thời điểm t = Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP mẫu sau LTT thời điểm t = tháng Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP mẫu sau LTT thời điểm t = tháng Phụ lục Đồ thị phân bố KTTP mẫu sau LTT thời điểm t = tháng ... AMB cú phc hp lipid AMB: ỏnh giỏ c lng AMB cú h thng phc hp lipid AMB cn phi loi b phn AMB t Hỳt chớnh xỏc khong ml hn dch phc hp AMB thụ vo tỳi thm tớch Buc kớn hai u, t nhỳng chỡm tỳi vo b nh... Larabi v cng s (2004) ó bo ch phc hp lipid cha AMB bng phng phỏp bc hi dung mụi pha o, s dng hai lipid DMPC v DMPG T l mol cỏc thnh phn AMB: DMPC : DMPG 5: : , tng t nh thnh phn ca Abelcet AMB... phc hp lipid AMB nh lng AMB hn dch phc hp lipid AMB bng phng phỏp o quang V phng phỏp quột ph cc i hp th ca AMB methanol, xõy dng ng chun tuyn tớnh gia nng AMB v hp th quang ó c trỡnh by khúa