Tiếp tục nghiên cứu bào chế niosome natri diclofenac ứng dụng trong dạng thuốc dùng qua da

BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN NGỌC GIANG MÃ SINH VIÊN: 1201138 TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ NIOSOME NATRI DICLOFENAC ỨNG DỤNG TRONG DẠNG THUỐC DÙNG QUA DA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ HÀ NỘI – 2017 BỘ Y TẾ TRƯỜNG ĐẠI HỌC DƯỢC HÀ NỘI TRẦN NGỌC GIANG MÃ SINH VIÊN: 1201138 TIẾP TỤC NGHIÊN CỨU BÀO CHẾ NIOSOME NATRI DICLOFENAC ỨNG DỤNG TRONG DẠNG THUỐC DÙNG QUA DA KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP DƯỢC SĨ Người hướng dẫn: TS Trần Thị Hải Yến Nơi thực Bộ môn Bào chế HÀ NỘI – 2017 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành khoá luận này, xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành sâu sắc tới: TS Trần Thị Hải Yến Người thầy tận tâm dẫn, hết lòng giúp đỡ tạo điều kiện thuận lợi cho suốt thời gian nghiên cứu vừa qua Xin chân thành cảm ơn thầy cô, anh chị kỹ thuật viên, bạn bè tham gia nghiên cứu Bộ môn Bào Chế, Bộ môn Dược lực trường Đại học Dược Hà Nội, Viện Công nghệ Dược phẩm Quốc gia nhiệt tình giúp đỡ để hoàn thành khoá luận tốt nghiệp Xin cảm ơn thầy cô Ban giám hiệu, người thầy dạy dỗ, dìu dắt suốt năm học tập mái trường Đại học Dược Hà Nội Cuối cùng, xin gửi lời tri ân tới gia đình, bạn bè bên, hỗ trợ động viên vượt qua khó khăn để hoàn thành tốt khoá luận Hà Nội, ngày 10 tháng năm 2017 Sinh viên Trần Ngọc Giang MỤC LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG DANH MỤC CÁCH HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ĐẶT VẤN ĐỀ CHƯƠNG TỔNG QUAN Tổng quan diclofenac natri 1.1.1 Công thức hoá học 1.1.2 Tính chất vật lý, hoá học 1.1.3 Một số thông số dược động học 1.1.4 Tác dụng dược lý 1.1.5 Chỉ định 1.1.6 Tác dụng không mong muốn 1.1.7 Chống định thận trọng 1.1.8 Các dạng bào chế 1.1.9 Ưu điểm chế phẩm natri diclofenac dùng da điều trị bệnh xương khớp 1.2 Tổng quan hệ tiểu phân nano niosome 1.2.1 Khái niệm 1.2.2 Phân loại 1.2.3 Ứng dụng niosome lĩnh vực dược phẩm 1.2.4 Bào chế niosome phương pháp tiêm ethanol 1.2.5 Các yếu tố ảnh hưởng tới khả tạo niosome chất diện hoạt không ion hoá 12 1.2.6 Ứng dụng hệ vận chuyển niosome vào dạng thuốc dùng da 14 CHƯƠNG ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 2.1 Đối tượng nghiên cứu 16 2.2 Hoá chất, nguyên liệu, thiết bị động vật thí nghiệm 16 2.2.1 Hoá chất nguyên liệu sử dụng 16 2.2.2 Thiết bị 17 2.2.3 Động vật thí nghiệm 18 2.3 Nội dung nghiên cứu 18 2.4 Phương pháp nghiên cứu 18 2.4.1 Bào chế niosome natri diclofenac phương pháp tiêm ethanol 18 2.4.2 Bào chế gel chứa niosome natri diclofenac 1% 19 2.4.3 Bào chế gel natri diclofenac 1% 19 2.4.4 Đánh giá số đặc tính tiểu phân niosome natri diclofenac 19 2.4.5 Đánh giá sinh khả dụng gel chứa niosome NaD 1% thử nghiệm ex-vivo 25 2.4.6 Bước đầu đánh giá sinh khả dụng gel chứa niosome NaD 1% thử nghiệm in-vivo 27 2.4.7 Phương pháp HPLC định lượng NaD thử nghiệm ex-vivo invivo 30 2.4.8 Phương pháp xử lý số liệu 32 CHƯƠNG 3: THỰC NGHIỆM, KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬN 33 3.1 Bào chế đánh giá niosome natri diclofenac 33 3.1.1 Khảo sát lựa chọn loại Span 33 3.1.2 Khảo sát lựa chọn tỷ lệ mol dược chất/tổng tá dược dầu 35 3.1.3 Đánh giá số đặc tính tiểu phân niosome NaD 39 3.2 Đánh giá sinh khả dụng gel chứa niosome natri diclofenac 1% qua thử nghiệm ex-vivo in-vivo 41 3.2.1 Thẩm định số tiêu phương pháp HPLC định lượng diclofenac natri môi trường muối đệm phosphat pH 7,4 41 3.2.3 Đánh giá sinh khả dụng gel chứa niosome NaD 1% thử nghiệm ex-vivo 43 3.2.4 Bước đầu đánh giá sinh khả dụng gel chứa niosome NaD 1% thử nghiệm in-vivo 45 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 48 TÀI LIỆU THAM KHẢO PHỤ LỤC DANH MỤC CÁC BẢNG STT Tên bảng Trang Bảng 1.1 Độ tan natri diclofenac theo pH Bảng 1.2 Dược chất sử dụng hệ vận chuyển niosome Bảng 1.3 Mối quan hệ CPP cấu trúc hình thành 13 Bảng 2.1 Hoá chất nguyên liệu sử dụng 16 Bảng 3.1 Thành phần công thức khảo sát 33 Bảng 3.2 Thành phần công thức khảo sát 35 Bảng 3.3 Thành phần công thức khảo sát 37 Bảng 3.4 Số sóng liên kết O-H, liên kết C-O (nhóm acid), liên kết -C=O (nhóm este) phổ IR mẫu khảo sát Bảng 3.5 Thành phần mẫu gel đánh giá bào chế theo quy trình 2.4.2 39 42 10 Bảng 3.6 Nồng độ dược chất máu thời điểm 45 11 Bảng 3.7 Các thông số dược động học 45 DANH MỤC CÁC HÌNH VẼ, ĐỒ THỊ STT Tên hình Trang Hình 1.1 Công thức phân tử natri diclofenac 2 Hình 1.2 Cấu trúc niosome Hình 1.3 Phân loại niosome theo kích thước Hình 1.4 Cơ chế hình thành niosome phương pháp tiêm ethanol Hình 1.5 Sơ đồ mô hình tiêm chéo dòng 10 Hình 1.6 Sơ đồ mô hình màng tiếp xúc 11 Hình 1.7 Sơ đồ mô hình bào chế niosome quy mô pilot sử dụng 11 ống tiêm Hình 1.8 Sơ đồ mô hình bào chế niosome quy mô pilot sử dụng 12 màng SPG Hình 1.9 Chỉ số CPP 13 10 Hình 1.10 Cơ chế vận chuyển thuốc qua da niosome 15 11 Hình 3.1 Đồ thị KTTP PDI công thức S1, S2, S3 Span 60 34 Span 80 12 Hình 3.2 Đồ thị hiệu suất nạp dược chất công thức S1, S2, S3 34 Span 60 Span 80 13 Hình 3.3 KTTP PDI công thức thay đổi tỷ lệ mol dược 36 chất/TDD cố định tỷ lệ mol cholesterol/Span80 4/6 14 Hình 3.4 Đồ thị biểu diễn hiệu suất nạp lượng dược chất 36 (mmol) nạp thay đổi tỷ lệ mol NaD/TDD cố định tỷ lệ mol cholesterol/Span 80 4/6 15 Hình 3.5 KTTP PDI công thức thay đổi tỷ lệ mol dược 37 chất/TDD cố định tỷ lệ mol cholesterol/Span80 5/5 16 Hình 3.6 Đồ thị biểu diễn hiệu suất nạp lượng dược chất 38 (mmol) nạp thay đổi tỷ lệ mol NaD/TDD cố định tỷ lệ mol cholesterol/Span 80 5/5 17 Hình 3.7 Đồ thị biểu diễn mối tương quan diện tích peak 42 nồng độ natri diclofenac môi trường muối đệm phosphat pH 7,4 18 Hình 3.8 Đồ thị thể khả giải phóng dược chất qua da 43 công thức gel M8 1%, gel N8 1%, Voltaren Emulgel1% gel NaD 1% 19 Hình 3.9 Đồ thị thể lượng dược chất lưu trữ da sau 24 công thức gel M8 1%, gel N8 1%, Voltaren Emulgel 1% gel NaD 1% 44 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT Tên viết tắt Tên đầy đủ %EE Hiệu suất nạp (Encapsulation Efficiency) AUC Diện tích đường cong (Area under the curve) CDH Chất diện hoạt CPP Critical Packing Parameter DĐVN IV DSC EDTA FESEM Dược điển Việt Nam IV Phân tích nhiệt quét vi sai (Differential Scanning Calorimetry) Acid ethylendiamin tetraacetic Kính hiển vi điện tử quét trường phát xạ (Field Emission Scanning Electron Microscopy) HLB Chỉ số cân dầu nước (Hydrophilic lipophilic balance) KTTP Kích thước tiểu phân NaD NSAIDs Natri Diclofenac Các thuốc chống viêm không steroid (Non-steroidal anti inflammatory drugs) NSX Nhà sản xuất PDI Chỉ số đa phân tán (Polydispersity index) PTFE RI Polytetrafluoroethylene Chỉ số khúc xạ (Refractive Index) SPG Shirasu Porous Glass TDD Tá dược dầu TKHH XRD Tinh khiết hoá học Nhiễu xạ tia X (X-ray Diffraction) Phụ lục 2: Sắc ký đồ mẫu trắng môi trường đệm salin phosphat pH 7,4 Sắc ký đồ mẫu chuẩn môi trường đệm salin phosphat pH 7,4 Sắc ký đồ mẫu thử môi trường đệm salin phosphat pH 7,4 Phụ lục 3: A.KTTP số PDI công thức N8 B KTTP số PDI công thức M8 Phụ lục 4: A Phổ phân tích nhiệt vi sai NaD B Phổ phân tích nhiệt vi sai niosome M8 C Phổ phân tích nhiệt vi sai niosome N8 D Phổ phân tích nhiệt vi sai cholesterol Phụ lục 5: số hình ảnh tiểu phân niosome công thức M8 N8 ghi lại kỹ thuật chụp quét trường phát xạ (FESEM) Phụ lục 6: A Phổ nhiễu xạ tia X NaD Fa culty of Che mistry, HUS , VNU, D8 ADVANCE-Bruker - Diclofenac 100 90 80 70 d=35.983 50 d=2.102 d=2.424 d=2.615 d=3.155 d=3.769 d=7.206 20 d=4.717 30 d=6.278 d=6.851 40 d=13.155 Lin (Cps) 60 10 10 20 30 40 50 60 2-Theta - Scale File: GiangDHDuoc Diclofenac.raw - Type: 2Th/Th locked - Start: 1.000 ° - End: 70.000 ° - Step: 0.030 ° - Step time: 0.3 s - Temp.: 25 °C (Room) - Time Started: 14 s - 2-Theta: 1.000 ° - Theta: 0.500 ° - Chi: 0.00 ° - Phi: 0.0 00-039-1684 (Q) - Diclofenac sodium - C14H10Cl2NNaO2 - Y: 11.95 % - d x by: - WL: 1.5406 - B Phổ nhiễu xạ tia X niosome N8 70 Phụ lục 7: Bảng KTTP PDI công thức S1, S2, S3 Span 80 Span 60 (n=3) KTTP (d.nm) Công thức Span 80 Span 60 TB ± SD PDI RSD (%) TB ± SD RSD (%) S1 107,53 ± 0,48 0,45 0,163 ± 0,013 8,224 S2 111,06 ± 5,86 5,28 0,214 ± 0,022 10,085 S3 101,49 ± 0,94 0,92 0,164 ± 0,004 2,420 S1 80,69 ± 3,99 4,94 0,200 ± 0,002 12,187 S2 101,75 ± 3,00 2,95 0,201 ± 0,009 4,415 S3 134,58 ± 10,30 7,65 0,178 ± 0,007 3,711 Bảng Hiệu suất nạp dược chất (%EE) giá trị p công thức S1, S2, S3 Span 80 Span 60 CT Span 80 Span 60 TB ± SD (%) 58,31 ± 2,09 59,30 ± 5,81 RSD (%) 3,58 5,81 TB ± SD (%) 73,41 ± 3,24 56,28 ± 3,17 RSD (%) 4,42 3,17 TB ± SD (%) 75,23 ± 3,21 58,12 ± 3,84 RSD (%) 4,26 3,84 EE% S1 S2 S3 P 0,750 0,006 0,003 Bảng KTTP PDI công thức thay đổi tỷ lệ mol dược chất/TDD cố định tỷ lệ mol cholesterol/Span80 4/6 (n=3) Công thức M2 KTTP (d.nm) PDI TB ± SD RSD (%) TB ± SD RSD (%) 100,52 ± 0,46 0,46 0,192 ± 0,004 2,167 M3 105,09 ± 1,22 1,16 0,197 ± 0,007 3,451 M4 109,14 ± 1,56 1,43 0,181 ± 0,009 4,824 M5 109,30 ± 1,62 1,48 0,201 ± 0,005 2,504 M6 99,27 ± 1,04 1,04 0,203 ± 0,005 2,59 M7 105,13 ± 0,64 0,61 0,197 ± 0,007 3,558 M8 97,72 ± 1,02 1,04 0,198 ± 0,010 4,893 M9 101,58 ± 0,59 0,58 0,196 ± 0,009 4,680 Bảng EE% lượng dược chất (mmol) nạp công thức thay đổi tỷ lệ mol NaD/TDD cố định tỷ lệ mol cholesterol/Span 80 4/6 Công thức M2 M3 M4 M5 M6 M7 M8 M9 EE (%) TB ± SD RSD (%) 47,75 ± 0,10 0,206 47,84 ± 0,14 0,284 44,68 ± 0,05 0,122 39,03 ± 0,17 0,424 39,66 ± 0,10 0,250 38,12 ± 0,69 1,822 35,58 ± 0,31 0,882 39,28 ± 0,07 0,172 Số mol NaD (mmol) TB ± SD RSD (%) 0,095 ± 0,002 0,206 0,144 ± 0,004 0,284 0,179 ± 0,002 0,122 0,195 ± 0,008 0,424 0,238 ± 0,006 0,250 0,267 ± 0,049 1,822 0,285 ± 0,025 0,882 0,354 ± 0,006 0,172 Bảng KTTP PDI công thức thay đổi tỷ lệ mol dược chất/TDD cố định tỷ lệ mol cholesterol/Span80 5/5 (n=3) N2 N3 KTTP (d.nm) RSD (%) TB ± SD 90,00 ± 1,52 1,67 93,60 ± 1,44 1,54 TB ± SD 0,172 ± 0,011 0,159 ± 0,005 RSD (%) 6,379 3,464 N4 100,59 ± 4,70 4,67 0,168 ± 0,011 6,275 N5 95,31 ± 0,73 0,76 0,187 ± 0,009 4,877 N6 89,51 ± 3,22 3,60 0,195 ± 0,006 3,302 N7 104,73 ± 0,42 0,41 0,168 ± 0,001 0,373 Công thức PDI N8 81,82 ± 0,41 0,50 0,184 ± 0,011 5,882 N9 99,88 ± 1,21 1,21 0,176 ± 0,002 1,353 Bảng Hiệu suất nạp dược chất lượng dược chất (mmol) nạp thay đổi tỷ lệ mol NaD/TDD cố định tỷ lệ mol cholesterol/Span 80 5/5 Công thức EE (%) Lượng NaD (mmol) TB ± SD RSD (%) TB ± SD RSD (%) N2 60,77 ± 0,07 0,11 1,215 ± 0,001 0,107 N3 51,9 ± 0,16 0,30 1,557 ± 0,005 0,303 N4 51,89 ± 2,05 3,96 2,076 ± 0,082 3,957 N5 47,3 ± 0,85 1,80 2,365 ± 0,043 1,804 N6 37,47 ± 0,37 0,99 2,248 ± 0,022 0,992 N7 45,17 ± 2,77 6,14 3,162 ± 0,194 6,140 N8 42,38 ± 0,1 0,23 3,391 ± 0,008 0,233 N9 36,65 ± 1,18 3,23 3,299 ± 0,107 3,230 Bảng Thẩm định tính thích hợp hệ thống HPLC STT tR (phút) Diện tích peak (mAu.s) 7,261 1041,2 7,320 1053,2 7,262 1047,4 TB 7,281 1047,3 SD 0,034 6,0 RSD (%) 0,467 0,573 Bảng Mối tương quan diện tích peak nồng độ natri diclofenac môi trường pH 7,4 Nồng độ (𝜇𝑔/𝑚𝐿) Diện tích peak (mAu.s) 2,0 4,0 20,0 40,0 80,0 100,0 146,2 241,9 1041,2 2125,9 4040,5 5141,4 Bảng Thẩm định độ phương pháp HPLC Bảng 10 Khả giải phóng dược chất qua da công thức gel M8 1%, gel N8 1%, Voltaren Emulgel 1% gel NaD 1% (n=2) Mẫu Giờ Gel NaD 1% Voltaren Emulgel 1% TB ± SD (%) TB ± SD (%) Gel N8 1% Gel M8 1% TB ± SD (%) TB ± SD (%) 0,00 ± 0,00 0,21 ± 0,03 1,70 ± 0,00 1,06 ± 0,05 0,00 ± 0,00 0,76 ± 0,03 5,43 ± 0,13 3,44 ± 0,20 0,00 ± 0,00 1,66 ± 0,02 11,39 ± 0,32 5,78 ± 0,18 0,15 ± 0,03 2,60 ± 0,02 15,03 ± 0,11 9,58 ± 0,63 0,25 ± 0,08 3,37 ± 0,02 17,94 ± 0,44 12,05 ± 0,85 0,37 ± 0,12 3,57 ± 0,02 24,55 ± 0,25 15,36 ± 1,26 0,49 ± 0,15 4,22 ± 0,06 28,91 ± 0,73 16,68 ± 1,45 0,63 ± 0,25 4,51 ± 0,01 32,80 ± 1,25 19,75 ± 0,67 Bảng 11 Lượng dược chất lưu trữ da sau 24 công thức gel M8 1%, gel N8 1%, Voltaren Emulgel 1% gel NaD 1% (n=2) Gel Kết TB ± SD (𝜇𝑔/𝑐𝑚/ ) Gel NaD 1% Voltaren Emulgel 1% Gel N8 1% Gel M8 1% 879,00 ± 6,74 724,88± 13,03 173,05 ± 14,70 241,84 ± 13,03 Phụ lục 8: A Phổ IR Span 80 B Phổ IR Cholesterol C Phổ IR NaD D Phổ IR niosome NaD công thức N8 E Phổ IR niosome NaD công thức M8 ... nghiờn cu - Bo ch niosome natri diclofenac - ỏnh giỏ mt s c tớnh tiu phõn niosome natri diclofenac - Bo ch gel cha niosome natri diclofenac 1% - ỏnh giỏ sinh kh dng ca gel cha niosome NaD 1% bng... niosome natri diclofenac 1% Vỡ vy, chỳng tụi tin hnh ti: Tip tc nghiờn cu bo ch niosome natri diclofenac ng dng dng thuc dựng qua da vi cỏc mc tiờu: Bo ch v ỏnh giỏ mt s c tớnh tiu phõn niosome natri. .. bụi ngoi da diclofenac ó c tin hnh nh: gel natri diclofenac 1%, gel diethylamin diclofenac 1,16%, gel MIKA diclofenac 4% dng xt, lotion diclofenac DMSO v ming dỏn diclofenac epolamin Trong mt