Nghiên cứu chiết rút laminaran từ rong nâu s oligocystum bằng phương pháp khuếch tán làm giàu

BỘ GIÁO VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG HUỲNH THỊ THU THÚY NGHIÊN CỨU CHIẾT RÚT LAMINARAN TỪ RONG NÂU S OLIGOCYSTUM BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH TÁN LÀM GIÀU ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM CÁN BỘ HƯƠNG DẪN: 1) PGS.TS Vũ Ngọc Bội 2) ThS Nguyễn Thị Mỹ Trang KHÁNH HÒA - 2017 BỘ GIÁO VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG HUỲNH THỊ THU THÚY NGHIÊN CỨU CHIẾT RÚT LAMINARAN TỪ RONG NÂU S OLIGOCYSTUM BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH TÁN LÀM GIÀU ĐỒ ÁN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC CHUYÊN NGÀNH CÔNG NGHỆ THỰC PHẨM Mã số sinh viên : 55134419 Lớp : 55TP3 Cán hướng dẫn : PGS.TS Vũ Ngọc Bội ThS Nguyễn Thị Mỹ Trang KHÁNH HÒA - 2017 i LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành đề tài này, Trước hết, em xin gửi tới Ban Giám hiệu Trường Đại học Nha Trang, Ban Chủ nhiệm khoa Công nghệ Thực phẩm, Phòng Đào tạo lòng biết ơn niềm kính trọng, tự hào học tập trường năm qua Sự biết ơn sâu sắc em xin giành cho thầy PGS.TS Vũ Ngọc Bội Trưởng khoa Công nghệ Thực phẩm, ThS Nguyễn Thị Mỹ Trang tài trợ kinh phí, tận tình hướng dẫn động viên suốt trình thực đồ án tốt nghiệp Xin cám ơn thầy cô phản biện cho em lời khuyên quí báu để công trình nghiên cứu hoàn thành có chất lượng Xin chân thành cảm ơn tất thầy cô khoa Công nghệ Thực phẩm truyền đạt cho em kiến thức quý báu suốt thời gian em học tập trường năm qua Em xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến gia đình tạo điều kiện cho em học xin cám ơn bạn bè chia sẻ, động viên, giúp đỡ em suốt thời gian qua Nha Trang, tháng năm 2017 Sinh viên thực Huỳnh Thị Thu Thúy ii MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN i DANH MỤC VIẾT TẮT iv DANH MỤC HÌNH v LỜI NÓI ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN .3 1.1 TỔNG QUAN VỀ RONG NÂU – PHAEOPHYTA: .3 1.1.1 Giới thiệu chung rong nâu 1.1.2 Thành phần hóa học rong nâu 1.1.2.1 Sắc tố: .4 1.1.2.3 Protein: 1.1.2.4 Chất khoáng: 1.1.3 Tình hình nghiên cứu sử dụng rong nâu: .5 1.1.3.1Tình hình sử dụng rong nâu giới 1.1.3.2 Tình hình sử dụng, chế biến rong nâu Việt Nam 1.1.4 Giới thiệu chung rong mơ 1.1.5 Sự phân bố rong S.oligocystum 10 1.1.7 Công dụng vai trò sinh học rong mơ 12 1.1.7.1 Công dụng rong mơ .12 1.1.7.2 Vai trò sinh học rong mơ .12 1.2 Tổng quan laminaran: 13 1.2.1 Giới thiệu Laminaran 13 1.2.2 Đặc điểm cấu tạo: 13 1.2.3 Tính chất: 14 1.2.4 Ứng dụng Laminaran 14 1.2.5 Phương pháp chiết Laminaran 15 1.2.5.1 Một số nghiên cứu nước 15 iii CHƯƠNG 2: NGUYÊN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.1 NGUYÊN LIỆU 20 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 20 2.2.1 Phương pháp phân tích 20 2.2.1.1 Phương pháp định lượng laminaran: 20 2.2.1.2 Phương pháp xác định hoạt tính chống oxy hóa 20 2.2.1.3 Phương pháp chiết tinh laminaran 21 2.3 HÓA CHẤT VÀ CÁC THIẾT BỊ CHỦ YẾU ĐÃ SỬ DỤNG .28 2.3.1 Hóa chất 28 2.3.2 Thiết bị chủ yếu sử dụng 28 2.4 PHƯƠNG PHÁP XỬ LÝ SỐ LIỆU 28 3.1 Xác định thông số thích hợp cho quy trình chiết rút laminaran từ rong nâu S oligocystum phương pháp khuếch tán làm giàu .29 3.1.1 Ảnh hưởng số lần chiết 29 3.1.2 Ảnh hưởng thời gian chiết 35 3.1.3 Ảnh hưởng tỉ lệ DM/NL: 38 3.1.4 Ảnh hưởng pH dung môi: 43 3.1.5 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết: .48 3.2 ĐỀ XUẤT QUY TRÌNH CHIẾT LAMINARAN TỪ RONG NÂU S OLIGOCYSTUM BẰNG PHƯƠNG PHÁP KHUẾCH TÁN LÀM GIÀU 51 3.3 ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG LAMINARAN THU NHẬN TỪ RONG NÂU S OLYGOCYSTUM 55 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 58 KẾT LUẬN .58 KIẾN NGHỊ 58 TÀI LIỆU THAM KHẢO 59 PHỤ LỤC - - iv DANH MỤC VIẾT TẮT CHỮ VIẾT TẮT DIỄN GIẢI TA Hoạt tính chống oxi hóa tổng RP Hoạt tính khử sắt S Surgassum DW Khối lượng rong khô AA Acid Ascorbic v/p vòng/ phút v DANH MỤC HÌNH Hình 1.1 Rong S.oligocystum tươi 11 Hình 1.1: Cấu trúc hóa học laminaran .14 Hình 2.1 Hình ảnh rong mơ S oligocystum sấy khô 20 Hình 2.2 Quy trình dự kiến chiết xuất laminaran từ rong Sargassum oligocystum 22 Hình 2.3 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định số lần chiết 23 Hình 2.4 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định thời gian chiết laminaran 24 Hình 2.5 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định pH chiết 25 Hình 2.6 Sơ đồ bố trí thí nghiệm xác định tỷ lệ DM/NL .26 Hình 3.1 Ảnh hưởng số lần chiết đến hàm lượng laminaran thu nhận từ rong mơ S oligocystum 29 Hình 3.2 Ảnh hưởng số lần chiết đến hoạt tính chống oxi hóa tổng dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum 30 Hình 3.3 Ảnh hưởng số lần chiết đến hoạt tính khử sắt dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum .30 Hình 3.4 Sự tương quan hàm lượng laminaran hoạt tính chống oxy hoá tổng dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum .33 Hình 3.5 Sự tương quan hàm lượng laminaran hoạt tính khử sắt dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum 34 Hình 3.6 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hàm lượng laminaran thu nhận từ rong mơ S oligocystum 35 Hình 3.7 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hoạt tính chống oxi hóa tổng dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum 36 Hình 3.8 Ảnh hưởng thời gian chiết đến hoạt tính khử sắt dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum .36 Hình 3.9 Ảnh hưởng tỷ lệ DM/NL đến hàm lượng laminaran thu nhận từ rong mơ S oligocystum 39 vi Hình 3.10 Ảnh hưởng tỷ lệ DM/NL đến hoạt tính chống oxi hóa tổng dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum 39 Hình 3.11 Ảnh hưởng tỷ lệ DM/NL đến hoạt tính khử sắt dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum .40 Hình 3.12 Sự tương quan hàm lượng laminaran hoạt tính chống oxy hoá tổng dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum .42 Hình 3.13 Sự tương quan hàm lượng laminaran hoạt tính khử sắt dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum 43 Hình 3.14 Ảnh hưởng pH dung môi đến hàm lượng laminaran thu nhận từ rong mơ S oligocystum 44 Hình 3.15 Ảnh hưởng pH dung môi đến hoạt tính chống oxi hóa tổng dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum 44 Hình 3.16 Ảnh hưởng pH dung môi đến hoạt tính khử sắt dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum .45 Hình 3.17 Sự tương quan hàm lượng laminaran hoạt tính chống oxy hoá tổng dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum .47 Hình 3.18 Sự tương quan hàm lượng laminaran 48 hoạt tính khử sắt dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum 48 Hình 3.19 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hàm lượng laminaran thu nhận từ rong mơ S oligocystum 49 Hình 3.20 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hoạt tính 49 chống oxi hóa tổng dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum 49 Hình 3.21 Ảnh hưởng nhiệt độ chiết đến hoạt tính khử sắt dịch chiết laminaran từ rong mơ S oligocystum .50 Hình 3.22 Quy trình chiết laminaran từ rong mơ Sargassum oligocystum .52 Hình 3.23 Quy trình sản xuất nước uống bổ sung laminaran 55 Hình 3.24 Nước uống bổ sung laminaran 57 LỜI NÓI ĐẦU Việt Nam có bờ biến dài 3200km, thuận lợi cho việc khai thác, nuôi trồng chế biến loại rong biển Trong số loài thực vật biển sống dọc bờ biển Việt Nam, đảo dải đá ngầm có khoảng 1000 loài thực vật biển sinh sống Trong có 638 loài rong biển bao gồm: Rhodophyta với 229 loài, Phaeophyta với khoảng 120 loài, Chlorophyta với khoảng 150 loài, Cyanobacteria với 76 loài 14 loài cỏ biển Trong số có khoảng 200 loài rong tảo có khả sử dụng đời sống Hiện có khoảng 60 loài sử dụng làm thực phẩm, y học dân gian để chế biến loại keo rong biển Trong rong biển, rong nâu số loài thực vật biển có khả tự tái tạo đáng lưu ý Rong nâu có chứa nhiều hợp chất thiên nhiên có giá trị dinh dưỡng dược dụng cao Chẳng hạn, rong nâu nguồn cung cấp loại đường (galactose, manose, xylose,…), 17 axít amin, axít béo không no, chất khoáng, loại vitamin cần thiết cho thể sống, hợp chất có hoạt tính sinh học polyphenol có khả chống oxy hóa mạnh mẽ bảo vệ thể loại trừ gốc tự nguy hiểm, fucoidan có khả kích thích hệ miễn dịch, chống viêm nhiễm, ngăn ngừa ung thư, đồng thời làm tăng số chức gan, alginate chất giải độc thiên nhiên laminaran chất chống đông tụ máu ung thư Theo nhà khoa học Nga, rong nâu coi nguồn lợi polysacarit có ứng dụng rộng rãi nhờ đặc điểm cấu trúc tính chất đặc thù chúng Polysacarit tồn rong nâu chia làm nhóm chính: nhóm tan kiềm axit alginic có hàm lượng lớn nhất, nghiên cứu từ năm 30 kỷ trước sử dụng rộng rãi nhiều lĩnh vực công nghiệp, thực phẩm, dược phẩm mỹ phẩm Nhóm tan nước bao gồm fucoidan, laminaran polyuronan chất có nhiều hoạt tính sinh học quí giá nghiên cứu sử dụng khoảng vài thập kỷ trở lại Trong số đó, laminaran chất không độc, có khả kích hoạt hệ miễn dịch, kháng ung thư, kháng khuẩn, laminaran nhiều nhà khoa học quan tâm nghiên cứu Tuy việc nghiên cứu, khai thác laminaran từ rong mơ hạn chế có công trình công bố nghiên cứu laminaran từ rong mơ Từ thực tế đồng ý giáo viên hướng dẫn, thực đề tài: “Nghiên cứu chiết rút laminaran từ rong nâu S oligocystum phương pháp khuếch tán làm giàu” Nội dung đề tài: 1) Xác định thông số thích hợp cho quy trình chiết rút laminaran từ rong nâu S oligocystum phương pháp khuếch tán làm giàu 2) Đề xuất quy trình chiết rút laminaran từ rong nâu S oligocystum phương pháp khuếch tán làm giàu 3) Đánh giá chất lượng laminaran thu nhận từ rong nâu S oligocystum Do thời gian thực đề tài có hạn lần đầu tiếp cận với công tác nghiên cứu nên báo cáo đồ án không tránh khỏi thiếu sót, em mong nhận ý kiến góp ý quý thầy cô bạn để báo cáo thêm hoàn chỉnh Em xin chân thành cám ơn Nha Trang, tháng năm 2017 Sinh viên thực Huỳnh Thị Thu Thúy 53 * Thuyết minh quy trình: + Nguyên liệu Rong mơ S olygocystum nguyên liệu thu mẫu vùng biển Ninh Thuận Rong mơ sau thu mẫu, rửa nước biển sau vận chuyển phòng thí nghiệm để làm nguyên liệu cho trình nghiên cứu + Rửa sạch: Mục đích: loại bỏ bớt tạp chất muối, bám dính rong nguyên liệu Ngâm đá để loại muối theo phương pháp PGS TS Vũ Ngọc Bội Tiến hành rửa rong nước Thao tác rửa phải nhanh sạch, đồng thới tránh làm dập rong rửa, gây tổn thất chất tan theo nước + Sấy: Mục đích: Sấy loại bớt nước có nguyên liệu, hạn chế phát triển vi sinh vật, nhằm đảm bảo chất lượng nguyên liệu Sấy khô kỹ thuật sấy lạnh kết hợp với xạ hồng ngoại nhiệt độ sấy 500C, tốc độ gió 2m/s thời gian khoảng 3,5 đến độ ẩm < 16% thu rong khô đóng gói bao bì PE, bảo quản nhiệt độ thường để dùng suốt trình nghiên cứu + Nghiền nhỏ: Mục đích: nhằm tăng diện tích tiếp xúc rong với dung môi, đồng thời phá vỡ cấu trúc tế bào rong, tạp điều kiện thuận lợi cho chất hòa tan dung môi Chú ý, không nên xay nghiền nhỏ, bới kích thước nhỏ cản trở trình lọc Rong nghiền nhỏ với kích thước khoảng 0,2 cm nhằm thuận lợi cho trình chiết rút Việc làm nhỏ rong nhằm mục đích làm tăng diện tích tiếp xúc bề mặt nguyên liệu với dung môi, đồng thời phá vỡ cấu trúc rong, tạo điều kiện thuận lợi cho chất hòa tan dung môi 54 + Chiết: Rong cắt nhỏ vào bình tam giác, dùng giấy bạc bịt kín miệng bình, tránh tượng dung môi bay trình ngâm chiết Tiến hành chiết điều kiện sau:  Dung môi: nước cất  Tỷ lệ DM/NL: 32/1  Thời gian: 60 phút  Nhiệt độ chiết: 68÷70oC  pH dung môi:  Số lần chiết:1 + Lọc: Lọc nhằm mục đích loại bỏ hợp chất không tan, bã khỏi hỗn hợp chiết, thu dịch chiết +Cô đặc: Cô đặc nhằm mục đích loại bỏ bớt dung môi dịch lọc nhờ trình bay dung môi áp suất nhiệt độ Sử dụng thiết bị cô quay chân không để điều chỉnh nhiệt độ áp suất Tiến hành cô đặc nhiệt độ 50oC, áp suất 65÷68mbar, tốc độ vòng quay: 40 v/p + Tinh laminaran: Dịch chiết lamminaran từ rong mơ, làm alginic acid cách cho từ từ dung dịch CaCl2 2M vào alginic acid bị kết tủa hoàn toàn dạng alginate calcium Sau hỗn hợp bảo quản điều kiện lạnh 12h để tạo điều kiện cho alginate calcium kết tủa, lắng đọng xuống đáy Sau đó, tiến hành ly tâm loại bỏ alginate calcium thu dung dịch Sau tiếp tục kết tủa loại bỏ fucoidan khỏi dung dịch cách cho vào dung dịch lượng cồn 96º gấp lần thể tích dung dịch bảo quản hỗn hợp điều kiện lạnh 12h Sau đó, tiến hành ly tâm loại bỏ fucoidan, tiếp tục kết tủa laminaran dung dịch cồn 96º với tỷ lệ 55 cồn/dịch 1/1 lưu giữ hỗn hợp điều kiện lạnh 12h Sau đó, tiến hành ly tâm thu laminaran sấy khô 50ºC đến độ ẩm 12% + Bảo quản: Bột laminaran sau sấy khô đến độ ẩm 12% cho vào bao bì PA, hút chân không bảo quản điều kiện lạnh 4ºC 3.3 ĐÁNH GIÁ CHẤT LƯỢNG LAMINARAN THU NHẬN TỪ RONG NÂU S OLYGOCYSTUM 3.3.1 Thử nghiệm sản xuất nước uống bổ sung laminaran Bột laminaran sau sấy khô đến độ ẩm 12% mang nghiền để sản xuất thử nước uống bổ sung laminaran  Sơ đồ quy trình: Bột laminaran Phối trộn Đồng hóa Lắng, lọc Gia nhiệt, rót chai Bài khí, ghép nắp Thanh trùng Làm nguội Sản phẩm Hình 3.23 Quy trình sản xuất nước uống bổ sung laminaran 56  Thuyết minh quy trình: * Phối trộn: Mục đích trình phối trộn điều chỉnh thành phần có hỗn hợp, tạo phân bố đồng cấu tử hỗn hợp nhằm làm tăng giá trị cảm quan cho sản phẩm Các thành phần dùng để phối trộn đồ uống gồm có: Nước: dùng sản xuất thực phẩm phải đạt tiêu chuẩn nước sinh hoạt sản xuất theo quy định Bộ Y tế Mantodextrin: dùng sản xuất đồ uống với tỉ lệ 0.75% Acid citric: dùng sản xuất đồ uống với tỉ lệ 0.07% Caragenan: dùng sản xuất đồ uống với tỉ lệ 0.05% Xantangom: dùng sản xuất đồ uống với tỉ lệ 0.03% Vitamin C: dùng sản xuất đồ uống với tỉ lệ 0.04% Đường sacarose: dùng sản xuất đồ uống với tỉ lệ 17% Hương dâu: Hương tổng hợp dùng sản xuất đồ uống với tỉ lệ 1% * Đồng hóa : Mục đích: Nhằm tạo cho chất phân bố đồng vào dung dịch Quá trình đồng hóa tiến hành nhiệt độ 70oC 10 phút để hỗn hợp đồng * Để lắng, lọc: Mục đích: Nhằm loại chất rắn để dịch nước uống hơn, tăng giá trị cảm quan cho sản phẩm Dịch sau nấu xong để nguội đem làm lạnh 24h để tạo điều kiện cho chất rắn lắng xuống, sau đem lọc * Gia nhiệt, rót chai: Nhằm tạo điều kiện thuận lợi cho trình khí * Bài khí, ghép nắp: Sau rót chai, khí sản phẩm đem ghép nắp 57 * Thanh trùng: Nhằm tiêu diệt số vinh vật, tăng thời gian bảo quản cho sản phẩm Thực trùng theo công thức 5−6−5 80 * Làm nguội: Sau trùng xong tiến hành làm nguội đến nhiệt độ phòng * Sản phẩm: Được bảo quản nhiệt độ phòng, nơi thoáng mát, tránh tiếp xúc trực tiếp với ánh nắng Hình 3.24 Nước uống bổ sung laminaran Gửi mẫu cho viện nghiên cứu ứng dụng công nghệ Nha Trang định lượng laminaran theo phương pháp Angelika cộng sự, 2016 Thu kết hàm lượng laminaran chiếm 82,98%/g chất khô 58 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN Từ kết nghiên cứu trên, cho phép em rút số kết luận sau: 1) Đã xác định thông số thích hợp cho trình chiết laminaran từ rong nâu S oligocystum kỹ thuật chiết khuếch tán làm giầu: nước cất dung môi chiết thích hợp, tỷ lệ cồn/nguyên liệu rong thích hợp cho trình chiết là: 32/1, thời gian chiết thích hợp là: 60 phút, Nhiệt độ chiết: 68÷70oC, pH dung môi: số lần chiết: lần 2) Đã đề xuất quy trình chiết rút laminaran từ rong nâu S oligocystum phương pháp khuếch tán làm giàu 3) Đã đánh giá chất lượng laminaran thu nhận từ rong nâu S oligocystum KIẾN NGHỊ Mặc dù cố gắng trình làm đề tài, song thời gian điều kiện nghiên cứu có giới hạn nên đề tài nhiều hạn chế thiếu sót Do xin đề xuất số ý kiến sau: Cần nghiên cứu thêm phương pháp thu hái bảo quản rong từ lúc tươi để hạn chế tổn thất thành phần quý rong Nghiên cứu thêm biện pháp tẩy trắng sản phẩm mà giữ chất lượng Nghiên cứu phương pháp làm nâng cao hiệu suất thu laminaran Nghiên cứu phương pháp tinh chế laminaran khác Nghiên cứu khả ứng dụng hợp chất laminaran vào lĩnh vực: thực phẩm, dược phẩm, mỹ phẩm… 59 TÀI LIỆU THAM KHẢO TIẾNG VIỆT [1] Nguyễn Hữu Dinh –Huỳnh Quang Năng–Trần Ngọc Bút– Nguyễn Văn Tiến (1993), “Rong biển Việt Nam phần phía bắc” , nhà xuất Nông Nghiệp [2] Trần Thị Luyến – Đỗ Minh Phụng – Nguyễn Anh Tuấn – Ngô Đăng Nghĩa (2003), Chế biến rong biển, nhà xuất Nông Nghiệp [3] L T L Của Trần Thị Văn Thi, Lê Trung Hiếu,(2012)“Các thông số chất lượng Fucoidan số sản phẩm khác phân lập từ rong mơ (Surgassm) Thừa Thiên Huế” [4] Khổng Trung Thắng (2001), “Nghiên cứu hoàn thiện quy tình chiết tách alginate natri từ rong Nâu qua xử lý CaCl2 ứng dụng làm chất mang cố định tế bào lên men dịch chiết dứa” [5] T V S Nguyễn Duy Nhất, Bùi Minh Lý Nguyễn Mạnh Cường (2006), “Phân lập đặc điểm fucoidan từ năm loài rong Mơ miền Trung” [6] TS Lê Như Hậu-Viện (2010), “Tiềm rong biển làm nguyên liệu sản xuất ethanol nhiên liệu Việt Nam” [7] PGS.TS Vũ Ngọc Bội cộng nghiên cứu đề tài ( 2013) “Sàng lọc hoạt tính kháng oxi hóa số loài rong nâu Surgassum Khánh Hòa, Việt Nam” [8] B M L tác giả Đặng Xuân Cường, Vũ Ngọc Bội, Trần Thanh Vân, (2014), “Nghiên cứu chiết Phlorotanin có hoạt tính chống oxi hóa từ rong nâu Surgassum mcclurei phương pháp ngâm chiết có hỗ trợ vi sóng” [9] T T V TITLYANOV E A PHẠM VĂN HUYÊN., “Nguồn Lợi, Sử Dụng Và Nuôi Trồng Rong Ở Việt Nam ,” Tạp chí Khoa học Công nghệ biển, vol 12, no 1, pp 87–98, 2012 [10] Teas J., Pino S., Critchley A., Braverman L E., Thyroid (2004) “surgassum oligocytum” [11] Tiến sĩ Hervé DEMAIS HCM “Tảo biển dinh dưỡng sức khỏe .” 60 TIẾNG ANH [12] B Glucans, “Beta Glucans,” vol 3, no 1, pp 18–21, 2002 [13] L E Rioux, S L Turgeon, and M Beaulieu, “Structural characterization of laminaran and galactofucan extracted from the brown seaweed Saccharina longicruris,” Phytochemistry, vol 71, no 13, pp 1586–1595, 2010 [14] C Devillé, J Damas, P Forget, G Dandrifosse, and O Peulen, “Laminarin in the dietary fibre concept,” J Sci Food Agric., vol 84, no 9, pp 1030–1038, 2004 [15] P Rupérez, O Ahrazem, and a J Leal, “Potential antioxidant capacity of sulfated polysaccharides from the edible brown seaweed Fucus vesiculosus,” J Agric Food Chem., vol 50, no 4, pp 840–845, 2002 [16] X Q Zha et al., “Polysaccharides in Laminaria japonica (LP): Extraction, physicochemical properties and their hypolipidemic activities in diet-induced mouse model of atherosclerosis,” Food Chem., vol 134, no 1, pp 244–252, 2012 [17] S U Kadam et al., “Laminarin from Irish Brown Seaweeds Ascophyllum nodosum and Laminaria hyperborea: Ultrasound Assisted Extraction, Characterization and Bioactivity,” Mar Drugs, vol 13, pp 4270–4280, 2015 [18] J Teas, S Pino, A Critchley, and L E Braverman, “Variability of iodine content in common commercially available edible seaweeds.,” Thyroid, vol 14, no 10, pp 836–841, 2004 [19] http:// http://www.fao.org [20] http://www.hoalinhpharma.com.vn/Desktop.aspx/ND-Cam-nangSK/Dinh- duong-an-toan-hop- ly/Thuc_pham_chong_viem_nhiem_trong_co_the/ [21] http://seaweed.ucg.ie/Nutrition/ChemicalComposition.html [22] http://www.longdinh.com [22] http://www.en.wikipedia.org/wiki/Laminarin -1- PHỤ LỤC Phụ lục 1: Xác định độ ẩm phương pháp sấy khô đến khối lượng không đổi a) Nguyên lý Dùng lượng nhiệt làm bay hết nước mẫu thử, sau dựa vào hiệu số khối lượng mẫu thử trước sau sấy khô, từ tính hàm lượng nước mẫu (%) b) Dụng cụ - Tủ sấy - Cân phân tích, độ xác 10-4g - Cốc sấy - Bình hút ẩm - Đũa thủy tinh c) Tiến hành Rửa cốc nung, để ráo, sau sấy nhiệt độ 103ºC - 105ºC đến khối lượng không đổi Sau giờ, lấy làm nguội bình hút ẩm mang cân sấy đến khối lượng hai lần cân liên tiếp sai khác không 5.10-4g (khối lượng không đổi) Cân xác lượng rong cắt nhỏ vào cốc sấy khô đến khối lượng không đổi Dùng đũa thủy tinh đánh tơi mẫu dàn mẫu đáy cốc Chuyển cốc vào tủ sấy,sấy 60ºC - 80ºC Sau nâng nhiệt độ lên 100ºC 105ºC, sấy liên tục Chú ý, trình sấy sau đảo mẫu lần Lấy mẫu để nguội bình hút ẩm, sau mang cân cân phân tích sấy tiếp nhiệt độ 105ºC đến khối lượng không đổi d) Tính kết Công thức xác định hàm ẩm: w= G1−G2 𝐺1−𝐺 *100 -2- Trong đó: W: độ ẩm nguyên liệu (%) G: khối lượng cốc sau sấy đến khối lượng không (g) G1: khối lượng mẫu cốc trước sấy (g) G2: khối lượng mẫu cốc sau sấy đến khối lượng không đổi (g) Phụ lục 2: Phương pháp xác định hoạt tính khử Fe Theo phương pháp Zhu cộng (2002) với chất chuẩn FeSO4 a) Dụng cụ hóa chất Dụng cụ: - Máy quang phổ UV-VIS - Pipet - Ống nghiệm Hóa chất: - Dung dịch FeSO4 - Sodium phosphate 28mM - K3[Fe(CN)6] 1% - FeCl3 0,1% - CCl3COOH 10% b) Tiến hành Xây dựng đường chuẩn Cách pha đường chuẩn pha dung dịch FeSO4 1mg/1ml sau lấy 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120µl bổ sung 0,5 ml đệm phosphate pH = 7,2 0,2 ml K3[Fe(CN)6] 1% Giữ hỗn hợp 20 phút 50ºC Sau thêm vào 500 µl CCl3COOH 10% với bổ sung nước cất tương ứng cho đủ 1ml 80 µl FeCl3 0,1% Tiếp theo đo bước sóng 655 nm Với kết đo vẽ đường chuẩn đưa phương trình Đo mẫu thực Lấy 500 µl dịch mẫu bổ sung 0,5 ml đệm phosphate pH 7,2 0,2 ml -3- K3[Fe(CN)6] 1% Giữ hỗn hợp 20 phút 50ºC Sau thêm vào 500 µl CCl3COOH 10% với bổ sung 300 µl nước cất 80 µl FeCl3 0,1% Tiếp theo đo bước sóng 655 nm với chất chuẩn FeSO4 So sánh kết mẫu chiết với đường chuẩn có hàm lượng tương FeSO4 Phụ lục 3: Phương pháp xác định hoạt tính chống oxi hóa tổng Theo phương pháp Prieto cộng (1999) với chất chuẩn acid ascorbic a) Nguyên lý Chống oxy hóa tổng xác định theo phương pháp phosphomolybdenum Phương pháp dựa việc giảm hóa trị Mo (VI)-MO (V) hợp chất chống oxy hóa hình thành sau dung dịch phosphate màu xanh (phức hợp Mo (V) pH acid) Dụng cụ hóa chất Dụng cụ: - Máy quang phổ UV-VIS - Pipet - Ống nghiệm Hóa chất: - Dung dịch H2SO4 0,6M - Sodium phosphate 28mM - Ammonium Molybdate 4mM - Acid ascorbic b) Tiến hành Xây dựng đường chuẩn Cách pha đường chuẩn pha dung dịch acid ascorbic 1mg/1ml sau lấy 10, 20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120µl bổ sung nước cất tương ứng cho đủ 1ml sau thêm 3ml dung dịch A vào giữ 90 phút 95ºC Sau đo bước sóng 695nm Với kết đo vẽ đường chuẩn đưa phương trình -4- Đo mẫu thực Lấy 100µl mẫu bổ sung 900µl nước cất thêm 3ml dung dịch A (H2SO4 0,6M, sodium phosphate 28mM ammonium Molybdate 4mM) Hỗn hợp giữ 90 phút 95ºC Sau đo bước sóng 695nm với chất chuẩn acid ascorbic So sánh kết mẫu chiết với đường chuẩn có hàm lượng tương ứng acid ascorbic -5- Phụ lục 4: Bảng 3.1 Kết hàm lượng Laminaran hoạt tính chống oxy hóa, khử sắt số lần chiết Số Khối Nhiệ Tỷ Thời pH Hàm TA RP lần lượng t lệ gian dung lượng (mg acid (mg độ DM/ chiết môi laminaran ascorbic/ Fe2SO4/ (g) chiết NL (phút) (g) g DW) g DW) (˚C) 70 32/1 60 0,0233 10,4034 2,1646 70 32/1 60 0,0138 7,2964 1,2754 70 32/1 60 0,0094 3,7597 0,9626 chiết chiết Bảng 3.2 Kết hàm lượng Laminaran hoạt tính chống oxy hóa, khử sắt thời gian chiết Thời Khối Nhiệt Tỷ lệ số pH Hàm TA RP gian lượng độ chiết DM/ lần dung lượng (mg acid (mg chiết chiết (g) (˚C) NL chiết môi (phút) laminaran ascorbic/ g Fe2SO4/ (g) DW) g DW) 30 70 32/1 0,0207 10,0812 2,06789 60 70 32/1 0,0241 10,9082 2,7044 90 70 32/1 0,0243 9,0918 2,4222 120 70 32/1 0,0248 10,0854 2,2275 150 70 32/1 0,0252 10,6199 2,6796 -6- Bảng 3.3 Kết hàm lượng Laminaran hoạt tính chống oxy hóa, khử sắt tỷ lệ DM/NL Tỷ Khối Nhiệt Thời Số pH Hàm TA RP lệ lượng lần dung lượng (mg acid (mg chiết môi laminaran ascorbic/ Fe2SO4/ (g) g DW) g DW) độ gian DM chiết chiết chiết /NL (g) (˚C) (phút) 30/1 70 60 0,0207 7,3999 2,1390 32/1 70 60 0,0224 10,4096 2,6666 34/1 70 60 0,0219 8,1993 2,4169 36/1 70 60 0,0213 8,8863 2,1547 Bảng 3.4 Kết hàm lượng Laminaran hoạt tính chống oxy hóa , khử sắt pH dung môi pH Khối Nhiệt Thời dung lượng độ Số Tỷ Hàm gian lần lệ lượng TA mg acid mg Fe2SO4/ môi chiết chiết chiết chiết DM/NL laminaran ascorbic/ (g) (˚C) (phút) (g) RP g DW g DW 70 60 32/1 0,0205 10,0766 1,2377 70 60 32/1 0,0256 10,3084 1,8759 8 70 60 32/1 0,0202 9,5900 1,5877 -7- Bảng 3.5 Kết hàm lượng Laminaran hoạt tính chống oxy hóa, khử sắt nhiệt độ chiết Nhiệt Khối độ pH lượng dung chiết chiết môi Thời Số Tỷ Hàm TA RP gian lần lệ lượng (mg acid (mg chiết chiết ascorbic/ Fe2SO4/ (˚C) (g) 50 60 60 70 80 90 (phút) DM/ laminaran NL (g) g DW) g DW) 32/1 0,0215 9,1189 1,9049 60 32/1 0,0235 9,7330 1,9369 60 32/1 0,0253 10,4085 2,1576 60 32/1 0,0228 7,9209 1,7068 60 32/1 0,0221 6,9933 1,6983 ... oligocystum phương pháp khuếch tán làm giàu 2) Đề xuất quy trình chiết rút laminaran từ rong nâu S oligocystum phương pháp khuếch tán làm giàu 3) Đánh giá chất lượng laminaran thu nhận từ rong nâu S. .. tài: Nghiên cứu chiết rút laminaran từ rong nâu S oligocystum phương pháp khuếch tán làm giàu Nội dung đề tài: 1) Xác định thông s thích hợp cho quy trình chiết rút laminaran từ rong nâu S oligocystum. .. FeSO4 2.2.1.3 Phương pháp chiết tinh laminaran * Phương pháp chiết khuếch tán làm giàu Quá trình chiết rút laminaran từ rong mơ thực theo phương pháp chiết khuếch tán làm giầu Về chất phương pháp