Tổng hợp chitosan tan trong nước ứng dụng trong y sinh

Science & Technology Development, Vol 18, No.T4-2015 Tổng hợp chitosan tan nước ứng dụng y sinh   Từ Thị Trâm Anh Hà Thúc Huy Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐHQG-HCM ( Bài nhận ngày 10 tháng 12 năm 2014, nhận đăng ngày 23 tháng 09 năm 2015) TĨM TẮT Chitosan (CS) có độ deacetyl hóa (DDA) cao cho phản ứng với anhydride acetic (Ac2O) tạo thành chitosan có DDA khác phụ thuộc tỉ lệ CS/Ac 2O Cấu trúc phân tử sản phẩm xác định quang phổ hồng ngoại (FT-IR), phổ cộng hưởng từ 13 hạt nhân H NMR, C NMR phân tử lượng xác định phương pháp GPC Từ khóa: chitosan, acetyl hóa, anhydride acetic DDA sản phẩm giảm tăng tỉ lệ CS/Ac2O Sản phẩm có DDA 80 % tan nước với khoảng pH rộng Có thể dùng sản phẩm chitosan tan nước vào nhiều ứng dụng y sinh chế tạo hệ dẫn truyền thuốc chức hóa hạt nano oxide sắt từ MỞ ĐẦU Chitosan vật liệu tương thích sinh học phân hủy sinh học, sản xuất thương mại phản ứng N-deacetyl hóa chitin, thành phần vỏ động vật giáp xác, mơi trường kiềm chitin chitosan copolymer hai monomer 2-acetamido-2-deoxy-D-glucose (N-acetyl glucosamine, GlcNAc) 2-amino-2deoxy-D-glucose (glucosamin, GlcN) thơng qua liên kết β-(1→4) Cấu trúc hóa học chitin chitosan minh họa Hình Độ deacetyl hóa (DDA) sử dụng để phân biệt chitin chitosan Khi độ deacetyl hóa chitin lớn 50 % (phụ thuộc vào nguồn gốc polymer), trở nên tan mơi trường acid gọi chitosan Sự hòa tan xảy q trình proton hóa nhóm -NH2 vị trí C2 đơn vị tái lặp D-glucosamin Chitosan có số tính chất hóa lý đặc điểm sinh học độc đáo bao gồm khả tạo màng, kết dính niêm mạc, kháng khuẩn làm lành vết thương, khả liên kết chất béo, acid béo tăng Trang 170 cường thâm nhập qua màng niêm mạc chitosan cơng nhận loại vật liệu có giá trị cho ứng dụng tiềm phân phối thuốc gen, thẩm thấu qua da, cơng thức thẩm thấu qua niêm mạc cấy ghép [1] Tính khơng tan chitosan dung dịch nước pH > 6,0 giới hạn số ứng dụng tiềm Sau hòa tan mơi trường acid, pH tăng lên đến pH ≈ 6,0, chitosan kết tủa từ dung dịch nước Kết phân phối vào chất lỏng sinh lý trung tính bazơ dẫn đến kết tủa chitosan với hiệu ứng bất lợi Để giải vấn đề này, số nhà nghiên cứu phát triển dẫn xuất chitosan biến tính, cải thiện khả hòa tan dung dịch với phạm vi pH rộng Nhiều phương pháp biến tính để đưa nhóm ưa nước vào chitosan, phổ biến số nhóm amin tứ cấp cacboxymethyl hóa [2] phản ứng ghép với polyettylen glycol [3] TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 18, SỐ T4- 2015 Hình Cấu trúc hóa học chitin chitosan độ deacetyl hóa cao (HDCS) với DDA ≈ 99 %, Mn = 1,5848*104, Mw = 3,0154*104, D = 1,9027*100 NaOH (Merck, Đức), acetic acid (AcOH) (Xilong, Trung Quốc), anhydride acetic (Ac2O) M=102,09g/mol (Scharlau, Tây Ban Nha), acetone (Chemsol, Việt Nam), pyridin (Guangdong Guanghua Sci-Tech Co.Ltd, Trung Quốc), nước cất hai lần Tổng hợp chitosan tan nước (WCS) Một phương pháp khác để cải thiện khoảng pH-tan chitosan giảm kết tinh Điều đạt thơng qua acetyl hóa phần chitosan với anhydride acetic Các sản phẩm thu được, với độ acetyl hóa khoảng 50 %, tăng khả hòa tan nước so với chitosan chưa biến tính Tuy nhiên quy trình áp dụng có hạn chế thời gian phản ứng lâu làm ảnh hưởng đến trọng lượng phân tử Ngồi việc sử dụng ethanol quy trình làm khó kiểm sốt DDA sản phẩm phản ứng ester hóa ethanol anhydride acetic [4, 5] Trong nghiên cứu này, chúng tơi đưa quy trình tổng hợp chitosan tan nước với thời gian phản ứng ngắn hơn, khơng sử dụng ethanol, sản phẩm thu có độ deacetyl hóa cao 50 % có khả tan nước Ảnh hưởng thời gian phản ứng tỉ lệ chitosan/anhydride acetic lên DDA sản phẩm khảo sát PHƯƠNG PHÁP Hóa chất Chitosan (CS) mua từ cơng ty Chitoworld, KCN Tân Tạo, Q Bình Tân, Tp Hồ Chí Minh có DDA ≈ 90 %, kích thước 90 mesh, hàm lượng tro 0,6 % deacetyl hóa thêm phòng thí nghiệm để thu chitosan có HDCS (0,5000 g) hòa tan vào 50,00 mL acetic acid 2,8 % để tạo thành dung dịch chitosan 1,0 % Dung dịch sau lọc chuyển vào bình cầu cổ thể tích 100 mL, khuấy máy khuấy từ nhiệt độ phòng, cho giọt 4,00 mL pyridine vào bình cầu, thêm giọt anhydride acetic với khối lượng tùy theo phản ứng Thời gian phản ứng từ đến 60 phút tùy theo phản ứng Sau phản ứng kết thúc, nhỏ giọt dung dịch bình cầu vào becher chứa 300 mL acetone khuấy làm xuất kết tủa màu trắng đục Quay ly tâm với tốc độ 5000 vòng /phút 15 phút để thu lấy phần kết tủa trắng Rửa kết tủa nhiều lần acetone sau sấy chân khơng 60 oC khối lượng khơng đổi Sản phẩm thu có dạng bột màu trắng ngà bảo quản bình hút ẩm trước phân tích tính chất Quy trình tổng hợp chitosan tan nước tóm tắt Sơ đồ Khảo sát thay đổi DDA theo tỉ lệ mol HDCS/Ac2O HDCS cho phản ứng với anhydride acetic với có mặt xúc tác pyridine theo quy trình mơ tả Sơ đồ 1, khối lượng anhydride acetic thay đổi mơ tả Bảng 1, thời gian phản ứng phút Trang 171 Science & Technology Development, Vol 18, No.T4-2015 Sơ đồ Quy trình tổng hợp chitosan tan nước Bảng Kí hiệu sản phẩm thành phần tác chất phản ứng acetyl hóa chitosan anhydride acetic với tỉ lệ mol HDCS/Ac2O thay đổi Kí hiệu mẫu Tỉ lệ mol HDCS/Ac2O Khối lượng HDCS (g) Số mol HDCS Khối lượng Ac2O (g) Số mol Ac2O WCS_R11 1:1 0,5000 3,1* 10-3 0,3170 3,10* 10-3 WCS_R12 1:2 0,5000 3,1* 10-3 0,6341 6,21* 10-3 WCS_R13 1:3 0,5000 3,1* 10-3 0,9511 9,31* 10-3 WCS_R14 1:4 0,5000 3,1* 10-3 1,2682 12,42* 10-3 Khảo sát thay đổi DDA theo thời gian HDCS cho phản ứng với anhydride acetic với có mặt xúc tác pyridine theo quy trình mơ tả Sơ đồ 1, khối lượng HDCS anhydride acetic 0,5000 0,6341 g (nHDCS:nAc2O = 1:2), thời gian phản ứng thay đổi trình bày Bảng Bảng Kí hiệu sản phẩm điều kiện tiến hành phản ứng acetyl hóa chitosan anhydride acetic với thời gian phản ứng thay đổi Kí hiệu mẫu WCS6 WCS8 WCS10 WCS12 WCS14 WCS16 WCS18 WCS20 WCS40 WCS60 Trang 172 Thời gian phản ứng (phút) 10 12 14 16 18 20 40 60 Xác định cấu trúc hóa học độ deacetyl hóa chitosan WCS Cấu trúc hóa học chitosan sản phẩm phản ứng acetyl hóa chitosan anhydride acetic (WCS) xác định phương pháp quang phổ hồng ngoại (FT-IR) cộng hưởng từ hạt nhân (NMR) Bột chitosan WCS sấy khơ nghiền mịn sau ép viên với KBr Phổ FT-IR ghi nhận máy FT-IR Vertex 70 Độ deacetyl hóa xác định phương pháp FT-IR tính theo cơng thức [6] : A1320 - 0,3822 DDA(%)=100 - A1420 0,03133 (1) A1320 A1420 cường độ hấp thu tương ứng với đỉnh hấp thu số sóng 1320 cm-1 1420 cm-1 TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 18, SỐ T4- 2015 Phổ cộng hưởng từ hạt nhân 1H 13C tiến hành phân tích máy Bruker Ultrashield độ phân giải 500 MHz Dung mơi D2O sử dụng mẫu tan nước, mẫu HDCS sử dụng dung mơi D2O % CD3COOD động: 0,25 M CH3COOH/0,25 M CH3COONa Đầu dò RID Nồng độ dung dịch 1,000 g/L Thể tích dung dịch 20,000 µL Tốc độ dòng 1,000 mL/phút Xác định cấu trúc tinh thể Các mẫu cần khảo sát hòa tan vào nước cất hai lần (pH=7.0) với nồng độ 2,5 mg/mL Độ đục dung dịch xác định máy TURB 350 IR, serien Nr: 212035, USA Phân tích nhiễu xạ tia X mẫu bột chitosan WCS tiến hành máy XRD TRY-WCU K sử dụng xạ Cu Kα (λ=1,54056Å) 2θ từ o đến 45 oC, tốc độ qt o/phút 25 oC Xác định độ tan sản phẩm mơi trường nước KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN Xác định trọng lượng phân tử Xác định cấu trúc hóa học sản phẩm Phân tử lượng chitosan WCS xác định phương pháp sắc kí gel máy GPC 1100 Agilend Cột 2000 ultra.CAL Pha Sản phẩm phản ứng acetyl hóa chitosan anhydride acetic phân tích FT-IR cho kết Hình Bảng Hình Phổ FT-IR HDCS sản phẩm WCS với tỉ lệ CS/Ac2O thay đổi Bảng Các dao động đặc trưng tần số hấp thu tương ứng mẫu chitosan độ deacetyl hóa cao (HDCS) chitosan sau acetyl hóa Dao Động νOH νCH2 νCH νC=O (amide I) δNH (amine) δNH (amide II) δCH2 νC-N δN-H (amide III) Số sóng (cm-1) HDCS 3275 2918 2870 Khơng quan sát thấy 1589 Khơng quan sát thấy 1420 1328 WCS6 3428 2921 2857 1649 1604 (vai nhỏ) 1562 1425 1315 Trang 173 Science & Technology Development, Vol 18, No.T4-2015 Hình Phổ 1H NMR WCS6 Các dao động đặc trưng cho thấy cấu trúc sản phẩm phản ứng acetyl hóa tương tự chitosan ban đầu Tuy nhiên việc xuất thêm dải hấp thu đặc trưng cho nhóm amide chứng tỏ thay phần nhóm amine cấu trúc chitosan nhóm amide thơng qua phản ứng với anhydride acetic khơng thấy tín hiệu cộng hưởng H1 mắc xích GlcNAc đồng thời tín hiệu proton nhóm acetyl 2,03 ppm có cường độ thấp Điều khẳng định lại kết từ phổ FTIR sản phẩm có thay phần nhóm -NH2 chitosan ban đầu thành nhóm –NH-CO-CH3 Kết phân tích 1H NMR HDCS WCS6 trình bày Hình Hình Mũi cộng hưởng 4,51 ppm tương ứng với proton H1 mắc xích N-acetyl glucosamine (GlcNAc), tín hiệu 3,86 ppm ứng với proton H1 mắc xích glucosamine (GlcN) Từ 3,71 đến 3,48 ppm vùng cộng hưởng proton H3-H6 chúng có mật độ điện tử gần giống Mũi cộng hưởng 2,76 ppm tín hiệu proton H2 mắc xích GlcN Các proton nhóm acetyl có mật độ điện tử xung quanh hạt nhân cao nên cộng hưởng vùng từ trường cao, chúng xuất dạng mũi đơn 1,37 ppm [7] Kết 13C NMR WCS6 trình bày Hình cho thấy cấu trúc có loại carbon Tín hiệu 174,6 ppm ứng với carbon nhóm carbonyl (C=O), mũi 101,2 ppm ứng với C1, C4 cộng hưởng 79,0-77,5 ppm, tín hiệu 74,6 ppm ứng với C5, tín hiệu 73,1-71,7 ppm ứng với C3, tín hiệu 60,0 56,4 ppm ứng với C6 C2, C nhóm acetyl cộng hưởng 22,29 ppm [8] Cả phổ 1H 13 C NMR WCS khơng xuất thêm tín hiệu cộng hưởng lạ chứng tỏ phản ứng xảy chọn lọc, anhydride acetic tác kích vào nhóm amine mắc xích GluN Trên phổ 13C có loại carbon carbonyl carbon nhóm amide nên kết luận q trình xảy q trình N-acetyl hóa, khơng có q trình phụ O-acetyl hóa (anhydride acetic tác kích vào nhóm CH2-OH) Khi so sánh với phổ 1H NMR HDCS trình bày Hình 5, tín hiệu cộng hưởng WCS HDCS tương tự HDCS hàm lượng nhóm amide nên Trang 174 TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 18, SỐ T4- 2015 Hình Phổ 1H NMR HDCS Hình Phổ 13C NMR WCS6 Trang 175 Science & Technology Development, Vol 18, No.T4-2015 Ảnh hưởng tỉ lệ tác chất thời gian phản ứng đến DDA sản phẩm Bảng Sự thay đổi DDA sản phẩm theo tỉ lệ mol HDCS/Ac2O WCS_R11 WCS_R12 WCS_R13 WCS_R14 Tỉ lệ mol HDCS/Ac2O 1:1 1:2 1:3 1:4 DDA (%) 99,4 77,7 26,9 1,4 60 56.6 55.9 55 54.5 50 DDA (%) Tên mẫu thời gian chứng tỏ tốc độ phản ứng nhanh, muốn thu sản phẩm có DDA 50 % cần tiến hành phản ứng với thời gian 16 phút 54.0 51.4 49.4 46.5 45 41.6 40 35 DDA sản phẩm WCS với tỉ lệ mol HDCS/Ac2O thay đổi xác định từ phổ FTIR theo cơng thức (2.1) trình bày Bảng Khi tỉ lệ mol 1:1, DDA sản phẩm gần DDA HDCS, lúc chưa xảy phản ứng, lượng anhydride acetic bị thủy phân mơi trường nước Khi tỉ lệ mol CS/Ac2O tăng lên, lượng anhydride nhiều hơn, nên ngồi lượng anhydride bị thủy phân anhydride tham gia phản ứng N-acetyl hóa Tỉ lệ mol HDCS/Ac2O tăng, lượng anhydride tham gia phản ứng N-acetyl hóa nhiều, nhóm amine bị chuyển hóa thành nhóm amide nhiều, DDA giảm Khi số mol Ac2O gấp ba lần số mol chitosan DDA trở nên nhỏ 50 % giảm xuống 1,4 % tỉ lệ 1:4 Khảo sát thời gian phản ứng cho thấy thời gian tăng, DDA giảm (Hình 7) DDA đạt 56,6 % thời gian phản ứng phút, sau 16 phút DDA giảm xuống 50 % sau 60 phút DDA đạt 27,2 % DDA giảm nhanh theo Trang 176 32.1 30 27.2 25 10 20 30 40 50 60 Thời gian (phút) Hình Sự thay đổi DDA theo thời gian phản ứng Tính tan sản phẩm mơi trường nước Tính tan sản phẩm trình bày Bảng Các mẫu có DDA ≤ 77,7 % có độ đục nhỏ, chúng tan nước pH=7,0 Trong đó, HDCS tạo thành pha phân tán khơng tan nước làm cho độ đục tăng gần 100 lần so với mẫu tan Tương tự vậy, mẫu chitosan biến tính với tỉ lệ mol HDCS/Ac2O =1:1 (WCS_R11) có DDA cao tạo thành huyền phù pH=7,0 nên độ đục cao xấp xỉ chitosan ban đầu Như nghiên cứu giá trị DDA lớn để mẫu tan nước pH=7,0 77,7 % TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 18, SỐ T4- 2015 Bảng Tính tan sản phẩm mơi trường nước pH=7,0 Kí hiệu mẫu DDA (%) Độ đục (NTU) Tính tan HDCS 99,9 1068,0± 41,6 Khơng tan WCS_R11 99,4 1048,3± 31,2 Khơng tan WCS_R12 77,7 10,1± 0,6 Tan WCS_R13 26,9 10,0± 0,2 Tan WCS_R14 1,4 13,1± 0,7 Tan WCS6 56,6 9,9± 0,7 Tan WCS8 55,9 10,3± 0,1 Tan WCS10 54,5 11,9± 1,2 Tan WCS12 54,0 12,5± 0,5 Tan WCS14 51,4 13,4± 0,8 Tan WCS16 49,4 12,4± 1,0 Tan WCS18 46,5 9,2± 0,1 Tan WCS20 41,6 14,7± 2,7 Tan WCS40 32,1 13,1± 0,4 Tan WCS60 27,7 12,7± 0,4 Tan Hai yếu tố chi phối khả hòa tan chitosan proton hóa nhóm amino độ kết tinh mẫu Với chitosan có độ deacetyl hóa cao, dự đốn proton hóa ưu đãi, điều dường cân kết tinh cao polymer này, kết cuối tan pH≤6 Khi chitosan tham gia phản ứng acetyl hóa anhydride acetic, hàm lượng nhóm amin giảm (tức DDA giảm) làm cho liên kết hydrogen liên phân tử giảm Mà liên kết hydrogen đóng vai trò quan trọng việc hình thành cấu trúc tinh thể chitosan nên DDA giảm độ kết tinh mẫu giảm Khi DDA giảm đến giá trị cấu trúc tinh thể trở nên lỏng lẽo, q trình solvat hóa diễn dễ dàng chitosan tan nước pH=7 Lập luận kiểm tra lại phân tích nhiễu xạ tia X Kết phân tích XRD mẫu HDCS (DDA = 99,9 %) cho thấy ba đỉnh nhiễu xạ sắc nhọn 2θ=10,2 o, 19,9 o 22,0 o với cường độ cao (Hình 8) thể độ kết tinh cao Trong mẫu WCS_R12 (DDA = 77,7 %) có hai đỉnh nhiễu xạ rộng 2θ=10,2 o 20,5 o với cường độ thấp nhiều thể độ kết tinh thấp Trang 177 Science & Technology Development, Vol 18, No.T4-2015 Hình Giản đồ nhiễu xạ tia X mẫu HDCS (DDA = 99,9 %) WCS_R12 (DDA = 77,7 %) Phân tử lượng Kết phân tích GPC mẫu chitosan HDCS WCS_R12 trình bày Hình 9, Hình 10 Bảng Hình Kết phân tích GPC mẫu HDCS Hình 10 Kết phân tích GPC mẫu WCS_R12 Trang 178 TẠP CHÍ PHÁT TRIỂN KH&CN, TẬP 18, SỐ T4- 2015 Bảng Kết phân tích GPC mẫu HDCS WCS_R12 Mẫu Mn (g/mol) Mw (g/mol) D HDCS 1,5848x104 3,0154x104 1,9027x100 WCS_R12 2,3274x104 8.9449x104 3,8433x100 Sau tham gia phản ứng acetyl hóa với anhydride acetic có mặt xúc tác pyridine, phân tử lượng chitosan tăng hai ngun nhân Thứ mạch chitosan có thay nhóm amine thành nhóm amide có khối lượng lớn Thứ hai hàm lượng liên kết hydrogen chitosan ban đầu nhiều sản phẩm nên mạch polymer co cụm lại, chúng phân bố lỗ xốp có kích thước nhỏ pha tĩnh, chitosan sau acetyl hóa phân bố vào lỗ xốp lớn Phân tử lượng sản phẩm đạt khoảng 2,33x104 đáp ứng u cầu nhiều lĩnh vực ứng dụng KẾT LUẬN Phản ứng acetyl hóa chitosan anhydride acetic có mặt xúc tác pyridine thực Cấu trúc sản phẩm có thay phần nhóm amine mạch nhóm amide xác định FT-IR 1H, 13C NMR Thời gian phản ứng tối thiểu để thu chitosan tan nước rút ngắn so với tài liệu tham khảo khác Có thể điểu khiển DDA sản phẩm thu cách thay đổi tỷ lệ mol HDCS/Ac2O thời gian phản ứng Khi tỷ lệ mol HDCS/Ac2O thời gian phản ứng tăng, DDA giảm Sản phẩm có DDA ≤ 77,7 % tan nước pH≤7 Phản ứng acetyl hóa giúp mở rộng khoảng pH hòa tan chitosan DDA tối đa để chitosan tan nước (77,7 %) cao so với cơng bố trước Phản ứng khơng làm giảm phân tử lượng ngun liệu đầu Sản phẩm chitosan thu có DDA phân tử lượng cao quan trọng tan mơi trường nước pH=7 Điều khắc phục hạn chế tính tan chitosan mở vơ số ứng dụng, đặc biệt ứng dụng mơi trường sinh lý Trang 179 Science & Technology Development, Vol 18, No.T4-2015 Synthesis of water-soluble chitosan for biomedical applications   Tu Thi Tram Anh Ha Thuc Huy University of Science, VNU-HCM ABSTRACT Highly deacetylated chitosan (CS) reacted with anhydride acetic (Ac2O) to produce chitosan with various degree of deacetylation (DDA) depending on the CS/Ac2O ratios The structure of products 13 was characterized by FT-IR, H NMR, C NMR, and the molecular weight was identified by GPC The DDA of products decreases as the CS/Ac2O ratio increases The products with less than 80 % DDA were soluble in water with a wide pH range The water-soluble chitosan can be used in many biomedical applications such as manufacturing drug delivery systems or functionalized iron oxide nanoparticles TÀI LIỆU THAM KHẢO [1] M Rinaudo, Chitin and chitosan: Properties and applications, Prog Polym Sci., 31, 603632 (2006) [2] N.T An, D.T.T, N.T Dong, P.L Dung, Water-soluble N-carboxymethylchitosan derivatives: Preparation, characteristics and its application, Carbohydrate Polymers, 75, 489-497 (2009) [3] Y Hu, H.J, C Xu, Y Wang, K Zhu, Preparation and characterization of poly(ethylene glycol)-g-chitosan with waterand organosolubility, Carbohydrate Polymers, 61, 472-479 (2005) [4] S Lu, X.S, D Cao, Y Chen, Preparation of water-soluble chitosan, Journal of Applied Polymer Science, 91, 3497–3503 (2004) [5] A Ioannis, V.V.K Sogias, A.C Williams, Exploring the factors affecting the solubility Trang 180 of chitosan in water, Macromol Chem Phys, 211, 426–433 (2010) [6] J Brugnerotto, J.L., F.M Goycoole, An infrared investigation in relation with chitin and chitosan characterization, Polymer, 42, 3569-3580 (2001) [7] M Lavertu, Z Xia, A.N Serreqi, M Berrada, A validated 1H NMR method for the determination of the degree of deacetylation of chitosan, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 32, 1149-1158 (2003) [8] M.L Duarte, M.C.F, M.R Marva˜o, Determination of the degree of acetylation of chitin materials by 13C CP/MAS NMR spectroscopy, International Journal of Biological Macromolecules, 28, 359-363 (2001)  ... ethanol anhydride acetic [4, 5] Trong nghiên cứu n y, chúng tơi đưa quy trình tổng hợp chitosan tan nước với thời gian phản ứng ngắn hơn, khơng sử dụng ethanol, sản phẩm thu có độ deacetyl hóa cao... 18, No.T4-2015 Sơ đồ Quy trình tổng hợp chitosan tan nước Bảng Kí hiệu sản phẩm thành phần tác chất phản ứng acetyl hóa chitosan anhydride acetic với tỉ lệ mol HDCS/Ac2O thay đổi Kí hiệu mẫu Tỉ... phản ứng tăng, DDA giảm Sản phẩm có DDA ≤ 77,7 % tan nước pH≤7 Phản ứng acetyl hóa giúp mở rộng khoảng pH hòa tan chitosan DDA tối đa để chitosan tan nước (77,7 %) cao so với cơng bố trước Phản ứng