Nghiên cứu xác định levofloxacin trong dược phẩm và nước tiểu bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao

ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH LEVOFLOXACIN TRONG DƢỢC PHẨM VÀ NƢỚC TIỂU BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội – 2017 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH LEVOFLOXACIN TRONG DƢỢC PHẨM VÀ NƢỚC TIỂU BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Chuyên ngành: HÓA PHÂN TÍCH Mã số: 60440118 NGƢỜI HƢỚNG DẪN KHOA HỌC: TS NGUYỄN XUÂN TRƢỜNG PGS.TS TỪ BÌNH MINH Hà Nội – 2017 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian nghiên cứu học tập em hoàn thành luận văn cao học với đề tài “Nghiên cứu xác định Levofloxacin dƣợc phẩm nƣớc tiểu sắc ký lỏng hiệu cao" dƣới hƣớng dẫn bảo hai thầy TS Nguyễn Xuân Trƣờng, PGS TS Từ Bình Minh thầy cô, anh chị, bạn môn Hóa phân tích Với lòng biết ơn sâu sắc, em xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Xuân Trƣờng PGS TS Từ Bình Minh giao đề tài, tận tình hƣớng dẫn tạo điều kiện thuận lợi giúp em hoàn thành luận văn Em xin chân thành cám ơn nghiên cứu sinh Nguyễn Thị Minh Diệp hỗ trợ em trình thực đề tài Em xin gửi lời cảm ơn chân thành tới thầy cô môn Hóa phân tích, bạn học viên lớp cao học K25 tạo điều kiện, giúp đỡ em thời gian thực đề tài Hà Nội, ngày 17 tháng năm 2017 Học viên Nguyễn Thị Thu Hà MỤC LỤC LỜI CẢM ƠN DANH MỤC HÌNH DANH MỤC BẢNG DANH MỤC CHỮ CÁI VIẾT TẮT LỜI MỞ ĐẦU CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan Levofloxacin 1.1.1.Cấu trúc tính chất lý – hóa Levofloxacin 1.1.2 Tính chất dƣợc học Levofloxacin 1.1.3.Vai trò ứng dụng Levofloxacin 1.1.4.Sự tƣơng tác Levofloxacin với loại thuốc khác 1.2.Một số phƣơng pháp xác định Levofloxacin 1.2.1.Phƣơng pháp điện hóa 1.2.2.Phƣơng pháp phân tích quang học 1.2.3.Phƣơng pháp miễn dịch huỳnh quang phân cực (FPIA) 1.2.4.Phƣơng pháp sắc ký lỏng 1.3.Các phƣơng pháp xử lý mẫu phẩm sinh học 11 1.3.1.Kỹ thuật chiết lỏng – lỏng 11 1.3.2.Kỹ thuật chiết pha rắn 12 CHƢƠNG II: THỰC NGHIỆM 17 2.1 Mục tiêu nghiên cứu 17 2.2 Đối tƣợng nội dung nghiên cứu 17 2.2.1 Đối tƣợng 17 2.2.2 Nội dung nghiên cứu 18 2.3 Phƣơng pháp nghiên cứu 19 2.3.1 Phƣơng pháp phân tích 19 2.3.2 Phƣơng pháp định lƣợng Levofloxacin thuốc 19 2.3.3 Phƣơng pháp xử lý mẫu 20 2.4 Xử lý số liệu 21 2.5 Thiết bị, dụng cụ hóa chất dùng nghiên cứu 21 2.5.1 Thiết bị 21 2.5.2 Dụng cụ 21 2.5.3 Hóa chất, chất chuẩn 22 2.6 Các điều kiện đánh giá độ tin cậy phƣơng pháp phân tích 23 2.6.1 Độ đặc hiệu 23 2.6.2 Giới hạn phát (LOD), giới hạn định lƣợng (LOQ) 23 2.6.3 Độ chụm (độ lặp lại) phƣơng pháp 23 2.6.4 Độ (độ thu hồi) phƣơng pháp 24 CHƢƠNG III: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 25 3.1 Khảo sát điều kiện phân tích Levofloxacin thiết bị HPLC 25 3.1.1 Bƣớc sóng hấp thụ cực đại Levofloxacin 25 3.1.2 Khảo sát pha động 25 3.1.3 Giới hạn phát (LOD) giới hạn định lƣợng(LOQ) thiết bị 33 3.1.4 Xây dựng đƣờng chuẩn đinh lƣợng Levofloxacin 34 3.2 Phân tích Levofloxacin dƣợc phẩm 36 3.2.1 Xây dựng quy trình định lƣợng Levofloxacin dƣợc phẩm 40 3.3.2 Độ lặp lại trình xử lý mẫu 40 3.3.3 Phân tích số mẫu thuốc thị trƣờng 41 3.3 Tối ƣu điều kiện quy trình chiết nhằm xác định Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu 43 3.3.1 Khảo sát quy trình chiết lỏng - lỏng 43 3.3.2 Khảo sát quy trình chiết pha rắn 55 3.4 Phân tích mẫu thực tế 67 KẾT LUẬN 69 TÀI LIỆU THAM KHẢO 71 A.TIẾNG VIỆT 71 B.TIẾNG ANH 71 DANH MỤC HÌNH Hình 1: Công thức cấu tạo Levofloxacin Hình 1: Phổ hấp thụ Levofloxacin vùng UV-Vis ………………… 24 Hình 2: Sắc kí đồ Levofloxacin với hệ pha động khác 26 Hình 3: Ảnh hƣởng tỷ lệ pha động đến trình định lƣợng Levofloxacin 27 Hình 4: Ảnh hƣởng pH dung dịch đệm đến trình định lƣợng Levofloxacin 28 Hình 5: Ảnh hƣởng nồng độ dung dịch đệm đến trình định lƣợng Levofloxacin 29 Hình 6: Sắc ký đồ Levofloxacin thay đổi tốc độ dòng khác 30 Hình 7: Đƣờng chuẩn Levofloxacin 32 Hình 8: Ảnh hƣởng dung môi chiết đến trình định lƣợng Levofloxacin dƣợc phẩm 34 Hình 9: Sắc ký đồ Levofloxacin mẫu dƣợc phẩm sử dụng dung môi chiết khác 35 Hình 10: Ảnh hƣởng thời gian rung siêu âm đến trình định lƣợng Levofloxacin dƣợc phẩm 36 Hình 11: Sắc ký đồ Levofloxacin mẫu dƣợc phẩm thay đổi thời gian rung siêu âm 36 Hình 12: Độ lặp lại trình xử lý mẫu thuốc 38 Hình 13: Sắc ký đồ phân tích Levofloxacin số mẫu dƣợc phẩm thị trƣờng 40 Hình 14: Sắc ký đồ mẫu nƣớc tiểu sử dụng dung môi chiết khác kĩ thuật chiết lỏng-lỏng 42 Hình 15: Ảnh hƣởng dung môi chiết đến độ thu hồi Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu theo quy trình chiết lỏng – lỏng 43 Hình 16: Ảnh hƣởng tỷ lệ mẫu : đệm phosphat đến độ thu hồi Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu theo quy trình chiết lỏng – lỏng 44 Hình 17: Ảnh hƣởng pH dung dịch đệm đến độ thu hồi Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu theo quy trình chiết lỏng – lỏng 45 Hình 18: Ảnh hƣởng thể tích dung môi chiết đến độ thu hồi Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu theo quy trình chiết lỏng – lỏng 46 Hình 19: Sắc ký đồ Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu tự tạo theo quy trình chiết lỏng – lỏng tối ƣu 47 Hình 20: Sắc ký đồ Levofloxacin nƣớc tiểu sử dụng quy trình chiết lỏnglỏng 48 Hình 21: Đƣờng chuẩn Levofloxacin theo phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 50 Hình 22: Sắc ký đồ mẫu nƣớc tiểu sử dụng dung môi rửa tạp khác kĩ thuật chiết pha rắn 54 Hình 23: Sắc ký đồ mẫu nƣớc tiểu sử dụng dung môi rửa giải khác kĩ thuật chiết pha rắn 56 Hình 24: Ảnh hƣởng dung môi rửa giải đến độ thu hồi Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu theo quy trình chiết pha rắn 57 Hình 25: Sắc ký đồ Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu tự tạo theo quy trình chiết pha rắn tối ƣu 59 Hình 26: Sắc kí đồ Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu kĩ thuật chiết pha rắn 60 Hình 27: Đƣờng chuẩn Levofloxacin theo phƣơng pháp chiết pha rắn 62 Hình 28 Kết phân tích levofloxacin nƣớc tiểu số bệnh nhân với quy trình (a) lỏng – lỏng (b) chiết pha rắn 65 DANH MỤC BẢNG Bảng 1: Thông tin số loại thuốc chứa Levofloxacin thị trƣờng 16 Bảng 1: Sự phụ thuộc diện tích pic vào tốc độ dòng pha động 30 Bảng 2: Giới hạn phát (LOD) Levofloxacin 31 Bảng 3: Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng đồ Levofloxcin 31 Bảng 4: Điều kiện phân tích Levofloxacin phƣơng pháp HPLC 33 Bảng 5: Thông tin mẫu thuốc thị trƣờng 38 Bảng 6: Kết phân tích số mẫu thuốc chứa LEV thị trƣờng 40 Bảng 7: Điều kiện chiết tối ƣu quy trình chiết lỏng – lỏng 46 Bảng 8: Giới hạn phát giới hạn định lƣợng phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 49 Bảng 9: Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng đồ Levofloxcin theo phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 49 Bảng 10: Kết khảo sát độ chụm phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 51 Bảng 11: Kết khảo sát độ phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng 52 Bảng 12: Ảnh hƣởng cột chiết pha rắn đến độ thu hồi chất chuẩn Levofloxacin theo quy trình chiết pha rắn 53 Bảng 13: Ảnh hƣởng dung môi rửa tạp đến hiệu suất thu hồi Levofloxacin mẫu nƣớc tiểu theo quy trình chiết pha rắn 55 Bảng 14: Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng đồ Levofloxcin theo phƣơng pháp chiết pha rắn 61 Bảng 15: Kết khảo sát độ chụm phƣơng pháp chiết pha rắn 63 Bảng 16: Kết khảo sát độ phƣơng pháp chiết pha rắn 63 Bảng 17: Kết phân tích mẫu nƣớc tiểu bệnh nhân đƣợc trình bày bảng 64 Bảng 14: Sự phụ thuộc diện tích pic vào nồng đồ Levofloxcin theo phương pháp chiết pha rắn Nồng độ (ppm) Spic (mAu) 0,09 28813 0,5 106250 231907 426740 1081593 10 2153110 20 4199353 50 10457393 70 14556230 100 21398619 61 Diện tích pic (mAu) Đƣờng chuẩn Levofloxacin theo phƣơng pháp chiết pha rắn 25000000 y = 207778x + 26100 R² = 0,9999 20000000 15000000 10000000 5000000 0 20 40 60 Nồng độ (ppm) 80 100 120 Hình 27: Đường chuẩn Levofloxacin theo phương pháp chiết pha rắn Chất phân tích mẫu nƣớc tiểu có khoảng tuyến tính rộng từ 0,09ppm- 100ppm với hệ số tƣơng quan R2 = 0,9999 Phƣơng trình hồi quy Levofloxacin có dạng: Y = 207778X + 26100 Trong Y diện tích pic, X nồng độ Levofloxacin Sử dụng phƣơng pháp thống kê kiểm tra thấy Ftính< Fbảng nghĩa sai khác giá trị hệ số a khác có nghĩa với giá trị độ tin cậy 95% hay phƣơng pháp không mắc sai số hệ thống d Đánh giá độ chụm phƣơng pháp Để đánh giá độ chụm phƣơng pháp, tiến hành làm lặp lại lần để khảo sát độ lặp lại Levofloxacin mức nồng độ48,4ppm Kết đƣợc trình bày bảng sau: 62 Bảng 15: Kết khảo sát độ chụm phương pháp chiết pha rắn Lần chiết Nồng độ Lev thêm chuẩn (ppm) 48,4 48,4 48,4 Nồng độ Lev thu hồi (ppm) 44,53 45,54 45,21 Hiệu suất thu hồi (%) 92,0% 94,1% 93,4% RSD % 1,15% Từ kết bảng cho thấy, độ lệch chuẩn tƣơng đối RSD < 3% Tức mức độ dao động kết thử nghiệm độc lập quanh giá trị trung bình chấp nhận đƣợc Điều chứng tỏ phƣơng pháp chiết pha rắn có độ lặp lại tốt e Đánh giá độ phƣơng pháp Để đánh giá độ phƣơng pháp, tiến hành khảo sát chiết mẫu trắng thêm chuẩn mức nồng độ với quy trình chiết pha rắn tối ƣu nhƣ nêu mục 3.3.2.3-b Kết đƣợc trình bày bảng sau: Bảng 16: Kết khảo sát độ phương pháp chiết pha rắn Tên Mức Mức Mức Nồng độ Lev chuẩn thêm (ppm) 19,36 48,4 96,8 Nồng độ Lev thu hồi (ppm) 17,99 45,54 90,70 Hiệu suất thu hồi (%) 92,9% 94,1% 93,7% Hiệu suất thu hồi trung bình (%) 93,57% Các kết bảng hiệu suất thu hồi Levofloxacin cao từ, cho thấy phƣơng pháp chiết pha rắn có độ cao Từ kết nghiên cứu thu đƣợc, thấy quy trình phân tích đáp ứng đƣợc yêu cầu độ chụm độ phân tích lƣợng vết hợp chất hữu mẫu phức tạp Quy trình chiết chiết pha rắn có ƣu điểm trội chiết lỏng – lỏng thời gian xử lý mẫu ngắn, độ thu hồi cao, khoảng tuyến tính rộng Cả hai quy trình có độ lệch chuẩn tƣơng đối chất phân tích RSD 63 < 3%, độ thu hổi chất phân tích từ 86,57% - 94,1% Do đó, áp dụng hai quy trình chiết để phân tích mẫu thực tế 3.4 Phân tích mẫu thực tế Áp dụng hai quy trình xử lý mẫu vào phân tích số mẫu nƣớc tiểu bệnh nhân đƣợc tiêm truyền Cravit hàm lƣợng Levofloxacin 750mg/150ml, truyền lần/ ngày, lần chai 150ml kết thu đƣợc trình bày nhƣ bảng hình sau: Bảng 17: Kết phân tích mẫu nước tiểu bệnh nhân trình bày bảng Kết phân tích (ppm) Lỏng-lỏng Chiết pha rắn STT Tên bệnh nhân Giờ lấy sau truyền (h) Nguyễn Văn A 10 33,06 ± 0,08 34,68 ± 0,13 Phạm Văn C 10 34,90 ± 0,12 36,12 ± 0,07 Chu Văn D 12 30,68 ± 0,11 34,02 ± 0,07 Nguyễn Huy H 61,30 ± 0,09 65,56 ± 0,10 Phạm Thu Q 31,66 ± 0,10 32,46 ± 0,09 64 (a) (b) Hình 28 Kết phân tích levofloxacin nước tiểu số bệnh nhân với quy trình (a) lỏng – lỏng (b) chiết pha rắn Tất mẫu sau xử lý để xác định hàm lƣợng Levoflocaxin nhận thấy rằng, phƣơng pháp phân tích HPLC kết hợp với chiết lỏng – lỏng chiết pha rắn cho kết tƣơng đồng Tuy nhiên Do độ thu hồi HPLC kết hợp với chiết pha rắn tốt nên thu đƣợc hàm lƣợng Lev cao Mặt khác, kết phân tích tùy bệnh nhân thời gian lấy mẫu sau truyền hàm lƣợng Lev đào thải qua nƣớc tiểu khác Do đó, dựa việc định lƣợng Lev, trƣờng hợp bệnh nhân cụ thể nhận đƣợc phác đồ điều trị kháng sinh phù hợp, hiệu an toàn 65 KẾT LUẬN Qua nghiên cứu thực nghiệm, với mục tiêu đặt nghiên cứu xây dựng phƣơng pháp đinh ̣ lƣơ ̣ng kháng sinh Levofloxacin mẫu thuốc mẫu nƣớc tiểu bằ ng HPLC; ứng du ̣ng phân tích mô ̣t số mẫu thuốc thành phẩm thị trƣờng mẫu nƣớc tiểu ngƣời sau sử dụng thuốc chứa kháng sinh Levofloxacin, luận văn thu đƣợc số kết sau đây: -Khảo sát lựa chọn điều kiện phân tích hệ thống HPLC Shimadzu 10Avp với detector PDA bƣớc sóng hấp thụ 295nm, cột pha đảo cột C18 MRCODS (6 × 250 mm, 15 μm) Pha động gồm ACN-đệm phosphat 20 mM pH=3,5 (30:70), tốc độ dòng pha động 0,8 ml/phút chế độ rửa giải đẳng dòng, thể tích bơm mẫu 20µl Xây dựng đƣờng chuẩn cho LEV khoảng nồng độ 0,05150ppm, hệ số tƣơng quan R2 = 0,9999 LOD LEV 0,015; LOQ LEV 0,05ppm -Xây dựng quy trình xử lý mẫu dƣợc phẩm Phân tích mẫu thuốc lƣu hành thị trƣờng Hà Nội đƣợc thu thập ngẫu nhiên cửa hàng thuốc Kết cho thấy, sai khác hàm lƣợng chất phân tích tìm thấy hàm lƣợng ghi nhãn tƣơng đối nhỏ (< 6%) Nhƣ vậy, quy trình phân tích đáng tin cậy phù hợp để xác định hàm lƣợng LEV dƣợc phẩm -Tối ƣu hóa quy trình xử lý mẫu phƣơng pháp chiết lỏng – lỏng chiết pha rắn Phƣơng pháp xử lý mẫu cho độ thu hồi chất nằm khoảng 86,57% - 94,1% Xây dựng đƣờng chuẩn cho LEV khoảng 0,1-20ppm chiết lỏng – lỏng khoảng 0,09-100ppm chiết pha rắn Tất phƣơng trình hồi quy cho hệ số tƣơng quan R2> 0,9997 Với chiết lỏng – lỏng, MDL LEV 0,03ppm, MQL LEV 0,1ppm Với chiết pha rắn, MDL LEV 0,027ppm, MQL LEV 0,09ppm Các giá trị RSD% nhỏ 2% nằm giới hạn cho phép 66 -Phân tích mẫu nƣớc tiểu thu thập số bệnh nhân truyền thuốc chứa LEV Trung tâm chống độc, Bệnh viện Bạch Mai Kết phân tích cho thấy sử dụng quy trình chiết pha rắn thu đƣợc hàm lƣợng Levoflocaxin cao phù hợp với kết khảo sát Từ kết thu đƣợc, nhận thấy phƣơng pháp sắc ký lỏng hiệu cao phù hợp với việc xác định hàm lƣợng Levofloxacin mẫu dƣợc phẩm mẫu nƣớc tiểu Phƣơng pháp áp dụng viện kiểm nghiệm, bệnh viện địa phƣơng để phục vụ việc phát thuốc giả bác sĩ có có pháp đồ điều trị với bệnh nhân thông qua lƣợng Levofloxacin xác định đƣợc 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO A.TIẾNG VIỆT Dƣợc điển Việt Nam IV, (2009), nhà xuất Y học, Hà Nội, PL 9.6 Đào Thị Vân Khánh, (2015), Xác định đồng thời số kháng sinh quinolon tôm nước nuôi tôm phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), Luận văn Thạc sĩ, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên – ĐHQG Hà Nội Phạm Luận (2014), Phương pháp phân tích sắc ký chiết tách, Nhà xuất bách khoa Hà Nội, Hà Nội Nguyễn Thu Thủy (2009), Nghiên cứu xác định Ciprofloxacin (CIP) số dược phẩm phương pháp điện hóa, Luận văn Thạc sĩ, Trƣờng Đại học Khoa học Tự nhiên – ĐHQG Hà Nội Nguyễn Văn Ri (2011), Các phương pháp tách sắc ký, Sách chuyên đề phân tích cho cao học, Đại học Khoa học Tự nhiên – Đại học Quốc gia Hà Nội Tạ Thị Thảo (2010), Bài giảng chuyên đề thống kê hóa phân tích, ĐH Quốc gia Hà Nội Trần Cao Sơn, (2010), Thẩm định phương pháp phân tích hóa học & vi sinh vật, Nhà xuất Khoa học Kỹ thuật TS Phùng Thị Vinh (2005), Nghiên cứu phương pháp chiết xuất định lượng Norfloxacin dịch sinh học, Đề tài cấp bộ, Viện kiểm nghiệm-Bộ y tế B.TIẾNG ANH A Espinosa-Mansilla, A Munoz de la Pẽna, D Gonzãlez Gómez, F Salinas López (2006), “Determination of fluoroquinolones in urine and serum by using high performance liquid chromatography and multiemission scan fluorimetric detection”, Talanta, 68, pp.1215–1221 68 10 A.Radi, Z El – Sherif (2002), “Determination of levofloxacin in human urine by adsorptive square – wave anodic stripping voltammetry on a glassy carbon electrode”, Talanta, 58, pp.319-324 11 Brian R Overholser, Michael B Kays, Kevin M Sowinski (2003), “Determination of gatifloxacin in human serum and urine by highperformance liquid chromatography with ultraviolet detection”, Journal of Chromatography B, 798, pp.167–173 12 Ester Caro, Rosa M Marcé, Peter A.G Cormack, David C Sherrington, Francesc Borrull (2006), “Novel enrofloxacin imprinted polymer applied to the solid-phase extraction of fluorinated quinolones from urine and tissue samples”, Analytica Chimica Acta, 562, pp.145-151 13 FA Wong, SJ Juzwin, SC Flor (1996), “Rapid stereospecific high-performance liquid chromatographic determination of levofloxacin in human plasma and urine”, Journal of Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 15, pp.765-71 14 F Lombardi, R Ardemagni, V Colzani and M Visconti (1992), “Highperformance liquid chromatographic determination of rufloxacin and its main active metabolite in biological fluids”, Journal of Chromatography, 516, pp 129-134 15 Francisco J Lara, Monsalud del Olmo-Iruela, Ana M García-Campaña (2013), “On-line anion exchange solid-phase extraction coupled to liquid chromatography with fluorescence detection to determine quinolones in water and human urine”, Journal of Chromatography A, 1310, pp 91–97 16 Gaoli Hea, Beining Guoa, Jicheng Yua, Jing Zhanga, Xiaojie Wua, Guoying Cao, Yaoguo Shia and Cheng-yuan Tsaic (2014), “Determination of a novel nonfluorinated quinolone, nemonoxacin, in human feces and its glucuronide conjugate in human chromatography– triple urine and feces quadrupole Chromatography, 29, pp.739-748 69 mass by high-performance spectrometry”, liquid Biomedical 17 Giuseppe Carlucci (1998), “Analysis of fluoroquinolones in biological fluids by highperformance liquid chromatography”, Journal of Chromatography A, 812, pp 343–367 18 Grace K Kim, (2010), "The risk of fluoroquilone-induced tendinophathy and tendon rupture”, The Journal of Clinical and Aesthetic Dermatology, 3(4), pp.49-54 19 Hanwen Sun, Hongliu Wang, Xusheng Ge and Xiaolan Qin (2011), “Simultaneous determination of the combined drugs of ceftriaxone sodium, metronidazole, and levofloxacin in human urine by high-performance liquid chromatography”, International Journal of Science Innovations and Discoveries, 26, pp.216-225 20 Hing-Biu Lee, Thomas E Peart, M Lewina Svoboda (2007), “Determiantion of Ofloxacin, Norfloxacin and Ciprofloxacin in sewage by selective solid-phase extraction, liquid chromatography with fluorescence detection and liquid chromatography-tadem mass spectrometry”, Journal of Chromatography A, 1139, pp.45-52 21 Hiroyuki Aoki, Yumi Ohshima , Makoto Tanaka, Osamu Okazaki, Hideo Hakusui (1994), “High-performance liquid chromatographic determination of the new quinolone antibacterial agent DU-6859a in human serum and urine using solid-phase extraction with photolysis-fluorescence detection”, Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications, 660, pp 365374 22 Hongyuan Yan and Fengxia Qiao (2014), “Rapid screening of ofloxacin enantiomers in human urine by molecularly imprinted solid-phase extraction coupled with ligand exchange chromatography”, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 37, pp.1237–1248 70 23 I Ahmad, R Bano, M.A Sheraz, S Ahmed, T Mirza, S.A Ansari (2013), “Photodegradation of levofloxacin in aqueous and organic solvents: a kinetic study”, Acta Pharmaceutica, 63, pp.223-229 24 I A Shanin, A R Shaimardanov, Nguen Ti Diu Thai, S A Eremin (2015), “Determination of fluoroquinolone antibiotic levofloxacin in urine by fluorescence polarization immunoassay”, Journal of Analytical Chemistry, 70, pp.712-717 25 J Macek, P Ptácek, “Determination of Ofloxacin in human plasma using highperformance liquid chromatography and fluorescence detection”, Journal of Chromatography B, 673, pp.316-319 26 Juan Antonio Ocan˜a Gonza´ lez, Manuel Callejo´n Mocho´ n, Francisco Jose´ Barraga´ n dela Rosa (2000), “Spectrofluorimatric determination of levofloxacin in tablets, human urine and serum”, Talanta, 52, pp.49-56 27 Ke He, Lee Blaney (2014), “Systematic optimization of an SPE with HPLCFLD method for fluoroquinolone detection in wastewater”,Journal of Hazardous Materials, 282, pp.96-105 28 Klaus Borner and Ellen Borner (1992), “Determination of sparfloxacin in serum and urine by highperformance liquid chromatography”, Journal of Chromatography, 579, pp 285-289 29 Krupa M Kothekara , Balasundaram Jayakara , Amit P Khandharb , Rajnish K Mishrac (2007), “Quantitative Determination of Levofloxacin and Ambroxol hydrochloride in Pharmaceutical Dosage Form by ReversedPhase High Performance Liquid Chromatography”, Eurasian Journal of Analytical Chemistry, 2, pp.21-31 30 Lee SJ, Desta KT, Eum SY, Dartois V, Cho SN, Bae DW, Shin SC (2015), “Development and validation of LC-ESI-MS/MS method for analysis of moxifloxacin and levofloxacin in serum of multidrug-resistant tuberculosis 71 patients: Potential application as therapeutic drug monitoring tool in medical diagnosis”, Journal of Chromatography B,1009-1010, pp.138-143 31 Makoto Tanaka, Yumi Oshima, Hiroyuki Aoki, Hideo Hakusui (1995), “Determination of a new fluoroquinolone antimicrobial agent, (S)-10-[(S)-(8amino-6-azaspiro[3,4]octan-6-yl)]-9-fluoro-2,3- dihydro-3-methyl-7-oxo-THpyddo[1,2,3-de][1,4]benzoxazine- 6-carboxylic acid hemihydrate, DV-7751a, in human serum and urine using solid-phase extraction and high-performance liquid chromatography with fluorescence detection”, Journal of Chromatography B, 664, pp.401-407 32 Manimala M., Ravindra Reddy K and Hepcykala Rani D (2013), “Development and validation of novel UV spectrophotometric determination of levofloxacin hemi hydrate in bulk and pharmaceutical dosage forms”, Der Pharma Chemica, pp.47-50 33 MARCELLE O KOEPPE, RODRIGO CRISTOFOLETTI,1 EDUARDO F FERNANDES, SILVIA STORPIRTIS, HANS E JUNGINGER, SABINE KOPP,4 KAMAL K MIDHA, VINOD P SHAH, SALOMON STAVCHANSKY, JENNIFER B DRESSMAN, DIRK M BARENDS, (2011), “Biowaiver Monographs for Immediate Release Solid Oral Dosage Forms: Levofloxacin”, Journal of Pharmaceutical Sciences, 100(5), pp.16281636 34 Marika Kamberi , Perparim Kamberi , Shigeyuki Nakano (2000), “Determination of grepafloxacin in plasma and urine by a simple and rapid high-performance liquid chromatographic method”, Journal of Chromatography B, 741, pp.295–300 35 M.D Prat, J Benito, R Compañó, JA Hernández-Arteseros, M Granados (2004), “Determination of quinolones in water samples by solid-phase extraction and liquid chromatography with fluorimetric Chromatography A, 1041, pp.27-33 72 detection”, Journal of 36 Michela Sturini, Andrea Speltini, Federica Maraschi, Elisa Rivagli, Antonella Profumo (2010), fluoroquinolones “Solvent-free from soil and microwave-assisted liquid extraction of chromatography-fluorescence determination”, Journal of Chromatography A, 1217, pp.7316-7322 37 O Ballesteros, IToro, V Sanz-Nebot, A Navalón, JLVílchez, J Barbosa (2003), “Determination of fluoroquinolones in human urine by liquid chromatography coupled to pneumatically assisted electrospray ionization mass spectrometry”, Journal of Chromatography B, 798, pp.137-144 38 Osamu Okazaki, Hiroyuki Aoki, Hideo Hakusui (1991), “High-performance liquid chromatographic determination of (S)-(−)-ofloxacin and its metabolites in serum and urine using a solid-phase clean-up”, Journal of Chromatography B: Biomedical Sciences and Applications, 563, pp.313-22 39 Ping-Fei Fang, Hua-Lin Cai, Huan-De Li, Rong-Hua Zhu, Qin-You Tan, Wei Gao, Ping Xu, Yi-Ping Liu,Wen-Yuan Zhang, Yong-Chang Chen, Feng Zhang (2010), “Simultaneous determination of Isoniazid, Rifampicin, Levofloxacin in mouse tissues and plasma by high performance liquid chromatographytandem mass spaectrometry”, Journal of Chromatography B, 878, pp.22862291 40 RESMI MUSTARICHIE, WIWIEK INDRIYATI, IYAN SOPYAN (2011), “Ofloxacin analysis validation method in human blood plasma (in vitro) using solid-phase extraction HPLC”, Open Access Research Journal, pp 80-87 41 Safila Naveed, Najma Sultana, M Saeed Arayne, Huma Dilshad (2014), “A new HPLC method for the assay of levofloxacin and its application in drugmetal interaction studies”, Journal of Scientific and Innovative Research, (1), pp 91-96 42 Shanin, A R Shaimardanov, Nguyen Ti Diu Thai and S A Eremin (2014), “Determination of Fluoroquinolone Antibiotic Levofloxacin in Urine by 73 Fluoresence Polarization Immunoassay”, Journal of Analytical Chemistry 6, pp.712–717 43 S Schulte, T Ackermann, N Bertram, T Sauerbruch1, and W.D Paar (2006), “Determination of the Newer Quinolones Levofloxacin and Moxifloxacin in Plasma by High-Performance Liquid Chromatography with Fluorescence Detection”, Journal of Chromatographic Science, 44, pp.205-208 44 Sung Joong Lee, Kebede Taye Desta, Seok Yong Eum, Veronique Dartois, Sang Nae Cho,Dong-Won Bae, Sung Chul Shin (2016), “ Development and validation of LC-ESI-MS/MS method for analysis of moxifloxacin and levofloxacin in serum of multidrug-resistant tuberculosis patients: Potential application as therapeutic drug monitoring tool in medical diagnosis”, Journal of Chromatography B, 1009-1010, pp.138–143 45 T Manish Kumar, Gurrala Srikanth, J Venkateshwar Rao, KRS Sambasiva Rao (2011), “Development and validation of hplc-uv method for the estimation of levofloxacin in human plasma”, International Journal of Pharmacy and Pharmaceutical Sciences, 3, pp.247-250 46 Vimal kumar Shahwal, Dr B.K Dubey and Mithun Bhoumick (2012), “Performulation study of Levofloxacin”, International Journal Advances in Pharmaceutics, 1(1) 47 VN Desai , Ozadheoghene E Afieroho, BO Dagunduro1 , TJ Okonkwo and CC Ndu1 (2011), “A Simple UV Spectrophotometric Method for the Determination of Levofloxacin in Dosage Formulations”, Tropical Journal of Pharmaceutical Research, 10,pp.75-79 48 World Health Organization, (2010), “Levofloxacin draft proposal for the international pharmacopoeia” 49 William V Caufield and James T Stewart (2002), “Determination of zidovudine and levofloxacin in human plasma by reversed phase HPLC and 74 solid phase extraction”, Journal of Liquid Chromatography & Related Technologies, 25, pp 1791-1805 50 Xinxing Gao, Guocan Yao, Na Guo, Fang An, Xingjie Guo (2007), “A simple and rapid high performance liquid chromatography method to determine levofloxacin in human plasma and its use in a bioequivalence study”, Drug Discov Ther,1(2), pp.136-140 51 Zhi-Ling Zhou, Min Yang, Xi-Yong Yu, Huai-Yan Peng, Zhi-Xin Shan, ShuZhen Chen, Qiu-Xiong Lin, Xiao-Ying Liu, Tie-Feng Chen, Shu-Feng Zhou and Shu-Guang Lin (2007), “A rapid and simple high-performance liquid chromatography method for the determination of human plasma levofloxacin concentration and its application to bioequivalence study”, Biomedical Chromatography, pp.1045-1051 75 ... HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN - NGUYỄN THỊ THU HÀ NGHIÊN CỨU XÁC ĐỊNH LEVOFLOXACIN TRONG DƢỢC PHẨM VÀ NƢỚC TIỂU BẰNG SẮC KÝ LỎNG HIỆU NĂNG CAO Chuyên ngành: HÓA PHÂN TÍCH Mã số: 60440118 NGƢỜI... độ thấp mẫu nƣớc tiểu Xuất phát từ lý nên chọn nghiên cứu đề tài: Nghiên cứu xác định Levofloxacin dƣợc phẩm nƣớc tiểu sắc ký lỏng hiệu cao" CHƢƠNG I: TỔNG QUAN 1.1.Tổng quan Levofloxacin 1.1.1.Cấu... 2017 LỜI CẢM ƠN Sau thời gian nghiên cứu học tập em hoàn thành luận văn cao học với đề tài Nghiên cứu xác định Levofloxacin dƣợc phẩm nƣớc tiểu sắc ký lỏng hiệu cao" dƣới hƣớng dẫn bảo hai thầy