Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)

Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (tt)

i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC  BÁO CÁO TÓM TẮT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ TẠO CHẾ PHẨM DẦU TẮM CHO TRẺ EM TỪ TINH DẦU CÂY ĐƠN KIM Mã số: ĐH2015-TN06-06 Chủ nhiệm đề tài: TS PHẠM THẾ CHÍNH Thái Nguyên, 7/2017 i ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠITHÁI HỌCNGUYÊN KHOA HỌC ĐẠI HỌC TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC   -BÁO CÁO TÓM TẮT KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC BÁO CÁO TỔNG KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ TẠO CHẾ PHẨM DẦU TẮM CHO TRẺ EM TỪ NGHIÊN CỨU NÂNG HIỆU QUẢ TINH DẦU CÂYCAO ĐƠN KIM CÔNG TÁC QUẢN LÝ MÔI TRƢỜNG BẰNG CÔNG Mã KHÔNG số: ĐH2015-TN06-06 NGHỆ ĐỐT XỬ LÝ CHẤT THẢI RẮN Y TẾ LÂY NHIỄM TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA TRUNG ƢƠNG THÁI Mã số: ĐH2014-TN07-10 Xác nhận tổ chức chủ trì Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên, đóng dấu) (ký, họ tên) Chủ nhiệm đề tài: ThS.NCS Nguyễn Thu Huyền Thái Thái Nguyên, Nguyên, 1/2017 7/2017 i DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH ĐỀ TÀI VÀ I Thành viên thực đề tài - PGS.TS Dương Nghĩa Bang – Khoa Hóa – Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên - TS Phạm Thị Thắm – Khoa Hóa học - Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên II Đơn vị phối hợp thực - Viện Hóa học - Viện Hóa sinh biển ii DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT STT KÍ HIỆU SKLM Sắc kí lớp mỏng VSVKĐ Vi sinh vật kiểm định TÊN Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectrocopy 13 C-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân Cacbon -13) Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectrocopy H-NMR (Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton) Distortionless Enhancement by Polarisation Tranfer DEPT Hz Hertz Half Maximal Inhibitory Concentration IC50 MS GC Mass Spectrocopy (Phổ khối lượng) Gas chromatography (Sắc kí khí) Electrospray Ionization 10 ESI (Ion hóa mù tia điện) Minimum Inhibitory Concentration 11 MIC 12 dd Doublet of doublet 13 d Doublet 14 s Singlet 15 q Quartet 16 PA (Nồng độ ức chế tối thiểu) Dung môi tinh khiết iii ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU Thông tin chung: - Tên đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu đơn kim - Mã số: ĐH2015 - TN06 - 06 - Chủ nhiệm: TS Phạm Thế Chính - Tổ chức chủ trì: Trƣờng Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên - Thời gian thực hiện: 01/2015 - 12/2016 Mục tiêu: + Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu đơn kim + Tạo chế phẩm dạng dầu tắm cho trẻ em xây dựng tiêu chuẩn sở cho chế phẩm Tính mới, tính sáng tạo: Đề tài phân lập tinh dầu đơn kim xác định thành phần hóa học tinh dầu đơn kim (đơn đất), nhận dạng hai mươi thành phần, hai hợp chất ageratochromene caryophyllene oxide hai thành phần lớn Lần đề tài phát tinh dầu đơn kim (đơn đất) có hoạt tính ức chế mạnh dòng vi khuẩn B Subtilis thể hoạt tính chống oxy hóa Đây kết có ý nghĩa khoa học nhằm tìm kiếm ứng dụng dược dụng thuốc Đề tài phát cặn chiết M (diclometan) ức chế mạnh trực khuẩn Staphylococus arenus Bacillus subtililis mạnh hoạt tính chống oxy hóa Ngoài ra, cặn chiết E (etyl axetat) ức chế trực khuẩn Staphylococus arenus chống oxy hóa với nồng độ thấp Từ kết hoạt tính đề tài bào chế thành công bột tắm dược liệu đăng ký thành công thương hiệu sáng chế dạng bột tắm Đề tài bào chề thành công dạng sữa tắm từ tình dầu đơn kim (đơn đất) có hoạt tính kháng khuẩn mạnh Đề tài phân lập ba hợp chất tinh khiết là: 1-allyl-4-metoxybenzen từ cặn chiết H (n-hexan), stigmasterol từ cặn chiết M (diclometan) 3-(4-hydroxy-3methoxyphenyl) propan-1,2-diol từ cặn chiết E (etyl axetat) sắc ký cột Kết nghiên cứu: Đề tài phân lập xác định 51 thành phần hóa học tinh dầu đơn đất, nhận dạng 26 thành phần, hai hợp chất ageratochromene (11,85%) caryophyllene oxide (11,69%) hai thành phần lớn iv Tinh dầu đơn đất có hoạt tính ức chế mạnh dòng vi khuẩn B Subtilis với MIC50 = 17,34g/ml thể hoạt tính chống oxy hóa với EC50 = 200g/ml Cặn chiết M (diclometan) ức chế mạnh trực khuẩn Staphylococus arenus với MIC50 = 52,7µg/ml Bacillus subtililis với MIC50 = 159,1µg/ml, hoạt tính chống oxy hóa nồng độ EC50 = 198,6µg/ml Cặn chiết E (etyl axetat) ức chế trực khuẩn Staphylococus arenus với MIC50 = 160,0µg/ml chống oxy hóa với nồng độ EC50 = 145,3 µg/ml Từ kết hoạt tính đề tài bào chế thành công bột tắm dược liệu đăng ký thành công thương hiệu sáng chế dạng bột tắm Đề tài bào chề thành công dạng sữa tắm từ tình dầu đơn kim (đơn đất) có hoạt tính kháng khuẩn mạnh Đề tài phân lập ba hợp chất tinh khiết là: 1-allyl-4-metoxybenzen từ cặn chiết H (n-hexan), stigmasterol từ cặn chiết M (diclometan) 3-(4-hydroxy-3methoxyphenyl) propan-1,2-diol từ cặn chiết E (etyl axetat) sắc ký cột Sản phẩm: 5.1 Sản phẩm khoa học: 01 Bằng sáng chế Phạm Thế Chính, Phạm Thị Thắm (2017), “Bột tắm dược liệu”, Bằng sáng chế số 1-2016-05044 - Cục sở hữu Trí tuệ Việt Nam Có 03 báo đăng tạp chí Khoa học Phạm Thế Chính, Phạm Thị Thắm, Dương Nghĩa Bang, Dương Thị Hoạt (2015), “Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học tinh dầu đơn đất (Wedelia chinensis Merr.)”, Tạp chí hóa học ứng dụng, số 4, 14-17 Phạm Thế Chính, Nguyễn Thảo Hiền, Lê Thị Mỹ Linh, Trương Thị Tươi, Phạm Thị Thắm, Đào Phương Lan (2017), “Thành phần hóa học dịch chiết diclometan đơn đất (Wedelia chinensis Merr.) thu hái Thái Bình”, Tạp chí hóa học ứng dụng, số 3, 1720 Phạm Thế Chính (2017), “Bước đầu thành phần hóa học cặn chiết etyl axetat đơn đất (Wedelia chinensis Merr.)”, Tạp chí hóa học ứng dụng, số 3, 29-31 5.2 Sản phẩm chuyển giao khoa học công nghệ 02 Hợp đồng chuyển giao công nghệ Hợp đồng chuyển giao công nghệ quy trình phân lập tinh dầu đơn kim đơn đất cho Công ty TNHH Hoàng Châu, Đoan Phượng, Hà Nội Hợp đồng thương mại hóa sản phẩm bột tắm cho công ty TNHHTM DV An Đức – Vũ Thư – Thái Bình 5.3 Sản phẩm đào tạo: * Có 05 đề tài sinh viên NCKH nghiệm thu: Dương Thị Hoạt (2015), Nghiên cứu thành phần hóa học tinh dầu đơn kim, Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên v Nguyễn Thảo Hiền (2016), Nghiên cứu thành phần hóa học cặn chiết phân cực đơn kim, Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên Lê Thị Mỹ Linh (2016), Nghiên cứu thành phần hóa học cặn chiết phân cực trung bình đơn kim, Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên Trương Thị Tươi (2016), Nghiên cứu thành phần hóa học dịch chiết không phân cực đơn kim, Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Thị Quỳnh Ngân (2017), Nghiên cứu chế tạo chế phẩm sữa tắm từ đơn đất (đơn kim), Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Thảo Hiền, Lê Thị Mỹ Linh, Trương Thị Tươi, Dương Thị Hoạt, Thành phần hóa học hoạt tính sinh học đơn kim (đơn đất), Đề tài đạt giải thưởng Eureka, 2016, Tp Hồ Chí Minh (Giải Khuyến khích) * Có 03 KLTN Đại học nghiệm thu: Trương Thị Tươi (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học phân tích cấu trúc hợp chất phân lập từ cặn chiết n-hexan đơn kim (đơn đất), Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên Nguyễn Thảo Hiền (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học phân tích cấu trúc hợp chất phân lập từ cặn chiết etyl axetat đơn kim (đơn đất), Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên Lê Thị Mỹ Linh (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học phân tích cấu trúc hợp chất phân lập từ cặn chiết diclometan đơn kim (đơn đất), Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên Phƣơng thức chuyển giao, địa ứng dụng, tác động lợi ích mang lại kết nghiên cứu: Chuyển giao quy trình công nghệ phân tách tinh dầu cho Công ty TNHH Hoàng Châu, Đoan Phượng, Hà Nội Chuyển giao thương mại hóa hóa sản phẩm bột tắm cho Công ty TNHHTM DV An Đức – Vũ Thư – Thái Bình Ngày 17 tháng 07 năm 2017 Tổ chức chủ trì (ký, họ tên, đóng dấu) Chủ nhiệm đề tài (ký, họ tên) TS Phạm Thế Chính vi INFORMATION ON RESEARCH RESULTS General information: Project title: Study on chemical constituents and bioactivity of Wedelia chinensis essential oil and preparation of soap from this essential oil Code number: ĐH2015 - TN06 - 06 Coordinator: Dr Pham The Chinh Implementing institution: TNU - University of Sciences Duration: from 01/2015 to 12/2016 Objective(s): Study on chemical composition and bioactivity of Wedelia chinensis essential oil Study on preparation of soap from this essential oil Creativeness and innovativeness: The essential oil in Wedelia chinensis was obtained by distillation method Its main component is ageratochromene and caryophyllene oxide The essential oil showed strong antioxidant and strong antibacterial activities against Bacillus subtililis The dichlomethane (M) extract showed strong antibacterial activity against Staphylococus arenus and Bacillus subtililis and showed antioxidant activity The ethyl acetate (E) extract was active only against Staphylococus arenus and showed antioxidant activity From data of bioactivity of Wedelia chinensis, the Medical bath powder and soap were preparated 1-Allyl-4-methoxybenzene, stigmasterol and 3-(4-hydroxy-3methoxyphenyl)propane-1,2-diol were isolated for the first time from Wedelia chinensis Merr of Thai Binh - Vietnam Their structure determined by means of spectroscopic methods Research results: The essential oil in Wedelia chinensis was obtained by distillation method with its yield 0.15% Its main component is ageratochromene (11.85%) and caryophyllene oxide (11.69%) The essential oil showed strong antioxidant (EC50 = 200g/ml) and strong antibacterial activities against Bacillus subtililis at MIC50 = 17.34g/ml The dichlomethane (M) extract showed strong antibacterial activity against Staphylococus arenus (MIC50 = 52.7µg/ml) and Bacillus subtililis (MIC50 = 159.1µg/ml) and showed weak antioxidant activity (EC50 = 198,6µg/ml) The ethyl acetate (E) extract was active only against Staphylococus arenus (MIC50 = 160.0 µg/ml) and showed antioxidant activity (EC50 = 145.3 µg/ml) From data of bioactivity of Wedelia chinensis, the “Medical bath powder” and soap were preparated vii 1-Allyl-4-methoxybenzene, stigmasterol and 3-(4-hydroxy-3methoxyphenyl)propane-1,2-diol were isolated for the first time from Wedelia chinensis Merr of Thai Binh - Vietnam Their structure determined by means of spectroscopic methods Products: 5.1 Scientific publications: There are 03 published papers: Pham The Chinh, Pham Thi Tham, Duong Nghia Bang, Duong Thi Hoat (2015), “Study on chemical composition and bioactivity of Wedelia chinensis essential oil”, Journal of Chemistry and Application, No 4, 14-17 Pham The Chinh, Nguyen Thao Hien, Le Thi My Linh, Truong Thi Tuoi, Pham Thi Tham, Dao Phuong Lan (2017), “Some natural compounds from dichlomethane extract of Wedelia chinensis Merr Thai Binh”, Journal of Chemistry and Application, No 3, 17-20 Pham The Chinh (2017), “Study on chemical composition ethyl acetate extract of Wedelia chinensis Merr.”, Journal of Chemistry and Application, No 3, 29-31 01 patent Pham The Chinh, Pham Thi Tham (2017), Medical bath powder, Patent 1-2016-05044, National Office of Intellectual Property of Vietnam 5.2 Technology transfer 02 Technology transfer Technology transfer contract: The process extracting essential oil of Wedelia chinensis Merr., Hoang Chau Co., Ltd, Doan Phuong, Hanoi Technology transfer contract: Commercialization of Medical bath powder, An Duc Trading and Service Company Limited - Vu Thu, Thai Binh 5.3 Training results: * 05 scientific research student: Duong Thi Hoat (2015), Study on chemical composition of Wedelia chinensis essential oil, Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University Nguyen Thao Hien (2016), Study on chemical composition of polar extraction of Wedelia chinensis Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University Le Thi My Linh (2016), Study on chemical composition of medium-polar extraction of Wedelia chinensis Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University Truong Thi Tuoi (2016), Study on chemical composition of non-polar extraction of Wedelia chinensis, Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University viii Nguyen Thi Quynh Ngan (2017), Study on preparation of soap from Wedelia chinensis, Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University * 03 under graduation thesis: Nguyen Thao Hien (2017), Study on chemical composition of ethyl acetate extract of Wedelia chinensis, Under graduation thesis, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University Le Thi My Linh (2017), Study on chemical composition of dichlomethane extract of Wedelia chinensis Under graduation thesis ,Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University Truong Thi Tuoi (2017), Study on chemical composition of n-hexane extract of Wedelia chinensis, Under graduation thesis, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University Transfer alternatives, application institutions, impacts and benefits of reserach results: + Technology transfer contract: The process extracting essential oil of Wedelia chinensis Merr., Hoang Chau Co., Ltd, Doan Phuong, Hanoi + Technology transfer contract: Commercialization of Medical bath powder, An Duc - Trading and Service Company Limited - Vu Thu, Thai Binh cho công ty công nghệ cao Hoàng Châu - Hà Nội để sản xuất tinh dầu đơn đất (hợp đồng kèm theo) 3.1.2 Khảo sát thành phần hóa học tinh dầu đơn đất GC-MS Ngày phương pháp đại để phân tích hàm lượng thành phần nhận biết thành phần hỗn hợp chất lỏng hay chất rắn có nhiệt độ sôi thấp GC/MS Người ta cho tinh dầu khí mang qua cột sắc kí theo chương trình nhiệt, thành phần tinh dầu phân tách cột sau đưa vào buồng bắn phá khối phổ dòng electron có lượng 70eV; ghi phổ khối so sánh với phổ khối chất chuẩn thư viện máy Những thành phần có phổ khối trùng lặp 90% phù hợp với quy luật phân rã coi nhận biết Số thành phần tinh dầu đánh giá số pic với thời gian lưu Hàm lượng thành phần % diện tích pic chúng tổng diện tích pic tinh dầu Bằng cách tiến hành phân tích tinh dầu đơn đất vừa phân tách HOAT máy GC/MS-5980B hãng Hewlett Packard (USA), điều kiện Kết hình 3.2 bảng 3.1 Hình 3.2 Phổ GC tinh dầu đơn đất HOAT Bảng 3.1 Thành phần hóa học tinh dầu đơn đất STT Thời gian lƣu tR STT Thời gian lƣu tR Tên chất % Tên chất % 19.60 p-Cymen-8-ol 0.27 27 34.33 (-) 1.38 19.84 α-Terpineol 28 34.43 Caryophylla3(15),7(14)-dien-6-ol 1.89 20.78 trans-Carveol 0.25 29 34.59 (-) 0.62 21.82 Geraniol 0.25 30 34.74 Ageratochromene 11.85 23.27 Cumin ancol 0.43 31 34.84 (-) 0.62 23.55 Thymol 32 34.92 Eudesma-4(15),7dien-1β-ol 1.67 26.98 - 33 34.97 (-) 1.11 1.36 1.37 1.00 27.82 ECaryophylene 1.39 34 35.34 14-Hydroxy-9-epi(E)- Caryophyllene 3.79 28.51 Z-Farnesene 0.64 35 35.51 epi-α-Bisabolol 0.84 10 28.90 α-Humulene 0.72 36 35.59 α-Bisabolol 1.62 11 29.41 γ-Curcumene 2.98 37 35.70 (-) 0.85 12 29.51 α-Curcumene 3.81 38 35.82 (-) 3.66 13 29.82 γ-Himachalene 0.64 39 36.95 (-) 0.58 14 30.65 (-) 0.52 40 37.26 Xanthorrhizol 10.20 15 31.35 (-) 0.73 41 37.62 (-) 0.79 16 31.88 (-) 1.34 42 37.76 (-) 0.70 17 32.47 Turmerol 0.7 43 37.93 (-) 1.06 18 32.61 (-) 0.96 44 38.09 (-) 0.64 19 32.73 Spathulenol 1.62 45 38.21 (-) 0.79 20 32.80 (-) 0.91 46 38.32 (-) 1.06 21 32.84 (-) 0.54 47 38.52 (-) 0.70 22 32.95 Caryophyllene oxide 11.69 48 40.33 (-) 0.55 23 33.36 Humulene epoxide I 0.73 49 42.37 Palmitic acid 24 33.42 (-) 0.82 50 44.43 (-) 0.62 25 33.70 Humulene 7.06 51 45.19 (-) 0.74 26 33.97 Epoxide II α-Acorenol 1.04 0.38 (-): chưa xác định Từ phổ đồ GC/MS (hình 3.2) bảng 3.1 cho biết tinh dầu đơn đất mọc hoang dã Thái Bình có thành phần hóa học phức tạp, thành phần có độ phân cực tương đối gần nên phổ GC dầy Kết GC cho biết tinh dầu có tất từ 51 thành phần hóa học, có 26 thành phần nhận dạng (bảng 3.1) chiếm khoảng 50,98% số lượng thành phần hóa học 69,19% khối lượng tinh dầu, phổ khối lượng (MS) thành phần nhận dạng thể phụ lục Trong số 25 thành phần chưa nhận dạng thành phần có hàm lượng lớn 4%, 26 thành phần nhận dạng có đến thành phần lớn 7% (bảng 3.1) Nghĩa tất thành phần có hàm lượng lớn nhận dạng, thành phần có hàm lượng lớn tinh dầu đơn đất ageratochromene (11,85%) caryophyllene oxide (11,69%) caryophyllene oxide dẫn xuất secquitecpenoit Ngoài số thành phần nhận dạng chủ yếu hợp chất tecpen Kết so sánh với liệu tài liệu [17, 18] cho thấy thành phần chủ yếu tinh dầu đơn đất Thái Bình tương tự Đài Loan, nhiên hàm lượng loại hợp chất có khác Đặc biệt kết nghiên cứu cho thấy tinh dầu đơn đất mọc Thái Bình có hàm lượng ageratochromene cao lên đến 11,85% Đây kết lý thú mở hướng nghiên cứu rộng tinh dầu đơn đất nhiều vùng miền khác nước để tìm quy luật chung tinh dầu đơn đất Việt Nam nhằm phát huy bào tồn nguồn gen quý 3.1.3 Hoạt tính sinh học tinh dầu đơn đất Kết thể bảng 3.2 Bảng 3.2 Kết hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định tinh dầu đơn đất Giá trị MIC50 chủng (g/ml) Ký hiệu mẫu Gram (+) Tinh dầu đơn đất Nấm Gram (-) S aureus B subtilis L fermentum S enterica E coli P aeruginosa C albican >128 17,34 >128 >128 >128 >128 >128 Từ bảng 3.2 nhận thấy tinh dầu đơn đất có hoạt tính mạnh với dòng vi khuẩn B Subtilis với giá trị MIC50 = 17,34g/ml Đây giá trị lý thú lý giải việc sử dụng đơn đất cho thuốc kháng khuẩn y học dân tộc [1, 2, 5, 6] Ngoài ra, kết khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cho biết tinh dầu đơn đất hoạt tính với dòng vi khuẩn nấm lại phép thử MIC50 > 128g/ml Hoạt tính chống oxi hóa tinh dầu đơn đất tiến hành theo phương pháp Shela G., Olga cộng (2003) Dựa nguyên tắc 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) có khả tạo gốc tự bền dung dịch EtOH bão hòa Khi cho tinh dầu vào hỗn hợp này, chất có khả làm trung hòa bao vây gốc tự làm giảm cường độ hấp thụ ánh sáng gốc tự DPPH Bảng 3.3 Kết hoạt tính chống oxy hóa tinh dầu đơn đất STT Kí hiệu mẫu EC50 (µg/ml) Kết Chứng (+) (Resveratrol) 8,3 Dƣơng tính Chứng (-) (Dung môi DMSO) - Âm tính Tinh dầu đơn đất 200 Dƣơng tính Kết bảng 3.3 cho thấy tinh dầu đơn đất hoạt tính chống oxy hóa với giá trị EC50 = 200µg/ml Đây kết có ý nghĩa cho việc ứng dụng tinh dầu chế phẩm làm đẹp 3.2 NGHIÊN CỨU CÁC CẶN CHIẾT CÂY ĐƠN ĐẤT 3.2.1 Phân lớp lớp chất theo độ phân cực tăng dần dung môi Lựa chọn dung môi chiết nhiệm vụ quan trọng nghiên cứu hóa học thuốc, thuốc có nhiều thành phần hóa học lớp chất có độ phân cực khác Nên việc lựa chọn dung môi phù hợp phân tách dịch chiết có phân bố hàm lượng chất mong muốn cao Trong đề tài nhóm nghiên cứu lựa chọn n-hexan, diclometan etyl axetat dung môi chiết để nghiên cứu nhằm tìm kiếm chất hoạt tính sinh học lý Qui trình chiết lớp chất thực sơ đồ sau: 500g bột thân đơn đất Ngâm với etanol lần Lọc bustle Bã Dịch etanol Dịch etanol-H2O Loại etanol, cặn chiết tổng Hòa tan cặn tổng vào nước Chiết n-hexan Dịch Làm khô n-hexan Cặn H 4,3 gam Loại nhexan Dịch etanolH2O Pha thêm 500ml H2O Chiết CH2Cl2 Dịch CH2Cl2 Làm khô Cặn M 2,8 gam Loại CH2Cl2 Pha thêm 500ml H2O Chiết etyl axetat Dịch Etyl axetat Làm khô Loại etylaxetat Cặn E 1,8 gam Sơ đồ 3.1 Qui trình chiết lớp chất từ đơn đất 3.2.2 Khảo sát hoạt tính sinh học cặn chiết Y học phương đông thường dùng phận đơn đất chữa bệnh nhiễm trùng đường hô hấp, viêm họng dùng để nấu nước tắm cho trẻ em, trẻ sơ sinh bà mẹ sau sinh nhiều tỉnh miền Bắc Việt Nam có tác dụng chống hăm da trẻ em nhiều tài liệu đông y đề cập đến [2, 5, 6] Mặt khác, nghiên cứu thử nghiệm lâm sàng giới cho biết dịch chiết etanol, dịch chiết nước đơn đất (Wedelia chinensis) có khả làm lành vết thương [12, 16, 27] Cho đến chưa thấy có công bố hoạt tính sinh học loài mọc Việt Nam có nhiều thuốc theo kinh nghiệm dân gian, tiến hành khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định hoạt tính chống oxy hóa cặn chiết phân cực etyl axetat đơn đất 3.2.2.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cặn chiết H, M E thực dựa phương pháp pha loãng đa nồng độ tương tự với tinh dầu, kết bảng 3.4 Bảng 3.4 Kết khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cặn chiết Giá trị MIC50 chủng (g/ml) Ký hiệu mẫu S aureus B subtilis L fermentum S enterica E coli P aeruginosa C albican H >256 >256 >256 >256 >256 >256 >256 M 52,7 159,1 >256 >256 >256 >256 >256 E 160,0 >256 >256 >256 >256 >256 >256 Gram (+) Nấm Gram (-) Từ bảng 3.4 kết cho thấy cặn chiết M có khả ức chế mạnh trực khuẩn Staphylococus arenus nồng độ MIC50 = 52,7µg/ml Bacillus subtililis nồng độ MIC50 = 159,1µg/ml Cặn chiết E có khả ức chế đáng lưu ý trực khuẩn Staphylococus arenus nồng độ MIC50 = 160,0µg/ml, trực khuẩn Gram (+) gây nhiễm trùng nguy hiểm Kết lý thú phần lý giải việc sử dụng thuốc thuốc điều trị bệnh nhiễm khuẩn 3.2.2.2 Hoạt tính chống oxy hóa Hoạt tính chống oxi hóa cặn chiết đơn đất tiến hành theo phương pháp Shela G., Olga cộng (2003) Dựa nguyên tắc 1,1-diphenyl-2-picryl hydrazyl (DPPH) có khả tạo gốc tự bền dung dịch etanol bão hòa Khi cho cặn chiết E vào hỗn hợp này, chất có khả làm trung hòa bao vây gốc tự làm giảm cường độ hấp thụ ánh sáng gốc tự DPPH (bảng 3.5) Bảng 3.5 Kết khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cặn chiết STT Kí hiệu mẫu MIC50 (µg/ml) Kết Chứng (+) (Resveratrol) 8,3 Dƣơng tính Chứng (-) (Dung môi DMSO) - Âm tính Cặn chiết H >256 Âm tính Cặn chiết M 198,6 Dƣơng tính Cặn chiết E 145,3 Dƣơng tính Từ bảng 3.5 cho biết cặn chiết E có khả chống oxy hóa với nồng độ MIC50 = 145,3µg/ml, cặn chiết M có MIC50 = 198,6µg/ml so với chất đối chứng Resveratrol (MIC50 = 8,3µg/ml) hoạt tính cặn M E tương đối thấp, nhiên cặn chiết hỗn hợp nhiều hợp chất hữu thiên nhiên có giá trị IC50 kết có ý nghĩa để phân lập tìm kiếm chất chống oxy hóa mạnh cặn chiết ứng dụng cặn chiết sản xuất mỹ phẩm có khả chống oxy hóa 3.2.3 Phân lập chất tinh khiết cặn chiết 3.2.3.1 Phân lập xác định cấu trúc chất cặn chiết H Để hiểu rõ thành phần hóa học, tiến hành phân lập chất cặn chiết H phương pháp sắc ký cột Bằng silica gel cỡ 40 - 63 m, tỷ lệ cặn chiết chất hấp phụ silica gel 1/4, nhồi cột theo phương pháp nhồi ướt, chạy cột hệ dung môi n-hexan/etyl axetat (8/2) Chúng thu chất tinh khiết dạng dầu màu vàng kí hiệu TH2 Qui trình phân tách tóm tắt sơ đồ 3.2 Cặn chiết H silica gel n-hexan: etyl axetat 8/2 (v/v) H1 1-4 H2 6-7 H3 10-16 H4 19-32 H5 36-46 H6 50-67 H7 70-89 Sơ đồ 3.2 Sơ đồ phân tách chất tinh khiết từ cặn H H5 chất tinh khiết dạng lỏng màu vàng sáng, R f = 0,53 chạy mỏng với hệ dung môi n-hexan/etyl axetat, 7/3, v/v Có khối lượng 5mg Trên phổ MS hợp chất H5 tìm thấy tín hiệu 149,1 tương ứng với tín hiệu ion giả phân tử [M+H]+ không thấy tín hiệu ion đồng vị, hợp chất H5 ankanoid chứa halogen phân tử Từ MS tính M = 148,1 phù hợp với công thức phân tử C10H12O Trên phổ 1H NMR hợp chất H5 xuất tín hiệu cộng hưởng nhân thơm vị trí 1,4 tìm thấy tín hiệu cộng hưởng vùng thơm có dạng tương tác spin-spin hai proton thơm doublet J = 8,5Hz có tương tác ortho-ortho tín hiệu doubletdoublet hai proton lại có J = 8,5 2,0 Hz có tương tác ortho tương tác meta Các tín hiệu quy gắn sau nhân thơm: tín hiệu cộng hưởng 6,95 (2H, 10 d, J = 8,5Hz) gán cho vị trí H-2’ H-6’, tín hiệu cộng hưởng 6,66 (2H, dd, J = 8,5, 2,0 Hz) gán cho vị trí H-3’ H-5’ Ngoài phổ 1H-NMR hợp chất H5 xuất tín hiệu cộng hưởng proton thuộc nhóm OCH3 3,81ppm (3H, s) Mặt khác, phổ 1H NMR thể tín hiệu cộng hưởng nhóm allyl sau: tín hiệu 3,22ppm (2H, d, J = 7,0Hz) đặc trưng nhóm metylen liên kết với nhân thơm, hai tín hiệu multiplet 4,97 - 5,04 ppm 5,87 - 5,92 đặc trưng nhóm -CH=CH2Phổ 13C-NMR H5 xuất đẩy đủ tín hiệu cộng hưởng 10 nguyên tử cacbon có tín hiệu đặc trưng nhóm metoxi 55,1ppm, tín hiệu nhóm cacbon bậc nhân thơm có liên kết ete 157,0ppm, cacbon bậc thơm 138,3ppm 13C-NMR-DEPT H5 (xem phụ lục 6) cho biết hợp chất H5 có nhóm CH2, nhóm CH, nhóm OCH3 nhóm cacbon bậc Như vậy, vào phân tích liệu phổ MS, 1H-NMR, 13C-NMR cho phép khẳng định cấu trúc H5 1-allyl-4’metoxybenzen có cấu trúc sau: 3.2.3.2 Phân lập xác định cấu trúc chất cặn chiết M Để hiểu rõ thành phần hóa học, tiến hành phân lập chất cặn chiết M phương pháp sắc ký cột Bằng silica gel cỡ 40 - 63 m, tỷ lệ cặn chiết chất hấp phụ silica gel 1/4, nhồi cột theo phương pháp nhồi ướt, rửa cột hệ etyl axetat/n-hexan thu hợp chất tinh khiết D2 Qui trình phân tách tóm tắt sơ đồ 3.3 Hợp chất D2 chất rắn màu trắng có nhiệt độ nóng chảy 169 - 170 oC Phổ 1HNMR xuất tín hiệu ba proton olefin 5,37ppm (1H, br), 5,15ppm (1H,m) 5,02 (1H, m) Ngoài ra, tín hiệu 3,53ppm (1H, m) đặc trưng proron nhóm CH ancol bậc Trên phổ 1H-NMR xuất đầy đủ tín hiệu cộng hưởng nhóm metyl 1,02, 0,92; 0,84; 0,83; 0,81, 0,70 ppm nhiều tín hiệu proton metylen metin overlap với Phổ 13C-NMR xuất tín hiệu 29 cacbon có nhóm metyl, nhóm metylen 11 nhóm metin, tín hiệu cacbon bậc 140,8, 36,5 42,3 ppm Các liệu phổ 1H-NMR 13C-NMR hoàn toàn phù hợp với liệu phổ stigmasterol hợp chất có mặt hầu hết loài thực vật bậc cao, liệu phù hợp với kết công bố [29] 11 Cặn chiết diclometan (M) silica gel n-hexan/etyl axetat, 6/4 (v/v) B1 (2-4) B2 (6-8) B3 (1017) B4 (2135) B5 (3953) B6 (5880) B7 (86102) B8 (110128) D2 (1015) D3 (1720) silica gel n-hexan: etyl axetat 8:2 (v/v) D1 (1-8) Sơ đồ 3.3 Sơ đồ phân tách chất tinh khiết từ cặn M D2 có khối lượng 8mg, chất bột rắn không màu Dữ liệu phổ NMR hợp chất D2 thể bảng sau Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR D2 so sánh với tài liệu [29] C 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 * δC[31] 37,2 31,6 71,8 42,3 140,7 121,7 31,9 31,9 50,1 36,5 21,1 39,6 42,3 56.8 24,3 28,9 55,9 12,0 19,4 40,5 δC a,b 37,3 31,7 71,8 42,4 140,8 121,6 31,9 32,1 50,2 36,6 21,1 39,7 42,4 56,9 24,4 29,0 56,1 12,1 19,4 40,6 δHa,c 3,53 m 5,37 d (4,5) 0,70 s 1,02 s 12 21 21,1 21,1 0,92 d (6,6) 22 138,3 138,4 5,15 dd (3,5;15,5) 23 129,2 129,3 5,02 dd (3,5;15,5) 24 51,2 51,3 25 31,9 31,9 26 21,2 21,3 0,83 d (7,3) 27 19,0 19,0 0,81 d (6,8) 28 25,4 25,4 29 12,3 12,3 0,84 d (7,5) *δC stimasterol đo CDCl3 [31], “đo CDCl3” 125MHZ, 500MHZ Như cấu trúc chất D2 stigmasterol: 3.2.3.3 Phân lập xác định chất cặn chiết E Kết nghiên cứu hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định (VSVKĐ) cho biết cặn chiết E (etyl axetat) có hoạt tính VSVKĐ hoạt tính chống oxy hóa Kết khảo sát SKLM cho thấy cặn có thành phần phức tạp Để hiểu rõ thành phần hóa học, tiến hành phân lập chất cặn chiết E phương pháp sắc ký cột Bằng silica gel cỡ 40 - 63 m, tỷ lệ cặn chiết chất hấp phụ silica gel 1/30, nhồi cột theo phương pháp nhồi ướt, rửa cột hệ dung môi n-hexan/etyl axetat, 6/4, v/v Chúng thu chất tinh khiết dạng dầu có ánh vàng kí hiệu E1 Qui trình phân tách tóm tắt sơ đồ 3.4 E1 chất tinh khiết dạng lỏng có ánh vàng, Rf = 0,46 với hệ dung môi n-hexan/etyl axetat, 6/4, v/v Hiệu suất thu hồi đạt 0,33 % so với lượng cặn chiết đưa lên cột Trên phổ MS hợp chất E1 tìm thấy hai tín hiệu 199,1 221,6 tương ứng với tín hiệu hai ion giả phân tử [M+H]+ [M+Na]+ không thấy tín hiệu ion đồng vị, hợp chất E1 ankanoid chứa halogen phân tử Mặt khác kết SKLM hợp chất E1 cho biết chúng màu với FeCl3 màu hồng đậm với UV bước sóng 254nm, giả thiết E1 nhóm chất polyphenol Từ MS tính M = 198,1 phù hợp với công thức phân tử C10H14O4 Trên phổ 1H NMR hợp chất E1 xuất tín hiệu cộng hưởng nhân thơm nhóm vị trí 1, tìm thấy tín hiệu cộng hưởng vùng thơm có dạng tín hiệu doublet J = 1,5Hz có tương tác meta-meta, doublet J = 8,0Hz có tương tác ortho-ortho 13 tín hiệu doublet-doublet lại có J = 8,0Hz 1,5Hz có tương tác ortho mà tương tác meta Cặn chiết E 1,8g silica gel n-hexan: etyl axetat 6:4 (v/v) EPD1 3-9 EPD3 24-29 EPD2 10-18 silica gel n-hexan: etyl axetat 7:3 (v/v) EM1 2-4 EM2 6-8 EM 10-12 silica gel n-hexan: etyl axetat 6:4 E1 2-3 E2 4-5 E1 6mg Sơ đồ 3.4 Qui trình phân tách chất cặn chiết E Các tín hiệu quy gắn sau nhân thơm: tín hiệu cộng hưởng 6,86 (1H, d, J = 8,0Hz) gán cho vị trí H-5’; tín hiệu cộng hưởng 6,74 (1H, d, J = 1,5Hz) gán cho vị trí H-2’ tín hiệu cộng hưởng 6,70 (1H, dd, J = 8,0, 1,5 Hz) gán cho vị trí H-6’ Như nhâm thơm E1 biểu diễn sau: Trên phổ 1H NMR E1 có tín hiệu singlet 5,57 (1H, s) đặc trưng OH phenol, kết phù hợp với việc chất E1 có màu với thuốc thử FeCl3 phân 14 tích Tín hiệu cộng hưởng ba proton singlet tạo 3,88ppm đặc trưng nhóm metoxi liên liên kết với nhân thơm Mặt khác, phổ 1H NMR thể tín hiệu cộng hưởng propandiol: tín hiệu multiplet 3,89 - 3,92 (1H, m, H-2) đặc trưng proton CH ancol bậc 2, tín hiệu 3,69 (1H, q, J = 3,0Hz) 3,52 (1H, q, J = 2,0Hz) đặc trưng nhóm CH2OH Tín hiệu doublet-doublet 2,75 2,67 ppm có cặp số tương tác J = 5,5, 14,0 Hz J = 8,0, 14,0 Hz đặc trưng nhóm metylen liên kết với nhóm COH hay nhóm -CH2-CH(OH)- Phổ 13C-NMR E1 xuất đẩy đủ tín hiệu cộng hưởng 10 nguyên tử cacbon có tín hiệu đặc trưng nhóm metoxi tạo 55,9ppm, tín hiệu nhóm cacbon bậc nhân thơm có liên kết ete 146,6ppm, cacbon bậc phenol 144,4ppm 13C-NMR-DEPT cho biết hợp chất E1 có nhóm CH2, nhóm CH, nhóm OCH3 nhóm cacbon bậc 4.Như vậy, vào phân tích liệu phổ MS, 1H-NMR, 13C-NMR so sánh với liệu công bố tài liệu [13] cho phép khẳng định cấu trúc 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propan1,2-diol có cấu trúc sau: E1 3.3 TẠO BỘT TẮM DƢỢC LIỆU Trong dân gian số tỉnh duyên hải Bắc Thái Bình, Nam Định, Hải Phòng… người dân thường dùng đơn đất (rễ, thân, hoa) để nấu nước tắm cho trẻ em bà mẹ sau sinh Tuy nhiên, việc nấu nước tắm theo cách phải sử dụng thuốc đun nấu trực tiếp với nước nên việc tắm gặp nhiều khó khăn thời gian lọc, gạn thuốc khỏi nước tắm, mà lại không loại bỏ triệt để phận thuốc sót lại, nên tắm gây cảm giác khó chịu ảnh hưởng tới da người tắm Mặt khác, phế thải rễ, thân, hoa sau sử dụng đổ bỏ tốn điện tích gom rác nhà nên không thuận tiện cho gia đình thành phố Mặt khác, việc lựa chọn ngấu nhiên phận đơn đất không làm phát huy hết tác dụng đơn đất Để giải tình trạng nêu trên, tác giả nghiên cứu tạo loại bột khô liệu pha trộn từ rễ, thân, hoa đơn đất với tỉ tệ hợp lý để phát huy tối đa tác dụng có lợi cho da chất có đồng thời đảm bảo an toàn loại bỏ khó khăn sử dụng trực tiếp rễ, thân, lá, hoa đến đun nước tắm hay sử dụng phương pháp khác Bột dược liệu theo sáng chế sản xuất đơn giản, nguyên liệu dễ tìm kiếm, có tác dụng làm kháng khuẩn mạnh, chống rôm sảy, ngứa ngáy trẻ em, làm lành vết thương nhẹ, muỗi đốt, làm trắng da không bào mòn, không kích ứng da đồng thời bảo vệ môi trường 15 Cây đơn đất có tên khoa học Wedelia chinensis Merr, thuộc chi Wedelia, họ Asteraceae Tinh dầu toàn phận đơn đất có khả chống khuẩn mạnh đặc biệt chủng vi khuẩn gây viêm nhiễm nguy hiểm Staphylococcus aureus Bacillus subtilis Trong tinh dầu đơn đất có hoạt tính mạnh với chủng vi khuẩn B Subtilis với giá trị IC50=17,34mg/ml Các cặn chiết có khả ức chế mạnh trực khuẩn S arenus nồng độ MIC50=52,7μg/ml B subtililis nồng độ MIC50=159,1 μg/ml Đây giá trị thú vị giải thích việc sử dụng đơn đất cho thuốc kháng khuẩn y học dân tộc Ngoài ra, nghiên cứu nước phát cặn chiết tinh dầu phận đơn đất có tính chống oxy hóa nồng độ IC50=198,6μg/ml, đơn đất hoàn toàn sử dụng làm mỹ phẩm có khả làm trắng da Đặc biệt nghiên cứu phát khả đuổi muỗi côn trùng tinh dầu đơn đất, kết cần phải phát triển loài dược liệu thành sản phẩm ứng dụng thực tế Kết nghiên cứu hoạt tính sinh học đơn đất cho thấy dịch chiết nước hỗn hợp bột dược liệu có hoạt tính kháng vi sinh vật mạnh hoạt tính chống oxy hóa tốt thành phần bột phận nằm giới hạn Ngoài giới hạn trên, hàm lượng yếu tố nhỏ lớn so với khoảng tỉ lệ nêu làm giảm hoạt tính chống khuẩn chống oxy hóa Bột tắm dược liệu theo sáng chế bao gồm bột rễ đơn đất, bột thân đơn đất; bột hoa đơn đất với tỉ lệ % khối lượng sau: Bột rễ đơn đất: từ % đến 10% Bột thân đơn đất: từ 88 % đến 94,5% Bột hoa đơn đất: từ 0.5% đến 2% Kích thước bột dược liệu: 0,001-0,5 mm Mục đích khác sáng chế đề xuất loại bột tắm dược liệu cho vào túi lọc giúp người sử dụng thuận tiện hơn, nước tắm không lẫn bã dược liệu, nước tắm dung dịch đồng nước thông thường, có mùi thơm đặc trưng thuốc, dễ dàng tắm cho trẻ sơ sinh mà không lo ngại bã dược liệu bám vào da Ngoài ra, đóng túi lọc nên cần bỏ túi lọc sau sử dụng vào thùng rác gia đình nên tiện dụng Bột tắm dược liệu theo sáng chế điều chế việc nghiền trộn phận đơn đất: Rễ, thân, hoa 3.4 QUY TRÌNH PHA SỮA TẮM DƢỢC LIỆU TỪ TINH DẦU Kết phần khảo sát hoạt tính kháng sinh, hoạt tính chống oxy hóa hoạt tính chống viêm khẳng định tinh dầu đơn kim (đơn đất) có hoạt tính sinh học mạnh thể đầy đủ hoạt tính khảo sát, tiến hành tạo sữa tắm từ dịch chiết Theo nguyên tắc sữa tắm, phải dịch đồng với pH sinh lý, để đảm bảo pH sinh lý lựa chọn xà phòng gốc hãng Unilever Vietnam chuyên dùng để pha sữa tắm Ngoài ra, để tinh dầu phân tán vào sữa tắm, 16 lựa chọn PEG-400 chất lỏng tan tốt dung môi phân cực không cực thường sử dụng làm dung môi cho nhiều loại dược phẩm Để lựa nồng độ pha hợp lý tiến hành pha hàng loạt mẫu theo nồng độ khác nhau: M15 (15 mg/ml); M20 (20 mg/ml); M30 (30 mg/ml); M40 (40 mg/ml); M50 (50 mg/ml); M60 (60 mg/ml); M70 (70 mg/ml) M80 (80 mg/ml), sau thử hoạt tính kháng sinh (kháng S aureus) mẫu so với mẫu chuẩn xà phòng diệt khuẩn có bán thị trường, giá trị diệt khuẩn so sánh đường kính vòng kháng khuẩn Kết thử cho thấy, mẫu pha từ nồng độ 50mg/ ml (mẫu M50) thể hoạt tính kháng khuẩn, từ mẫu M60 đến M80 có đường kính kháng khuẩn lớn Như vậy, để pha sữa tắm hiệu phải chọn nồng độ từ M50 Trong nghiên cứu tiếp tục nghiên cứu nồng độ cặn chiết tối đa để pha sữa tắm có tính đồng cao nhất, có tính cảm quan tốt kinh tế 17 KẾT LUẬN Đã phân lập tinh dầu đơn đất phương pháp chưng cất lôi nước cải tiến, hiệu suất 0,015% so với mẫu tươi Tinh dầu có mùi thơm mạnh dễ chịu đặc 25 25 trưng đơn đất có d = 0,950, nD = 1,477 Bằng phương pháp GC/MS xác định 51 thành phần tinh dầu thu được, nhận dạng 26 thành phần, thành phần hóa học có hàm lượng từ 7% trở lên, ageratochromene (11,85%) caryophyllene oxide (11,69%) hai thành phần lớn Tinh dầu đơn đất có hoạt tính ức chế mạnh dòng vi khuẩn B Subtilis với giá trị MIC50 = 17,34g/ml Tinh dầu thể hoạt tính chống oxy hóa với giá trị EC50 = 200 g/ml Đã phân phân lớp cặn chiết đơn đất theo độ phân cực tăng dần dung môi n-hexan, diclometan etyl axetat với hiệu suất 0,86%, 0,56% 0,36 % so với nguyên liệu khô Đã khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cặn chiết đơn đất, kết cho thấy cặn chiết M (diclometan) cặn chiết E (etyl axetat) có hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định Trong cặn chiết M có khả ức chế mạnh trực khuẩn Staphylococus arenus nồng độ MIC50 = 52,7µg/ml Bacillus subtililis nồng độ MIC50 = 159,1µg/ml Cặn chiết E có khả ức chế đáng lưu ý trực khuẩn Staphylococus arenus nồng độ MIC50 = 160,0µg/ml Đã khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cặn chiết đơn đất, kết cho thấy cặn chiết E có khả chống oxy hóa với nồng độ MIC50 = 145,3µg/ml, cặn chiết M có khả chống oxy hóa nồng độ MIC50 = 198,6 µg/ml Đã phân lập ba hợp chất tinh khiết là: 1-allyl-4-metoxybenzen từ cặn chiết H (n-hexan), stigmasterol từ cặn chiết M (diclometan) 3-(4-hydroxy-3methoxyphenyl)propan-1,2-diol từ cặn chiết E (etyl axetat) sắc ký cột.Cấu trúc 1allyl-4-metoxybenzen, stigmasterol 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) propan-1,2-diol chứng minh phương pháp NMR MS Đã nghiên cứu tạo bột tắm dược liệu từ đơn đất theo hai quy trình nghiền Đã nghiên cứu tạo chế phẩm dầu tắm từ tinh dầu đơn đất 18 KIẾN NGHỊ Tinh dầu đơn đất có hoạt tính ức chế mạnh dòng vi khuẩn B Subtilis hoạt tính chống oxy hóa nên tiếp tục nghiên cứu tìm kiếm quy trình pha chế tinh dầu đơn đất vào loại mỹ phẩm thảo dược để diệt khuẩn ngăn chặn trình lão hóa da Cơ sở liệu hoạt tính kháng khuẩn chống oxy hóa cặn chiết đơn đất khoa học làm sở để xây dựng tiêu chuẩn cho loại bột tắm thảo dược đăng ký với tên thương hiệu wedelia cục sở hữu trí tuệ Tuy nhiên sở khoa học để tiếp tục nghiên cứu tìm kiếm hợp chất có hoạt tính sinh học lý thú cặn chiết này, đồng thời tiếp tục nghiên cứu phát triển cặn chiết sản phẩm mỹ phẩm dạng kem, xà phòng diệt khuẩn kem dưỡng da khác Căn kết nghiên cứu kết tìm hiểu qua tổng quan tài liệu, tiếp tục xin hỗ trợ kinh phí từ nguồn khác để nghiên cứu sâu thành phần hóa học tìm kiếm hoạt tính từ thuốc hoạt tính chống ung thư, hoạt tính giảm đường huyết để điều trị bệnh tiểu đường từ đơn đất ... công bố thành phần hóa học tác dụng sinh học tinh dầu đơn đất Việt Nam nên đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu đơn kim (đơn đất)”... KẾT ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH SINH HỌC VÀ TẠO CHẾ PHẨM DẦU TẮM CHO TRẺ EM TỪ NGHIÊN CỨU NÂNG HIỆU QUẢ TINH DẦU CÂYCAO ĐƠN KIM CÔNG TÁC QUẢN... chiết đơn đất Nghiên cứu thành phần hóa học hoạt tính sinh học cặn chiết đơn đất Nghiên cứu tạo bột tắm dược liệu đơn kim (đơn đất) Nghiên cứu tạo chế phầm dầu tắm từ tinh dầu CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ