Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)

Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (NCKH)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC

- -

BÁO CÁO TỔNG KẾT

ĐỀ TÀI KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ CẤP ĐẠI HỌC

NGHIÊN CỨU NÂNG CAO HIỆU QUẢ

CÔNG TÁC QUẢN LÝ MÔI TRƯỜNG BẰNG CÔNG

NGHỆ KHÔNG ĐỐT XỬ LÝ CHẤT THẢI RẮN Y TẾ LÂY NHIỄM TẠI BỆNH VIỆN ĐA KHOA TRUNG ƯƠNG THÁI

NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC, HOẠT TÍNH SINH

HỌC VÀ TẠO CHẾ PHẨM DẦU TẮM CHO TRẺ EM TỪ

TINH DẦU CÂY ĐƠN KIM

Mã số: ĐH2015-TN06-06

Xác nhận của tổ chức chủ trì Chủ nhiệm đề tài

(ký, họ tên, đóng dấu) (ký, họ tên)

Thái Nguyên, 7/2017

DANH SÁCH NHỮNG THÀNH VIÊN THAM GIA NGHIÊN CỨU

ĐỀ TÀI VÀ ĐƠN VỊ PHỐI HỢP CHÍNH

I Thành viên thực hiện đề tài

- PGS.TS Dương Nghĩa Bang – Khoa Hóa – Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên

- TS Phạm Thị Thắm – Khoa Hóa học - Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên

II Đơn vị phối hợp thực hiện

- Viện Hóa học

- Viện Hóa sinh biển

MỤC LỤC

I Thành viên thực hiện đề tài i

MỤC LỤC ii

CHƯƠNG 1 3

TỔNG QUAN 3

1.1 KHÁI QUÁT VỀ HỌ CÚC (ASTERACEAE) 3

1.2 KHÁI QUÁT VỀ CHI WEDELIA 4

1.3 KHÁI QUÁT VỀ CÂY ĐƠN ĐẤT 4

1.3.1 Đặc điểm thực vật 5

1.3.2 Nguồn gốc và phân bố 5

1.4 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐƠN ĐẤT 6

1.4.1 Nhóm wedelo 6

1.4.2 Nhóm tecpenoit 6

1.4.3 Nhóm flavonoit 7

1.4.4 Thành phần hóa học của tinh dầu cây đơn đất 8

1.5 CÔNG DỤNG VÀ CÁC KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA CÂY ĐƠN ĐẤT 8

1.5.1 Đơn đất trong y học Phương Đông 8

1.5.2 Các nghiên cứu hoạt tính của cây đơn đất 9

THỰC NGHIỆM 11

2.1 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT 11

2.1.1 Hóa chất 11

2.1.2 Thiết bị 11

2.2 MẪU THỰC VẬT CHO NGHIÊN CỨU 12

2.3 NGHIÊN CỨU TINH DẦU CÂY ĐƠN ĐẤT 12

2.3.1 Tách tinh dầu đơn đất 12

2.3.2 Khảo sát thành phần hoá học của tinh dầu bằng GC-MS 13

2.3.3 Khảo sát hoạt tính sinh học của tinh dầu cây đơn đất 13

2.4 PHÂN TÁCH CÁC DỊCH CHIẾT CÂY ĐƠN ĐẤT 14

2.5 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH

HỌC CỦA CẶN CHIẾT CÂY ĐƠN ĐẤT 14

2.5.1 Khảo sát hoạt tính sinh học cặn của các cặn chiết 14

2.5.2 Phân lập các chất tinh khiết từ các cặn chiết 15

2.6 NGHIÊN CỨU TẠO BỘT TẮM DƯỢC LIỆU CÂY ĐƠN KIM (ĐƠN ĐẤT) 19

2.7 NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM DẦU TẮM TỪ TINH DẦU 22

CHƯƠNG 3 23

KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 23

3.1 NGHIÊN CỨU TINH DẦU CÂY ĐƠN ĐẤT 23

3.1.1 Phân lập tinh dầu đơn đất 23

3.1.2 Khảo sát thành phần hóa học của tinh dầu đơn đất bằng GC-MS 25 3.1.3 Hoạt tính sinh học của tinh dầu cây đơn đất 27

3.2 NGHIÊN CỨU CÁC CẶN CHIẾT CÂY ĐƠN ĐẤT 28

3.2.1 Phân lớp các lớp chất theo độ phân cực tăng dần của dung môi 28

3.2.2 Khảo sát hoạt tính sinh học của các cặn chiết 29

3.2.2.1 Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định 30

3.2.2.2 Hoạt tính chống oxy hóa 30

3.2.3 Phân lập các chất tinh khiết trong cặn chiết 31

3.2.3.1 Phân lập và xác định cấu trúc các chất trong cặn chiết H 31

3.2.3.2 Phân lập và xác định cấu trúc các chất trong cặn chiết M 33

3.2.3.3 Phân lập và xác định các chất trong cặn chiết E 35

3.3 TẠO BỘT TẮM DƯỢC LIỆU 38

3.4 QUY TRÌNH CHẾ PHẨM DẦU TẮM DƯỢC LIỆU TỪ TINH DẦU 41 KẾT LUẬN 42

KIẾN NGHỊ 44

TÀI LIỆU THAM KHẢO 45

DANH MỤC HÌNH ẢNH

Hình 1.1 Hình ảnh cây đơn đất (Wedelia chinensis) 4

Hình 1.2 Hình ảnh hoa đơn đất 5

Hình 2.1 Chương trình nhiệt độ của máy GC-MS 13

Hình 3.1 Thiết bị chưng cất tinh dầu cải tiến 24

DANH MỤC BẢNG BIỂU Bảng 2.1 Các phân đoạn sắc phổ giống nhau trong chạy sắc kí cột cặn H 16

Bảng 2.2 Các phân đoạn sắc phổ giống nhau trong chạy sắc kí cột cặn M 17

Bảng 2.3 Kết quả các phân đoạn chạy cột cặn E 18

Bảng 2.4 Kết quả các phân tách phân đoạn EPĐ2 18

Bảng 2.5 Kết quả các phân tách phân đoạn EM1 18

Bảng 3.1 Thành phần hóa học của tinh dầu đơn đất 26

Bảng 3.2 Kết quả hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định của tinh dầu đơn đất27 Bảng 3.3 Kết quả hoạt tính chống oxy hóa của tinh dầu đơn đất 28

Bảng 3.4 Kết quả khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định cặn chiết 30

Bảng 3.5 Kết quả khảo sát hoạt tính chống oxy hóa cặn chiết 31

Bảng 3.6 Dữ liệu phổ NMR của D2 và so sánh với tài liệu [31] 34

DANH MỤC SƠ ĐỒ Sơ đồ 3.1 Qui trình chiết các lớp chất từ cây đơn đất 29

Sơ đồ 3.2 Sơ đồ phân tách các chất tinh khiết từ cặn H 32

Sơ đồ 3.3 Sơ đồ phân tách các chất tinh khiết từ cặn M 34

Sơ đồ 3.4 Qui trình phân tách các chất trong cặn chiết E 36

DANH MỤC CÁC KÍ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT

Half Maximal Inhibitory Concentration

8 MS Mass Spectrocopy (Phổ khối lƣợng)

(Sắc kí khí)

Electrospray Ionization (Ion hóa hơi mù tia điện)

ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN

TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC

THÔNG TIN KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU

1 Thông tin chung:

- Tên đề tài: Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim

- Mã số: ĐH2015 - TN06 - 06

- Chủ nhiệm: TS Phạm Thế Chính

- Tổ chức chủ trì: Trường Đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên

- Thời gian thực hiện: 01/2015 - 12/2016

Lần đầu tiên đề tài đã phát hiện tinh dầu đơn kim (đơn đất) có hoạt tính

ức chế mạnh dòng vi khuẩn B Subtilis và thể hiện hoạt tính chống oxy hóa

Đây là kết quả rất có ý nghĩa khoa học nhằm tìm kiếm các ứng dụng dược dụng của cây thuốc này

Đề tài đã phát hiện cặn chiết M (diclometan) ức chế mạnh trực khuẩn

Staphylococus arenus và Bacillus subtililis và có thể hiện mạnh hoạt tính

chống oxy hóa Ngoài ra, cặn chiết E (etyl axetat) ức chế trực khuẩn

Staphylococus arenus và chống oxy hóa với nồng độ thấp

Từ kết quả hoạt tính đề tài đã bào chế thành công được bột tắm dược liệu

và đăng ký thành công thương hiệu và bằng sáng chế dạng bột tắm này

Đề tài cũng đã bào chề thành công dạng sữa tắm từ tình dầu cây đơn kim (đơn đất) có hoạt tính kháng khuẩn mạnh

Đề tài đã phân lập được ba hợp chất tinh khiết là:

1-allyl-4-metoxybenzen từ cặn chiết H (n-hexan), stigmasterol từ cặn chiết M

(diclometan) và 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) propan-1,2-diol từ cặn chiết

E (etyl axetat) bằng sắc ký cột

4 Kết quả nghiên cứu:

Đề tài đã phân lập xác định được 51 thành phần hóa học trong tinh dầu cây đơn đất, trong đó đã nhận dạng được 26 thành phần, hai hợp chất ageratochromene (11,85%) và caryophyllene oxide (11,69%) là hai thành phần chính lớn nhất

Tinh dầu đơn đất có hoạt tính ức chế mạnh dòng vi khuẩn B Subtilis với

MIC50 = 17,34  g/ml và thể hiện hoạt tính chống oxy hóa với EC50 =

200  g/ml

Cặn chiết M (diclometan) ức chế mạnh trực khuẩn Staphylococus arenus

với MIC50 = 52,7µg/ml và Bacillus subtililis với MIC50 = 159,1µg/ml, hoạt tính chống oxy hóa ở nồng độ EC50 = 198,6µg/ml Cặn chiết E (etyl axetat) ức

chế trực khuẩn Staphylococus arenus với MIC50 = 160,0µg/ml và chống oxy hóa với nồng độ EC50 = 145,3 µg/ml

Từ kết quả hoạt tính đề tài đã bào chế thành công được bột tắm dược liệu

và đăng ký thành công thương hiệu và bằng sáng chế dạng bột tắm này

Đề tài cũng đã bào chề thành công dạng sữa tắm từ tình dầu cây đơn kim (đơn đất) có hoạt tính kháng khuẩn mạnh

Đề tài đã phân lập được ba hợp chất tinh khiết là:

1-allyl-4-metoxybenzen từ cặn chiết H (n-hexan), stigmasterol từ cặn chiết M

(diclometan) và 3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl) propan-1,2-diol từ cặn chiết

sáng chế số 1-2016-05044 - Cục sở hữu Trí tuệ Việt Nam

Có 03 bài báo đăng trên tạp chí Khoa học

1 Phạm Thế Chính, Phạm Thị Thắm, Dương Nghĩa Bang, Dương Thị Hoạt (2015), “Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của tinh dầu

cây đơn đất (Wedelia chinensis Merr.)”, Tạp chí hóa học ứng dụng, số 4, tr

3 Phạm Thế Chính (2017), “Bước đầu về thành phần hóa học của cặn chiết

etyl axetat cây đơn đất (Wedelia chinensis Merr.)”, Tạp chí hóa học ứng

dụng, số 3, tr 29-31

5.2 Sản phẩm chuyển giao khoa học và công nghệ

02 Hợp đồng chuyển giao công nghệ

1 Hợp đồng chuyển giao công nghệ về quy trình phân lập tinh dầu cây đơn kim và đơn đất cho Công ty TNHH Hoàng Châu, Đoan Phượng, Hà Nội

2 Hợp đồng thương mại hóa sản phẩm bột tắm cho công ty TNHHTM

và DV An Đức – Vũ Thư – Thái Bình

5.3 Sản phẩm đào tạo:

* Có 04 đề tài sinh viên NCKH đã nghiệm thu:

1 Dương Thị Hoạt (2015), Nghiên cứu thành phần hóa học của tinh dầu cây

đơn kim, Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Khoa học – Đại

học Thái Nguyên

2 Nguyễn Thảo Hiền (2016), Nghiên cứu thành phần hóa học của cặn chiết phân

cực cây đơn kim, Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Khoa học

– Đại học Thái Nguyên

3 Nguyễn Thị Quỳnh Ngân (2017), Nghiên cứu chế tạo chế phẩm sữa tắm từ cây

đơn đất (đơn kim), Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại học Khoa

học – Đại học Thái Nguyên

4 Trần Thu Phương (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học và hoạt tính sinh

học của tinh dầu cây sài đất, Đề tài sinh viên nghiên cứu khoa học, Trường Đại

học Khoa học – Đại học Thái Nguyên

5 Nguyễn Thảo Hiền, Lê Thị Mỹ Linh, Trương Thị Tươi, Dương Thị Hoạt,

Thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của cây đơn kim (đơn đất), Đề tài

đạt giải thưởng Eureka, 2016, Tp Hồ Chí Minh (Giải Khuyến khích)

* Có 03 KLTN Đại học đã nghiệm thu:

1 Trương Thị Tươi (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học và phân tích cấu

trúc của các hợp chất phân lập từ cặn chiết n-hexan cây đơn kim (đơn đất),

Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên

2 Nguyễn Thảo Hiền (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học và phân tích

cấu trúc của các hợp chất phân lập từ cặn chiết etyl axetat cây đơn kim (đơn đất), Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên

3 Lê Thị Mỹ Linh (2017), Nghiên cứu thành phần hóa học và phân tích cấu

trúc của các hợp chất phân lập từ cặn chiết diclometan cây đơn kim (đơn đất), Khóa luận tốt nghiệp, Trường Đại học Khoa học – Đại học Thái Nguyên

6 Phương thức chuyển giao, địa chỉ ứng dụng, tác động và lợi ích mang lại của kết quả nghiên cứu:

Chuyển giao quy trình công nghệ phân tách tinh dầu cho Công ty TNHH Hoàng Châu, Đoan Phượng, Hà Nội

Chuyển giao thương mại hóa hóa sản phẩm bột tắm cho Công ty TNHHTM và DV An Đức – Vũ Thư – Thái Bình

Ngày 17 tháng 07 năm 2017

Tổ chức chủ trì

(ký, họ và tên, đóng dấu)

Chủ nhiệm đề tài

(ký, họ và tên)

TS Phạm Thế Chính

INFORMATION ON RESEARCH RESULTS

1 General information:

Project title: Study on chemical constituents and bioactivity of Wedelia

chinensis essential oil and preparation of soap from this essential oil

Code number: ĐH2015 - TN06 - 06

Coordinator: Dr Pham The Chinh

Implementing institution: TNU - University of Sciences

Duration: from 01/2015 to 12/2016

2 Objective(s):

Study on chemical composition and bioactivity of Wedelia chinensis

essential oil

Study on preparation of soap from this essential oil

3 Creativeness and innovativeness:

The essential oil in Wedelia chinensis was obtained by distillation method

Its main component is ageratochromene and caryophyllene oxide

The essential oil showed strong antioxidant and strong antibacterial

activities against Bacillus subtililis

The dichlomethane (M) extract showed strong antibacterial activity

against Staphylococus arenus and Bacillus subtililis and showed antioxidant activity The ethyl acetate (E) extract was active only against Staphylococus

arenus and showed antioxidant activity

From data of bioactivity of Wedelia chinensis, the Medical bath powder

and soap were preparated

1-Allyl-4-methoxybenzene, stigmasterol and methoxyphenyl)propane-1,2-diol were isolated for the first time from Wedelia chinensis Merr of Thai Binh - Vietnam Their structure determined by means

3-(4-hydroxy-3-of spectroscopic methods.

4 Research results:

The essential oil in Wedelia chinensis was obtained by distillation method with its yield 0.15% Its main component is ageratochromene (11.85%) and caryophyllene oxide (11.69%)

The essential oil showed strong antioxidant (EC50 = 200  g/ml) and strong

antibacterial activities against Bacillus subtililis at MIC50 = 17.34  g/ml

The dichlomethane (M) extract showed strong antibacterial activity

against Staphylococus arenus (MIC50 = 52.7µg/ml) and Bacillus subtililis

(MIC50 = 159.1µg/ml) and showed weak antioxidant activity (EC50 = 198,6µg/ml) The ethyl acetate (E) extract was active only against

Staphylococus arenus (MIC50 = 160.0 µg/ml) and showed antioxidant activity (EC50 = 145.3 µg/ml)

From data of bioactivity of Wedelia chinensis, the “Medical bath

powder” and soap were preparated

1-Allyl-4-methoxybenzene, stigmasterol and

3-(4-hydroxy-3-methoxyphenyl)propane-1,2-diol were isolated for the first time from Wedelia

chinensis Merr of Thai Binh - Vietnam Their structure determined by means

of spectroscopic methods.

5 Products:

5.1 Scientific publications:

There are 03 published papers:

1 Pham The Chinh, Pham Thi Tham, Duong Nghia Bang, Duong Thi Hoat (2015), “Study on chemical composition and bioactivity of Wedelia chinensis

essential oil”, Journal of Chemistry and Application, No 4, pp14-17

2 Pham The Chinh, Nguyen Thao Hien, Le Thi My Linh, Truong Thi Tuoi, Pham Thi Tham, Dao Phuong Lan (2017), “Some natural compounds from

dichlomethane extract of Wedelia chinensis Merr Thai Binh”, Journal of

Chemistry and Application, No 3, pp 17-20

3 Pham The Chinh (2017), “Study on chemical composition ethyl acetate

extract of Wedelia chinensis Merr.”, Journal of Chemistry and Application,

No 3, pp 29-31

01 patent

1 Pham The Chinh, Pham Thi Tham (2017), Medical bath powder, Patent

1-2016-05044, National Office of Intellectual Property of Vietnam

5.2 Technology transfer

02 Technology transfer

1 Technology transfer contract: The process extracting essential oil of

Wedelia chinensis Merr., Hoang Chau Co., Ltd, Doan Phuong, Hanoi

2 Technology transfer contract: Commercialization of Medical bath powder,

An Duc - Trading and Service Company Limited - Vu Thu, Thai Binh

5.3 Training results:

* 05 scientific research student:

1 Duong Thi Hoat (2015), Study on chemical composition of Wedelia

chinensis essential oil, Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University

2 Nguyen Thao Hien (2016), Study on chemical composition of polar

extraction of Wedelia chinensis Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University

3 Le Thi My Linh (2016), Study on chemical composition of medium-polar extraction of Wedelia chinensis Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University

4 Truong Thi Tuoi (2016), Study on chemical composition of non-polar extraction of Wedelia chinensis, Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University

5 Nguyen Thi Quynh Ngan (2017), Study on preparation of soap from

Wedelia chinensis, Students study topics scientific, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University

* 03 under graduation thesis:

1 Nguyen Thao Hien (2017), Study on chemical composition of ethyl acetate

extract of Wedelia chinensis, Under graduation thesis, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University

2 Le Thi My Linh (2017), Study on chemical composition of dichlomethane extract of Wedelia chinensis Under graduation thesis , Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University

3 Truong Thi Tuoi (2017), Study on chemical composition of n-hexane extract of Wedelia chinensis, Under graduation thesis, Thai Nguyen University of Sciences - Thai Nguyen University

6 Transfer alternatives, application institutions, impacts and benefits of reserach results:

+ Technology transfer contract: The process extracting essential oil of

Wedelia chinensis Merr., Hoang Chau Co., Ltd, Doan Phuong, Hanoi

+ Technology transfer contract: Commercialization of Medical bath

powder, An Duc - Trading and Service Company Limited - Vu Thu, Thai

Binh

MỞ ĐẦU

Từ xa xưa, con người đã biết sử dụng các loại cây, cỏ để phòng và chữa các loại bệnh khác nhau Nhưng chỉ chữa theo kinh nghiệm có được hoặc do kinh nghiệm của người đi trước để lại mà chưa có hiểu biết về cơ sở khoa học trong cây thuốc Trong đó nhiều cây thuốc quý của dân tộc có mặt trong nhiều bài thuốc quan trọng vẫn chưa được nghiên cứu một cách đầy đủ về thành phần hóa học và hoạt tính sinh học để giải thích cơ sở khoa học của các bài thuốc đang sử dụng

Đơn đất có tên khoa học là Wedelia chinensis hay còn gọi là cây đơn đất, cây

còn có tên gọi khác là đơn kim hoặc đơn buốt tùy theo từng vùng miền gọi khác

nhau và thường bị nhầm lẫn với sài đất (Wedelia calendulacea), được dùng trong

dân gian của nhiều địa phương ở Việt Nam như một vị thuốc quan trọng trong nhiều bài thuốc quý để chữa các căn bệnh khác nhau [5] Theo đông y, đơn đất có vị đắng, tính bình, có tác dụng thanh nhiệt, giải độc, khu phong, hoạt huyết, tan máu ứ, thường dùng để chữa rất nhiều bệnh như: nhiễm trùng đường hô hấp, viêm họng viêm ruột thừa, viêm gan truyền nhiễm, viêm dạ dày - ruột, tiêu hóa kém, đau nhức xương khớp, sốt rét Nó còn được dùng ngoài chữa rắn cắn, nhọt lở, chấn thương sưng đau [1-5]

Đơn đất (Wedelia chinensis) là loài thực vật mọc hoang dại ở khắp nơi trên

đất nước ta từ miền núi, trung du đến đồng bằng Ngoài ra, đơn đất là loài thực vật

có mặt ở nhiều nước trên thế giới như: Ấn độ, Trung Quốc, Nhật Bản, Brazil…vv Đây là loài cây mọc quang năm, sức sinh sản nhanh và được coi như là loài “cỏ dại” [2, 5, 6]

Như vậy, đơn đất là một cây thuốc quý và đến nay chưa có nhiều công bố về thành phần hóa học cũng như tác dụng sinh học của tinh dầu và của cây đơn đất ở

Việt Nam nên đề tài: “Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của và

tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (đơn đất)” là có ý

nghĩa khoa học và thực tiễn nhằm làm sáng tỏ các cơ sở khoa học của cây thuốc, phát huy giá trị kinh tế và bảo tồn nguồn gen cây thuốc quý hiếm

Mục tiêu chính của đề tài:

+ Nghiên cứu tách tinh dầu cây đơn đất

+ Nghiên cứu hoạt tính sinh học của tinh dầu cây đơn đất

+ Nghiên cứu tạo cặn chiết cây đơn đất theo độ phân cực tăng dần của dung môi + Khảo sát hoạt tính sinh học của các cặn chiết cây đơn đất

+ Nghiên cứu phân lập các thành phần hóa học của cặn chiết cây đơn đất\ + Nghiên cứu tạo bột tắm dƣợc liệu

+ Nghiên cứu tạo chế phẩm dầu tắm

CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN

1.1 KHÁI QUÁT VỀ HỌ CÚC (ASTERACEAE)

Họ Cúc (danh pháp khoa học: Asteraceae hay Compositae), còn gọi là họ Hướng Dương, họ Cúc Tây, là một học thực vật có hoa hai lá mầm Tên gọi khoa

học của họ này có từ chi Aster (cúc tây) và có từ nguyên từ gốc tiếng Hy Lạp mang

nghĩa ngôi sao hình dáng của bông hoa trong trong các loài của nó, được điển hình hóa thành tên gọi phổ biến chung là hoa cúc Họ Asteraceae là họ lớn nhất hoặc thứ hai trong ngành Magnoliophyta, chỉ có họ Phong Lan (Orchidaceae) là có thể có sự

đa dạng lớn hơn, với khoảng 25.000 loài [19] Họ Asteraceae phân bố rộng khắp thế giới, nhưng phổ biến nhất tại các khu vực ôn đới và miền núi nhiệt đới [1, 14, 15,

19, 27-29]

Đặc trưng phổ biến và chung nhất của các loài thuộc họ Cúc này là trong cách nói thông thường gọi là “hoa”, là cụm hoa hay cụm hoa hình đầu (đúng ra là hoa hình giỏ) là một cụm dày đặc của nhiều hoa nhỏ, thông thường gọi là chiếc hoa (nghĩa là các hoa nhỏ) Các loài trong họ Cúc thông thường có một hoặc cả hai loại hoa con Vòng ngoài của cụm hoa hình đầu tương tự như ở hoa hướng dương được cấu thành từ các hoa con có dạng cánh hoa dài, được gọi là lưỡi bẹ, chúng là hoa tia Phần bên trong của đầu cụm hoa (hay đĩa) được hợp thành từ các hoa nhỏ với các cánh hoa hình ống, chúng là các hoa đĩa hay hoa phễu hoặc hoa ống Thành phần của các hoa họ Cúc dao động từ hoa toàn tia (tương tự như ở các loài bồ công anh,

chi Taraxacum) tới hoa toàn đĩa (tương tự như ở các loài cỏ dứa) [1, 14, 29]

Một số loài trong họ cho giá trị thương mại như rau diếp, hướng dương và

atiso Jerusalem Guayule (Parthenium argentatum) là nguồn nhựa mủ ít gây dị ứng

Nhiều thành viên trong họ Asteracae là các nguồn sản xuất mật hoa dồi dào và có ích cho việc lượng giá các quần thể động vật thụ phấn trong thời kỳ nở hoa của

chúng Centaurea (xa cúc), Helianthus annuus (hướng dương trồng), và một số loài

Solidago (goldenrod) là các nguồn cung cấp mật và phấn hoa chủ yếu cho ong mật Solidago sản xuất ra phấn hoa tương đối giàu protein, điều này giúp cho ong mật

sống tốt qua được mùa đông Nhiều loài trong họ này còn được trồng làm cây cảnh

để lấy hoa, ví dụ các loài thuộc chi Chrysanthemum Một số loài cây còn được sử

dụng làm vị thuốc trong y học cổ truyền như bồ công anh, cúc hoa (cúc hoa vàng -

Chrysanthemum indicum - và cúc hoa trắng) [15, 28, 29]

1.2 KHÁI QUÁT VỀ CHI WEDELIA

Chi Wedelia là một chi thực vật có hoa thuộc họ Cúc, Asteraceae Chúng là

một trong số các chi có tên gọi tiếng Anh là "creeping-oxeye" Chi này có khoảng

18 loài phổ biến được phân bố rộng ở các vùng nhiệt đới và cận nhiệt Nó bao gồm các loại cây thân thảo hay cây bụi được biết đến nhờ mùi tinh dầu đặc trưng của nó

Trong chi này có loài rất phổ biến ở Việt Nam và Trung Quốc đó là sài đất

(Wedelia Calendulacea) là một loài thực vật có hoa thuộc chi Wedelia Sài đất còn

có tên là húng trám vì khi vò cây có mùi trám, cây sống dai, mọc lan bò Thân màu xanh có lông trắng cứng nhỏ, lá gần như không cuống có lông nhỏ cứng ở cả hai mặt, hoa màu vàng Sài đất có tác dụng chống viêm, được dùng để giảm đau, giảm sốt, chữa ho, viêm họng, mụn nhọt, sốt rét, đau mắt [2]

Chi Wedelia có đặc trưng giống loài sài đất, chi này thường được sử dụng để

điều trị các bệnh như sốt rét, viêm gan, ung thư, viêm và nhiễm trùng do nấm, vi khuẩn, vi rút Nhưng thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của các loài trong chi này vẫn chưa được nghiên cứu một cách cặn kẽ [2, 5, 6]

1.3 KHÁI QUÁT VỀ CÂY ĐƠN ĐẤT

Hình 1.1 Hình ảnh cây đơn đất (Wedelia chinensis)

Cây đơn đất có tên khoa học là Wedelia chinensis (W Chinensis), thuộc họ

Cúc (Asteraceae) Cây còn có các tên gọi khác nhau theo từng vùng, miền như: đơn buốt, đơn kim và cây này rất dễ bị nhầm lẫn với cây sài đất [2]

1.3.1 Đặc điểm thực vật

Đơn đất là một loại cỏ mọc hằng năm, thân cao 0,4 - 1 m Thân màu xanh có lông trắng cứng nhỏ Lá mọc đối, gần như không cuống, phiến lá kép gồm ba lá chét Lá chét hình mác, phía đáy hơi tròn, mép lá có răng cưa to thô, sần sùi có lông ngắn màu trắng hoặc dài hơn Cụm hoa hình đầu, màu vàng, mọc ở nách lá hay ở đầu cành, mọc đơn độc hay từng đôi một Quả bế hình thoi, ba cạnh, không đều, dài 1cm, trên có rãnh chạy dọc [2]

Hình 1.2 Hình ảnh hoa đơn đất 1.3.2 Nguồn gốc và phân bố

Đơn đất là một loại thực vật thân thảo được tìm thấy ở những nơi ẩm ướt như Uttar Pradesh, Assam, Arunachal Pradesh và dọc tất cả các khu vực ven biển của Bengal, Myanma, Konkan, Trung Quốc và Nhật Bản Ngoài ra, còn thấy mọc ở Ấn

Độ, Thái Lan, Philipin [2, 17]

Ở Việt Nam, cây đơn đất phân bố rộng rãi khắp nơi ở miền Bắc và Miền Trung nước ta như: Hà Giang, Cao Bằng, Phú Thọ, Vĩnh Phúc, Hà Nội, Hòa Bình,

Hải Phòng, Gia Lai, Lâm Đồng…vv Trừ vùng núi cao lạnh như: Sa Pa (Lào Cai), Sìn Hồ (Lai Châu), Phó Bảng (Hà Giang) không thấy có cây đơn đất [2, 3]

1.4 THÀNH PHẦN HÓA HỌC CỦA CÂY ĐƠN ĐẤT

Đơn đất thuộc chi Wedelia là một chi lớn trong họ Cúc (Asteraceae), nhưng

nghiên cứu về loài cây này còn rất hạn chế Các nghiên cứu về thành phần hóa học của cây chủ yếu là của tác giả nước ngoài Căn cứ vào tài liệu thu thập được, các thành phần hóa học của cây đơn đất có thể chia làm ba nhóm chất chính là: wedelo, tecpenoit, flavonoit

1.4.1 Nhóm wedelo

Năm 1956, lần đầu tiên Govindchari TR, đã phân lập được một hợp chất

thuộc nhóm benzofuran được đặt tên là wedelolacton từ cây Wedelia

Calendulaceae, một loài thuộc chi Wedelia [9] Sau đó các thực vật thuộc chi Wedelia đều phân lập được các wedelolacton và các dẫn xuất của nó, người ta đặt

tên nhóm các hợp chất này là wedelo [8, 9, 17, 20]

OH

hiện được nhiều hợp chất tecpenoit trong các thực vật chi Wedeli Tritepenoit

sanponin có tên hóa học là bisdesmodic được phân lập từ nhiều loài thuộc chi

Wedelia [11]

Tritecpenoit saponin

R = β-D-xylopyranosyl

R = β-D-glucopyranosyl

Từ dịch chiết metanol của Wedelia người ta phân lập được nhiều hợp chất

thuộc nhóm chất tecpenoit như axit (-) kaur-16-en-19-oic; hỗn hợp của ba este là

3α-triglinoyloxy , 3α-angeloyloxy, axit 3α-senecioyloxy-kaur-16-en-19-oic [10, 12]

axit (-)-kaur-16-en-19-oic axit 3α-triglinoyloxy kaur-16-en-oic

O

OH OH COOH

OH

O

H O

H

H

H COOH

O O

H3C H

H

H

1.4.4 Thành phần hóa học của tinh dầu cây đơn đất

Đơn đất là một loại thực vật có tinh dầu, thân, lá và rễ có mùi thơm dễ chịu nên được các nhà khoa học quan tâm nghiên cứu Thành phần hóa học của tinh dầu cây đơn đất đã có một số công trình nghiên cứu [8, 17] Lin và các cộng sự đã nghiên cứu thành phần hóa học của tinh dầu đơn đất bằng GC/MS [17], kết quả cho biết tinh dầu có 19 thành phần chính, chiếm 94% khối lượng tinh dầu Trong 19 thành phần này, nhóm chất hydrosecquitecpen chiếm 22,5 %, các hợp chất oxy monotecpen 0,7%

α-Pinen Sapthulenol Limonen

Thành phần có hàm lượng lớn nhất là α-pinen (21,7%), sapthulenol (20,3%)

và limonen (14,3%) [8] Ngoài ra, người ta còn tìm thấy trong tinh dầu đơn đất có một lượng nhỏ các luteolin, apigenin, wedelolacton và indol-3-cacboxyaldehit [17]

1.5 CÔNG DỤNG VÀ CÁC KẾT QUẢ NGHIÊN CỨU HOẠT TÍNH SINH

HỌC CỦA CÂY ĐƠN ĐẤT

1.5.1 Đơn đất trong y học Phương Đông

Theo Đông y, cây đơn đất có vị đắng, tính bình, có tác dụng thanh nhiệt, giải độc, khu phong, hoạt huyết, tan máu ứ Đơn đất thường dùng để chữa các bệnh nhiễm trùng đường hô hấp, viêm họng, viêm ruột thừa, viêm gan truyền nhiễm, viêm dạ dày - ruột, tiêu hóa kém, đau nhức xương khớp, sốt rét Nó còn được dùng ngoài chữa rắn cắn, nhọt lở, chấn thương sưng đau, có mặt trong nhiều bài thuốc

HO

dân tộc [5] Nhân dân các tỉnh đồng bằng Bắc Bộ Việt Nam thường sử dụng lá, thân

và rễ cây đơn đất để nấu nước tắm cho trẻ em, trẻ sơ sinh và bà mẹ sau sinh con để trị mẩn ngứa

Ngoài ra, theo kinh nghiệm của nhân dân Trung Quốc (Trung Quốc dược dụng thực vật đồ giám, 1960:146) Đơn đất có tác dụng chữa lỵ, yết hầu, cổ họng sưng đau, nấc Còn có tác dụng giải độc, giải nhiệt Dùng ngoài chữa bọ cạp, nhện, rắn cắn Gần đây tại Trung Quốc có kinh nghiệm dùng cây đơn đất để chữa viêm ruột thừa có kết quả [5]

Theo một số tài liệu, lá cây đơn đất được sử dụng trong điều trị thận rối loạn chức năng, chữa vết thương và rong kinh [22] Lá của nó còn được dùng để điều trị các rối loạn về da, ho, nhức đầu, rụng tóc, tăng cường hệ thống thần kinh, thiếu máu, rối loạn hệ tiêu hóa, được sử dụng trong nhuộm tóc màu xám và trong việc thúc đẩy sự phát triển của tóc Ngoài ra, lá được sử dụng để chữa các bệnh về viêm khớp, thấp khớp, gút rất tốt [23]

1.5.2 Các nghiên cứu hoạt tính của cây đơn đất

Các nghiên cứu sàng lọc hoạt tính sinh học cho biết chi Wedelia có nhiều

hoạt tính sinh học đáng chú ý như kháng viêm, chống côn trùng, chống đau dạ dày vv [17] Kết quả nghiên cứu của Hwang và các cộng sự đã khẳng định dịch

chiết của cây đơn đất mọc ở Đài Loan W Chinensis (Osbeck) Merr có khả năng bảo

vệ gan khỏi hư tổn do kích ứng của CCl4 [18] Nghiên cứu còn chỉ ra các dịch chiết của toàn bộ cây này đã được thử nghiệm trên động vật, kết quả cho thấy chúng bảo

vệ gan rất tốt [7] Các dịch chiết như este dầu, chloroform và metanol của W

Chinensis cũng cho thấy tác dụng đáng kể bằng cách giảm nồng độ cao của các

enzym huyết thanh [21]

Dịch chiết nước của lá W Calendulaceae Less Có khả năng làm lành vết

thương [24, 26], đây là kết quả hết sức lý thú, chúng đã lý giải việc sử dụng lá của cây này làm nước tắm nhanh lành da Các nghiên cứu cũng cho biết vết thương

nhanh lành hơn khi được nhỏ cao chiết etanol của W Chinensis [27] Dịch chiết của

W Chinensis được cho là có ảnh hưởng đến hệ thống thần kinh trung ương Các cặn

chiết thô của W Calendulaceae tác động đến thần kinh trung ương làm giảm đau

mạnh, chủ yếu giống với chất psychopharmacological [25]

Dịch chiết cồn của W Chinensis được làm thay đổi trong não bộ và tăng men

monoamin oxidase trong chuột bạch tạng Các chất chiết xuất được tìm thấy thường

có hoạt chất chống lại căng thẳng cố định lạnh gây ra thay đổi trong norepinephrine (NE), dopamin (DA), 5-hydroxytryptamin (5-HT), axit 5-hydroxy indol axetic (5-HIAA) và men monoamin oxidase (MAO) [28] Gần đây các nghiên cứu mới khẳng

định W Chinensis có khả năng ngăn ngừa sự phát triển của tế bào ung thư [12],

giảm đau, chống viêm và kháng khuẩn mạnh [16]

Như vậy, hoạt tính của chi Wedelia rất đa dạng và có tiềm năng nghiên cứu

phát triển thuốc rất lớn Do đó, đề tài nghiên cứu thành phần hóa học của cây đơn

đất một loài thuộc chi Wedelia là rất có ý nghĩa khoa học và thực tiễn, nhằm làm

sáng tỏ cơ sở khoa học của cây thuốc này, nâng cao giá trị khoa học và kinh tế giúp phát huy và bảo tồn giống cây thuốc quý hiếm

CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM

2.1 THIẾT BỊ VÀ HÓA CHẤT

2.1.1 Hóa chất

Các dung môi hữu cơ dùng để chiết mẫu thực vật và dung môi dùng cho sắc

kí lớp mỏng, sắc kí cột phải là những dung môi tinh khiết (PA)

Sắc kí lớp mỏng (SKLM) được chạy trên những bản nhôm tráng sẵn silica gel 60F254 độ dày 0,2mm của hãng Merck

Các sắc kí đồ của lớp mỏng được nhận biết bằng thuốc thử ceri, thuốc thử vanilin/H2SO41%, (dùng để nhận biết đa phần các hợp chất hữu cơ) Thuốc thử FeCl3 5% trong etanol (dùng để nhận biết các hợp chất phenolic) Thuốc thử vanilin/H2SO41% được điều chế bằng cách pha 0,2g vanilin trong 10ml H2SO498%

2.2 MẪU THỰC VẬT CHO NGHIÊN CỨU

Mẫu nguyên liệu thân lá cây đơn đất, được thu mua ngẫu nhiên vào tháng 3 năm

2015 tại Vũ Thư - tỉnh Thái Bình Mẫu được giám định tên khoa học tại Bảo tàng thực vật, Khoa Sinh học, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc Gia Hà Nội

Tiêu bản cây đơn đất được lưu giữ tại Khoa Hóa học - Trường đại học Khoa học - Đại học Thái Nguyên và Trường Đại học Khoa học Tự nhiên - Đại học Quốc Gia Hà Nội Nguyên liệu tươi được rửa sạch, loại bỏ các phần hư hỏng và được chia làm hai phần Phần tươi được phân tách tinh dầu bằng phương pháp chưng cất hơi nước, phần còn lại được sấy khô ở nhiệt độ 45oC đến khối lượng không đổi

2.3 NGHIÊN CỨU TINH DẦU CÂY ĐƠN ĐẤT

2.3.1 Tách tinh dầu đơn đất

Cho 2000g đơn đất tươi như đã chuẩn bị ở mục 2.2 vào bình A (1lít) của thiết

bị cất cuốn hơi nước, sau đó cho tiếp dung dịch NaCl 15% đến ngập nguyên liệu,

cho 50ml n-hexan vào bẫy dung môi D của thiết bị Đun hồi lưu, hỗn hợp dầu - nước ngưng tụ được chảy vào bẫy dung môi D và lội qua lớp n-hexan sau đó lắng xuống, tinh dầu sẽ tan vào n-hexan còn nước sẽ ở dưới Thực hiện quá trình chưng

cất cho tới khi dịch dầu nước tháo ra có phản ứng âm tính với thuốc thử Bayers (sau 4h) Sau đó đem dịch nước này bão hoà bằng NaCl, tiếp theo chiết 3 lần nữa bằng

n-hexan, mỗi lần 30ml Gộp tất cả các dịch chiết cùng với 50 ml n-hexan ban đầu ở

bình bẫy dung môi D được 140ml, làm khô bằng Na2SO4 khan, đem cất loại

n-hexan ở áp suất thấp thì thu được 0,30 gam tinh dầu, hiệu suất 0,015% (so với khối lượng mẫu tươi) kí hiệu là HOAT, tinh dầu thu được là một chất lỏng màu xanh vàng, cường độ mùi mạnh, thơm đặc trưng và dễ chịu, = 1,477

Tinh dầu sau thu được chia làm 2 phần, một phần đem xác định tổng thành phần bằng GC-MS tại Viện Hoá học các hợp chất thiên nhiên, Viện Hàn lâm Khoa học công nghệ Việt Nam Phần còn lại được khảo sát hoạt tính sinh học tại Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học và Công nghệ Việt Nam

25

D

n

2.3.2 Khảo sát thành phần hoá học của tinh dầu bằng GC-MS

Mẫu tinh dầu được phân tích thành phần hoá học trên máy GC-MS 5980B: các chất được tách bằng cột mao quản và nhận biết bằng detetor chọn khối (MSD); thiết bị MS của hãng Hewllet Packand (USA), HP 5970A ghép trực tiếp với máy sắc kí khí HP 5980 II, cột HP-I (25m×0,2mm đường kính trong; lớp phun dày 0,5µm tẩm CP-sil 5CB) Máy hoạt động theo chương trình nhiệt độ lúc đầu dừng ở 60ºC trong 3 phút, sau đó tăng dần nhiệt độ với tốc độ 5ºC/phút cho đến khi nhiệt

độ tăng đến 250ºC thì dừng lại trong 30 phút (hình 2.1) Tất cả các thành phần sau khi ra khỏi cột sắc kí khí mao quản được chuyển sang buồng bắn phá các phân tử bằng chùm năng lượng điện tử (70eV) và ghi khối phổ Các chất được nhận biết bằng so sánh khối phổ của nó với với khối phổ của các chất chuẩn có trong thư viện máy, những chất có khối phổ trùng lặp trên 90% với khối phổ của chất chuẩn trong thư viện và phù hợp với quy luật phân giã của chúng thì được coi là đã nhận biết Kết quả GC/MS tinh dầu được chỉ ra ở bảng 3.1 và phụ lục 17

Hình 2.1 Chương trình nhiệt độ của máy GC-MS 2.3.3 Khảo sát hoạt tính sinh học của tinh dầu cây đơn đất

Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định

Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định của tinh dầu cây đơn đất được tiến hành theo phương pháp pha loãng của Vander Bergher và Vlietlinck (1991) và MCKance, L., & Kandel (1996) Các mẫu thử được thực hiện trên các phiến vi

lượng 96 giếng (96-well microtiter plate) Môi trường thí nghiệm: Eugon Broth (Difco, Mỹ) cho vi khuẩn, Mycophil (Difco, Mỹ) cho nấm Kết quả được chỉ ra ở bảng 3.2 phụ lục 3

Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa

Hoạt tính chống oxi hóa được tiến hành theo phương pháp của Shela G., Olga, M B., Elena K và cộng sự (2003) Hoạt tính chống oxi hóa được đánh giá thông qua giá trị hấp thụ ánh sáng của dịch thí nghiệm so với đối chứng khi đọc trên máy Elisa ở bước sóng 515nm Kết quả chỉ ra ở bảng 3.3

2.4 PHÂN TÁCH CÁC DỊCH CHIẾT CÂY ĐƠN ĐẤT

Ngâm 500g bột thân và lá cây đơn đất trong 2 lít etanol 96 trong 5 ngày ở nhiệt độ phòng Lọc Butsne lấy dịch và ngâm thêm 2 lần nữa Gộp dịch lọc, loại etanol dưới áp suất giảm thu được cặn chiết tổng Cặn tổng được hòa tan vào trong

nước cất, chiết được chiết lần lượt bằng các dung môi theo độ phân cực tăng dần

n-hexan (chiết 5 lần mỗi lần 100ml), sau đó cho thêm 500ml nước cất và chiết bằng diclometan (chiết 5 lần mỗi lần 100ml) Dịch nước thu được, cho thêm 500ml nước cất và chiết 5 lần bằng etyl axetat mỗi lần 100ml Các dịch chiết được làm khan bằng Na2SO4 và cất loại dung môi ở áp suất thấp thu được các cặn chiết tương ứng

như sau: 4,3g cặn n-hexan (H), 2,8g cặn chiết diclometan (M), 1,8g cặn chiết etyl

axetat (E)

2.5 NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HÓA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC

CỦA CẶN CHIẾT CÂY ĐƠN ĐẤT

2.5.1 Khảo sát hoạt tính sinh học cặn của các cặn chiết

Khảo sát hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định

Hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định của các cặn chiết cây đơn đất được tiến hành theo phương pháp pha loãng của Vander Bergher và Vlietlinck (1991) và MCKance, L., & Kandel (1996) Các mẫu thử được thực hiện trên các phiến vi lượng

96 giếng (96-well microtiter plate) Môi trường thí nghiệm: Eugon Broth (Difco, Mỹ) cho vi khuẩn, Mycophil (Difco, Mỹ) cho nấm Kết quả được chỉ ra ở bảng 3.4 và phụ lục 1

Khảo sát hoạt tính chống oxy hóa

Hoạt tính chống oxi hóa được tiến hành theo phương pháp của Shela G., Olga, M B., Elena K và cộng sự (2003) Hoạt tính chống oxi hóa được đánh giá thông qua giá trị hấp thụ ánh sáng của dịch thí nghiệm so với đối chứng khi đọc trên máy Elisa ở bước sóng 515nm Kết quả chỉ ra ở bảng 3.5 và phụ lục 2

2.5.2 Phân lập các chất tinh khiết từ các cặn chiết

 Chuẩn bị cột sắc ký

Cột sắc ký được dùng có khóa kín ở dưới, chiều dài 80cm, đường kính 1,5cm Rửa sạch cột bằng hỗn hợp axit sunfocromic, rửa lại bằng nước cất rồi tráng bằng cồn, làm khô cột Khóa cột phải được tra mỡ silicon để đảm bảo xoay chuyển

dễ dàng

 Nhồi cột theo phương pháp nhồi ướt

Cân 10g silica gel (cỡ hạt 0,040 - 0,063 mm của hãng Merck) hòa với 100ml

n-hexan trong cốc thủy tinh dung tích 250ml Khuấy đều đến khi trong cốc không

còn bọt khí Mở khóa cột và đổ nhanh hỗn hợp silica gel trong dung môi n-hexan

lên cột Dùng quả bóp cao su gõ nhẹ lên cột nhiều lần cho các hạt silica gel dồn xuống để không còn bọt khí trong cột Chú ý không để cột bị khô và sau khi nhồi xong phải để cột ổn định trong 12 giờ

a, Phân lập cặn H

Cân 2,0g cặn chiết H, hòa tan bằng 3ml n-hexan Sau đó cho thêm từ từ

khoảng 4g silica gel, trộn đều hỗn hợp và làm bay hơi hết dung môi, thu được một hỗn hợp chất ở dạng bột tơi Mở khóa cột cho dung môi thoát ra ngoài cho đến khi

bề mặt dung môi cách bề mặt silica gel 2mm thì cho mẫu vào cột sao cho mặt phẳng mẫu và mặt phẳng silica gel đã nhồi cột phải tạo thành mặt phẳng song song với nhau để quá trình phân giải chất đều, hiệu quả tách chất cao Sau đó phủ một lớp bông lên trên để tránh hiện tượng khuếch tán ngược

Trong quá trình phân lập chất từ cặn H trên cột sắc kí với hệ dung môi là

n-hexan/etyl axetat có tỉ lệ 8/2 ta đã thu được phân đoạn H1 H7 như bảng 2.1 sau:

Bảng 2.1 Các phân đoạn sắc phổ giống nhau trong chạy sắc kí cột cặn H

Nhóm Các phân đoạn có sắc phổ giống nhau

Phân đoạn H5 hiện một vệt tròn với sắc ký lớp mỏng và hiện một vệt tròn

màu xanh với thuốc thử ceri trong hệ dung môi n-hextan/etyl axetat (7/3, v/v) H5 là chất lỏng màu vàng sáng, có Rf = 0,53 (hệ dung môi n-hextan/etyl axetat (7/3, v/v)

Khối lƣợng H5 là 5,0 mg

1H NMR-500MHz (CDCl3), δppm: 3,81 (3H, s, OCH3); 3,22 (2H, d, J = 7,0Hz, H-1); 4,97-5,04 (2H, m, H-3); 5,87 - 5,92 (1H, m, H-2); 6,66 (2H, dd, J = 2,0; 8,5Hz, H-3’, H-5’); 6,95 (2H, d, J = 8,5Hz, H-2’ và H-6’)

13

C NMR-125MHz (CDCl3), δppm: 38,6 (C-1); 55,1ppm (OCH3); 115,3 3’, C-5’); 116,1 (C-3); 112,9 (C-2’, C-6’); 129,6 (C-2); 138,3 (C-1’); 157,0 (C-4)

(C-ESI-MS: [M+H]+ = 149,1

b, Phân lập cặn M

Cặn chiết diclometan đƣợc tiến hành rửa giải bằng dung môi n-hexan/etyl axetat 6/4, v/v Tốc độ rửa giải là 25 giọt/phút Kết quả thu đƣợc 128 phân đoạn, mỗi phân đoạn chứa 2ml

Các phân đoạn thu đƣợc đem tiến hành khảo sát lớp mỏng bằng dung môi diclometan, gom các phân đoạn có sắc phổ giống nhau thành nhóm và đánh số thứ

tự các nhóm C1M1 cho đến C8M8

Bảng 2.2 Các phân đoạn sắc phổ giống nhau trong chạy sắc kí cột cặn M

Nhóm Các phân đoạn có sắc phổ giống nhau

Phân đoạn C7M7 có ba vết chất, tiếp tục đƣợc phân tách trên cột silica gel với

hệ dung môi rửa giải là n-hexan/etyl axetat 8/2, thu đƣợc 20 phân đoạn mỗi phân

đoạn 2ml Phân đoạn 10 - 15 nhận đƣợc một chất tinh khiết khí hiệu D2 D2 là chất rắn có khối lƣợng 8mg, nhiệt độ nóng chảy 169 - 170o

C

1H NMR-500 MHz (CDCl3), δppm: 0,84 (d, J = 7,5 Hz); 0,81 (d, J=6,8 Hz); 0,83 (d, J = 7,3 Hz), 5,02 (dd, J = 3,5; 15,5 Hz); 5,15 (dd, J = 3,5; 15,5 Hz); 0,92 (d, J= 6,6 Hz); 1,02 (s), 0,70 (s); 5,37 (d, J = 4,5 Hz); 3,53 (m)

13

C NMR-125 MHz (CDCl3), δppm: 12,1; 12,3; 19,0; 19,4; 21,1 (2C); 21,3; 24,4; 25,4; 29,0; 31,7; 31,9 (2C); 32,1; 36,6; 37,3; 39,7; 40,6; 42,4; 42,4; 50,2; 51,3; 56,1; 56,9; 71,8; 121,6; 129,3; 138,4; 140,8

c, Phân lập cặn E

Cân 1,0g cặn chiết etyl axetat, hòa tan bằng 2ml axeton Sau đó cho thêm từ

từ khoảng 4g silica gel, trộn đều hỗn hợp và làm bay hơi hết dung môi, thu đƣợc

một hỗn hợp chất ở dạng bột tơi.Tiến hành rửa giải bằng hệ dung môi n-hexan/etyl

axetat với tỷ lệ 6/4 Tốc độ rửa giải là 25 giọt/phút Kết quả thu đƣợc 30 phân đoạn, mỗi phân đoạn chứa 5ml

Các phân đoạn thu đƣợc đem tiến hành khảo sát lớp mỏng bằng dung môi

n-hexan/etyl axetat tỷ lệ 5/5, gom các phân đoạn có sắc phổ giống nhau thành nhóm

và đánh số thứ tự các nhóm EPĐ1 cho đến EPĐ3

Kết quả được ghi ở bảng sau:

Bảng 2.3 Kết quả các phân đoạn chạy cột cặn E

Nhóm phân đoạn Các phân đoạn có sắc phổ giống nhau

Nhóm EPĐ2 hiện ba vết tròn, do đó tiếp tục tiến hành sắc kí cột lần 2 để tách

3 chất này Sử dụng cột sắc kí có chiều dài 80cm đường kính 1,5cm với hệ dung

môi n-hexan/etyl axetat, 7/3, v/v Thu được 12 phân đoạn, mỗi phân đoạn chứa 5ml

Gom những phân đoạn có sắc phổ giống nhau, thu được 3 nhóm:

Bảng 2.4 Kết quả các phân tách phân đoạn EPĐ2

Nhóm Các phân đoạn có sắc phổ giống nhau

Nhóm EM1 hiện hai vết tròn màu xanh nhạt với sắc kí lớp mỏng, tiếp tục sắc

kí lớp mỏng lần ba để tách 2 chất này Sử dụng cột sắc ký có chiều dài 30cm, đường

kính 1,0cm, hệ dung môi n-hexan/etyl axetat tỉ lệ 6/4 Thu được 5 phân đoạn, gom

các phân đoạn có sắc phổ giống nhau, thu được E1 đến E2 E1 là chất lỏng ánh

vàng, hiện một vết tròn màu xanh nhạt, cho Rf = 0,46 với hệ dung môi n-hexan/etyl

axetat tỷ lệ 6/4 hiện màu hồng với UV và hiện màu xanh lục đậm với thuốc thử ceri, tan tốt trong axeton, clorofom

Bảng 2.5 Kết quả các phân tách phân đoạn EM1

Nhóm Các phân đoạn có sắc phổ giống nhau

1H NMR-500MHz (CDCl3), δppm: 6,86 (1H, d, J = 8,0Hz, H-5’); 6,74 (1H,

d, J = 1,5Hz, H-2’); 6,70 (1H, dd, J = 8,0, 1,5 Hz, H-6’); 5,57 (1H, s, OH); 3,89 -

Bước 1: Chuẩn bị nguyên liệu

Rễ, thân, lá và hoa của cây đơn đất thu hái tự nhiên hoặc thu mua từ các nhà cung cấp Tiến hành rửa sạch các bộ phận của cây để loại bỏ đất, cỏ dại và các vật thể khác bám dính vào bộ phận cây

Bước 2: Làm khô nguyên liệu

Các bộ phận rễ, thân, lá và hoa cây đơn đất sau khi làm sạch tại bước 1 được phơi khô tự nhiên hoặc sấy cho khô

Việc phơi khô được thực hiện riêng rẽ giữa rễ, thân, lá và hoa trong điều kiện

có ánh nắng đến khô giòn, thời gian phơi là 3 ngày, mỗi ngày phơi 6 tiếng (từ 9h đến 15h), nghĩa là có khoảng 18 tiếng phơi liên tục trong ánh nắng sẽ là thời gian để nước trong các mẫu tươi bay hơi đến khối lượng không đổi Thời gian phơi ngắn hơn sẽ không đảm đảo được độ ẩm theo yêu cầu của mẫu, thời gian phơi quá lâu sẽ làm mẫu bay hơi mất lượng tinh dầu, và một số hoạt chất bị oxy hóa nên làm giảm chất lượng sản phẩm Khi điều kiện phơi không cho phép thì có thể sấy các nguyên liệu này, nhiệt độ sấy là 45oC, Nếu nhiệt độ sấy thấp hơn thì thời gian sấy lâu hơn, mẫu có thể bị mốc hoặc làm giảm chất lượng Nếu nhiệt độ sấy cao hơn 45oC sẽ làm bay hơi mất lượng tinh dầu của mẫu và phân hủy nhiều hoạt chất trong mẫu làm

giảm chất lượng của sản phẩm, thời gian sấy không cố định, sấy cho đến khối lượng không đổi

Bước 3: Cân định lượng nguyên liệu

Tiến hành cân khối lượng các nguyên liệu đã khô theo Bước 2 theo tỷ lệ % khối lượng như sau

Rễ cây đơn đất: từ 5 % đến 10%

Thân và lá cây đơn đất: từ 88 % đến 94,5%

Hoa cây đơn đất: từ 0.5% đến 2%

Bước 4: Nghiền nguyên liệu

Các nguyên liệu sau khi được chuẩn bị theo định lượng mà sáng chế đề cập ở trên theo bước 3 được nghiền thành bột mịn bằng máy nghiền

Lưu ý khi nghiền tốc độ của máy nghiền phải đạt 4000-4500 vòng/phút Không được nghiền đi nghiền lại nhiều lần vì sẽ làm hao phí nguyên liệu, và nhiệt phát ra trong quá trình nghiền sẽ làm phân hủy nhiều hoạt chất Quá trình nghiền bột cần được thực hiện trong điều kiện với độ ẩm ≤ 10% khối lượng bột, có hàm lượng tạp chất ≤ 3% và hàm lượng kim loại năng bao gồm chì < 0,02ppm và asen < 0,5ppm Bột sau khi nghiền xong có kích thước hạt từ 0,001 – 0,5mm Thu được bột tắm dược liệu theo sáng chế

Bước 5: Đóng gói và bảo quản

Bột tắm dược liệu này được đóng vào trong túi lọc trà theo khối lượng tùy thuộc vào khối lượng cần sử dụng từ 3g đến 10g cho mỗi túi

Bột tắm dược liệu sau khi đóng gói được bảo quản khô tránh ánh nắng và nhiệt độ cao trực tiếp

Phương pháp trộn

Bột tắm dược liệu theo sáng chế được điều theo phương pháp trộn bao gồm các bước sau:

Bước 1: Bước 1: Chuẩn bị nguyên liệu

Rễ, thân, lá và hoa của cây đơn đất thu hái tự nhiên hoặc thu mua từ các nhà cung cấp Tiến hành rửa sạch các bộ phận của cây để loại bỏ đất, cỏ dại và các vật thể khác bám dính vào bộ phận cây

Bước 2: Làm khô nguyên liệu

Các bộ phận rễ, thân, lá và hoa cây đơn đất sau khi làm sạch tại bước 1 được phơi khô tự nhiên hoặc sấy cho khô

Việc phơi khô được thực hiện riêng rẽ giữa rễ, thân, lá và hoa trong điều kiện

có ánh nắng đến khô giòn, thời gian phơi là 3 ngày, mỗi ngày phơi 6 tiếng (từ 9h đến 15h), nghĩa là có khoảng 18 tiếng phơi liên tục trong ánh nắng sẽ là thời gian để nước trong các mẫu tươi bay hơi đến khối lượng không đổi Thời gian phơi ngắn hơn sẽ không đảm đảo được độ ẩm theo yêu cầu của mẫu, thời gian phơi quá lâu sẽ làm mẫu bay hơi mất lượng tinh dầu, và một số hoạt chất bị oxy hóa nên làm giảm chất lượng sản phẩm Khi điều kiện phơi không cho phép thì có thể sấy các nguyên liệu này, nhiệt độ sấy là 45oC, Nếu nhiệt độ sấy thấp hơn thì thời gian sấy lâu hơn, mẫu có thể bị mốc hoặc làm giảm chất lượng Nếu nhiệt độ sấy cao hơn 45oC sẽ làm bay hơi mất lượng tinh dầu của mẫu và phân hủy nhiều hoạt chất trong mẫu làm giảm chất lượng của sản phẩm, thời gian sấy không cố định, sấy cho đến khối lượng không đổi

Bước 3: Nghiền riêng rẽ nguyên liệu

Những nguyên liệu bao gồm rễ, thân, lá và hoa đã được phơi khô ở bước 2 được cho vào máy nghiền một cách riêng rẽ từng nguyên liệu Tốc độ của máy nghiền phải đạt 4000-4500 vòng/phút Không được nghiền đi nghiền lại nhiều lần vì

sẽ làm hao phí nguyên liệu, và nhiệt phát ra trong quá trình nghiền sẽ làm phân hủy nhiều hoạt chất Quá trình nghiền bột cần được thực hiện trong điều kiện độ ẩm ≤ 10% khối lượng bột, có hàm lượng tạp chất ≤ 3% và hàm lượng kim loại năng bao gồm chì < 0,02ppm và asen < 0,5ppm Bột sau khi nghiền được đặt riêng rẽ lần lượt

là bột rễ cây đơn đất; bột thân và lá cây đơn đất; bột hoa cây đơn đất Các bột này

có kích thước hạt từ 0,001 mm – 0,5mm

Bước 4: Cân định lượng nguyên liệu

Các loại bột riêng biệt được tạo thành từ quá trình nghiền theo bước 3 được cân định lượng theo tỉ lệ % khối lượng như sau:

Bột rễ cây đơn đất: từ 5 % đến 10%

Bột thân và lá cây đơn đất: từ 88 % đến 94,5%

Bột hoa cây đơn đất: từ 0.5% đến 2%

Bước 5: Trộn nguyên liệu

Sau khi được cân theo định lượng tại Bước 4, các loạt bột được khuấy trộn đều với nhau Thời gian khuấy trộn là 2 giờ để đảm bảo dược liệu được đồng đều về sản phẩm Nếu thấp hơn 2 giờ thì sản phẩm được liệu không được đồng đều Nếu nhiều hơn 2 giờ thì sản phẩm sẽ bị hấp thu nước từ không khí làm thay đổi độ ẩm của sản phẩm và tốn thời gian và kinh phí khuấy trộn

Bước 6: Đóng gói và bảo quản

Bột tắm dược liệu này được đóng vào trong túi lọc trà theo khối lượng tùy thuộc vào khối lượng cần sử dụng từ 3g đến 10g cho mỗi túi

Bột tắm dược liệu sau khi đóng gói được bảo quản khô tránh ánh nắng và nhiệt độ cao trực tiếp

2.7 NGHIÊN CỨU TẠO CHẾ PHẨM DẦU TẮM TỪ TINH DẦU

Phương pháp tạo dầu tắm này được thực hiện theo cách pha sữa tắm chiết xuất từ dược liệu của Unilever

Lấy 3mL xà phòng cho vào bình nón 50 mL sau đó khuấy đều trên máy khuấy từ ở nhiệt độ phòng Lấy X mg tinh dầu, sau đó thêm 0,5 mL PEG-400, khuấy cho tan sau đó đổ hỗn hợp vào bình nón trên Khuấy liên tục ở nhiệt độ phòng trong khoảng thời gian 40 phút Làm lần lượt 5 lần theo số mg cặn chiết như sau:

 15 mg tinh dầu ta thu được M15

 20 mg tinh dầu ta thu được M20

 30 mg tinh dầu ta thu được M30

 40 mg tinh dầu ta thu được M40

 50 mg tinh dầu ta thu được M50

 60 mg tinh dầu ta thu được M60

 70 mg tinh dầu ta thu được M70

 80 mg tinh dầu ta thu được M80

CHƯƠNG 3 KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN

Như đã trình bày trong tổng quan, cây đơn đất là vị thuốc được sử dụng để điều trị các bệnh liên quan nhiễm trùng, bệnh đường tiêu hóa và bệnh do ký sinh Ngoài ra, lá và thân cây đơn đất được dùng để nấu nước tắm cho trẻ em, trẻ sơ sinh

và bà mẹ sau khi sinh tại nhiều tỉnh miền Bắc Việt Nam, làm da trẻ em thơm hơn, trắng hơn, không bị nứt lở và không bị côn trùng đốt, trong đó tác dụng chống hăm

da trẻ em đã được nhiều tài liệu đông y đề cập đến [2, 5, 6] Tuy nhiên, cho đến nay thành phần hóa học và hoạt tính sinh học của tinh dầu loài này ở Việt Nam còn ít được quan tâm nghiên cứu Hơn nữa để có hiểu biết sâu hơn về cơ sở hóa học và cơ

sở dược lý của cây thuốc này sẽ góp phần phát huy giá trị kinh tế của cây thuốc nhằm tìm kiếm các ứng dụng mới của cây thuốc trong đời sống Do đó đề tài

Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học và tạo chế phẩm dầu tắm cho trẻ em từ tinh dầu cây đơn kim (đơn đất) (Wedelia chinensis) rất có ý nghĩa

khoa học góp phần vào nghiên cứu ứng dụng theo hướng chuyển giao công nghệ

3.1 NGHIÊN CỨU TINH DẦU CÂY ĐƠN ĐẤT

3.1.1 Phân lập tinh dầu đơn đất

Thành phần hóa học của tinh dầu đơn đất mọc hoang dã tại Đài Loan đã được nhóm nghiên cứu của Lin công bố [17, 18] Theo kết quả nghiên cứu này thì thành phần hóa học của tinh dầu đơn đất rất phức tạp, được cấu thành bởi một số nhóm hợp chất rất phổ biến trong các tinh dầu họ Cúc là: monohydrotecpen (50,6%), secquihydrotecpen (22,5%) và các dẫn xuất có oxy của secquitecpen (20,3%) Trong

đó có ba thành phần hóa học thuộc các nhóm trên là α-pinen (21,7%), spathulenol (20,3%) và limonene (14,3%) Như vậy, thành phần hóa học của tinh dầu đơn đất Đài Loan đã được nghiên cứu rất chi tiết Đơn đất cũng là loài mọc phổ biến ở Việt Nam [1, 2, 5], là nhóm cây thuốc có tinh dầu nên việc nghiên cứu thành phần hóa học của tinh dầu cây này rất có ý nghĩa về khoa học và thực tiễn tại Việt Nam Đây

là lý do khích lệ nhóm nghiên cứu lựa chọn tinh dầu đơn đất là đối tượng nghiên cứu để phát huy, bảo tồn và tìm kiếm các hoạt chất quý từ cây thuốc này

Chưng cất lôi cuốn theo hơi nước là một phương pháp chủ yếu để thu tinh dầu từ thực vật, tuy nhiên với các phương pháp chưng cất lôi cuốn thông thường chỉ thu được các thành phần nhẹ của tinh dầu mà không tận thu triệt để các thành phần nặng khác Ngày nay người ta sử dụng phương pháp cất cuốn hơi nước cải tiến để thu hồi tinh dầu, đây là một phương pháp hiện đại, thuận tiện và cho hiệu suất thu hồi cao Lý do trên chúng tôi lựa chọn phương pháp cất cuốn hơi nước cải tiến để điều chế tinh dầu đơn đất

Hình 3.1 Thiết bị chưng cất tinh dầu cải tiến

Trong thiết bị như trên (hình 3.1) cho phép chúng tôi áp dụng hiệu ứng muối, đun hồi lưu, chiết tinh dầu và cất cuốn hơi nước Cho nguyên liệu đã được chuẩn bị sẵn dung dịch muối NaCl 15% vào bình cất sao cho dung dịch ngập nguyên liệu,

cho dung môi n-hexan vào bẫy bình nón, đun hồi lưu 4h Khi đun, hỗn hợp hơi dầu

- nước theo sinh hàn, ngưng tụ thành dịch dầu - nước, dịch này đi qua lớp dung môi

ở bẫy D, tinh dầu tan vào dung môi trong bẫy còn nước thì lắng xuống Với dung dịch muối 15%, làm cho nhiệt độ sôi của dung dịch lên đến 115oC, ở nhiệt độ này tất cả các phần của tinh dầu sẽ bay theo hơi nước Như vậy sau thời gian 4h đun hồi lưu hầu như toàn bộ tinh dầu trong nguyên liệu đã được chuyển vào dung môi trong bẫy D Tháo dung môi trong bẫy sau đó tiếp tục cất cho đến khi dịch dầu - nước thu được có phản ứng âm tính với thuốc thử Bayer, có nghĩa là tinh dầu đã hoàn toàn ra

hết khỏi nguyên liệu Bão hòa dịch dầu nước này bằng NaCl rồi chiết bằng n-hexan,

gộp dung môi chiết này với dung môi vừa lấy ra ở bình nón, làm khô bằng Na2SO4

khan, tiếp theo loại dung môi ở áp suất thấp thu lấy tinh dầu Kết quả chúng tôi thu được tinh dầu ở dạng lỏng, có màu xanh vàng, hiệu suất thu hồi tinh dầu là 0,015%,

so sánh với kết quả tách tinh dầu của Lin [17, 18] là 0,018% thì hàm lượng tinh dầu đơn đất của Việt Nam mọc ở Thái Bình tương đương như mẫu đơn đất của Đài Loan đã công bố Quy trình cải tiến này đã góp phần quan trọng trong nghiên cứu chuyển giao công nghệ cho Công ty công nghệ cao Hoàng Châu - Hà Nội để sản xuất tinh dầu cây đơn đất (hợp đồng kèm theo)

3.1.2 Khảo sát thành phần hóa học của tinh dầu đơn đất bằng GC-MS

Ngày nay phương pháp hiện đại nhất để phân tích hàm lượng các thành phần

và nhận biết các thành phần trong một hỗn hợp chất lỏng hay chất rắn có nhiệt độ sôi thấp là GC/MS Người ta cho tinh dầu cùng khí mang qua cột sắc kí theo chương trình nhiệt, các thành phần tinh dầu được phân tách trên cột sau đó đưa vào buồng bắn phá khối phổ bằng dòng electron có năng lượng 70eV; ghi phổ khối và

so sánh với các phổ khối của các chất chuẩn trong thư viện máy Những thành phần nào có phổ khối trùng lặp trên 90% và phù hợp với quy luật phân rã thì coi là đã nhận biết Số thành phần trong tinh dầu đã được đánh giá bằng số pic cùng với thời gian lưu của nó Hàm lượng của thành phần là % diện tích pic của chúng trên tổng diện tích các pic trong tinh dầu Bằng cách này chúng tôi tiến hành phân tích tinh dầu đơn đất vừa phân tách được HOAT trên máy GC/MS-5980B của hãng Hewlett Packard (USA), trong cùng một điều kiện Kết quả chỉ ra ở hình 3.2 và bảng 3.1

Hình 3.2 Phổ GC của tinh dầu đơn đất HOAT