Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (Ficus hirtaVahl.) Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (Ficus hirtaVahl.) Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (Ficus hirtaVahl.) Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (Ficus hirtaVahl.) Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (Ficus hirtaVahl.) Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (Ficus hirtaVahl.) Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (Ficus hirtaVahl.) Nghiên cứu thành phần hóa học, hoạt tính sinh học của hai loài ngọc cẩu (Balanophora laxiflora Hemsl.) và loài vú bò (Ficus hirtaVahl.)
BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẦN ĐỨC ĐẠI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LỒI NGỌC CẨU (BALANOPHORA LAXIFLORA HEMSL.) VÀ VÚ BÒ (FICUS HIRTA VAHL.) LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Hà Nội - 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẦN ĐỨC ĐẠI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LỒI NGỌC CẨU (BALANOPHORA LAXIFLORA HEMSL.) VÀ VÚ BỊ (FICUS HIRTA VAHL.) LUẬN ÁN TIẾN SĨ HÓA HỌC Chuyên ngành: Hóa học H Mã số: 62.44.01.14 c Người hướng dẫn khoa học: PGS.TS Trịnh Thị Thủy TS Ng yễn Q yết Tiến Hà Nội-2018 LỜI CẢM ƠN Luận án hồn thành Phòng Nghiên cứu Hợp chất thiên nhiên Phòng Nghiên cứu Hoạt chất sinh học,Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Trịnh Thị Thủy TS Nguyễn Quyết Tiến - thầy cô dành cho tơi hướng dẫn, bảo tận tình suốt q trình thực luận án Tơi xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến chú, anh chị Phòng Hợp chất thiên nhiên Phòng Hoạt chất sinh học - Viện Hóa học - Viện Hàn lâm Khoa học Cơng nghệ Việt Nam hết lòng bảo giúp đỡ tơi q trình thực luận án Để hồn thành luận án này, tơi nhận giúp đỡ nhiệt tình của: - Ban lãnh đạo, Thầy Cô giáo, anh chị bạn đồng nghiệp Viện Hóa học Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam - Ban lãnh đạo, đồng nghiệp Trường Đại học Tân Trào - Tuyên Quang - Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn động viên, giúp đỡ gia đình, bạn bè - Quỹ Nafosted; Tơi xin trân trọng cảm n ! Hà Nội, ngày .tháng năm 2018 Tác giả l ận án Trần Đức Đại LỜI CAM ĐOAN Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng hướng dẫn PGS.TS Trịnh Thị Thủy TS Nguyễn Quyết Tiến Các số liệu kết nêu luận án trung thực, đồng tác giả cho phép sử dụng chưa công bố cơng trình khác Tác giả Trần Đức Đại MỤC LỤC MỞ ĐẦU CHƯƠNG 1: TỔNG QUAN 1.1 Giới thiệ loài ngọc cẩ (Balanophora laxiflora Hemsl.) 1.1.1 Chi Balanophora 1.1.2 Loài ngọc cẩu B laxiflora 1.1.2.1 Tên gọi 1.1.2.2 Đặc điểm thực vật loài ngọc cẩu (B laxiflora) 1.1.2.3 Cơng dụng chữa bệnh lồi ngọc cẩu (B laxiflora) 1.1.2.4 Tổng quan loài ngọc cẩu 1.2 Thành phần hóa học hoạt tính sinh học loài th ộc chi Ficus 15 1.2.1 Chi Ficus 15 1.2.1.1 Các nghiên cứu quốc tế 16 1.2.1.2 Các nghiên cứu nước 32 1.2.2 Loài vú bò F hirta .34 1.2.2.1 Mô tả thực vật .34 1.2.2.2 Công dụng .35 1.2.2.3 Thành phần hóa học lồi vú bò 36 CHƯƠNG 2: PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VÀ THỰC NGHIỆM 38 2.1 Mẫ nghiên 38 2.1.1 Mẫu ngọc cẩu 38 2.1.2 Mẫu vú bò 38 2.2 Phư ng pháp nghiên 39 2.2.1 Phương pháp chiết mẫu thực vật 39 2.2.3 Phương pháp xác định cấu trúc 40 2.2.4 Phương pháp thử hoạt tính sinh học 40 2.2.4.1 Phương pháp nghiên cứu hoạt tính gây độc tế bào 40 2.2.4.2 Phương pháp gây độc tế bào thự Đại học Y Perugia - Đại học tổng hợp Perugia nước Cộng hòa Italy .42 2.2.4.3 Phương pháp thử nghiệm hoạt tính ức chế nitric oxide (NOs inhibition) thực Viện Hóa học – Viện Hàn lâm Khoa học Việt Nam43 2.3 Chiết tách tinh chế hợp chất từ hai loài nghiên 45 2.3.1 Phân lập hợp chất từ loài ngọc cẩu (B laxiflora) .45 2.3.1.1.Chiết tách, tạo cao chiết 45 2.3.1.2 Phân lập hợp chất từ cặn chiết dichloromethane 46 2.3.1.3 Phân lập hợp chất từ cặn chiết ethyl acetate 49 2.3.1.4 Phân lập hợp chất từ cặn chiết methanol 52 2.3.2 Phân lập hợp chất từ rễ vú bò (F hirta) .54 2.3.2.1 Chiết mẫu, tạo cao chiết .54 2.3.2.2 Thử hoạt tính cao chiết 55 2.3.2.3 Phân lập hợp chất từ cao ethyl acetate 56 2.3.2.4 Phân lập hợp chất từ cao n-butanol .58 CHƯƠNG KẾT QUẢ THẢO LUẬN 62 3.1 Cây ngọc cẩ (B laxiflora) 62 3.1.1 Hợp chất BL-1 (4-Hydroxy-3-methoxycinnamandehid) 62 3.1.2 Hợp chất BL-2 (methyl 4-hydroxycinnamate) 63 3.1.3 Hợp chất BL-3 (pinoresinol) .63 3.1.4 Hợp chất BL-4 (methyl 3,4-dihydroxycinnamate) 64 3.1.5 Hợp chất BL-5 (7-hydroxy-6-methoxycoumarin), scopoletin .65 3.1.6 Hợp chất BL-6 (+)-lariciresinol) .66 3.1.7 Hợp chất BL-7 (+)-isolariciresinol 68 3.1.8 Hợp chất BL-8 (quercetin) 68 3.1.9 Hợp chất BL-9 (methyl gallate) .70 3.1.10 Hợp chất BL-10 (chất mới)- balanochalcone 70 3.1.11 Hợp chất BL-11 (β-hydroxydihydrochalcone) .74 3.1.12 Hợp chất BL-12, dimethyl 6,9,10-trihydroxybenzo[kl]xanthene-1,2dicarboxylate 76 3.1.13 Hợp chất BL-13 (p-cumaric acid) 77 3.1.14 Hợp chất BL-14 (isolariciresinol 4-O-β-D-glucopyranoside) 78 3.1.15 Hợp chất BL-15 (Daucosterol) 78 3.1.16 Hợp chất BL-16 (5-Hydroxymethylfurfural) 79 3.1.17 Hợp chất BL-17 (methyl β-D-glucopyranoside) .80 3.1.18 Hợp chất BL-18 (methyl 4-O-β-D-glucopyranosylconiferyl ether) .81 3.1.19 Hợp chất BL-19, 4-hydroxy-3,5-dimethoxybenzoyl glucopyranoside 82 3.1.20 Hợp chất BL-20 (lariciresinol 4-O-β-D-glucopyranoside) 84 3.2 Các hợp chất phân lập từ loài vú bò 87 3.2.1 Hợp chất F-1 (6,7-Furano-hydrocoumaric acid ethyl ester) 87 3.2.2 Hợp chất F-2 (umbelliferon) 7-hydroxycoumarin 90 3.2.3 Hợp chất F-3 (bergapten) 92 3.2.4 Hợp chất F-4 (ethyl β-D-fructofuranoside) 94 3.2.5 Hợp chất F-5 (ethyl β-D-glucopyranoside) 94 3.2.6 Hợp chất F-6, 5-O-[β-D-apiofuranosyl-(1→2)-β-Dglucopyranosyl]bergaptol (chất mới) 95 3.2.7 Hợp chất F-7 (adenosine) 101 3.2.8 Hợp chất F-8 (6-carboxy-umbelliferon) 104 3.2.9 Hợp chất F-9 (picraquassioside A) 104 3.2.10 Hợp chất F-10 (rutin) 105 3.2.11 Hợp chất F-11 (acid aspartic) .107 3.3 Kết q ả thử hoạt tính sinh học 109 3.3.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào lồi ngọc cẩu (B laxiflora) 109 3.3.1.1 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào thực thử nghiệm viện Hóa học 109 3.3.1.2 Kết thử hoạt tính gây độc tế bào thực thử nghiệm Đại học y Perugia - Đại học tổng hợp Perugia nước Cộng hòa Italy .109 KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ 113 Thành phần hóa học ngọc cẩ B laxiflora 113 Thành phần hóa học vú bò F hirta 113 Đánh giá bước đầ hoạt tính sinh học 114 3.1 Hoạt tính sinh học loài ngọc cẩu B laxifloraError! Bookmark not defined 3.2 Hoạt tính sinh học lồi vú bò F hirta Error! Bookmark not defined DANH MỤC CÁC CÔNG BỐ CỦA TÁC GIẢ CÓ LIÊN QUAN ĐẾN ĐỀ TÀI LUẬN ÁN 116 TÀI LIỆU THAM KHẢO 1162 DANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CÁC CHỮ VIẾT TẮT IR Proton Nuclear Magnetic Resonance Spectrocopy Carbon-13 Nuclear Magnetic Resonance Spectrocopy Distortionless Enhancement by Polarisation Transfer Heteronuclear Multiple Bond Coherence Heteronuclear Single Quantum Coherence Correlation Spectrocopy Electron Spray Ionization Mass Spectrocopy High Resolution Electron Spray Ionization- Mass Spectrocopy Nuclear Overhauser Effect Spectrocopy Infrared Spectrocopy IC50 Inhibitory concentration 50% KB HepG2 Lu MCF-7 MKN7 LNCaP HL-60 SK-Mel2 SW626 SW480 RD IL-6 TNF-α Human epidermic carcinoma Human hepatocellular carcinoma Human lung carcinoma Human breast carcinoma Human gastric cancer Human prostate edenocarcinoma Human promyeloccytic leukemia Human malignant melanoma Human ovarian adenocarcinoma Human colon adenocarcinoma Human rhabdomyosarcoma Interleukin Tumor necrosis factor alpha Acid 4-(2-hydroxyethyl)-1piperazineethanesulfonic 3-(4,5-dimethylthiazol-2-yl)-2,5diphenyltetrazolium bromide 1,1-diphenyl-2-picrylhydrazyl H-NMR 13 C-NMR DEPT HMBC HSQC COSY ESI-MS HR-ESI-MS NOESY HEPES MTT DPPH Phổ cộng hưởng từ hạt nhân proton Phổ cộng hưởng từ hạt nhân carbon 13 Phổ DEPT Phổ tương tác dị nhân đa liên kết Phổ tương tác dị nhân đơn liên kết Phổ tương quan proton-proton Phổ khối ion hóa phun mù điện tử Phổ khối phân giải cao ion hóa phun mù điện tử Hiệu ứng NOE Phổ hồng ngoại Nồng độ ức chế 50% tế bào thử nghiệm Ung thư biểu mô người Ung thư gan người Ung thư phổi người Ung thư vú người Ung thư dày người Ung thư tuyến tiền liệt người Ung thư máu cấp tính người Ung thư da người Ung thư buồng trứng người Ung thư đại tràng người Ung thư vân người Pleiotropic cytokine Yếu tố hoại tử khối u LPS L-NMMA ATCC SRB s br s d t m dd J Lipopolysaccharides NG-methyl-L-arginine acetate American Type Culture Collection Sulforhodamine B Singlet Broad singlet Doublet Triplet Multiplet Doublet of doublet Coupling constant δ H D EtOAc MeOH DMSO n-BuOH H:E D:M n-hexane Dichloromethane Ethyl acetate Methanol Dimethyl sulfoxide n-butanol n-hexane : ethyl acetate Dichloromethane : Methanol Bảo tàng giống chuẩn Hoa Kỳ Hằng số tương tác (Hz) Độ dịch chuyển hóa học, thang δ ((ppm)) DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1.1 Bảng thử hoạt tính dịch chiết loài B.laxiflora [29] Bảng 1.2 Các hợp chất hóa học thuộc nhóm tanin tách từ loài ngọc cẩu (B laxiflora) Bảng 1.3 Các hợp chất hóa học thuộc nhóm (C6 - C3)n (phenylpropanoid) tách từ lồi ngọc cẩu (B laxiflora Hemsl) .9 Bảng 1.4 Các hợp chất hóa học thuộc nhóm (C6 - C3)n (phenylpropanoid) tách từ loài ngọc cẩu (B laxiflora Hemsl) .10 Bảng 1.5 Bảng thử hoạt tính chống oxi hóa dịch chiết lồi B.laxiflora phương pháp khử gốc tự DPPH, superoxyd, ngăn chặn tạo phức ion sắt [35] 12 Bảng 1.6 Kết thử hoạt tính chống oxi hóa phương pháp khử gốc tự DPPH 19 chất tách từ loài B.laxiflora [30] 13 Bảng 1.7 Kết thử hoạt tính chống oxi hóa lồi B laxiflora [32] 13 Bảng 1.8 Kết thử hoạt tính kháng viêm số chất tách từ loài loài B laxiflora [33] 15 Bảng 1.9 Các hợp chất (46-51) phân lập từ số loài thuộc chi Ficus .18 Bảng 1.10 Các hợp chất (52-61) phân lập từ số loài thuộc chi Ficus 19 Bảng 1.11 Các hợp chất (62-65) phân lập từ số loài thuộc chi Ficus 20 Bảng 1.12 Các hợp chất (66-75) thuộc nhóm chất alkaloid phân lập từ số loài thuộc chi Ficus Error! Bookmark not defined Bảng 1.13 Các hợp chất cumarin phân lập từ số loài thuộc chi Ficus .22 Bảng 1.14 Các hợp chất flavonoid phân lập từ thân số loài thuộc chi Ficus 25 Bảng 1.15 Các hợp chất sterol phân lập từ rễ số loài thuộc chi Ficus .29 Bảng 1.16 Các hợp chất phân lập từ rễ loài F hirta Hemsl .37 Bảng 2.1 Khả ức chế sản sinh NO mẫu nghiên cứu 56 Bảng 2.2 Tác động mẫu nghiên cứu đến khả ức chế phát triển tế bào RAW 264,7 55 Bảng 3.1 Dữ liệu phổ NMR hợp chất BL-5 scopoletin [131a] .65 Bảng 3.2 Dữ liệu phổ 1H 13C-NMR BL-6, BL-7 hợp chất tham khảo [CD3OD, δ ((ppm)), J (Hz)] .67 Bảng 3.3 Dữ liệu phổ NMR hợp chất BL-8 quercetin [129a] .69 Bảng 3.4 So sánh số liệu phổ hợp chất BL-12 với hợp chất dimethyl 6,9,10trihydroxybenzo[kl]xanthene-1,2-dicarboxylate…………………………………….86 Bảng 3.5 So sánh số liệu phổ hợp chất BLM-16 với hợp chất 5hydroxymethylfurfural [123a] 80 ... 113 Thành phần hóa học vú bò F hirta 113 Đánh giá bước đầ hoạt tính sinh học 114 3.1 Hoạt tính sinh học loài ngọc cẩu B laxifloraError! Bookmark not defined 3.2 Hoạt tính sinh học. .. DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ TRẦN ĐỨC ĐẠI NGHIÊN CỨU THÀNH PHẦN HĨA HỌC VÀ HOẠT TÍNH SINH HỌC CỦA HAI LỒI NGỌC CẨU (BALANOPHORA LAXIFLORA. .. (Balanophora laxiflora Hemsl.) vú bò (Ficus hirta Vahl.)” Theo hướng nghiên cứu này, luận án có nội dung sau: Nghiên cứu thành phần hóa học hai lồi: lồi ngọc cẩu (B laxiflora Hemsl.) lồi vú bò