FBMạnhĐức phản ứng chéo đầy đủ

PHẢN ỨNG chéo đầy đủ... Đặt vấn đề- Tầm quan trọng của máu - Hòa hợp nhóm máu hệ ABO: Phản ứng chéo ở nhiệt độ phòng TN 22˚C.. - Hòa hợp các hệ nhóm máu khác: Phản ứng chéo ở nhiệt độ

PHẢN ỨNG chéo đầy

đủ

Đặt vấn đề

- Tầm quan trọng của máu

- Hòa hợp nhóm máu hệ ABO: Phản ứng

chéo ở nhiệt độ phòng TN (22˚C).

- Hòa hợp các hệ nhóm máu khác: Phản ứng

chéo ở nhiệt độ 37˚C và nghiệm pháp kháng globulin

- Nghiệm pháp Coombs là nghiệm pháp sử

dụng thuốc thử kháng globulin ng ời (huyết thanh Coombs) để xác định sự có mặt của kháng thể miễn dịch (kháng thể thiếu) đã đ ợc cảm nhiễm trên tế bào hồng cầu

Cơ chế sinh kháng thể bất th

ờng

Thiếu máu tan máu ở trẻ sơ sinh do bất đồng

nhóm máu hệ Rh

HC mẹ Rh (D) âm

HC con Rh (D) d

ơng Kháng thể D

Hàng rào nhau thai

Cơ chế t ơng tự khi truyền máu không hòa hợp

giữa NCM và BN

Phản ứng kháng nguyên - kháng thể

KT đủ (IgM) KT đủ (IgM)

KT thiếu (IgG)

KN + KT đặc hiệu cho p/ ng ng kết

KN + KT đặc hiệu không cho p/ ng ng

kết

Nguyên lý kỹ thuật

• Kháng thể đủ (IgM): KN + KT đặc hiệu => Phản ứng ng ng

kết

• Kháng thể thiếu (IgG): KN + KT đặc hiệu => Không ng ng kết

• Kháng globulin ng ời làm cầu nối => Cho phản ứng ng ng kết

Kháng globulin ng

ời

Dụng cụ và thuốc thử

A Dụng cụ và TTB:

• Ly tâm ống thẳng.

• Tủ lạnh bảo quản thuốc thử

• Quầy lạnh sâu để bảo quản mẫu huyết thanh

• Bình cách thuỷ 37°C (hoặc tủ ấm hoặc bình giữ nhiệt)

• Kính hiển vi

• Tủ sấy dụng cụ

• Bút chì kính, bút dạ

• Giấy đo pH

• Bông thấm

• Cốc mỏ thuỷ tinh

• Bình đựng n ớc muối.

• Nhiệt kế

• Pipet Pasteur.

• ống nghiệm tan máu thuỷ tinh.

• Giá đựng ống nghiệm để tiến hành kỹ thuật.

• Lam kính.

B Thuốc thử:

• Thuốc thử kháng globulin ng ời

• anti D

• N ớc muối 0,9%

Anti-IgG

Anti C3b

Poly-specific

C¸c lo¹i thuèc thö kh¸ng globulin ng êi

Gåm Anti-IgG Anti-C3b Anti-C3d

Tiến hành kỹ thuật

Chuẩn bị:

Rửa hồng cầu nhóm O và hồng cầu của ng ời cho 3 lần bằng n ớc muối 0,9%

Pha thành dung dịch hồng cầu 5%

Ly tâm mẫu máu không chống đông của BN tách huyết thanh để làm phản ứng chéo.

Chuẩn bị hồng cầu chứng (Hồng cầu O đ ợc cảm nhiễm với kháng thể D)

Tiến hành kỹ thuật

Các b ớc tiến hành kỹ

thuật

B ớc 3: Trộn đều

B ớc 1: Nhỏ

3 giọt huyết

thanh bệnh

nhân

B ớc 2: Thêm

1 giọt hồng cầu của

ng ời cho 5% B ớc 4: Ly tâm

(1000 v/ph/15 -30

giây

Các mức độ ng ng kết

Ng ng

kết

Không ng ng kết

B ớc 5: Đọc và ghi lại kết quả

B ớc 9: Rửa HC 3 lần

bằng n ớc muối 0,9%

B ớc 10:

Thêm 2 giọt kháng globulin

B ớc 6: ủ tiếp ở 37˚C

/ 30 phút

Tiến hành kỹ thuật

B ớc 11:

Ly tâm (1000 v/ph/

15 -30 giây

B ớc 8: Đọc, ghi kết quả

Ghi chú: B ớc 6 nếu thêm 2 giọt đệm Liss vào ống nghiệm tr ớc khi ủ thì thời

gian ủ chỉ còn 15 phút

B ớc 7: Ly tâm

1000 v/ph/15 -30 giây

B ớc 12: Đọc

và ghi kết quả

B ớc 13: Nếu

KQ âm tính thêm 1 giọt

HC chứng

- KQ ph¶i d ¬ng tÝnh

- NÕu KQ ©m tÝnh ph¶i lµm

l¹i thö nghiÖm

TiÕn hµnh kü thuËt

B íc 15: §äc, ghi l¹i kÕt qu¶

B íc 14: Ly t©m

1000 v/ph/15 -30 gi©y

Kh«ng NK

NK Kh«ng

NK

Nhận định kết quả

THANK YOU!