phản ứng chéo đầy đủ

Đặt vấn đề- Tầm quan trọng của máu - Hòa hợp nhóm máu hệ ABO: Phản ứng chéo ở nhiệt độ phòng TN 22 C.. ˚ - Hòa hợp các hệ nhóm máu khác: Phản ứng chéo ở nhiệt độ 37 C và nghiệm pháp kh

PH N NG chéo đầy đủ Ả Ứ

Đặt vấn đề

- Tầm quan trọng của máu

- Hòa hợp nhóm máu hệ ABO: Phản ứng chéo ở

nhiệt độ phòng TN (22 C). ˚

- Hòa hợp các hệ nhóm máu khác: Phản ứng chéo

ở nhiệt độ 37 C và nghiệm pháp kháng globulin ˚

- Nghiệm pháp Coombs là nghiệm pháp sử dụng

thuốc thử kháng globulin người (huyết thanh Coombs) để xác định sự có mặt của kháng thể miễn dịch (kháng thể thiếu) đã được cảm nhiễm trên tế bào hồng cầu

Cơ chế sinh kháng thể bất thường

Thiếu máu tan máu ở trẻ sơ sinh do bất đồng nhóm máu hệ Rh

HC mẹ Rh (D) âm

HC con Rh (D) dương Kháng thể D

Hàng rào nhau thai

Cơ chế tương tự khi truyền máu không hòa hợp giữa NCM và BN

Phản ứng kháng nguyên - kháng thể

KT đủ (IgM) KT đủ (IgM)

KT thiếu (IgG)

KN + KT đặc hiệu cho p/ư ngưng kết

KN + KT đặc hiệu không cho p/ư ngưng kết

Nguyên lý kỹ thuật

• Kháng thể đủ (IgM): KN + KT đặc hiệu => Phản ứng ngưng kết

• Kháng thể thiếu (IgG): KN + KT đặc hiệu => Không ngưng kết

• Kháng globulin người làm cầu nối => Cho phản ứng ngưng kết

Kháng globulin người

Dụng cụ và thuốc thử

A Dụng cụ và TTB:

• Ly tâm ống thẳng.

• Tủ lạnh bảo quản thuốc thử

• Quầy lạnh sâu để bảo quản mẫu huyết

thanh

bình giữ nhiệt)

• Kính hiển vi

• Tủ sấy dụng cụ

• Bút chì kính, bút dạ

• Giấy đo pH

• Bông thấm

• Cốc mỏ thuỷ tinh

• Bình đựng nước muối.

• Nhiệt kế

• Pipet Pasteur.

• ống nghiệm tan máu thuỷ tinh.

• Giá đựng ống nghiệm để tiến hành kỹ thuật.

• Lam kính.

B Thuốc thử:

• Thuốc thử kháng globulin người

• anti D

• Nước muối 0,9%

Anti-IgG

Anti C3b

Poly-specific

Các loại thuốc thử kháng globulin người

Gồm Anti-IgG Anti-C3b Anti-C3d

Tiến hành kỹ thuật

Chuẩn bị:

Rửa hồng cầu nhóm O và hồng cầu của người cho 3 lần bằng nước muối 0,9%

Pha thành dung dịch hồng cầu 5%

Ly tâm mẫu máu không chống đông của BN tách huyết thanh để làm phản ứng chéo.

Chuẩn bị hồng cầu chứng (Hồng cầu O được cảm nhiễm với kháng thể D)

Tiến hành kỹ thuật

Các bước tiến hành kỹ thuật

Bước 3: Trộn đều Bước 1: Nhỏ

3 giọt huyết

thanh bệnh

nhân

Bước 2: Thêm

1 giọt hồng cầu của người cho 5% Bước 4: Ly tâm

(1000 v/ph/15 -30

giây

Các mức độ ngưng kết

Ngưng kết

Không ngưng kết

Bước 5: Đọc và ghi lại kết quả

Bước 9: Rửa HC 3 lần

bằng nước muối 0,9%

Bước 10:

Thêm 2 giọt kháng globulin

Bước 6: ủ tiếp ở 37˚C

/ 30 phút

Tiến hành kỹ thuật

Bước 11:

Ly tâm (1000 v/ph/

15 -30 giây Bước 8: Đọc, ghi kết quả

Ghi chú: Bước 6 nếu thêm 2 giọt đệm Liss vào ống nghiệm trước khi ủ thì thời gian ủ chỉ còn 15 phút

Bước 7: Ly tâm

1000 v/ph/15 -30 giây

Bước 12: Đọc

và ghi kết quả

Bước 13: Nếu

KQ âm tính thêm 1 giọt

HC chứng

- KQ phải dương tính

- Nếu KQ âm tính phải làm

lại thử nghiệm

Tiến hành kỹ thuật

Bước 15: Đọc, ghi lại kết quả

Bước 14: Ly tâm

1000 v/ph/15 -30 giây

Không NK

NK Không NK

Nhận định kết quả

THANK YOU!