Nghiên cứu thu nhận dịch chiết chứa axid hydroxycitric từ vỏ quả tai chua (garcinia cowa roxb ) để tạo muối kép hydroxycitrat ứng dụng giảm béo phì (tt)

1 MỞ ĐẦU Đặt vấn đề Sự phát triển kỳ diệu với tốc độ vũ bão khoa học công nghệ, không mục tiêu lớn lao nhằm không ngừng cải tạo tự nhiên, đem đến giá trị hoàn mỹ phục vụ đắc lực cho sống thiên đường nhân loại mong muốn Ngày nay, thực tế cho thấy, đại phận người dân sống thị thành có sống đầy đủ vật chất, đặc biệt phần ăn giàu dinh dưỡng thiếu hợp lý nguyên nhân yếu tình trạng thừa cân béo phì gia tăng nhanh chóng phổ biến xã hội đại Tình trạng không gây hậu xấu sức khoẻ, thẩm mỹ cho người, mà gánh nặng cho ngành y nói riêng kinh tế nói chung Theo thống kê Tổ chức Y tế giới (WHO), năm 2014 có khoảng 1,9 tỷ người trưởng thành bị thừa cân (tương đương với 39% dân số), số có 600 triệu người mắc hội chứng béo phì Cũng theo số liệu WHO, số người mắc hội chứng béo phì tăng hai lần so với năm 1980 Chi phí cho công tác quản lý chữa trị hội chứng dự toán chiếm từ 2% - 7% so với tổng chi phí giành cho chăm sóc sức khỏe cộng đồng quốc gia phát triển Theo dẫn liệu từ Cục y tế dự phòng Bộ Y tế năm 2014, Việt Nam – quốc gia thuộc Thế giới thứ có tỷ lệ người trưởng thành bị thừa cân, béo phì chiếm khoảng 25% dân số Các nhà khoa học tiếp tục cảnh báo số mắc phải hội chứng tiếp tục gia tăng có xu hướng nhân rộng vào lứa tuổi vị thành niên Rõ ràng, thừa cân béo phì trở thành vấn nạn, tạo gánh nặng cho giải pháp sức khỏe cộng đồng toàn xã hội, nguyên khơi nguồn cho việc tìm kiếm giải pháp hợp lý có hiệu cao chống lại bệnh kỷ này, bệnh đứng sau đại dịch HIV xung đột vũ trang Một giải pháp quan tâm đến triển vọng ứng dụng vừa đảm bảo tin ́ h hiê ̣u quả , vừa an toàn đố i với sức khỏe đặc biệt sử dụng nguồn nguyên liệu thực vật đa dạng giàu hoạt tính sinh học sẵn có nước Trong số đó , dịch chiết chứa acid hydroxycitric từ vỏ quả bứa - mô ̣t hơ ̣p chấ t thiên nhiên có công giảm béo đươ ̣c sử du ̣ng rộng rãi dạng chế phẩ m muố i hydroxycitrat Từ những năm 50 kỷ trước nhiều tập hợp công trình nghiên cứu công bố hoạt chất acid hydroxycitric muối hydroxycitrat thu nhận chủ yếu từ bứa (bứa tròn - Garcinia cambogia, bứa nhà - Garcinia cochinchinensis (Lour.) Choisy, Garcinia atro viridis, Garcinia indica, …) Đối với tai chua (Garcinia cowa Roxb.) thuộc họ Bứa theo tài liệu công bố hàm lượng acid hydroxycitric chiếm tỷ lệ 27,1% nên tương lai gần, tai chua sử dụng làm nguồn nguyên liệu thống cho mục đích khai thác hoạt chất acid hydroxycitric (HCA) Tuy vậy, acid HCA dễ bị lacton hóa trình hóa cô đặc tạo thành dạng lỏng, không thuận lợi cho trình thương mại hóa, thường chuyển hóa qua dạng muối rắn Bên cạnh đó, muối hydroxycitrat kim loại hóa trị hai (II) lại khó hòa tan nước Vì giải pháp muối kép HCA tạo sản phẩm rắn vừa thuận lợi cho thương mại hóa, vừa có khả hòa tan nước lúc đưa nhiều nguyên tố vi lượng kim loại vào thể, xu hướng quan tâm Tại Việt Nam, có số nghiên cứu công bố có liên quan đến hoạt chất acid hydroxycitric công nghệ tạo muối hydroxycitrat Tuy nhiên, chưa có công trình đề cập hoàn thiện nghiên cứu thành phần hoá học, đặc biệt liên quan đến công nghệ chiết tách tạo muối từ nguồn nguyên liệu tai chua Loài tai chua (Garcinia cowa Roxb.) trồng tập trung hầu hết tỉnh miền núi trung du Bắc (Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Lào Cai, Tuyên Quang, Bắc Giang, Yên Bái, ), trồng nhiều vườn nhà nương rẫy, với sản lượng dự kiến hàng triệu quả/năm Được kế thừa công trình nghiên cứu khoa học công bố có liên quan với vùng nguyên liệu có sản lượng đủ lớn để thực thi ứng dụng, chọn đề tài “Nghiên cƣ́u thu nh ận dịch chiế t chứa acid hydroxycitric tƣ̀ vỏ quả tai chua (Garcinia cowa Roxb.) để tạo muối kép hydroxycitrat ứng dụng giảm béo phì” để thực nội dung luận án tiến sĩ Hy vọng nội dung luận án góp phần hoàn thiện thêm tư liê ̣u về loài thực vật Garcinia cowa Roxb mở triển vọng khả quan quy mô phát triển dược liệu sẵn có nước phương án công nghệ ứng dụng phù hợp , hiệu quả, góp phần n âng cao đời sống nhân dân vùng dược liệu Mục đích nghiên cứu - Xác định hàm lượng acid hydroxycitric (HCA) dich ̣ chiế t vỏ tai chua – Garcinia cowa Roxb - Qui triǹ h tổ ng hơ ̣p muố i kép hydroxycitrat từ dich ̣ chiế t acid hydroxycitric của vỏ quả tai chua – Garcinia cowa Roxb - Đánh giá khả giảm béo đóng góp thêm tư liê ̣u về loài tai chua – Garcinia cowa Roxb Đối tƣợng và phạm vi nghiên cứu * Đối tượng: vỏ tai chua - Garcinia cowa Roxb., đươ ̣c thu hái vào tháng 7, tháng tỉnh Vĩnh Phúc * Phạm vi nghiên cứu: Chiế t xuấ t vỏ quả tai chua - Garcinia cowa Roxb bằ ng dung môi nư ớc; xác định hàm lượng acid hydroxy-citric (HCA); tổng hợp muối kép hydroxycitrat; tác dụng hoạt tính sinh học chế phẩ m muố i kép hydroxycitrat Phƣơng pháp nghiên cƣ́u * Phương pháp lý thuyế t : Tổ ng hơ ̣p tà i liê ̣u về phương pháp nghiên cứu loài Bứa, đă ̣c biê ̣t là loài tai chua - Garcinia cowa Roxb Các phương pháp tổ ng hơ ̣p muố i kép hydroxycitrat * Phương pháp thực nghiê ̣m : Phương pháp lấ y mẫu x lý nguyên liệu Chiế t xuấ t acid hydroxycitric (HCA) tổng hợp muối kép hydroxycitrat Xác định hàm lượng acid, xác định hàm lượng ion kim loại sản phẩm muối kép, phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử - AAS, xác định cấu trúc sản phẩm tổng hợp phương pháp ứng dụng sinh học của muố i kép hydroxycitrat Những điểm luận án a Theo tác giả tra cứu tài liệu tham khảo, lần dịch chiết acid hydroxycitric nghiên cứu loài tai chua - Garcinia cowa Roxb Việt Nam, đạt hàm lượng cao (12,40%) phương pháp chưng ninh với nước dịch acid lần tổng hợp muối kép, mà trước chủ yếu từ loài bứa khác như: Garcinia cambogia, Garcinia indica, Garcinia atroviridis b Theo tác giả tra cứu tài liệu tham khảo, lần tổng hợp 02 muối kép Na/Mg HCA (natri magie hydroxycitrat) Na/Zn HCA (natri kẽm hydroxycitrat) vỏ tai chua - Garcinia cowa Roxb Việt Nam c Chế phẩm muối kép Na/Mg HCA Na/Zn HCA, nghiên cứu tác dụng sinh học đánh giá tính an toàn, thông qua thử nghiệm chuột nghiên cứu tác dụng giảm cân, hạ lipid máu, nghiên cứu độc tính cấp, bán trường diễn Ý nghĩa khoa học thƣ̣c tiễn đề tài Xây dựng quy trình tổng hợp muối kép hydroxycitrat dạng quy mô công nghiệp, tạo nên chế phẩm sinh học vừa hỗ trợ sức khỏe, vừa góp phần làm tăng tính thẩm mỹ nhu cầu làm đẹp ngày “bùng nổ” thời đại Từ quy hoạch vùng nguyên liệu, chuyển đổi trồng, phát triển kinh tế dược liệu, nâng cao thu nhập, nhằm cải thiện điều kiện sống cho người dân vùng khó khăn, vùng dược liệu nước Cấu trúc luận án Luận án gồm 139 trang, có 36 Bảng 83 Hình Phần mở đầu 05 trang, kết luận, đóng góp kiến nghị 03 trang, công trình khoa học công bố 02 trang, tài liệu tham khảo 15 trang Nội dung luận án chia làm 03 chương: Chương Tổng quan, 37 trang Chương Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu, 14 trang Chương Kết thảo luận, 63 trang CHƢƠNG TỔNG QUAN 1.1 Đại cƣơng chi Bƣ́a - Garcinia Họ Bứa (Măng cụt, Clusiaceae hay Guttiferae Antoine Laurent de Jussieu đưa năm 1789), họ thực vật có hoa, bao gồm khoảng 27 - 28 chi 1.050 loài hay chứa 14 chi với 595 loài, tùy theo quan điểm phân loại Chi bứa (danh pháp khoa học: Garcinia) chi rấ t rô ̣ng họ Bứa, loài thực vâ ̣t ta ̣p tính (đủ giố ng hoa hoa đực , hoa cái , hoa lưỡng tính ) hoă ̣c da ̣ng bu ̣i , đươ ̣c phân bố rô ̣ng raĩ ta ̣i khu vực mi ền Nam Châu Phi , vùng nhiệt đới Châu Á , Australia Polynesia Tại Việt Nam, loài thực vật phân bố rô ̣ng khắ p từ các tỉnh miề n Bắ c Tuyên Quang, Vĩnh Phúc, Hòa Bình, đến các tỉnh miề n Trung Hà Tiñ h , Thừa Thiên Huế , Quảng Nam - Đà Nẵng Riêng loà i tai chua chủ yế u t ập trung tỉnh miền Bắc Bắc Trung Bô ̣ 1.2 Mô tả và phân bố loài tai chua 1.2.1 Mô tả thực vật - Loài tai chua tên khoa học Garcinia cowa Roxb., loài mô ̣c thuô ̣c ho ̣ Măng cụt (Clusiaceae) - Thân cỡ trung bình, cao khoảng 16 - 18m, cành nhiều, thẳng, đầu rủ xuống Lá: đơn, mọc đối, dài - 17cm, rộng 2,5 7cm Hoa: ta ̣p tin ́ h nên cụm hoa đực gồm - hoa, xếp thành tán cuống dài 1cm Quả: hình cầu bẹp có - múi; vỏ dày vàng xanh, có - 10 hạt Mùa hoa tháng - 6, mùa tháng - Hình ảnh cây, vỏ khô tai chua (Hình 1.1) 6 Hình 1.1 Cây, và vỏ quả khô tai chua 1.2.2 Phân bố Tai chua loại nhiệt đới cho ăn được, mọc hoang ven rừng Đông Nam Á Nam Thái Lan , Mianma, Indonexia, phân bố miề n Đông bắ c Ấn Độ Tại Việt Nam, mọc rừng núi vùng trung du tỉnh Bắc Bộ Bắc Trung Bộ như: Cao Bằng, Lạng Sơn, Hoà Bình, Vĩnh Phúc, Phú Thọ, Thanh Hóa , Nghệ An, Hà Tĩnh , các rừng thứ sinh 1.3 Thành phần hóa học Trong quả tai chua có chứa phầ n lớn là acid hydroxycitric (HCA) (chiếm từ 23% đến 25% vỏ khô), với hàm lượng nhỏ không đáng kể là các hơ ̣p chấ t lacton của acid hydroxycitric, acid oxalic, flavonoid (trong vỏ ), hơ ̣p chấ t xanthon (isoxanthochymol và xanthochymol), hơ ̣p chấ t gluxit 1.4 Tình hình nghiên cứu acid hydroxycitric (HCA) loài tai chua 1.4.1 Trên thế giới a Nghiên cứu cấu trúc acid hydroxycitric (HCA) Acid hydroxycitric (acid 1,2 dihydroxypropan-1,2,3-tricarboxylic) đươ ̣c tim ̀ thấ y lầ n đầ u tiên tự nhiên là thành phầ n chiń h loại có tính acid cao Garcinia cambogia Lewis Nee lakantan (2001), nhâ ̣n thấ y đồ ng phân cấ u trúc của acid hydroxycitric không bề n vững; chuyể n hóa acid sang các da ̣ng muố i kali , canxi hydroxycitrat bền vững (Hình 1.2) 7 Hình 1.2 Cấ u trúc của (-)-HCA và da ̣ng lacton b Về hàm lượng acid hydroxycitric (HCA) Đối với vỏ khô Garcinia cowa Roxb.: có hai phương pháp tiến hành chiết xuất acid hữu Phương pháp 1, hàm lượng acid đươ ̣c xác đinh ̣ bằ ng phương pháp chuẩ n đô ̣ acid – base với dung dich ̣ NaOH 0,1N và chấ t chỉ thi ̣phenolphtalein , 27% so với khố i lươ ̣ng của vỏ khô Phương pháp 2, thu đươ ̣c lươ ̣ng acid HCA khoảng 26,3% 25,4% bằ ng phương pháp chuẩ n đô ̣ acid - base với dung dich ̣ NaOH 0,1N chất thị phenolphtalein Kế t quả phân tích hệ thống sắ c ký lỏng hiê ̣u cao – HPLC, giá trị thời gian lưu HCA tai chua (5,842 phút) gần với kết qủa phân tích HCA bứa Garcinia cambogia (5,3 phút) 1.4.2 Tại Việt Nam Năm 2013, nghiên cứu sinh Đă ̣ng Quang Vinh báo cáo luâ ̣n án tiế n si ̃ với đề tài “Nghiên cứu chiế t tách , chuyể n hóa hydroxycitric acid lá , vỏ bứa ứng dụng tạo sản phẩm giảm béo” ; tác giả xá c định hàm lượng acid hydroxycitric bằ ng sắ c ký lỏng hiê ̣u cao – HPLC (15,28%) từ loài bứa Garcinia oblongifolia Champ Ex Benth 1.5 Kết quả tạo chế phẩm hydroxycitrat từ acid hydroxycitric (HCA) 1.5.1 Nghiên cứu giới a Muối đơn Các nhà khoa học B.S Jena G K Jayaprakasha, R P Singh, phát cấu trúc acid không bền vững, khó bảo quản thời gian sử dụng, nên chuyển hóa sang dạng muối đơn kali, canxi hydroxycitrat bền vững, thuận lợi sử dụng bảo quản b Muối kép Năm 2000, Balasubramanyam, K., Chandrasekhar B., Rama-doss, C S., Rao; công bố phương pháp tạo thành cặp muối kim loại hòa tan nhóm IA IIA HCA (Hình 1.3) Hình 1.3 Công thƣ́c cấ u ta ̣o muố i kép kim loa ̣i nhóm IA và IIA Gokaraju cùng với các cô ̣ng sự , đã đưa kế t quả nghiên cứu về “Quá trình chuẩ n bi ̣mẫu ta ̣o muố i kép mới của acid hydroxycitric” , theo các tác giả đã đưa cấu trúc chúng xác định Hình 1.4 Hình 1.4 Cấ u trúc muố i kép của kim loa ̣i nhóm IIA với (-)-HCA Trong đó, X và Y phu ̣ thuô ̣c vào kim loa ̣i đươ ̣c lựa cho ̣n từ những kim loa ̣i nhóm II (IIA và IIB ) bảng hệ thống tuần hoàn : Be, Mg, Ca, Sr, Ba và Ra (nhóm IIA), Zn, Cd 1.5.2 Nghiên cứu nước a Muối đơn Hiện nay, theo tài liệu tham khảo chúng tôi, có tác giả Đặng Quang Vinh, công bố Luận án tiến sĩ acid hydroxycitric chuyển hóa acid hydroxycitric từ vỏ, loài bứa (Garcinia oblongifolia Champ.) ứng dụng giảm béo phì Qua đó tác giả đã tổ ng h ợp muố i đơn hydroxycitrat của kim loa ̣i nhóm IA và IIA , muố i HCK , HCCa b Muối kép Theo những tài liê ̣u chúng tham khảo ta ̣i Viê ̣t Nam , chưa có công trình khoa học công bố tổ ng hơ ̣p muố i kép của HCA Đặc biệt, muối kép dịch chiết acid hydroxycitric từ vỏ tai chua - Garcinia cowa Roxb., tài đề cập đến 9 1.6 Vai trò muố i hydroxycitrat từ HCA chăm sóc sức khỏe cộng đồng 1.6.1 Hoạt tính độc tính cấp Năm 2002, tác giả gồm Sunny E Ohia, Catherine A Opere, Angela M Leday, Manashi Bagchi, Debasis Bagchi và Sidney J Stohs, đã muối quan hệ tác độ ng giữa muố i kép HCA với v ỏ não chuô ̣t ba ̣ch ta ̣ng, thông qua hơ ̣p chấ t 5-hydro-xytryptamine hoă ̣c serotonin ([3H]-5-HT), hơ ̣p chấ t này tham gia vào viê ̣c điề u khiể n cảm giác về sự thèm ăn thông qua hệ thống dẫn truyề n thầ n kinh 1.6.2 Hoạt tính giảm béo thể Năm 2003, Michael Shara, Sunny E Ohia, công bố kết “Phát đặc tính tác động hóa lý dịch chiết acid hydroxycitric đến trọng lượng thể, phận thể chọn, gan nhiễm mỡ, phân mảnh DNA, huyết học mô bệnh học với thời gian 90 ngày”, theo muối canxi kali hòa tan với 60% HCA chiết từ Garcinia cambogia, mẫu sấ y khô lưu trữ ở nhiệt độ phòng 18 ÷ 250C CHƢƠNG NGUYÊN LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CƢ́U 2.1 Nguyên liêụ 2.2 Phƣơng pháp nghiên cƣ́u 2.2.1 Phương pháp lấy mẫu 2.2.2 Phương pháp vật lý 2.2.3 Phương pháp chiế t tách 2.2.4 Ảnh hưởng số yếu tố công nghệ đến hiệu suất thu tổng hàm lượng acid chiết nước áp suất cao a Khảo sát yếu tố thời gian b Khảo sát tỷ lệ rắn/lỏng c Kết tủa pectin 2.2.5 Phương pháp chuẩ n độ (TCVN 4589-88) 2.2.6 Tổng hợp muối kép hydroxycitrat 2.2.7 Phân tích đánh giá, kiểm tra muối kép hydroxycitrat 10 2.2.8 Phương pháp nghiên cứu tác dụng giảm béo đánh giá tác động an toàn CHƢƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 Nguyên liêu: ̣ Quả tai chua thu hái vào tháng 7, tỉnh Vĩnh Phúc, khu vực Bắc Bộ, xác đinh ̣ thực vâ ̣t tiến sĩ Nguyễn Thế Cường mẫu tiêu lưu Viện sinh thái Tài nguyên sinh vật, thuộc Viện Hàn lâm Khoa học Công nghệ Việt Nam 3.2 Khảo sát số yế u tố trọng lƣợng vỏ tai chua – Garcinia cowa Roxb 3.2.1 Xác định độ ẩm * Chúng tiến hành 05 thí nghiệm thu độ ẩm trung bình 14,250% Kết cho thấy độ ẩm nguyên liệu vỏ tai chua cao, cần sấy khô nguyên liệu trình bảo quản 3.2.2 Khảo sát hàm lượng tro hóa Kết tro hóa vỏ tai chua thấp (5,435%), nghĩa thành phần hữu tai chua chiếm tỷ lệ cao 3.2.3 Xác định thành phần kim loại nặng Kế t quả phân tích giá trị kim loại thu được, cụ thể: Sn (mg/l) 0,43/14; Pb (mg/l) 0,021/0,1; Cd (mg/l) 0,073/1,0; Hg (mg/l) 0,0003/0,005; MeHg (methyl thuỷ ngân) As không phát Thành phầ n kim loại nặng tai chua - Garcinia cowa Roxb thấ p rấ t nhiề u so với “Quy chuẩ n kỹ thuâ ̣t quố c gia đố i với giới ̣n ô nhiễm kim loại nặng thực phẩm” 3.3 Chiết tách HCA từ vỏ quả tai chua – Garcinia cowa Roxb nƣớc áp suất cao Chúng ti ến hành chiế t xuấ t acid hydroxycitric (HCA) từ vỏ tai chua – Garcinia cowa Roxb., phương pháp chưng ninh nồi áp suất (mục 2.2.3 chương 2) theo sơ đồ Hin ̀ h 3.1 sau: 11 Vỏ tai chua + nước + áp suất Tẩy màu Dịch chiết acid tẩy màu Chiết acid hữu Cô đặc dịch chiết Lọc vải Tách loại pectin Phân tích, đánh giá chất lượng dịch chiết Hình 3.1 Sơ đồ nghiên cứu chiết xuất acid hữu từ vỏ quả tai chua với nƣớc áp suất cao 3.4 Ảnh hƣởng số yếu tố công nghệ đến hiệu suất thu tổng hàm lƣợng acid chiết nƣớc áp suất cao 3.4.1 Yếu tố thời gian Kế t quả thu thời gian chưng ninh t= 90 phút với hàm lượng acid hữu thu lớn 23,055 (g/100g) 3.4.2 Khảo sát tỷ lệ rắn/lỏng Với tỷ lệ rắn lỏng 10g nguyên liệu/200 mL nước, hàm lượng acid hữu thu lớn 23,715 (g/100g) 3.4.3 Ảnh hưởng tỷ lệ thể tích dịch chiết/thể tích cồn 960 Với tỷ lệ 50mL dịch chiết /150mL cồ n 960 lượng pectin thô trung bình 12,863% *Kế t luâ ̣n: Dựa mô ̣t số kế t quả khảo sát, đưa các điề u kiê ̣n ảnh hưởng đến hiệu suất chưng ninh tối ưu vỏ tai chua khô, cụ thể: áp suất 0,15MPa, nhiệt độ khoảng 1270C, thời gian chiế t (90 phút), tỷ lệ rắn /lỏng (10g nguyên liệu/200mL nước), thể tích dịch chiết/cồ n 960 (50mL dịch chiết/150mL cồ n 960) 3.5 Xác định hàm lƣợng acid HCA thu đƣợc từ vỏ quả tai chua Garcinia cowa Roxb 3.5.1 Chuẩn độ acid Hàm lượng acid tổ ng thu đươ ̣c quá triǹ h chưng ninh nồ i áp suấ t , khoảng 23,784g/100g, ứng với hiệu suất 23,8%, giá trị 12 không chênh lệch đáng kể so với tài liệu tham khảo (27,1g±0,760/100g, hiệu suất 27,1%) loài tai chua Kết cao so với hàm lươ ̣ng HCA mô ̣t số loài bứa khác Garcinia cambogia (17-19,2%), Garcinia indica (12,48-15,1%) 3.5.2 Phương pháp sắ c ký lỏng hiê ̣u cao – HPLC a Kế t quả xây dựng đường chuẩ n Dựa vào kế t quả Hình 3.2, thấy nồng độ HCA có tương quan tuyế n tin ́ h giữa nồ ng đô ̣ và đô ̣ hấ p thu ̣ quang , từ đó có đươ ̣c phương triǹ h Y = 0,59746413.X - 0,5499125; ̣ số tương quan (correlation) 0,99996 Hình 3.2 Đƣờng chuẩn HCA máy phân tích HPLC b Hàm lượng HCA dịch chiết từ vỏ tai chua Chúng thu tín hiệu peak thời gian lưu R= 5,974 phút có hàm lượng cao (12,40%) giá trị chênh lệch không đáng kể so với kế t quả nghiên cứu thế giới về acid hydroxycitric loài tai chua – Garcinia cowa Roxb 3.5.3 Phổ hồng ngoại – IR Dựa phổ IR, thấ y, tín hiệu ʋ= 3403.4 cm-1, tín hiệu dao động hoá trị nhóm –OH; tương tự vâ ̣y ta ̣i ʋ= 1605.2 cm-1, đươ ̣c xác đ ịnh vị trí nhóm -C(=O)-; chứng tỏ dịch chiết vỏ tai chua có chứa acid hữu 3.6 Tổ ng hơ ̣p muố i kép K/Ca hydroxycitrat (K/Ca HCA) 3.6.1 Quy trình thực nghiệm 3.6.2 Xác định hàm lượng cấu trúc muối kép K/Ca HCA a Sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) 13 Tại tín hiệu peak thời gian lưu 5,976 phút, thu hàm lượng muối kép tinh khiết 96,87%, giá trị không khác biệt đáng kể với thời gian lưu dịch chiết acid HCA (R= 5,974 phút) Chứng tỏ muối kép K/Ca HCA có chứa gốc acid HCA b Phổ hồ ng ngoa ̣i IR Kết cho thấy: bước sóng của nhóm –COO- có giá trị lần lươ ̣t ʋ = 1599,04 cm-1; ʋ = 1592,23 cm-1; ʋ = 1614,78 cm-1 c Kiể m tra cấ u trúc bằ ng phổ cô ̣ng hưởng từ ̣t nhân - NMR * Phổ 13C-NMR của muố i kép K/Ca HCA: phổ 13C-NMR xuất vân phổ có giá trị δ= 42,452 ppm ứng với carbon methylen; δ= 76,581 ppm ứng với carbon methin δ= 79,687 ppm carbon bậc * Phổ 1H-NMR của muố i kép K/Ca HCA: tín hiệu phổ 1H-NMR proton methylen (HA-4 HB-4) xuất δ= 2,999 ppm δ= 3,054 ppm Vân phổ δ= 4,360 ppm, proton nhóm methin (H-2) Các proton nhóm -OH -COOH phổ 1H-NMR (D2O, 300MHz) d Phổ khối – MS muối kép K/Ca HCA Kết phân tích thu m/z = 206,6; mảnh acid hydroxycitric e Hàm lượng ion K+ Ca2+ sản phẩm muối kép Kết phân tích sắc ký trao đổi ion cho thấy, không có sự chênh lê ̣ch đáng kể giá trị lý thuyết thực nghiệm sản phẩm muối kép (14,02%/13,70% = 1,023 14,08%/13,73% = 1,025) 3.6.3 Kiểm tra khả hút ẩ m của muố i kép K/Ca HCA Kiể m tra khả hút ẩ m c muối kép K/Ca HCA với các mố c thời gian 30 phút, 60 phút, 120 phút, 180 phút 360 phút; thấy khối lượng muối kép không tăng (5,417g/5,417g) *Kế t luâ ̣n 1: Từ những dữ liê ̣u phân tích t rên, khẳ ng đinh, ̣ tổng hợp thành công muối kép K/Ca hydroxycitrat Muối 14 kép có màu trắng, không mùi, vị nhạt, thuận lợi cho việc sử dụng làm thực phẩm Cấu trúc muối kép K/Ca HCA có dạng Hình 3.3 Hình 3.3 Cấ u trúc của muố i kép K/Ca HCA 3.7 Tổ ng hơ ̣p muố i kép K/Mg hydroxycitrat (K/Mg HCA) 3.7.1.Quy trình thực nghiệm 3.7.2 Xác định hàm lượng cấu trúc muố i kép K/Mg HCA a Sắc ký lỏng hiệu cao – HPLC Tại tín hiệu peak thời gian lưu 5,980 phút, thu hàm lượng muối kép tinh khiết 95,71%, giá trị không khác biệt đáng kể với thời gian lưu dịch chiết acid HCA (R= 5,974 phút) b Phổ hồ ng ngoa ̣i – IR Từ các kế t quả thu đươ ̣c , khẳng định bước đầu cấ u trúc phổ hồng ngoại - IR muối K/Ca HCA, HCCa chuẩn muối kép K/Mg hydroxycitrat tổ ng hơ ̣p tương tự (Hình 3.4) Hình 3.4 Phổ hồ ng ngoa ̣i của muố i kép K/Mg hydroxycitrat c Phổ 13C-NMR Từ phổ đồ 13C-NMR, thấ y ta ̣i p eak có giá trị δ= 41,892 ppm là kết tương ứng với nhóm carbon methylen (-CH2-’), peak có δ= 75,640 ppm; 78,512 ppm là c nhóm carbon methin (-CH-) carbon bâ ̣c (C-2,2’ C-3,3’) d Phổ 1H-NMR 15 Chúng thấy tín hi ệu phổ 1H-NMR proton methylen (-CH2) xuất peak 2,76 ppm 3,60 ppm Peak tín hiệu đơn 4,055 ppm thể proton nhóm methin (-CH-) e Phổ MS của muố i kép K/Mg HCA tổ ng hơ ̣p Kết phân tích thu m/z= 206,0 m/z= 411,3; giá trị mono double acid hydroxycitric g Hàm lượng ion kim loại phương pháp sắc ký ion (IC) Hàm lượng ion kim loại muối kép xác định phương pháp sắ c ký ion là: K+ (26,41%) Mg2+ (4,04%) Hình 3.5 Cấ u trúc của muố i kép K/Mg HCA Từ giá trị trên, dự đoán cấ u trúc của muố i kép K/Mg hydroxycitrat phù hợp với cấu trúctrên Hình 3.5 3.7.3 Kiểm tra khả hút ẩ m của muố i kép K/Mg HCA Dựa vào mốc thời gian đánh giá: 30 phút, 60 phút, 120 phút, 180 phút 360 phút; thấy khối lượng muối kép không tăng (5,135g/5,135g) *Kế t luâ ̣n 2: Từ những dữ liê ̣u phân tić h , khẳ ng đinh, ̣ tổng hợp thành công muối kép K/Mg hydroxycitrat từ dịch chiết acid (-)-HCA loài tai chua 3.8 Tổ ng hơ ̣p muố i kép Na /Mg hydroxycitrat (Na/Mg HCA) – sản phẩ m muố i kép mới 3.8.1 Quy trình thực nghiệm 3.8.2 Xác đinh ̣ hàm lượng muố i kép Na/Mg HCA bằ ng sắ c ký lỏng hiê ̣u cao – HPLC Tại tín hiệu peak thời gian lưu 5,977 phút, khố i lươ ̣ng mẫu 101,26 mg, thể tích pha loañ g 100 mL, giá trị định lượng mẫu s ắc ký 16 đồ HPLC 98,77366 (mg/l); thu đươ ̣c hàm lư ợng muối kép 97,54% Giá trị không khác biệt đáng kể với thời gian lưu dịch chiết acid HCA (R = 5,974 phút) Chứng tỏ muối kép có gốc acid HCA 3.8.3 Xác định cấu trúc muối kép a Đo phổ hồ ng ngoa ̣i – IR Dựa vào phổ IR muối kép Na/Mg HCA, thấy tín hiê ̣u peak bước sóng ʋ= 3411,4 cm-1, có giá trị gầ n giố ng với tín hiê ̣u phổ chuẩn (ʋ= 3400,11cm-1) muố i kép K /Ca hydroxycitrat mà công bố (ʋ= 3352,08 cm-1) b Phổ cô ̣ng hưởng từ ̣t nhân – NMR của muố i kép Na/Mg HCA *Phổ 13C-NMR của Na/Mg HCA Trên phổ 13C-NMR xuất các giá tri ̣của vân phổ có δ= 42,238 ppm ứng với nhóm carbon methylen, δ= 75,979 ppm ứng với carbon methin δ= 78,594 ppm ứng với carbon bậc Ngoài phổ đồ có vân phổ với giá trị sau δ= 178,271 ppm; δ= 177,768 ppm δ= 177,584 ppm carbon carbonyl (C-1, C-5 C-6) nhóm carboxylat * Phổ 1H-NMR của Na/Mg HCA Tín hiệu phổ 1H-NMR proton methylen (HA-4 HB-4) xuất δ=2,745 ppm δ= 3,588 ppm Vân phổ δ= 4,061 ppm, có đỉnh cho thấy proton nhóm methin (H-2) c Phổ khố i – MS của muố i kép Na/Mg HCA Quan sát phổ khố i MS , thấy xuất giá trị mảnh có m/z= 206,9 m/z= 411,6, là giá tri ̣của cấ u trúc dạng mono và double acid HCA thành phần muố i kép d Phương pháp khố i phổ phân giải cao – HRMS Chúng nhâ ̣n thấ y muố i kép Na /Mg HCA có các giá tri ̣ khối lượng thực nghiê ̣m (542,9415) giá trị khối lượng lý thuyết (542,9431), 17 kết phân tích, không chênh lê ̣ch đáng kể ; cụ thể Δkhối lượng= 542,9431 – 542,9415= 0,0016 Da= 1,6 mDa (mili dalton ) Như vâ ̣y sự chênh lê ̣ch khối lượng nhỏ mDa là đa ̣t yêu cầ u 3.8.4 Hàm lượng ion kim loại muối kép Na/Mg HCA a Phương pháp sắ c ký ion Chúng thấy tỷ lệ hai ion kim loại Na + Mg 2+ không có sự chênh lê ̣ch đáng kể giữa thực nghiê ̣m so với lý thuyế t (17,37%/4,58% = 3,79 17,49%/4,56% = 3,84) b Phương pháp phân tích quang phổ phát xạ ghép khối phổ hay phương pháp khối phổ plasma cảm ứng (ICP/MS) Tỷ lệ hàm lượng ion kim loại muối kép có giá trị tương đương so sánh giữa lý thuyế t (17,49%/4,56% = 3,84 & 92/24 = 3,83) thực tế (11,35%/4,13% = 2,75 & 1602,24/529,51 = 3,03) 3.8.5 Kiểm tra khả hút ẩ m của muố i kép Na/Mg HCA Kiể m tra khả hút ẩ m muối kép Na/Mg HCA với mốc thời gian 30 phút, 60 phút, 120 phút, 180 phút 360 phút; thấy khối lượng muối kép không tăng (5,263g/5,263g) Hình 3.6 Cấ u trúc của muố i kép Na/Mg HCA *Kế t luâ ̣n 3: Từ dữ liê ̣u phân tić h , khẳ ng đinh ̣ , tổng hợp thành công muối kép Na/Mg hydroxycitrat từ dịch chiết acid (-)-HCA loài tai chua (Hình 3.6) 3.9 Tổ ng hơ ̣p muố i kép Na/Zn hydroxycitrat (Na/Zn HCA) 3.9.1 Qui trình tổ ng hợp 3.9.2 Xác định hàm lượng muối kép Na/Zn HCA Tại tín hiệu peak thời gian lưu 5,979 phút,với khố i lươ ̣ng mẫu 101,15 mg, thể tić h pha loañ g 50 mL, giá trị định lượng s ắc ký đồ 18 HPLC là 192,174 (mg/l); hàm lượng muối kép thu đươ ̣c 95,00% Và giá trị không khác biệt đáng kể với thời gian lưu dịch chiết acid HCA (R= 5,974 phút) Chứng tỏ muối kép chứa gốc acid HCA 3.9.3 Kiểm tra cấ u trúc của muố i kép Na/Zn HCA a Phân tić h phổ hồ ng ngoa ̣i IR muối kép Na/Zn HCA Kế t quả đươ ̣c thể hiê ̣n Hình 3.7 Hình 3.7 Phổ IR của muố i kép Na/Zn HCA Các tín hiệu nhóm chức –OH, -COO, -CO với bước sóng 3423 cm-1, 1588,4 cm-1, 1396,7 cm-1 nhóm ch ức phổ IR muố i kép Na /Zn HCA nhóm chức công thức cấu tạo muối kép Na/Mg HCA, K/Ca HCA b Phân tích cấ u trúc bằ ng phổ cô ̣ng hưởng từ ̣t nhân – NMR * Phổ 13C-NMR của Na /Zn HCA: tín hiệu peak δ= 42,2135 ppm; là tiń hiê ̣u của nhóm carbon methylen (-CH2-); peak có δ= 75,829 ppm; δ= 76,532 ppm; tín hiệu nhóm carbon methin (CH-); carbon bậc thể δ= 76,832 ppm * Phổ 1H-NMR của Na/Zn HCA: tín hiệu peak có δ= 2,70 ppm δ= 2,45 ppm là tin ́ hiê ̣u của nhóm methylen (–CH2-), tín hiệu δ= 4,257 ppm thể nhóm methin (-CH-) c Phân tić h phổ khố i – MS Kết phân tích thu m/z= 210,9; mảnh acid hydroxycitric d Phân tích khối phổ phân giải cao Kết thu đư ợc muố i kép Na /Zn HCA có các giá tri ̣ khối lượng thực nghiê ̣m (296,9568) khối lượng lý thuyết (296,9559) không chênh lê ̣ch đáng kể ; cụ thể Δkhối lượng= 296,9568 – 296,9559 = 19 0,0009 Da = 0,9 mDa (mili dalton ) Như vâ ̣y sự chênh lê ̣ch khối lượng nhỏ nhiều (0,9 mDa) so với giá trị cho phép phép đo (5 mDa) đạt yêu cầu cao phân tích 3.9.4 Xác định hàm lượng kim loại muố i kép Na/Zn HCA a.Phương pháp quang phổ hấ p thu ̣ nguyên tử - AAS Kế t quả hàm lươ ̣ng ion kim loa ̣i thu Zn2+ 223 (mg/g) Na+ 81,6 (mg/g) b Phương pháp quang phổ phát xa ̣ nguyên tử ghép khối phổ – ICP MS Kết đường chuẩn ứng với ion kim loại , thu hàm lượng ion kim loa ̣i Na+ (99,59%) Zn2+ (99,72%) Hình 3.8 Công thƣ́c cấ u ta ̣o của muố i kép Na/Zn HCA Dựa kết ph ân tích, thu giá trị hàm lượng ion Na+ tổ ng hơ ̣p là 7,1% (lý thuyết 7,8%), ion Zn2+ thực tế là 19,95% (lý thuyết 22,2%); thấy tỷ lệ ion kim loại cấu trúc muối kép Na /Zn HCA không có sự chênh lê ̣ch nhiề u giữa lý thuyế t 2,85 (22,2%/7,8%) thực tế 2,81 (19,95%/7,1%) Công thức cấu tạo có dạng hình Hình 3.8 3.9.5 Kiểm tra khả hút ẩ m của muố i kép Na/Zn HCA Dựa vào mốc thời gian đánh giá: 30 phút, 60 phút, 120 phút, 180 phút 360 phút; thấy khối lượng muối kép không tăng (5,217g/5,217g) *Kế t luâ ̣n 4: Từ những dữ liê ̣u phân tić h , khẳng đinh ̣ t hợp thành công muối kép Na/Zn hydroxycitrat từ dịch chiết acid HCA loài tai chua - Garcinia cowa Roxb 3.10 Tổ ng hơ ̣p muố i kép Na/Ca HCA 20 3.10.1 Quy trình thực nghiệm 3.10.2 Xác định hàm lượng muối kép Na/Ca HCA bằ ng HPLC Tại tín hiệu peak thời gian lưu 5,981 phút, với khố i lươ ̣ng mẫu cân 185,823 mg, thể tić h pha loañ g 100 mL, giá trị định lượng mẫu sắc ký đồ HPLC là 179,77988 (mg/l); thu đươ ̣c muối kép có đ ộ tinh khiết cao (96,75%), đồng thời giá trị không khác biệt đáng kể với thời gian lưu dịch chiết acid HCA (R= 5,974 phút) 3.10.3 Xác định cấ u trúc của muố i kép Na/Ca HCA a Phổ hồ ng ngoa ̣i – IR Phổ IR của muố i kép Na /Ca HCA cho thấy, tín hiệu peak nhóm – OH có số sóng υ= 3404,9 cm-1, có giá trị gần giống với tín hiệu tài liệu tham khảo (υ= 3400,11 cm ) tín hiệu muố i kép K /Ca HCA đã -1 công bố trước đó (υ= 3352,08 cm-1) nhóm –OH b Phổ cộng hưởng từ hạt nhân NMR * Phổ C-NMR muối kép Na/Ca HCA: peak δ= 13 42,682 ppm; 45,768 ppm; là tin ́ hiê ̣u của nhóm metylen (-CH2-); peak có δ= 58,051 ppm; 76,882 ppm; 79,377 ppm tín hiệu nhóm methin (-CH-) * Phổ 1H-NMR của Na/Ca HCA: tín hiệu peak có δ= 3,03 ppm δ= 3,18 ppm tín hiệu nhóm methylen (-CH2-), tín hiệu nhóm methin (-CH-), đươ ̣c thể hiê ̣n ở δ= 4,53 ppm c Phân tích phổ khố i – MS muối kép Na/Ca HCA Phổ MS của muố i kép Na /Ca hydroxycitrat (m/z = 268) cho thấ y tín hiệu mảnh có m/z = 205,7 m/z = 223,6; chứng tỏ cấ u trúc muố i kép có chứa phân tử acid HCA 3.10.4 Xác định hàm lượng kim loại muối kép Na/Ca HCA Giá trị thực nghiệm thu phương pháp sắc ký trao đổi ion (IC) 1,76 (14,96%/8,51%) lý thuyết 1,74 (14,93%/8,58%) Như vâ ̣y, công thức cấu tạo muố i kép Na /Ca HCA tổng hợp có dạng 21 Hình 3.9 Hình 3.9 Công thức cấu tạo muối kép Na/Ca HCA 3.10.5 Kiểm tra khả hút ẩ m của muố i kép Na/Ca HCA Kết kiểm tra khả hút ẩ m c muối kép Na/Ca HCA với mốc thời gian 30 phút, 60 phút, 120 phút, 180 phút 360 phút; cho thấy khối lượng không thay đổi so với ban đầu (5,312g/5,312g) *Kế t luâ ̣n 5: Từ tất liệu trên, khẳng định tổng hợp thành công muôi kép Na/Ca HCA; đồng thời kiểm chứng khả hút ẩm, màu sắc, mùi vị trình tổng hợp 3.11 Nghiên cứu đánh giá tính an toàn và tác dụng giảm béo muối kép Na/Mg HCA Na/Zn HCA 3.11.1 Kết nghiên cứu tác dụng giảm cân, hạ lipid máu a Sự thay đổi thể trọng lô chuột nghiên cứu Kết thay đổi thể trọng chuột uống Na/Mg HCA Na/Zn HCA sau tuần thể sau: muối Na/Mg HCA = (140,60/220,50) (gam); muối Na/Zn HCA = (140,36/220,50) (gam) b Sự thay đổi nồng độ cholesterol toàn phần, Triglycerid, HDLCholesterol, LDL-Cholesterol, VLDL-Cholesterol, số Atherogenic index (A.I) máu lô chuột nghiên cứu * Giảm số lipid xấu (mg/dl) (sau/trước TN): Triglycerid= 0,76/1,05 & 0,84/1,05; Cholesterol toàn phần = 3,98/5,66 &4,12/5,66; LDL cholesterol máu = 2,35 /3,99 &2,36/3,99; VLDL cholesterol máu = 0,34/0,48 & 0,39/0,48 * Tăng lipid máu tốt (mg/dl): HDL cholesterol= 1,28/1,20 & 1,36/1,20 3.11.2.Độc tính cấp a Muối Na/Mg HCA 22 Xác định giá trị LD50 muối Na/Mg HCA theo đường uống chuột nhắt trắng là:LD50= 1406,443 (1264,787 ÷ 1563,965) mg/kg P= 0,05 b Muối kép Na/Zn HCA Chưa tìm thấy LD50 muối Na/Zn HCA theo đường uống chuột nhắt trắng Với mức liều cao chuột uống 24h 6000mg/kg thể trọng 3.11.3 Kết nghiên cứu độc tính bán trường diễn a Ảnh hưởng muối Na/Mg HCA Na/Zn HCA lên tình trạng chung thay đổi thể trọng chuột cống trắng dùng dài ngày: kết cho thấy lông, da, niêm mạc, chất tiết bình thường; chế phẩm hạn chế đáng kể tăng cân chuột so với lô chứng sinh lý b Ảnh hưởng muối Na/Mg HCA Na/Zn HCA điện tim chuột: điện tim chuột bình thường; da, niêm mạc, chất tiết bình thường c Ảnh hưởng muối kép Na/Mg HCA Na/Zn HCA số tiêu huyết học chuột: kết cho thấy chế phẩm không làm thay đổi số huyết học (số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu) d Đánh giá khả ảnh hưởng muối Na/Mg HCA Na/Zn HCA lên tiêu sinh hóa máu: chế phẩm không làm thay đổi tiêu sinh hóa bao gồm nồng độ men gan AST, ALT máu, bilirubin toàn phần máu, creatinin máu, albumin huyết tương e Kết mô bệnh học nội tạng chuột thí nghiệm với muối kép Na/Mg HCA Na/Zn HCA: Quan sát kính lúp có độ phóng đại 25 lần, thấy: màu sắc, hình thái gan, lách thận hai lô dùng muối kép không khác so với lô chứng sinh lý 3.11.4 Kết luận tác dụng giảm béo đánh giá tính an toàn động vật 23 Từ kết thu thực nghiệm, kết luận: - Các lô chuột dùng chế phẩm nghiên cứu mức liều 94 mg/kg/24h & 282 mg/kg/24h (muối Na/Mg HCA); 250mg/kg/24h & 750mg/kg/24h (muối Na/Zn HCA), sau 60 ngày cho thấy: chuột thí nghiệm hoạt động bình thường; tình trạng lông, da, niêm mạc, chất tiết chuột bình thường; không gây ảnh hưởng sóng điện tim chuột - Không làm thay đổi số huyết học (số lượng hồng cầu, hàm lượng huyết sắc tố, hematocrit, thể tích trung bình hồng cầu, số lượng bạch cầu, số lượng tiểu cầu) Không làm thay đổi tiêu sinh hóa bao gồm nồng độ men gan AST, ALT máu, bilirubin toàn phần máu, creatinin máu, albumin huyết tương Không gây tổn thương mô bệnh học gan, lách, thận Trọng lượng chuột dùng chế phẩm không biến đổi, trọng lượng chuột lô chứng sinh lý tăng (p < 0,01) Chỉ số cholesterol máu toàn phần lô dùng chế phẩm giảm so với lô chứng sinh lý so với trước dùng chế phẩm Như chế phẩm với liều lượng thời gian sử dụng nghiên cứu thực nghiệm chuột cống trắng có tính an toàn cao, có tác dụng làm giảm cholesterol máu ngăn cản tăng cân chuột cống trắng bình thường (chuột không gây béo phì, rối loạn lipid máu) KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I KẾT LUẬN Đã xác định xác tên khoa học mẫu nguyên liệu sử dụng nghiên cứu để thu nhận dịch chiết Garcinia cowa Roxb., thuộc họ Bứa (Clusiaceae hay Guttiferae) có xuất xứ từ tỉnh Vĩnh Phúc Đã đề xuất quy trình tổng thể tạo muối kép hydroxycitrat từ dịch chiết có diện HCA kết hợp với kim loại dạng ion Kết quả, tạo 05 muối kép là: K/Ca HCA, K/Mg HCA, Na/Mg HCA Na/Zn HCA Na/Ca HCA 24 Các sản phẩm muối kép tự tạo có khả khắc phục số nhược điểm tồn muối đơn hydroxycitrat khả hút ẩm, màu sắc, mùi vị Đã nghiên cứu vai trò giảm béo, hạ lipid máu 02 sản phẩm muối kép: Na/Mg HCA: liều dùng 94mg/kg/ngày 282mg/kg/ngày; Na/Zn HCA: liều định 250mg/kg/ngày 750mg/kg/ngày Xác định giá trị LD50 sản phẩm muối kép Na/Mg HCA (1406,443mg/kg) Ngược lại, muối kép Na/Zn HCA giá trị đại số LD50 Liều tương đương với liều điều trị Bán trường diễn muối kép tự tạo dùng 60 ngày, kết cho thấy số huyết học tiêu sinh hóa không thay đổi; hình ảnh mô bệnh học chuột biến đổi so với ban đầu; khẳng định chế phẩm nghiên cứu có tính an toàn cao với khảo sát đánh giá động vật thực nghiệm II KIẾN NGHỊ Tiếp tục nghiên cứu tổng hợp thêm nhiều loại muối kép khác, đặc biệt loại muối kép với 03 nguyên tố kim loại để làm thực phẩm chức giảm cân có hiệu cao Nghiên cứu xây dựng quy trình công nghệ chiết tách HCA sản xuất muối kép quy mô công nghiệp làm sở cho việc thương mại hóa sản phẩm Nghiên cứu điều kiện sinh trưởng, phát triển trồng trọt tai chua nhằm đưa loài làm nguyên liệu cho sản xuất hoạt chất HCA Tìm kiếm khả hợp tác đầu tư để triển khai ứng dụng kết đề tài vào thực tế  ... sử dụng nghiên cứu để thu nhận dịch chiết Garcinia cowa Roxb. , thu c họ Bứa (Clusiaceae hay Guttiferae) có xuất xứ từ tỉnh Vĩnh Phúc Đã đề xuất quy trình tổng thể tạo muối kép hydroxycitrat từ. .. thi ứng dụng, chọn đề tài Nghiên cƣ́u thu nh ận dịch chiế t chứa acid hydroxycitric tƣ̀ vỏ quả tai chua (Garcinia cowa Roxb. ) để tạo muối kép hydroxycitrat ứng dụng giảm béo phì” để. .. hợp 02 muối kép Na/Mg HCA (natri magie hydroxycitrat) Na/Zn HCA (natri kẽm hydroxycitrat) vỏ tai chua - Garcinia cowa Roxb Việt Nam c Chế phẩm muối kép Na/Mg HCA Na/Zn HCA, nghiên cứu tác dụng