NGHIÊN cứu TUYỂN CHỌN hệ SECRETOME của nấm mốc CHO THỦY PHÂN gỗ THẢI CAO SU

Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học CẢM ƠN Tr hết, t i xin y tỏ lòng biết n h n th nh v s u s Anh, Bộ môn Hóa sinh – Vi sinh - Sinh học phân tử, Vi n ngh thực phẩm, Tr ờng Đại học Bách khoa Hà Nội t i TS Phạm Tuấn ng ngh sinh họ - Công tận t nh h ng nv u tt i qu tr nh ho n th nh luận văn n y Tôi xin chân thành cảm n PGS T Kim ngh thực phẩm theo h tạo iều ki n ho t i nh Vi n ng ngh sinh họ - Công ợc tham gia nghiên cứu, hoàn thành luận văn ng nghiên cứu ề tài T i xin h n th nh ảm n Đại họ h khoa H Nội th y gi o Khoa ng ngh sinh họ – Tr ờng giảng ạy v gi p ỡ suốt trình học tập v thự hi n luận văn uối ng, t i xin gửi t i gia ộng vi n v g p nh, ạn l ng iết n s u s v quan t m, ho t i suốt qu tr nh họ tập v ho n th nh luận văn n y Hà Nôi, tháng 09 năm 2013 Học viên Nguyễn Khoa Đăng Luận văn thạc sỹ khoa học -1- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học L T i xin am oan yl CAM ĐOAN ng tr nh nghi n ứu luận văn khoa học Các kết nghiên cứu luận văn ho n to n trung thực, số li u, tính to n to n hính x v h a ợc hoàn ợc công bố công trình nghiên cứu Luận văn thạc sỹ khoa học -2- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Mục lục Lời cảm n……………………………………………………………… ……… …… … Lời am oan ………………………………………………………………………… ……2 Mục lụ ……………………………………………………………………………… … Mở Đ u …………………………………………………………………………… … … Chương : Tổng quan ……………………………………………………… ………… ….8 1.Nhiên li u sinh họ …………………………………………………………… … … 2.Lignocellulose h enzyme thủy ph n ……………………………………… …… .18 1Ligno ellulose ……………………………………………………………… … … 18 2.1.1 Cellulose ……………………………………………………………… …… 19 2.1.2 Hemicellulose ……………………………………………………………… …21 2.1.3 Lignin ……………………………………………………………………… … 22 2.2 Gỗ cao su .23 2.3 Các loại nấm phân huỷ lignocellulose 25 2.3.1 Nấm mục nâu 25 Nấm mụ mềm .26 2.3.3 Nấm mục tr ng 27 2.4 Các enzyme thủy phân gỗ: 27 H enzyme thủy ph n ellulase: 27 H enzyme thủy ph n hemi ellulase: 29 H enzyme thủy ph n lignin: 30 Tổng quan Se retome Chương : 31 t i u v phương ph p nghi n c u 37 Vật li u nghi n ứu 37 1 Gỗ thải ao su 12 Ph 37 m i tr ờng nu i ợ sử ụng 38 ng ph p nghi n ứu 39 Ph ng ph p ph n lập tuyển chọn 39 22 ph ng ph p x Luận văn thạc sỹ khoa học ịnh hoạt ộ enzyme -3- 40 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học 2 Ph ng ph p x ịnh hoạt ộ enzyme exoglu anase 2 Ph ng ph p x ịnh hoạt ộ enzyme en oglu anase 2 Ph ng ph p x ịnh hoạt ộ enzyme xylanase 2 Ph ng ph p x ịnh hoạt ộ enzyme eta-glucosidase 44 2.2.5 Ph ng ph p x ịnh hoạt ộ enzyme ligninperosi ase 2 Ph ng ph p x ịnh hoạt ộ enzyme manganperosidase 46 .43 .45 ịnh 24X ịnh h m l ợng glu ose theo ph Ph ng ph p ịnh l ợng Protein ph Ph ng ph p thủy phân secretome: .51 Ph ng ph p i n di gel polyacrylamid (SDS-PAGE) 52 Ph ng ph p i n i hai hiều (2D) K tQ a ng ph p DNS 42 23X Chương ờng khử ph 40 47 ng ph p sử dụng kít Hexokinase 49 ng ph p for 51 .53 Thảo u n 55 Phân lập chủng nấm sợi có hoạt lực cellulase cao 55 1.1 Phân lập tuyển chọn s 1 Ph n lập 1.1.2 ợ ằng ph ộ từ m u gỗ thải cao su: .55 hủng nấm mố ph n giải ellulose từ m i tr ờngl m gi u .56 Tuyển họn s ộ: Thử khả ph n giải avi el hủng nấm ph n lập ng ph p khuế h t n tr n thạ h .58 1 Tuyển họn hủng nấm sinh exo-glu anase ao ằng ph ng ph p nu i lỏng bình tam giác ………………………………………………………………… … 60 1 Định t n hủng tuyển họn ……………………………………… … 62 S u tập chủng từ bảo tàng giống chuẩn VTCC 63 Tuyển chọn chủng 63 2.1 Tuyển chọn dựa khả STH ellulase 63 2.1.1 Hoạt ộ enyzme exo-glucanase 63 2 Hoạt ộ enzym en oglu anase .65 2.2 Tuyển chọn dựa khả thủy phân Avicel 67 2.2.1 Khả thủy phân Avicel 67 2.2.2 Khả tăng ờng thủy ph n enzyme th Luận văn thạc sỹ khoa học -4- ng mại: .68 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học 3.Tuyển chọn secretome cho thủy phân gỗ thải cao su 69 3.1 Nghiên cứu thu hồi secretome 69 3.2 Nghiên cứu khả thủy phân secretome 71 3.2.1 Khả thủy phân gỗ cao su 71 3.2.2 Khả tăng ờng thủy ph n enzyme th ng mại ể thủy phân gỗ cao su 73 3.3 Nghiên cứu thành ph n secretome 75 Chương K t Lu n Và Ki n Nghị 76 Tài li u tham khảo .77 Phụ lục Luận văn thạc sỹ khoa học -5- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Mở Đầu Nhu c u l ợng lo i ng ời hi n di n h h ng trăm ng n năm, on ng ời biết dùng lửa hoạt ộng h ng ng y ể n r y Kể từ , nguồn l ợng từ vật r n nh gỗ ngày trở nên quan trọng, có h n hai tỉ ng ời gi i ang m a ng thịt, uổi thú dữ, ốt rừng làm ng hất r n gia nh ể nấu n ng v s ởi ấm ng Năng l ợng có vai trò quan trọng ối v i phát triển kinh tế - xã hội An ninh quốc gia, an ninh kinh tế g n liền v i an ninh l ợng quốc gia Vì sách phát triển kinh tế, xã hội bền vững, hính s h l ợng n n ặt lên hàng ợc u Vào kỷ 19, gỗ nguồn l ợng làm máy chạy h i n ngành chuyên chở, giúp phát triển mạnh công nghi p gi i Sau c phổ thông , on ng ời chế tạo m y ph t i n cung cấp nguồn i n m i có nhiều công dụng ho ời sống hàng ngày thay d n máy chạy h i n tí h nh than , c Khi tìm thấy nguồn nhiên li u tr m u hỏa v khí ốt, on ng ời tăng tốc sử dụng loại l ợng không tái tạo n y ể chạy máy nổ, chủ yếu ngành vận tải, nhi t v li u thể lỏng (xăng i n Loại nhiên u) trở nên thông dụng h n ng nh huyển vận có tỉ trọng l ợng cao, dễ sử dụng h n loại nhiên li u khí r n, từ nguồn l ợng r n ợc sử dụng giảm d n.(26) _Theo tính toán chuyên gia kinh tế l ợng, d u mỏ v khí ốt hi n chiếm khoảng 60-80% n n l ợng gi i V i tố Luận văn thạc sỹ khoa học -6- ộ tiêu thụ nh hi n trữ 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học l ợng d u mỏ hi n có, nguồn l ợng nhanh chóng bị cạn ki t vòng 4050 năm nữa.(34) _ Vi ảm bảo nguồn l ợng dài hạn thay l ợng hoá thạ h ang ng y trở nên cấp thiết, d u mỏ ang ạn d n trở n n ang n ng ng t ỏ Hi n t ợng tr i ất n l n v gia tăng ph t thải khí cácbonic - khí gây hi u ứng nh kính i hỏi phát triển nguồn l ợng m i Nhiên li u sinh học (NLSH – Biofuel) nhiên li u tái tạo (renewa le fuels) ợc sản xuất từ nguyên li u sinh học Để góp ph n vào mục tiêu sản xuất cồn nhiên li u từ nguyên li u chứa cellulose thay nhiên li u hoá thạ h, h ng t i chọn ề t i “Nghiên cứu tuyển chọn hệ secretom nấm mốc cho thủy phân gỗ thải cao su” Mục đích c a đề tài - Lựa chọn ợc h secretom thích hợp ể thủy phân gỗ thải su Nội dung c a đề tài - Phân lập nấm sợi m u gỗ bị phân hủy, m u ất chứa gỗ mục - Tuyển chọn chủng có khả thủy phân thủy phân cao - Nghiên cứu thu hồi h secretome chủng tuyển chọn - Lựa chọn secretoem có khả thủy phân cao - Ứng dụng ể thủy phân gỗ thải Luận văn thạc sỹ khoa học -7- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Chương : Tổng quan Nhiên li u sinh học : - Nhiên li u sinh học loại nhiên li u ợc hình thành từ hợp chất có nguồn gốc ộng thực vật nh nhi n li u chế xuất từ chất béo ộng thực vật ( mỡ ộng vật, d u dừa…), ngũ ốc ( lúa mỳ, ng , ậu t ng…), hất thải nông nghi p ( r m rạ, bã mía…) v sản phẩm thải công nghi p ( m n a, sản phẩm gỗ thải…)[37] - Phân loại : Dựa theo thành ph n nguyên li u phân chia nhiên li u sinh học thành h * Th h th nhất: Thế h NLSH u ti n ợc sản xuất chủ yếu từ loại yl ngô, s n, mía, ậu nành, cọ, hạt cải, vv…Nhiên li u sinh họ ợ th ng mại ngày ợc sản xuât từ h Sản phẩm quan trọng nhiên li u sinh học chủ yếu thê h ng thực, thực phẩm nh u tiên bioetalnol, biodiesel, biogas: _ Bioethanol sản phẩm qu tr nh l n men ờng ( loại ngũ ố nh ng v mía) N ờng từ tinh bột sinh khối có chứa thể ợc sử dụng riêng rẽ hoặ l pha v i xăng v i tỷ l 10%, v i iều ki n thiết bị sử dụng phải ợc p ứng ủ tiêu chuẩn kỹ thuật _ Ethyl-tertiary-butyl-ether (ET E) ợc tổng hợp từ bioetanol isobutylene Nó ợc pha v i ga l n ến 15%, loại nhiên li u sinh họ ợc sử dụng nhiều châu Âu _ io iesel (F ME) ợc sản xuất từ d u thực vật nh l hạt cải d u, ậu t ng, ọ loại cho d u khác thông qua phản ứng triglycerides v i methanol Có thể sử Luận văn thạc sỹ khoa học -8- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học dụng biosiesel nguyên chất v i loại xe thích hợp pha v i diesel v i tỷ l 5% _ iogas thu ợc từ xử lý sinh khối nguyên li u ẩm, sau ợc sử dụng ph huyển thành bimethane ng ti n tiêu dùng ng kể khí CO2 phát thải so v i nhiên li u hóa thạ h, nh ng kh ng thực Tuy làm giảm phát triển bền vững nguyên li u cho NLSH lại nguồn l v gia s tăng gi ng thự ho on ng ời Gia tăng sử dụng nguồn nguyên li u cho NLSH thuộc loại nêu làm gia ả loại trồng n y v l m gia tăng ất ổn l ng thự triển nguyên li u ho NLSH, quĩ ất trồng gi i kh ng Ngo i ra, ể phát p ứng ủ Tìm kiếm phát triển loại nhiên li u thay cải tiến h n mặt công ngh ợc tiếp tục ặt (21) * Th h th hai : _ Thế h NLSH thứ hai l yl ợc phát triển chủ yếu dựa vào lignocellulosic loại ng thực trồng v ng ất cằn cỗi, hoang hóa Mặc dù nguyên li u thô cho sản xuất NLSH h phong phú, sẵn có tùy thuộc ịa ph ng, sản xuất nhiên li u v n h a thực có hi u kinh tế rào cản mặt kỹ thuật chế biến Hai loại nhiên li u iển hình NLSH h cellulosic ethanol and Fischer–Trops h fuels ều h a ợc sản xuất ại trà Tuy nhiên, thấy rõ NLSH h giảm rõ r t phát thải khí CO2, không cạnh tranh v i cạnh tranh ợc v i xăng v yl u có nguồn gốc từ d u mỏ t ng thực ng lai có ột phá công ngh Sinh khối lignocellulose nguyên li u tiềm ho ioethanol o h m l ợng cellulose hemicellulose cao, sản l ợng l n có khả t i tạo nhanh h n Luận văn thạc sỹ khoa học -9- nguy n li u 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học hoá thạ h ang ạn ki t Gỗ thải cao su nguồn lignocellulose dồi dào.(20) * Th h th ba : _ Nhiên li u sinh học h thứ a ợc chế tạo từ loài vi tảo n ẩm, sinh nhiều l ợng (7-30 l n) h n nhi n li u sinh học h tr , tr n ất c di n tích trồng Sản l ợng d u di n tích 0,4 tảo từ 20 000 lít/năm ến 80 000 lít/năm Ngo i ra, lo i tảo bị thoái hóa sinh họ kh ng l m h hại m i tr ờng xung quanh Theo c tính Bộ Năng L ợng Mỹ, n c c n di n tí h ất l n ộ 38 849 km2 ể trồng loại tảo thay tất nhu c u d u hỏa hi n n c _ Vi c dùng tảo ể sản xuất nhiên li u sinh học thay d u mỏ giống nh mũi t n b n tr ng hai ích: vừa tạo l ợng vừa làm sạ h m i tr ờng Mỗi tế bào tảo nhà máy sinh học nhỏ, sử dụng trình quang hợp ể chuyển hóa CO2 ánh sáng mặt trời th nh l ợng dự trữ tế bào tạo sản phẩm thứ cấp có giá trị cao Hoạt ộng chuyển ổi chúng hi u ến mức sinh khối chúng tăng gấp nhiều l n ngày Ngoài ra, trình quang hợp, tảo sản xuất d u tế bào chúng Trên n vị di n tí h, l ợng d u mà tảo tạo nhiều gấp 30 l n l ợng d u từ ậu n nh Đồng thời tảo tăng khả sản xuất d u cách bổ sung khí CO2 trình nuôi trồng chúng sử dụng giàu chất hữu (nh n m i tr ờng c thải) ể nuôi trồng Điều vừa tạo NLSH, vừa làm giảm l ợng CO2 ũng nh l m sạ h m i tr ờng.(28) * Th h th tư : _ Thay cải tiến quy trình làm nhiên li u, nhiên li u sinh học h thứ t t m thi n nguồn nguyên li u Thiết kế trồng tăng suất sinh khối.(12) Luận văn thạc sỹ khoa học -10- 2009- 2011 h ải Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Chương IV : K t Lu n Và Ki n Nghị - Kết t m ợc chủng A fumigatus 1.15 ũng nh hi u suất tăng hứng T reesei QM9414, ờng thủy ph n enzym th tiềm hi u suất thủy ph n gỗ ao su, ng mại h n so v i hủng ối ng ngh sản xuất nhi n li u sinh họ từ nấm mố - n thếm nghi n ứu huy n s u th m khả thủy ph n hủng A fumigatus 1.15 tr n quy m l n ể Luận văn thạc sỹ khoa học thể ứng ụng -76- ng nghi p 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Tài li u tham khảo [1] Beata Kluczek-Turpeinen; Lignocellulose degradation and humus modification by the fungus Paecilomyces inflatus, 2007 [2] Carmen Sánchez, Lignocellulosic residues: Biodegradation and bioconversion by fungi 2009 [3] Đặng Thị Thu, Nguyễn Thị Xuân Sâm, Tô Kim Anh Thí nghi m hóa sinh công nghi p Tr ờng Đại học Bách Khoa Hà Nội, 1997 [4] Dennis Yee, Deokjin Jahng, an Thomas K Woo (1995), “Enhan e Expression an Hydrogen Peroxide Dependence of Lignin Peroxidase from Streptomyces viridosporus T7 ”, iote hnol Prog, 12(1), pp 40-46 [5] Eduardo Callegari1 and Mario Navarrete; The Use of Mass Spectrometry for Characterization of Fungal Secretomes 2011 [6] E McCrady (1991) The nature of lignin Alkaline Paper Advocate, vol 4,No.4 [7] Holy Ravalason , Sacha Grisel , Didier Chevret , Anne Favel , Jean-Guy Berrin ,Jean-Claude Sigoillot , Isabelle Herpoël-Gimbert; Fusarium verticillioides secretome as a source of auxiliary enzymes to enhance saccharification of wheat straw [8] Howard, R L., Abotsi, E., Jansen van Rensburg, E L., Howard, S (2003) Lignocellulose biotechnology: issues of bioconversion and enzym production African J Biotechnol 2:602-619 [9] Hồ Sĩ Tr ng sở hoá học gỗ xenluloza (tập 2)(2007) [10] Isabelle Herpoël-Gimbert, Antoine Margeot, Alain Dolla,Gwénaël Jan, Daniel Mollé, Sabrina Lignon, Hughes Mathis, Jean-Claude Sigoillot, Frédéric Monot and Marcel Asther; Comparative secretome analyses of two Trichoderma reesei RUT-C30 and CL847 hypersecretory strains; 2008 [11] Jan Bach Kristensen Enzymatic hydrolysis of lignocelluloses Substrate interactions and high solids loadings 2009 [12] Jonathan Gressel;Transgenics are imperative for biofuel crops 2007 [13] Lê Tuân, Cao Xuân Bách, Tô Kim Anh, Phạm Tuấn Anh KHẢO SÁT ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC YẾU TỐ ĐẾN KHẢ NĂNG PHÂN ĐOẠN GLUCAN TỪ BÃ MÍA NHỜ AXIT FORMIC Luận văn thạc sỹ khoa học -77- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học [14] Ngô Kinh Luân Báo cáo ngành cao su 2013 [15] Ph c Toàn – Thanh Mai ;Công ngh sản xuất cồn sinh học từ nguyên li u lignocellulose 30-9-2009 [16] Praveen et all 2011 enzymes of a Mushroom Stereumostrea isolated from wood logs Enzyme research, vol 2011 [17] Que Chung, Deborah Leslie, and Lucas Marshall, Dr Michael Mossing; Polyacrylamide Gel Electrophoresis (PAGE) Resolution of Short Tandem Repeat PCR Products for Genetic Identification- Protocol [18] Rohit Soni, Asiya Nazir, B.S Chadha; Optimization of cellulase production by a versatile Aspergillus fumigatus Fresenius strain (AMA) capable of efficient deinking and enzymatic hydrolysis of Solka floc and bagasse [19] Sandra W.A Hinz , Laurice Pouvreau , Rob Joosten , Jeffrey Bartels , Meliana Jonathan ,Jan Wery , Henk A Schols , Hemicellulase production in Chrysosporium lucknowense C1 2009 [20] Sergey Zinoviev, Sivasamy Arumugam, and Stanislav Miertus; Biofuel Production Technologies; 2007 [21] Sun,Y et Cheng, J 2002, Hydrolysis of lignocellulosic materials for ethanol [22] Tamilvendan Manavalan, Arulmani Manavalan,Kalaichelvan P Thangavelu, Klaus Heese,; Secretome analysis of Ganoderma lucidum cultivated in sugarcane bagasse; 2012 [23] Tien, M and Kirk, T.K (1984) Lignin degrading enzyme from Phanerochaetechrysosporium : purification, characterization and catalytic propreties of a unique [24] T K GHOSE and V S BISARIA; Measurement of hemicelluloses activity; 1987 [25] TS Nguyễn Hoài H ng (2009) i giảng thực hành hóa sinh [26] T.S Tr n Văn Đạt; Nguồn Năng L ợng Sinh Học Hội Phát Triển Nông Thôn [27] Y.-H Percival Zhang, Michael E Himmel, Jonathan R Mielenz; Outlook for cellulase improvement: Screening and selection strategies; 2006 [28] Yusuf Chisti ;Biodiesel from Microalgae; Biotechnology Advances, 25 (2007) [29] https://en.wikipedia.org/wiki/Biofuel [30]http://en.wikibooks.org/wiki/Proteomics/Protein_Separations_Electrophoresis/Two_Dimensional_Polyacrylamide_gel_Electrophoresis%282D-PAGE%29 [31] http://en.wikipedia.org/wiki/Secretomics Luận văn thạc sỹ khoa học -78- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng [32] Công nghệ sinh học http://gremaco.com.vn/documents/de-phat-trien-nhien-lieu-sinh-hoc-den-nam-2015-tam- nhin-den-nam-2025-quyet-dinh-1772007qd[33] http:// www.hutton.ac.uk/news/gene-discovery-opens-new-possibilities-biofuels [34] P1 https://www.pvoil.com.vn/vi-VN/pvoil/chinh-sach-chien-luoc/tong-quan-ve-nhien-lieusinh-hoc/281/639 [35] http://www.renewableenergy.org.vn/index.php?page=nhien-lieu-sinh-hoc [36] www.sigmaaldrich.com/etc/medialib/docs/Sigma/ /gahk20 ul p f [37] https://vi.wikipedia.org/wiki/Nhi%C3%AAn_li%E1%BB%87u_sinh_h%E1%BB%8Dc Luận văn thạc sỹ khoa học -79- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Phụ lục Phụ lục Tên mẫu nguồn gốc Số ch ng phát triển nhanh có vòng tròn th y phân Số ch ng ph n l p Số ch ng 15 Kí hi u tên ch ng hình ảnh G1.2 G1.15 G2.1 G2.3 G2.4 G2.5 G2 – gỗ cao su mục l n ất 16 Luận văn thạc sỹ khoa học 10 -80- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học 15 G2.6 G2.7 G2.8 G2.9 G2.10 G2.16 G3.1 G3.5 12 G3 – gỗ cao su G3 Luận văn thạc sỹ khoa học -81- G3 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học 15 G3.11 G3.13 G3.24 G3.28 G4a G4r1 G4 – rễ cao su Luận văn thạc sỹ khoa học -82- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học 12 G5.5 G5.11 G7.1 G7.4 G5-gỗ cao su 15 G6 – gỗ cao su G7- gỗ cao su G8 ất quanh gốc cao su Luận văn thạc sỹ khoa học -83- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học AR12 AR4 AR15 AR5 Phụ lục 2: Luận văn thạc sỹ khoa học -84- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học G2.10, G3.1 G3.11 G2.4, G2.5, G2.7, G3.9, G3.12 G1.15, G2.1, G2.2, G2.3, G3.5, G2.7, G2.8, G3.21, G2.13, G3.8, G3.13, G1.2 G3.22, G5.r1, G5.12, G5.13 G3.6 Phụ lục 3: Phi u trả k t Cơ quan gửi mẫu: Địa chỉ:Số điện thoại: Luận văn thạc sỹ khoa học -85- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Cơ quan nhận mẫu: Khoa Vi sinh vật Mụi tr ờng , Vi n 69 – Bộ T l nh Bảo v Lăng hủ tịch Hồ Chí Minh Số lượng mẫu: 04 mẫu Ngày gửi mẫu: 03/01/2013 K t phân loại vi nấm T Ký hi u Tên loài Ghi T Aspergillus fumigatus Fresenius var ellipticus, var nov 5.5 AR5 Aspergillus niger van Tieghem var niger 1.15 Aspergillus fumigatus Fresenius 2.4 Aspergillus flavus Link Mẫu 5.5 - Tên loài: Aspergillus fumigatus Fresenius var ellipticus, var nov - Mô tả: Khuẩnlạ tr n m i tr ờng Czapek phát triển 2-4 cm/10 ngày nhi t ộ phòng 24-260C Mặt khuẩn lạ thay ổi từ dạng nhung ến xốp nhẹ v i cấu trúc sinh bào tử nhiều có màu lụ x m ến lục xám nhạt; mặt trái khuẩn lạ v m i tr ờng sung quanh kh ng m u ến lục vàng tối; cuống sinh bào tử th ờng ng n, 100-500m x 5,0-8,0m; bọng 20-30m ờng kính; thể bình t ng, 5,0-10m x 2,0-3,0m; bào tử tr n thành m m u lục, ráp nhẹ, h nh elip ến g n c u, h u hết 3,0- 4,5m x 3,0-4,0m nh ng thể ến 5,5 x 3,0m Luận văn thạc sỹ khoa học -86- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Aspergillus fumigatus Fresenius var ellipticus ( u sinh bào tử tr n bào tử tr n ( x 1000) Mẫu AR5 - Tên loài: Aspergillus niger van Tieghem var niger - Mô tả:Khuẩnlạ tr n m i tr ờng Czapek phát triển 4,5-5,0 cm/7 ngày nhi t ộ phòng 24-260C Mặt khuẩn lạc dạng nhung ến xốp v i u sinh bào tử hình tia hình cột tẽ, màu nâu oliu nhạt ến nâu oliu, màu nâu tối; h sợi nấm màu tr ng ến v ng ậm; giọt tiết kh ng m u ến nâu sáng; mặt tr i kh ng m u ến vàng xạm; cuống 150-1550m x 5,0-20m, kh ng m u ến nâu vàng ậm, thành dày, nhẵn; bọng hình g n c u ến c u, 13,0-72,0m rộng Thể bình t ng, cuống thể bình bao phủ 1/2 ến toàn bề mặt bọng, 0-3 vách ngang, 4,0-60,0m x 3,5-15m; thể bình 4,8- 17,0m x 2,46,5m Bào tử g n c u ến c u, 2,8-5,6 m, gai ráp có rãnh dị th ờng Luận văn thạc sỹ khoa học -87- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Aspergillus niger van Tieghem var niger ( u sinh bào tử tr n bào tử tr n ( x 1000) Mẫu 1.15 Tên loài: Aspergillus fumigatus Fresenius Mô tả:Khuẩnlạ tr n m i tr ờng Czapek phát triển nhanh, v i bề mặt khuẩn lạc có thay ổi từ dạng nhung ến xốp ng, l u có màu tr ng sau chuyển màu xanh lục nhạt; mặt trái khuẩn lạ v m i tr ờng sung quanh kh ng m u ến lục vàng tối; cuống sinh bào tử th ờng ng n, 100-500m x 5,0-8,0m; bọng 20-30m 5,0-10m x 2,0-3,0m; bào tử tr n th nh ờng kính; thể bình t ng, m m u lục, gai, hình g n c u ến c u, h u hết 2,5-3,0m Hạch nấm thể không tìm thấy Luận văn thạc sỹ khoa học -88- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Aspergillus fumigatus Fresenius ( u sinh bào tử tr n ( x 1000) Mẫu 2.4 - Tên loài:Aspergillus flavus Link - Mô tả: Khuẩn lạ tr n m i tr ờng Czapek phát triển nhanh, ờng kính 5- cm /10 ngày nhi t ộ phòng, mặt phẳng xốp nhẹ, màu vàng sau chuyển màu lục vàng, lục già Giá bào tử tr n thành dày, không màu, ráp; bọng hình elongate non, sau g n c u ến c u, từ 10- 65m ờng kính nh ng h u hết từ 25- 45m; thể bình t ng nh ng cấu trúc có 10m x 4,0- 5,0m nh ng u; cuống thể bình 6,0- thể l n ến 16m dài, thể bình 6,5- 10m x 3,0- 5,0m Bào tử tr n g n c u ến c u, gai ráp 3,0- 6,0m nh ng h u hết 3,5 ến 4,5m, elíp m i tạo thành 4,5- 5,5m x 3,5- 4,5m Luận văn thạc sỹ khoa học -89- 2009- 2011 Nguyễn Khoa Đăng Công nghệ sinh học Aspergillus flavus Link ( u sinh bào tử tr n bào tử tr n ( x 1000) Luận văn thạc sỹ khoa học -90- 2009- 2011 ... nghệ sinh học 3 .Tuyển chọn secretome cho thủy phân gỗ thải cao su 69 3.1 Nghiên cứu thu hồi secretome 69 3.2 Nghiên cứu khả thủy phân secretome 71 3.2.1 Khả thủy phân gỗ. .. t i chọn ề t i Nghiên cứu tuyển chọn hệ secretom nấm mốc cho thủy phân gỗ thải cao su” Mục đích c a đề tài - Lựa chọn ợc h secretom thích hợp ể thủy phân gỗ thải su Nội dung c a đề tài - Phân. .. lập nấm sợi m u gỗ bị phân hủy, m u ất chứa gỗ mục - Tuyển chọn chủng có khả thủy phân thủy phân cao - Nghiên cứu thu hồi h secretome chủng tuyển chọn - Lựa chọn secretoem có khả thủy phân cao