Nghiên cứu quy trình nhân nhanh một số giống mía mới bằng công nghệ nuôi cấy mô tế bào

VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT o0o - VŨ ANH TUẤN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN NHANH MỘT SỐ GIỐNG MÍA MỚI BẰNG CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Hà Nội, tháng 12 năm 2016 VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT o0o - VŨ ANH TUẤN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN NHANH MỘT SỐ GIỐNG MÍA MỚI BẰNG CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 60.42.01.14 LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC GS TS Đỗ Năng Vịnh Hà Nội, tháng 12 năm 2016 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan số liệu kết nghiên cứu luận văn hoàn toàn trung thực chưa sử dụng cho bảo vệ học vị Mọi giúp đỡ cho việc hoàn thành luận văn cảm ơn Các thông tin, tài liệu trình bày luận văn ghi rõ nguồn gốc phép công bố Hà Nội, tháng 12 năm 2016 Học viên thực Vũ Anh Tuấn LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành tốt luận án trước hết xin gửi lời cảm ơn chân thành sâu sắc GS.TS Đỗ Năng Vịnh tạo điều kiện tận tình giúp đỡ suốt thời gian thực đề tài nghiên cứu Đồng thời gửi lời cảm ơn sâu sắc tới ThS Trần Thị Hạnh trực tiếp hướng dẫn thực thí nghiệm, Cùng toàn thể Anh chị em cán phòng thí nghiệm trọng điểm công nghệ tế bào thực vật - Viện Di Truyền Nông Nghiệp nhiệt tình giúp đỡ trình nghiên cứu Tôi xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo dạy bảo giúp đỡ tận tình thời gian học tập trường Cuối cùng, xin chân thành cảm ơn ủng hộ, động viên to lớn gia đình bạn thành viên lớp cao học Hà Nội, tháng 12 năm 2016 Học viên cao học Vũ Anh Tuấn i DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT TỪ NGHĨA TIẾNG ANH ASEAN Association of Southest Asian Nations BAP 6-Benzylaminopurine CCS Commercial Cane Sugar CT Công thức FAO Food and Agriculture Organization of the United Nation Gdna Genomic Deoxyribonucleic acid NAA A-Naphthalene acetic acid HgCl2 Thủy ngân clorua H2 O2 Oxi già MS Môi trường Murashige and Skoog, 1962 PCR Polymerase Chain Reaction Rdna Ribosome DNA 2,4-D 2,4-Dichlorophenoxy acetic acid % Phần trăm ii DANH MỤC BẢNG TT Bảng Bảng 1.1 Bảng 3.1 Bảng 3.2 Bảng 3.3 Bảng 3.4 Bảng 3.5 Bảng 3.6 Bảng 3.7 Bảng 3.8 10 Bảng 3.9 11 Bảng 3.10 12 Bảng 3.11 13 Bảng 3.12 Nội dung Mười quốc gia sản xuất mía hàng đầu giới (FAO, 2015) Tỷ lệ mô phân sinh mía bật chồi môi trường khởi tạo Ảnh hưởng BAP lên hệ số nhân chồi giống mía sau tuần Ảnh hưởng kinetin đến hệ số nhân chồi giống mía sau tuần Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến trình nhân nhanh chồi giống mía LS2 sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến trình nhân nhanh chồi giống mía LS1 sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến trình nhân nhanh chồi giống mía MY5514 sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng trạng thái môi trường đến trình nhân nhanh chồi giống mía QĐ93159 sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng số chồi cụm chồi đến hệ số nhân chồi mía Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến qúa trình kéo dài chồi giống mía sau tuần nuôi cấy Nghiên cứu ảnh hưởng BAP đến qúa trình kéo dài chồi giống mía sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng NAA hàm lượng đường khác hình thành rễ sau tuần nuôi cấy LS1, LS2 Ảnh hưởng NAA hàm lượng đường khác hình thành rễ sau tuần nuôi cấy hai giống MY5514, QĐ93159 Trang 44 46 48 50 50 51 51 53 55 56 58 58 iii 14 Bảng 3.13 15 Bảng 3.14 16 Bảng 3.15 23 Bảng 3.16 24 Bảng 3.17 Ảnh hưởng mật độ nuôi cấy đến rễ chồi mía môi trường lỏng sau tuần nuôi cấy Ảnh hưởng giâm đến khả phát triển vườn ươm giống LS1 Ảnh hưởng giâm đến khả phát triển vườn ươm giống LS1 Ảnh hưởng giâm đến khả phát triển vườn ươm giống MY5514 Ảnh hưởng giâm đến khả phát triển vườn ươm giống QĐ93159 61 62 63 63 64 iv DANH MỤC HÌNH VẼ TT Hình Hình 3.1 Hình 3.2 Hình 3.3 Hình 3.4 Hình 3.5 Hình 3.6 Hình 3.7 Hình 3.8 Hình 3.9 10 Hình 3.10 11 Hình 3.11 12 Hình 3.12 13 Hình 3.13 14 Hình 3.14 15 Hình 3.15 16 Hình 3.16 17 Hình 3.17 Nội dung Trang Biểu bệnh trắng chồi cỏ mẫu thu thập 32 Thu thập mẫu nghi nhiễm bệnh chồi cỏ Tam Hợp, 33 Qu Hợp, Nghệ An Kết phân tích sản ph m PCR lồng mẫu mía 34 thu thập Tam Hợp So sánh trình tự 16s rDNA chủng SCGSVN-TH với chủng SCGSVN4 A ; SCWLBDVN B 36 SCGS Thailand, isolate SAK1-2 (C) Cây phân loại chủng phytoplasma gây bệnh chồi cỏ 37 Kết phân tích nested-PCR mẫu mía thu thập 39 Tân Châu sử dụng c p mồi c p mồi SGSVN-Fwd1/Rev So sánh trình tự 16s rDNA chủng SCWLVN-TN với chủng SCWLBDVN A SCWLCN41 Yuetang-86-386 (B) Cây phân loại chủng phytoplasma gây bệnh trắng 41 Các phản ứng khác mẫu tái sinh từ nuôi cấy 45 chồi nách chồi đỉnh Một số hình ảnh tái sinh cụm chồi từ nuôi cấy chồi đỉnh 45 chồi nách Biểu đồ ảnh hưởng BAP lên hệ số nhân chồi 46 giống mía sau tuần Ảnh hưởng BAP lên nhân chồi giống 47 QĐ93159, LS1, My5514 LS2 từ trái sang phải Biểu đồ ảnh hưởng kinetin đến hệ số nhân chồi 48 giống mía sau tuần Giống LS1 môi trường nhân chồi có Kinetin 49 Biều đồ ảnh hưởng trạng thái môi trường lên trình hình thành chồi 04 giống LS1, LS2, MY5514, 52 QĐ93159 Biểu đồ Ảnh hưởng số chồi cụm chồi đến hệ 53 số nhân chồi mía Ảnh nhân chồi giống với mật độ chồi/ cụm 54 v 18 Hình 3.18 19 Hình 3.19 20 Hình 3.20 29 Hình 3.21 30 Hình 3.22 Ảnh hưởng BAP đến trình kéo dài chồi giống mía Ảnh hưởng nồng độ NAA đến trình hình thành rễ sau tuần nuôi cấy Biểu đồ ảnh hưởng NAA hàm lượng đường khác đến hình thành rễ giống mía Bình nuôi cấy rễ mật độ 30 cây/bình Nghiên cứu ảnh hưởng chất đến sinh trưởng phát triển sau cấy mô vườn ươm 56 59 59 62 64 vi MỤC LỤC DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT i DANH MỤC BẢNG .ii DANH MỤC HÌNH VẼ iv MỤC LỤC vi MỞ ĐẦU 1 Đ t vấn đề Mục tiêu Ý nghĩa khoa học thực tiễn đề tài nghiên cứu CHƢƠNG 1: TỔNG QUAN TÀI LIỆU 1.1 Đ c điểm sinh học, phân loại di truyền học mía Saccharum officinarum liên quan đến trình nhân giống 1.1.1 Nguồn gốc 1.1.2 Phân loại 1.1.3 Đ c điểm di truyền nhiễm sắc thể mía trình nhân giống 1.1.4 Vấn đề sâu bệnh mía 1.2 Vai trò giống mía cấu giống sản xuất 1.3 Tình hình sản xuất mía đường giới nước ta 1.3.1.Tình hình sản xuất mía đường giới 1.3.2.Tình hình sản xuất mía đường nước 10 1.3.3 Những nguyên nhân, tồn ngành mía đường 12 1.3.4 Tình hình hình sâu bệnh hại 12 1.4 Những vấn đề đại cương công nghệ cấy mô mía 14 1.4.1 Các phương pháp tạo giống bệnh dựa kỹ thuật cấy mô 14 1.4.2 Công nghệ tế bào hiệu cao phục tráng giống, tạo giống bệnh nhân giống nhanh 14 1.4.2.1 Phương pháp nuôi cấy chồi đỉnh 14 1.4.2.2 Phương pháp nuôi cấy mô non chồi đỉnh 15 1.4.2.3 Phương pháp nhân giống mía thông qua nuôi cấy mô sẹo 16 1.4.3 Các hướng nghiên cứu cải thiện công nghệ vi nhân giống thực vật 17 1.4.4 Thành tựu nhân nhanh giống cấy mô qui mô công nghiệp 17 1.4.4.1 Nhân giống nhanh cấy mô rút ngắn thời gian chọn giống nhanh chóng đưa giống chọn tạo vào sản xuất lớn, đại trà 17 62 Hình 3.21: Bình nuôi cấy rễ mật độ 30 cây/bình 3.5 Nghiên cứu đƣa từ ống nghiệm vƣờn ƣơm Chúng tiến hành giâm vườn thí nghiệm rộng 200 m2 , chia làm lô thí nghiệm đất khác với lần nhắc lại Thí nghiệm 1: Đất phù sa phơi khô đập nhỏ trộn tỷ lệ đất : cát Thí nghiệm 2: Cát đen Thí nghiệm 3: đất phù sa +1 mùn + cát Thí nghiệm 4: đất + cát + 1/4 phân vi sinh Thí nghiệm 5: đất + mùn + 1/4 phân vi sinh + cát Mật độ trồng: × 50 cụm × khay = 1250 Bảng 3.14: Ảnh hƣởng giâm đến khả phát triển vƣờn ƣơm giống LS1 Chỉ số phát triển sau giâm CT Tỷ lệ sống (%) I 63,21 II 69,27 III 75,98 IV 87,12 V 91,15 CV (%) LSD 0,5 10 ngày Cao Cây/ khóm TB (cm) 2,98 3,25 2,97 4,34 4,43 5,15 4,28 20 ngày Số TB /cây 2,43 3,24 2,67 4,67 4,56 14,12 6,27 30 ngày Cao Cao Cây/ Số Cây/ câyTB câyTB khóm TB/cây khóm (cm) (cm) 7 3,23 3,34 3,65 4,35 5,65 21,48 3,87 2,76 3,43 3,65 4,24 5,34 26,95 5,06 7 9 4,56 5,13 5,23 5,45 6,23 27,86 5,42 Số láTB /cây 3,13 4,14 4,24 4,32 5,45 32,34 3,57 63 Bảng 3.15: Ảnh hƣởng giâm đến khả phát triển vƣờn ƣơm giống LS1 Chỉ số phát triển sau giâm Tỷ lệ CT 10 ngày 20 ngày 30 ngày sống Cây/ Cao Số Cây/ Cao Số Cây/ Cao (%) khóm TB TB /cây khóm câyTB TB/cây khóm câyTB (cm) (cm) (cm) Số láTB /cây I 69 3,34 2,25 4,15 2,25 4,17 3,23 II 78* 3,54 3,35 4,35 3,64 5,37 4,42 III 87* 3,46 3,24 4,26 4,17 5,58 4,15 IV 93* 3,25 4,34 4,83 4,64 5,71 4,46 V 96* 3,34 4,46 5,73 5,16 6,41 5,25 CV (%) 31,2 24,5 25,6 27,3 17,6 16,7 LSD 0,5 1,95 1,26 1,82 1,99 1,78 1,16 Bảng 3.16: Ảnh hƣởng giâm đến khả phát triển vƣờn ƣơm giống MY5514 Chỉ số phát triển sau giâm Tỷ lệ CT sống (%) 10 ngày 20 ngày 30 ngày Cây/ Cao Số Cây/ Cao Số Cây/ Cao Số khóm TB(cm) TB /cây khóm TB (cm) TB /cây khóm TB (cm) TB /cây I 67 3,43 2,45 4,31 2,26 4,65 3,24 II 78* 3,37 3,25 4,24 3,54 5,35 4,46 III 91* 3,42 3,15 4,41 4,45 5,54 4,67 IV 95* 3,25 4,43 4,36 4,24 5,72 4,78 V 97* 3,27 4,33 5,53 5,65 6,79 5,81 34,6 20,8 35,1 41,6 LSD 0,5 2,59 1,94 2,87 Ghi chú: × 50 cụm × khay = 1250 2,76 CV (%) 35,7 3,19 45,3 3,28 64 Bảng 3.17: Ảnh hƣởng giâm đến khả phát triển vƣờn ƣơm giống QĐ93159 Chỉ số phát triển sau giâm CT Tỷ lệ 10 ngày 20 ngày sống Cây Cao Số (%) Cây/ Cao Số khóm TB(cm) TB /cây /khóm TB TB/cây (cm) 30 ngày Cây/ khóm Cao Số TB TB/cây (cm) I 61 3,21 2,45 3,11 2,87 4,54 3,26 II 67 3,11 2,86 3,45 3,34 5,36 4,85 III 79 3,17 3,41 4,34 4,13 5,65 4,56 IV 88 4,45 4,21 4,54 4,24 5,75 4,31 V 97 4,17 4,25 5,12 5,43 6,25 5,36 CV (%) 33,4 34,6 31,8 33,9 32,8 41,9 LSD 0,5 1,85 2,31 2,76 2,67 3,77 3,31 Ghi chú: × 50 cụm × khay = 1250 Các tiêu xác định là; tỷ lệ sống, chiều cao cây, số cây/ khóm số Kết thu cho thấy công thức V tốt Thời gian đầu tỷ lệ sống sót 97% số khóm cây/ khóm , nhiên sau giâm 30 ngày vươn nhanh đồng thời đẻ nhánh, đạt cây/khóm, chiều cao đạt 6cm, có lá/cây Hình 3.22: Nghiên cứu ảnh hƣởng chất đến sinh trƣởng phát triển sau cấy mô vƣờn ƣơm 65 3.7 Tóm tắt Sơ đồ quy trình công nghệ nhân nhanh giống mía Giống mía ƣu việt chọn lọc LS1, LS2, My5514, QĐ93159 Chọn mầm khoẻ Chồi đỉnh, chồi nách sát chồi đỉnh M u non sát chồi đỉnh - Môi trƣờng tạo chồi cấp - Môi trƣờng nhân nhanh chồi - Môi trƣờng tạo mô sẹo - Môi trƣờng nhân mô sẹo - Môi trƣờng tạo chồi từ mô sẹo - Môi trƣờng nhân nhanh chồi Môi trƣờng tiền rễ Môi trƣờng rễ hoàn chỉnh Vƣờn ƣơm - Sản xuất giống cấp I: G1 Sản xuất giống cấp II: G2 - Sản xuất giống cấp III: G3 66 CHƢƠNG 4: KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ 4.1 Kết luận Từ kết nghiên cứu đề tài nhận thấy: Các kết đánh giá bệnh phytoplasma mẫu thu thập từ Tam Hợp, Qu Hợp, Nghệ An cho thấy có m t chủng phytoplasma gây bệnh chồi cỏ mía thuộc nhóm phytoplasma 16SrXI Các c p mồi thiết kế quy trình PCR lồng giúp phát chủng phytoplasma gây bệnh trắng mía, có m t chủng phytoplasma gây bệnh trắng mía thuộc nhóm phytoplasma 16SrXI Ở bốn giống mía nghiên cứu, khả tạo chồi từ đỉnh sinh trưởng cao so với từ chồi nách Sau tuần tỷ lệ bật chồi đạt 100% giống LS1, LS2, My5514, giống QĐ93159 tỷ lệ bật chồi thấp Môi trường MS + BAP 2; 2,5mg/l + 0,2mg/l Kinetin + nước dừa 15% môi trường chu n sử dụng giai đoạn nhân nhanh chồi mía Môi trường đ c 0,6% agar , thể tích môi trường 40ml/bình, mật độ nuôi cấy 30 chồi/bình thích hợp cho nhân chồi giống LS1, LS2, My5514 QĐ93159 Môi trường MS + 3% sucrose + 0,6 % agar + 15% nước dừa + Kinetin 0,2mg/l MT + BAP 0,5mg/l thích hợp cho nuôi cấy kéo dài chồi, Môi trường MS + 6% sucrose + Kinetin 0,2mg/l MT + 15% nước dừa + 2,5 mg/l NAA cho tỷ lệ % tạo rễ cao 95% giống LS2 89% giống LS1, 97% giống MY5514, 88,1% giống QĐ93159 10 Công thức giá thể thích hợp cho đưa vườn ươm giá thể V: Đất mùn + Trấu hun + cát + ¼ phân vi sinh sông danh, đạt tỷ lệ sống sót 96% sau 30 ngày nuôi trồng vườn vươn 4.2 Đề nghị: Kết nghiên cứu đề tài ứng dụng triển khai vào nhân nhanh giống mía in vitro để cung cấp giống mía mới, bệnh cho vùng nguyên liệu mía nước 67 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tiếng Việt Báo Nghệ An 2013 , "Nghệ An: Phòng trừ bệnh chồi cỏ mía giai đoạn cao điểm" Ngô Gia Bôn, Cao Anh Đương,Trịnh Xuân Hoạt, Nguyễn Đức Thành, Nguyễn Đức Quang, Vũ Duy Hiện, Mai Văn Quân, Nguyễn Thanh Thủy,Đỗ Đức Hạnh, Nguyễn Đại Hương 2011 , "Phát Phytoplasma gây bệnh trắng mía phương pháp NESTED-PCR", Tạp chí B T , số 5.2011, tr 14-17 Cục trồng trọt, Bộ Nông nghiệp Phát triển nông thôn 2016 , "Tình hình sản xuất mía – tác động biến đổi khí hậu phương hướng, giải pháp phát triển sản xuất mía thời gian tới", ội nghị tổng kết vụ sản xuất mía đường 2015 – 2016 thành phố Chí Minh, ngày 19 tháng năm 2016 Lê Huy Hàm, Hà Thị Thúy, Đỗ Năng Vịnh 1998 , "Nhân nhanh giống mía cao sản công nghệ vi nhân giống", Tạp chí Nông nghiệp & CNTP, tr 72 Lê Huy Hàm, Hà Thị Thúy, Đỗ Năng Vịnh 2000 , "Nghiên cứu cải thiện trình tạo rễ mía in vitro nuôi cấy môi trường lỏng", Tạp chí Nông nghiệp & CNTP, số 9, tr 418 Lê Huy Hàm, Hà Thị Thúy, Đỗ Năng Vịnh 2000 , "Nghiên cứu nhân nhanh số giống mía nuôi cấy mô callus non", Tạp chí Nông nghiệp & CNTP, số 10, tr 456 Lê Huy Hàm, Hà Thị Thúy, Đỗ Năng Vịnh 2000 , "Nghiên cứu phản ứng giống mía điều kiện nuôi cấy mô bảo quản tập đoàn quỹ gen in vitro", Tạp chí Nông nghiệp & CNTP 8, tr 341-342 Nguyễn Hữu Ước 1994 , "Kỹ thuật trồng mía", Kỹ thuật trồng mía, Nhà Xuất Bản: Nông nghiệp – Nội Hà Thị Thúy, Lê Quốc Hùng, Vũ Anh Tuấn, Đỗ Năng Vịnh 2014 , "Kết nghiên cứu khảo nghiệm giống mía HB1 số tỉnh phía Bắc", Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn Chuyên đề giống trồng, vật nuôi - tập 1, tháng 6, năm 2014, tr.202-2011 68 10 Hà Thị Thúy, Trần Thị Hạnh, Vũ Anh Tuấn, Đỗ Năng Vịnh 2013 , "Nghiên cứu xây dựng phát triển quy trình sản xuất giống mía bệnh theo quy mô công nghiệp công nghệ tế bào", ội thảo quốc gia K trồng lần thứ 11 Vũ Anh Tuấn, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Văn Nhị, Hà Thị Thuý, Đỗ Năng Vịnh 2016 , "Ứng dụng kỹ thuật PCR lồng chọn lọc mẫu mía bệnh phytoplasma cho nuôi cấy mô in vitro", Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 3+4/2016, tr 119-125 Tiếng Anh 12 Ahloowalia B S a A M (1983), "Plant regeneration via somatic embryogenesis in sugarcane", Plant Cell Reports 2, pp 21-25 13 Ahrens U S E (1992), "Detection of DNA of plant pathogenic mycoplasmalike organisms by a polymerase chain reaction that amplifies a sequence of the 16S rRNA gene", Phytopathology 82, pp 828-832 14 Ajay A K., Afghan S (2001), "Rapid multiplication of sugarcane through micropropagation technique", Pak Sugar J 16, pp 11-14 15 Berding N K., H, (1980), "Germplasm conservation of the saccharum complex: a collection from the Indonesian Archipelago", The Hawaiian Planters Record 59, pp 87-176 16 Berding N R B (1987), "Germplasm collection, maintenance, and use In: Heinz DJ (ed) Sugarcane improvement through breeding", Elsevier, Amsterdam, pp 143210 17 C.T R N a C (1989), "Grassy shoot and white leaf disease", Diseases of Sugarcane Elsevier Science Publiser, Amsterdam, pp 289-300 18 Chandrasena G., Brune, A.E., Rutherford, R.S and Dharmawardana, N (2003), "Detection of phytoplasmas associated with grassy shoot and white leaf diseases of sugarcane in Sri Lanka using FTATM papers", Sugar Tech 5(4), pp 237-241 19 Chen W H., Davey, M.R., Power, J.B and Cocking, E.C (1988), "Control and maintenance of plant regeneration in sugarcane callus cultures", J fxp Bot.39, pp 251-261 69 20 Deng S H C (1991), "Amplification of 16S rRNA genes from culturable and nonculturable Mollicutes", Journal of Microbiology Methods 14, pp 53-61 21 EW B (1958), "Origin, classification and characteristics", USDA Agriculture Handbook 122, pp 1-35, 260-262 22 FAO (2015), "Sugar: World Markets and Trade Foreign Agricultural Service", FAO 23 Frison E a P., C.AJ., eds (1993), "FAO/IBPGR Tech-nical Guidelines for the Safe Movement of Sugarcane Gennplasm Food and Agriculture Organisation of the United Nations", Rome and International Board for Plant Genetic Resources, Rome, pp 44 24 G B (1925), "The chromosomes of primitive forms of the genus Saccharum", Genetica 7, pp 293-322 25 G B (1929), "Short remarks on Cytology of Saccharum", ISSCT 26 George E F (1993), "Plant Propagation by Tissue Culture", Exegetics Ltd., Edington, England, pp 246 27 Gosal S S., K.S Thind and H.S Dhaliwal (1998), "Micropropagation of sugarcane-an efficient protocol for commercial plant production", Crop Impro 25(2), pp 167-171 28 Gundersen D.E L I.-M (1996), "Ultrasensitive detection of phytoplasmas by nested-PCR assays using two universal primer sets", Phytopathologia Mediterranea, 35, pp 144-151 29 Girard J.C F E., Rott P (2006), "In : Daugrois Jean-Heinrich VIIIth ISSCT Pathology Workshop Petit-Bourg, Guadeloupe (FWI), 23-27 January 2006, programme and abstracts", ISSCT ISSCT Pathology Workshop 8, 2006-01-23/200601-27, Petit-Bourg, Guadeloupe 30 H K L T a M (2004), "Micropropagation of Sugarcane Through Apical Bud and Axillary Bud", INTERNATIONAL JOURNAL OF AGRICULTURE & BIOLOGY 06, pp 257-259 31 Ha C., Revill, P., Harding, R.M., Vu, M., Dale, J.L., (2008), "Identification and sequence analysis of potyviruses infecting crops in Vietnam", Arch Virol 153, pp 45-60 70 32 Heinz DJ K M., Nickell LG, Maretzki A (1977), "Cell tissue and organ culture in sugarcane improvement", Applied and Fundamental Aspects of Plant Cell and Organ Culture (Eds Reinert, JYPS Bajaj), Springer, Berlin, Heidelburg, New York 33 Heinz DJ K M., Nickell LG, Maretzki A (1977), "Cell tissue and organ culture in sugarcane improvement Applied and Fundamental Aspects of Plant Cell and Organ Culture", (Eds Reinert, JYPS Bajaj), Springer, Berlin, Heidelburg, New York 34 Hendre R R., A.F Mascarenhas, A.L Nadgir, M Pathak and V Jagannathan (1975), "Growth of sugarcane mosaic virus free sugarcane plants from apical meristems", Indian Phytopathol 28, pp 175-178 35 Huang S.-H (2004), "Progress of Sugarcane disease reasearch in China" 36 Jalaja N C., Neelamathi, D and Sreenivasan, T.V (2008), "Micropropagation for Quality Seed Production in Sugarcane in Asia and the Pacific", Food and Agriculture Organization of the United Nations, Rome; Asia–Pacific Consortium on Agricultural Biotechnology, New Delhi 37 Khan W a (1978), "Thermotherapy and aseptic bud culture of sugarcane to facilitate the exchange of germplasm and passage through quarantime", Plant Dis Rep, pp 772-776 38 Lakin (1982), "Sugarcane tissue abd protoplast culture.", Plant cell tissue organ 108 cult.1, pp 149-162 39 Lakin PJ S W (1981), "Somaclonal variations: A novel source of variability from cell cultures", Theor Appl Genet 60, pp 197-214 40 Lal J., H.P Pande, S Kawasthi (1996), "A general micropropagation protocol for sugarcane varieties", New Botanist, pp 1-19 41 Lal N a K., R (1994), "Sugarcane and its problems: Tissue culture for pure and disease free seed production in sugarcane", Indian sugar, pp 847-848 42 Larkin PJ S W (1981), "Somaclonal variations: a novel source of variability from cell cultures", Theor Appl Genet 60, pp 197–214 43 Lee I.-M., Gundersen-Rindal, D E., Davis, R E & Bartoszyk, I M., (1998), "Revised classification scheme of phytoplasmas based on RFLP analyses of 16S rRNA and ribosomal protein gene sequences", Int J Syst Bacteriol48, pp 1153–1169 71 44 Lehrer A.T S S., Yan S.L, Komor (2007), "Movement of aphid-transmitted Sugarcane yellow leaf virus (ScYLV) within and betwen sugarcane plants.", Plant Phathology 56, pp 711-717 45 Lehrer A.T W K K., Komor E (2009) (2009), "Impact of Sugarcane yellow leaf virus (SCYLV) on growth and sugar yield of sugarcane", Journal of General Plant Pathology 75, pp 288-296 46 Li Y.-R (2014), "Chinese Sugarcane and Sugar Industry Development in Recent 10 Years The Fifth IAPSIT International Conference (IS-2014): Green Technologies for Sustainable Improvement of Sugar & Integrated Industries in Developing Countries, November 25-28, Nanning, China", pp 3-10 47 Limasset P., & Cornuet, P (1949), "Recherche du virus de la mosaïque du Tabac dans les méristèmes des plantes infectées.", C R Hebd Seances Acad Sci., 228, pp 1971-1972 48 Limasset P., & Cornuet, P (1949), "Recherche du virus de la mosaïque du Tabac dans les méristèmes des plantes infectées C R Hebd", Seances Acad Sci, pp 228 49 Lorenzo JC O E., Espinosa A, Borroto C (2001), "Field performance of temporary immersion bioreactor derived sugarcane plantys", In vitro cell Dev Biol., Plant, 37, pp 803-806 50 Mamun MA S M., Paul DK, Rehman MM, Islam M (2004), "In vitro micropropagation of some important sugarcane varieties of Bangladesh", Asian J Plant Sci 3(6), pp 666-669 51 McCoy R E e a (1989), "Plant diseases associated with mycoplasma-like organisms", In The Mycoplasmas, vol V, pp 545-640 52 Murashige T a F S (1962), "A revised medium for rapid growth and bioassay with tobacco cultures", Physiol Plant 15, pp 473–497 53 Nadar HM H D (1977), "Root and shoot development from sugarcane callus tissue", Crop Sci, pp 814-816 54 Nadira Islam C L., and Sontichai Chanprame, (2016), "AGROBACTERIUM MEDIATED TRANSFORMATION AND EXPRESSION OF BT GENE IN TRANSGENIC SUGARCANE", J ISSAAS Vol 22, No 1, pp 84-95 72 55 Nakashima K C W., Wongkaew P, Sirithorn P (1994), "Detection of mycoplasmalike organisms associated with white leaf disease of sugarcane in Thailand using DNA probes", Japan International Research Center for Agricultural Sciences 1, pp 57-67 56 Nand L S H (1994), "Rapid clonal multiplication of sugarcane through tissue culture", Plant Tissue Cult 4, pp 1-7 57 Nasare K Y., Amit, Singh A.K, Shivasharanappa K.B, Nerkar Y.S, and Reddy V.S (2007), "Molecular and Symptom analysis reveal the presence of new phytoplasma associated with surgacane grassy shoot disease in India", Plant Disease 91, pp 1413-1418 58 Parmssur Y A S., Saumtally S, Dookun-Saumtally A (2002), "Sugarcane yellow leaf virus and sugarcane yellows phytoplasma elimination by tissue culture", Plant Pathol 2002, 51, pp 561-566 59 Peter S a (1998), "Sugar Cane: Past and Present", Southern Illinois University 60 Pierik R L M (1997), "In Vitro Culture of Higher Plants", Kluwar Academic Publishers, Netherlands, pp 195-196 61 Pliansinchai U (2014), "Tisue culture Technology for sustainanable cane Production The Fifth IAPSIT International Conference (IS-2014): Green Technologies for Sustainable Improvement of Sugar & Integrated Industries in Developing Countries, November 25-28, Nanning, China, 2014", pp 95-96 62 Rakesh Sing Sengar K S a S K G (2011), "BIOTECHNOLOGICAL APPROACHES FOR HIGH SUGARCANE YIELD", Plant Sciences Feed, 2011 - (7), pp 101-111 63 Rao G.P D K N (2002), "Grassy Shoot Disease of Sugarcane", Sugarcane Crop Management by Singh S, Rao G and Easwatnamoorthy S SCI TECH Publications, USA, pp 208-222 64 Rao G.P F R E (2000), "Vectors of virus and Phytoplasma diseases of Sugarcane", An Overview Sugarcane Pathology Vol III, pp 265-314 65 Ricaud C a R., CC (1989), "Leafscald", Diseases of Sugarcane Eds RicaudC, Egan BT, Gillaspie AG and Hughes CG Elsevier, Amsterdam, pp 39-53 73 66 Ricaud C a R., CC (1989), "Leafscald pp 39-53 in: Diseases of Sugarcane.", Elsevier, Amsterdam 67 Rott R.A B J C., Comstock B.J, Croft A.S, Saumtally (2000), "A guide to sugarcane disease", CIRAD ISSCT 68 Sabaz Ali Khan H R., M Fayyaz Chaudhary1, Zubeda Chaudhry,and Amber Afroz (2008), "Rapid micropropagation of three elite Sugarcane (Saccharum officinarum L.) varieties by shoot tip culture", African Journal of Biotechnology Vol (13), pp 2174-2180 69 Santosa DA H R., Farouk A, Greiner R (2004), "A rapid and highly efficient method for transformation of sugarcane callus", Mol Biotechnol 2004 Oct;28(2), pp 113-119 70 Sasson A (1993), "Biotechnologies in Developing Countries: Present and Future, Vol 1", United Nations Educational, Scientific and Cultural Organization 71 Sauvaire D G R (1978), "Multiplication vegetative de canne a Sucre (Saccharum sp.) par bouturage in vitro", CR Acad Sci Paris, Seri D., pp 467-470 72 Schneider B S E., Smart C.D., Kirkpatrick B.C., (1995), "Phylogenetic classification of plant pathogenic my-coplasma-like organisms or phytoplasmas", Molecular and Diagnostic Procedures in Mycoplasmology, pp 369-380 73 Singh R (2003), "Tissue culture studies of surgacane", Department of Biotechnology and Environmental Science Thapar Institute of Engineering and Technology Patiala - 147004, India 74 Smith R H (2000), "Plant Tissue Culture: Techniques and Experiments", 2d ed, Academic press 75 Sreenivasan T V (1995), "Micropropagation of newly released varieties for quality seed production", Kisan World, pp 22-23 76 Sreenivasan T V a N C J (1981), "Utilization of tissue culture technique in sugarcane improvement C Meristem culture", Annual Report Sugarcane Breeding Institute, Coimbatore 1981, pp 68 77 Sreenivasan T V a N C J (1992), "Micropropagation of sugarcane varieties for increasing cane yield", SISSTA Jour, pp 61-64 74 78 Stöver BC M K (2010), "TreeGraph 2: combining and visualizing evidence from different phylogenetic analyses", BMC Bioinformatics doi: 10, pp 1186/1471-21051111-1187 79 Sundara B (1995), "Causes for sugarcane varietal yield decline and techniques of rejuvenation", Proceeding of the 57th Annual Convention of Sugar Technologists Association of India New Delhi, pp 153-167 80 Tanaka M., Yoneyama, M., Minami, T., Noguchi, K., (1993), "Micropropagation of Phalaenopsis by using synthetic seeds in film culture vessels", Proceed of the 14th World Orchid Conference, HMSO Publishers, Glasgow, Scotland, pp 180-187 81 Tarcizio Goes R M., Marlene de Araújo, Eliseu Alves, Mirian Oliveira de Souza (2011), "Sugarcane in Brazil - Current technologic stage and perspectives", Revista de Politica Agricola, Ano XX 82 Taylor P W J (1997), "Micropropagation of sugarcane (Saccharum spp Hybrid)", Biotechnology in Agriculture and forestry, volume 39, high-tech and Micropropagation v (Ed.): Y.P.S Bajaj Springer-verlag Berlin, pp 256-271 83 Taylor PWJ D S (1993), "Development of an in vitro culture technique for conservation of Saccharum Sp", Plant cell Tissue Organ Cult 34, pp 217-222 84 Tiwari A K S K V a G P R (2012), "Increasing incidence of sugarcane grassy shoot disease in Uttar Pradesh, India and its impact on yield and quality of sugarcane", Phytopathogenic Mollicute 01/2012, pp 2-63 85 Theerawut Wongwarat S S a P T (2011), "Effective methods of preserving SCWL-diseased sugarcane leaves for genomic DNA extraction and molecular detection of phytoplasma", African Journal of iotechnology Vol 10(53), pp 1087110876 86 Trinh Xuan Hoat N G B., Mai Van Quan,Vu Duy Hien,Nguyen Duc Thanh, Matthew Dickinson, (2012), "Detection and molecular characterization of sugarcane grassy shoot phytoplasma in Vietnam", Phytoparasitica, September 2012, Volume 40, Issue 4, pp 351-359 75 87 Vasil C a (1993), "Effect of L-Proline and L-triptophan on somatic embryogenesis and plantlet regeneration of rice (oryza sativa L cv Pusa 169)", Plant cell tiss Organ cult., 1993 32, pp 351-361 88 Vu Anh Tuan T T H., Pham Thi Thanh Phuong, Phan Thi Thanh Thuy Ha Thi Thuy, Do Nang Vinh, Tran Dang Khanh (2015), "RAPID IN VIRO MULTIPLICATION OF SOME SUGARCANE CULTIVARS (SACCHARUM OFFICNARUM) VIA EMBRYOGENIC CALLUS CULTURE OF YOUNG LEAF TISSUES", International Journal of Development Research Vol 5, Issue, 12, pp 6139-6146 89 Wagish ME G G., Ryan CC, Adkins SW (1995), "Development of an axillary bud culture technique for Fiji desea virus elimination in sugarcane", Aust J Bot H3, pp 135-143 90 Xie Y W M., Xu D, Li R, Zhou G (2009), "Simultaneous detection and identification of four sugarcane viruses by one-step RT-PCR", Virol Methods Dec, pp 162(161-162):164-168 91 Xie Y W M., Xu D, Li R, Zhou G (2009), "Simultaneous detection and identification of four surgacane viruses by one-step RT-PCR", Virol Methods Dec, pp 162 (161-162): 164-168 92 Ye Y P., Li, Y.R., Su, J.B., Huang, C.M., Tang, J., and Huang X (2003), "Preliminary study on yield-increasing effect of virus free seed plantlets of fruit-use sugar cane", Crops, 6, pp 21-22 93 Z.K V (182), "The ontogeny of somatic embryos of Pennisetnm Americamm (L.) K Schm.I", In cultured immature embryos Bot Gaz :143, pp 454-465 94 Z.K V (1964), "Plantlets from free suspended cells groups invitro", 146, pp 7677 95 Z.K V (1982), "The ontogeny of somatic embryos of Pennisetnm Americamm (L.) K Schm.I.", In cultured immature embryos Bot Gaz :143, pp 454-465 96 Taylor PWJ D S (1993), "Development of an in vitro culture technique for conservation of Saccharum Sp.", Plant Cell Tissue Organ Cult 34 76 DANH MỤC CÁC CÔNG TRÌNH CÓ LIÊN QUAN ĐẾN LUẬN VĂN Hà Thị Thúy, Trần Thị Hạnh, Vũ Anh Tuấn, Đỗ Năng Vịnh Nghiên cứu xây dựng phát triển quy trình sản xuất giống mía bệnh theo quy mô công nghiệp công nghệ tế bào Hội thảo quốc gia KH trồng lần thứ nhất.( ngày 5-6/09/2013) Hà Thị Thúy, Lê Quốc Hùng, Trần Thị Hạnh, Vũ Anh Tuấn, Đỗ Năng Vịnh Nghiên cứu tạo giống bưởi cam không hạt công nghệ sinh học Hội thảo quốc gia KH trồng lần thứ nhất.( ngày 5-6/09/2013) Hà Thị Thúy, Lê Quốc Hùng, Vũ Anh Tuấn, Đỗ Năng Vịnh Kết nghiên cứu khảo nghiệm giống mía HB1 số tỉnh phía Bắc Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn Chuyên đề giống trồng, vật nuôi - tập 1, tháng 6, năm 2014, tr 202-211 Ha Thi Thuy, Do Nang Vinh, Tran Thị Hanh, Trân Ngoc Thanh, Lê Quoc Hung, Vu Anh Tuan, Tran Dang Khanh Integation of biotechnology and conventional breeding to develop citrus seedless cutivars in viet nam International journal of development research Vol.4, Isue,10, pp 2091 – 2093, September, 2014 Vu Anh Tuan, Tran Thi Hanh, Pham Thi Thanh Phuong, Phan Thi Thanh Thuy Ha Thi Thuy, Do Nang Vinh, Tran Dang Khanh Agricultural Genetics Institute, Hanoi, Vietnam RAPID IN VIRO MULTIPLICATION OF SOME SUGARCANE CULTIVARS (SACCHARUM OFFICNARUM) VIA EMBRYOGENIC CALLUS CULTURE OF YOUNG LEAF TISSUES International Journal of Development Research Vol 5, Issue, 12, pp 6139-6146, December, 2015 Vũ Anh Tuấn, Vũ Duy Tiến, Trần Thị Hạnh, Nguyễn Văn Nhị, Hà Thị Thuý, Đỗ Năng Vịnh Ứng dụng kỹ thuật PCR lồng chọn lọc mẫu mía bệnh phytoplasma cho nuôi cấy mô in vitro.Tạp chí Nông nghiệp Phát triển nông thôn, 3+4/2016 Tr119-125 ... LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT o0o - VŨ ANH TUẤN NGHIÊN CỨU QUY TRÌNH NHÂN NHANH MỘT SỐ GIỐNG MÍA MỚI BẰNG CÔNG NGHỆ NUÔI CẤY MÔ TẾ BÀO Chuyên ngành:... bệnh nghiên cứu nhân nhanh giống mía phương pháp nuôi cấy mô phục vụ cho sản xuất mía đường Việt Nam đòi hỏi bách sản xuất Chính tiến hành đề tài: Nghiên cứu quy trình nhân nhanh số giống mía công. .. Sauvaire Galzy [71] xây dựng quy trình nhân nhanh chồi mía in vitro quy trình sau áp dụng vào nhân giống quy mô công nghiệp nhiều nước Đến nay, công nghệ nhân giống mía nuôi cấy mô triển khai phạm vi