Số lượng sản xuất cây hoa Lan hiện nay vẫn chưa đáp ứng được nhu cầu ngày càng tăng của thị trường, Giảm bớt các nhược điểm của phương pháp nhân giống truyền thống trên môi trường thạch và lỏng Hiện tượng thủy tinh thể khi nuôi cấy trong môi trường lỏng có tỷ lệ cao
ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG ĐẠI HỌC BÁCH KHOA KHOA HÓA BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC BÁO CÁO ĐỀ TÀI: Nghiên cứu nhân nhanh protocorm giống lan Hồ điệp (PHALAENOPSIS SPP.) phương pháp nuôi cấy mô hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI Giáo viên hướng dẫn: TS ĐẶNG ĐỨC LONG Sinh viên thực hiện: LƯƠNG THANH BÌNH NỘI DUNG CHÍNH 1.1.TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 2.2.VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 3.3.KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.4.KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ I TÍNH CẤP THIẾT CỦA ĐỀ TÀI Số lượng sản xuất hoa Lan chưa đáp ứng nhu cầu ngày tăng thị trường Giảm bớt nhược điểm phương pháp nhân giống truyền thống môi trường thạch lỏng Gia tăng hệ số nhân thời gian ngắn để đáp ứng nhu cầu lớn thị trường nước xuất Hiện tượng thủy tinh thể nuôi cấy môi trường lỏng có tỷ lệ cao GiỚI THIỆU VỀ HOA LAN hồ điệp (phalaenopsis spp.) - tên khoa học là Phalaenopsis sp Lan Hồ Điệp có màu sắc phong phú - Hoa lan Hồ Điệp II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Nguồn mẫu protocorm giống lan Hồ điệp (Phalaenopsis spp.), (có màu xanh, đường kính từ 1-1,5mm) thu nhận sau 2-3 tháng cấy chuyền sang môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) có bổ sung 2,0 mg/l BA, 0.5 mg/l NAA, 20% nước dừa 30 g/l đường Thiết bị nghiên cứu Có thông số kích thước sau: - Chiều cao (kể nắp): 38 cm - Chiều rộng: 33,5 cm - Chiều sâu: 40 cm Nắp có chiều cao cm Có khả mở đóng lại dễ dàng Nhìn từ bề ta thấy máy gồm chi tiết như: - Công tắc tổng (nguồn): Dùng để bật /tắc nguồn máy - Điều áp: Dùng để điều chỉnh cường độ dòng điện - Đo dòng khí (Thủy kế): Dùng để đo dòng khí tổng - Bộ hẹn giờ: Dùng để cài đặt chu kỳ hoạt động máy - Van điều áp: Điều chỉnh áp lực khí - Công tắc đèn báo: bật/ tắc đèn báo - Đèn báo: Báo ống dùng - Quạt: làm mát bên máy Hệ thống BioCFI hệ thống tự động hóa hoàn toàn Hệ thống BioCFI hoạt động nguyên lý cung cấp dòng khí định kỳ vào bên bình nuôi cấy Dòng khí làm màng lọc vi sinh trước vào bình nuôi cấy 2.2 Phương pháp nghiên cứu Môi trường nuôi cấy MS bản: - MSđđ + 20g/l saccharose + 300ml/l CW + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC - pH = 5,8 Điều kiện nuôi cấy: - Nhiệt độ: 25±2 C - Độ ẩm: 70 - 80% - Thời gian chiếu sáng: 14 giờ/ngày - Cường độ chiếu sáng: 2000 lux Kết nghiên cứu NT Thể tích (ml) pH Ban đầu Sau nuôi cấy Ban đầu Sau nuôi cấy V1 300 230 ± 3,05 5,8 5,050 ± 0,10 V2 300 205 ± 4,16 5,8 4,675 ± 0,11 V3 300 185 ± 5,01 5,8 4,100 ± 0,10 V4 300 190 ± 4,02 5,8 4,225 ± 0,05 Biểu đồ 5.3 Sự thay đổi thể tích pH môi trường trình nuôi cấy hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI v1 v3 v2 v4 Kết luận nghiên cứu V1: mg/l BA + mg/l NAA lần V2: 0,5 mg/l BA + 0,5 mg/l NAA V3 V3: mg/l BA + 0,5 mg/l NAA V4: 1,5 mg/l BA + 0,5 mg/l NAA 19,7 ± 0.458 (g) Kết nghiên cứu Chế độ sục khí Ban đầu (g) 1h/ngày (S1) 1,5h/ngày (S2) 2h/ngày (S3) 17,85 19,75 18,9 Biều đồ 5.4 Ảnh hưởng chế độ sục đến khả nhân sinh protocorm hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI Kết nghiên cứu NT Thể tích (ml) pH TT Ban đầu Sau nuôi cấy Ban đầu Sau nuôi cấy 1h/ngày 300 205 5,8 4,55 1,5h/ngày 300 190 5,8 4,15 2h/ngày 300 160 5,8 3,85 Biểu đồ 5.5 Sự thay đổi thể tích pH môi trường chế độ sục khí hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI h f g Kết luận nghiên cứu Khối lượng tươi 19,75 g 1,5h/ngày 1h/ngày 2h/ngày IV Kết luận đề nghị KẾT LUẬN Qua trình nghiên cứu đề tài “Nghiên cứu nhân nhanh protocorm giống lan Hồ Điệp phương pháp nuôi cấy hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI 1”, em rút kết luận sau: Đối với trình nuôi cấy hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI nhân nhanh protocorm cho kết cao so với nuôi cấy lỏng lắc lỏng tĩnh Sau tuần nuôi cấy đạt khối lượng tươi protocorm 19,45g, protocorm xanh tốt, tròn, nhiều cụm, số protocorm phát triển thành chồi KẾT LUẬN Việc bổ sung chất điều hòa sinh trưởng môi trường nuôi cấy nồng độ 1mg/l BA + 0,5mg/l NAA cho kết tốt nhất: trọng lượng tươi mẫu cấy cao với 19,7g, cụm mẫu cấy protocorm, sau tuần nuôi cấy tạo thành protocorm có phát triển đồng protocorm, xuất nhiều cụm protocorm to có màu xanh đậm nhiều mẫu protocorm bắt đầu hình thành chồi Đối với chế sục khí 1,5h/ngày việc tạo cụm protocorm tốt, có đồng protocorm, có màu xanh đậm, to lớn Trọng lượng tươi đạt tới 19,75g Với chế độ sục 1h/ngày đạt khối lượng tươi 17,85g Tóm lại, nuôi cấy mẫu protocorm lan Hồ điệp hệ thống bioreactor tự tạo BioCFI với môi trường: MS + 20g/l đường + 300ml/l CW + 1mg/l BA + 0,5mg/l NAA + 0,5kg/l khoai tây + 0,5g/l AC, pH ~ 5,8, chế độ sục 1,5h/ngày khả nhân nhanh protocorm cho khối lượng tươi protocorm cao so với nuôi cấy lỏng lắc lỏng tĩnh ĐỀ NGHỊ Qua nghiên cứu em xin đề xuất số đề nghị sau: - Nên khảo sát thêm yếu tố “lưu lượng khí sục vào bình nuôi cấy” đến khả nhân nhanh protocorm - Các mẫu protocorm sau thu nhận từ trình nuôi cấy hệ thống bioreactor tiếp tục chuyển qua hệ thống ngập chìm tạm thời để tạo chồi - Mở rộng việc nhân nhanh protocorm nhiều loại hoa lan khác như: Dendrobium, nhân nhanh callus số loại thực vật khác: hoa Cúc, hoa Đồng tiền THANK YOU ... HOA LAN hồ điệp (phalaenopsis spp.) - tên khoa học là Phalaenopsis sp Lan Hồ Điệp có màu sắc phong phú - Hoa lan Hồ Điệp II VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 2.1 Vật liệu nghiên cứu Nguồn mẫu protocorm. .. f g Kết luận nghiên cứu Khối lượng tươi 19,75 g 1,5h/ngày 1h/ngày 2h/ngày IV Kết luận đề nghị KẾT LUẬN Qua trình nghiên cứu đề tài Nghiên cứu nhân nhanh protocorm giống lan Hồ Điệp phương pháp... bioreactor, lỏng lắc, lỏng tĩnh đến khả nhân sinh chồi protocorm Kết luận nghiên cứu n Lỏ ắc l g corm o t r o p b n Lỏ ĩ nh t g ct a e r o i or a c b Kết nghiên cứu Trọng lượng tươi (g) Chất điều