BƯỚC đầu NGHIÊN cứu NHÂN NHANH cây nưa (amorphophallus sp) TRONG ỐNG NGHIỆM để bảo tồn và PHỤC vụ sản XUẤT

BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC THÀNH TÂY KHOA CÔNG NGHỆ NÔNG - LÂM - THỰC PHẨM ………………… KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP TÊN ĐỀ TÀI: BƯỚC ĐẦU NGHIÊN CỨU NHÂN NHANH CÂY NƯA (Amorphophallus sp) TRONG ỐNG NGHIỆM ĐỂ BẢO TỒN VÀ PHỤC VỤ SẢN XUẤT NGƯỜI HƯỚNG DẪN: TS NGUYỄN VĂN DƯ (VIỆN SINH THÁI VÀ TÀI NGUYÊN SINH VẬT) TS LÊ XUÂN ĐẮC (VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC) BỘ MÔN – KHOA: CÔNG NGHỆ NÔNG - LÂM - THỰC PHẨM NGƯỜI THỰC HIỆN: LÊ THỊ THANH HUỆ LỚP: K2-CNSH2 HÀ NỘI - 2012 LỜI CAM KẾT Tơi xin cam đoan cơng trình nghiên cứu riêng Các số liệu kết nghiên cứu khóa luận hồn tồn trung thực chưa cơng bố cơng trình khác Hà Nội, ngày tháng Tác giả Lê Thị Thanh Huệ năm 2012 LỜI CẢM ƠN Để hồn thành khóa luận tốt nghiệp này, tơi xin chân thành cảm ơn TS Nguyễn Văn Dư, Viện Sinh thái tài nguyên sinh vật, TS Lê Xuân Đắc, Viện Cơng nghệ sinh học ln tận tình giúp đỡ hướng dẫn tơi suốt q trình thực đề tài Đồng thời, xin chân thành cảm ơn thầy cô giáo khoa Công nghệ Nông - Lâm - Thực phẩm trường Đại học Thành Tây dạy dỗ, truyền đạt cho cho kiến thức vững lòng đam mê nghiên cứu khoa học suốt thời gian học tập trường Cuối cùng, tơi xin gửi đến gia đình bạn bè, người ủng hộ, động viên suốt trình học tập nghiên cứu khoa học lời biết ơn chân thành sâu sắc Hà Nội, tháng năm 2012 KÍ TỰ VIẾT TẮT BAP CT CTMT ĐC IAA IBA KTST NAA TB - Benzyl Amino Purin Công thức Công thức môi trường Đối chứng Indoly Acetic Acid Indoly Butyric Acid Kích thích sinh trưởng α – Naphthalen Acetic Acid Trung bình DANH MỤC CÁC BẢNG Bảng 1: Kết tạo nguyên liệu vô trùng từ hạt Bảng 2: Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tạo đa chồi Bảng 3: Ảnh hưởng nồng độ BAP NAA đến khả tạo đa chồi Bảng 4: Ảnh hưởng nồng độ BAP IAA đến khả tạo đa chồi Bảng 5: Ảnh hưởng nồng độ BAP IBA đến khả tạo đa chồi Bảng 6: Kết tổng hợp thí nghiệm tạo đa chồi Nưa Bảng 7: Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Bảng 8: Ảnh hưởng IAA đến khả tạo rễ Bảng 9: Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Bảng 10: Ảnh hưởng giá thể đến trồng bầu Phần MỞ ĐẦU 1.1 Đặt vấn đề Nưa loại thường trồng quốc gia Đông Á lương thực thực phẩm Ở nước ta, Nưa mọc hoang rải rác khắp vùng rừng núi, người dân nhiều địa phương đem trồng lâu đời vườn, quanh bờ ao, dọc hàng rào đồi để làm thức ăn cho người gia súc, gặp nhiều tỉnh Lạng Sơn, Quảng Ninh, Hồ Bình, Nghệ An, Hà Tĩnh, Quảng Trị, Thừa Thiên Huế Củ Nưa có nhiều tinh bột mịn ăn ngon sắn nên trước nhân dân ta trồng nhiều để lấy củ làm lương thực ăn thay cơm, bẹ nấu canh hay muối để dành làm thức ăn dưa tháng thiếu rau xanh cho người chế biến thức ăn cho gia súc Trong củ Nưa có chứa glucomannan, polysaccharide hòa tan nước Nó có khả làm giảm lượng đường cholesterol máu, giảm cân, thúc đẩy hoạt động đường ruột tăng cường chức miễn dịch Glucomannan sử dụng công nghiệp thực phẩm dược phẩm Cây Nưa khơng có giá trị mặt thực phẩm mà có ý nghĩa việc chống xói mòn đất Thực trạng nay, diện tích rừng nước ta ngày bị thu hẹp, việc khai thác tài nguyên rừng bừa bãi, đa dạng sinh học bị phá vỡ, nhiều nguồn gen thực vật có nguy tuyệt chủng Cùng với thực tế ngày đời sống người ngày nâng cao, nhiều người khơng nghĩ đến lồi dân dã lại có nhiều giá trị to lớn Nưa Hơn nghiên cứu Nưa chưa nhiều, việc quan tâm đến Nưa việc làm cần thiết để nhân giống bảo tồn giống Nưa Ngày nay, kỹ thuật nuôi cấy mô tế bào thực vật kỹ thuật quan trọng công nghệ sinh học thực vật Những thành tựu mà nuôi cấy mô tế bào thực vật đạt chứng tỏ khả ứng dụng hiệu nhiều lĩnh vực, đặc biệt nhân nhanh bảo tồn lồi thực vật q (Lê Trần Bình CS, 1997) Với lý trên, lựa chọn đề tài: “Bước đầu nghiên cứu nhân nhanh Nưa (Amorphophallus sp) ống nghiệm để bảo tồn phục vụ sản xuất” 1.2 Mục đích yêu cầu 1.2.1 Mục đích Xây dựng quy trình hồn chỉnh để nhân nhanh bảo tồn in vitro Nưa 1.2.2 Yêu cầu - Xây dựng qui trình nhân Nưa ống nghiệm với hệ số nhân chồi cao, chi phí sản xuất thấp, giá thành hạ - Cây nuôi cấy từ ống nghiệm phát triển tốt giai đoạn nhà lưới vườn ươm Phần TỔNG QUAN TÀI LIỆU 2.1 Vị trí phân loại giá trị Nưa Cây Nưa (hay khoai Nưa) có tên khoa học Amorphophallus sp, thuộc họ Ráy (Araceae), lớp Một mầm (Monocotyledone) (Hoàng Thị Sản Hồng Thị Bé, 2006) Cây thảo có củ lớn hình cầu lõm, đường kính tới 25cm; trước hoa, sau Mỗi chia làm nhánh, nhánh lại chia đốt, phiến xẻ thuỳ sâu hình lơng chim, thuỳ cuối hình trám thuôn, nhọn đầu; cuống thon, dài 40-80cm, nhẵn, màu lục nâu, có điểm chấm trắng Cụm hoa có mo lớn, phần bao mo màu lục nhạt điểm vết lục thẫm, phía mép màu tím, mặt màu đỏ thẫm Trục hoa dài gấp đôi mo Quả mọng (Hejnowicz Z Barthlott W 2005), (Jianbin Hu Jianwu Li, 2008) Khoai Nưa trồng Nhật bản, Trung quốc, Việt Nam Philippin Ở nước ta, dân tộc số vùng đồi núi thuộc tỉnh Quảng Ninh, Lạng Sơn, Hà Bắc có tập quán trồng khoai Nưa từ lâu đời Nhiều vùng nơng thơn có trồng để lấy củ ăn Cây Nưa có giá trị thực phẩm to lớn Cuống Nưa dùng để nấu canh muối dưa ăn Củ, dọc lá, bã bột khoai Nưa nguồn thức ăn tốt để chăn nuôi gia súc, đặc biệt chăn nuôi lợn Củ Nưa phần có giá trị to lớn Củ Nưa luộc ăn gọt vỏ thổi độn với cơm, ăn mát, dạ, khơng nóng ruột khoai lang Củ khoai Nưa dùng để nấu chè Tuy nhiên, Nưa chủ yếu trồng để lấy bột Bột Nưa trắng mịn bột sắn có hàm lượng tinh bột cao Trong 100g củ khơ có tinh bột 75,16g; protein 12,5g; lipid 0,98; dẫn xuất không protein 3,27; cellulose 3,67; tro 4,42 Tỷ lệ tinh bột nhiều gấp đôi khoai sọ Bột Nưa từ lâu người Nam Bộ coi thứ thực phẩm giải nhiệt hữu hiệu giống bột sắn Dân gian dùng bột Nưa để làm loại bánh, làm miến sử dụng công nghiệp để hồ vải Từ xưa người dân miệt duyên hải Tây Nam Bộ xem bột Nưa loại thuốc dân gian Củ Nưa dùng dược liệu để chữa bệnh sốt rét có báng, đờm trệ, ăn không tiêu, đầy bụng (Đỗ Tất Lợi, 2005) Trong củ Nưa có chứa glucomannan - polysaccharide hòa tan nước Glucomannan chất phụ gia thực phẩm sử dụng chất chuyển đổi sữa hay chất làm đặc Trong lịch sử, glucomannan sử dụng thực phẩm truyền thống châu Á mì, đậu phụ, sản phẩm khác Ngoài ý nghĩa thực phẩm, glucomannan đóng vai trò quan trọng số loại dược phẩm (Tamura CS, 2005) Glucomannan chất xơ hòa tan, sử dụng để điều trị táo bón Glucomannan làm giảm táo bón cách giảm thời gian vận chuyển phân (Marzio, 1989) Trong điều trị táo bón mãn tính, glucomannan cải thiện đáng kể triệu chứng táo bón (Passaretti, 1991) Glucomannan có tác dụng giảm colesterol, lipoprotein chất béo trung tính, bổ sung vào thành phần loại thuốc chữa béo phì (Walsh, 1984), (Gallaher, 2002) Chất chứng minh có tác dụng hỗ trợ tích cực hỗ trợ điều trị bệnh nhân tiểu đường type điều chỉnh nồng độ đường máu (Chen, 2003) Glucomanan chiếm 70% chất khơ củ Nưa, việc nghiên cứu nhân giống Nưa để thu glucomannan có ý nghĩa to lớn Cây Nưa khơng kén đất, trồng nhiều loại đất từ đất xấu bạc màu đến đất hoang đồi núi tơi xốp, nhiều mùn Một đặc điểm sinh lý quan trọng khoai Nưa khả chịu bóng cao, dễ quang hợp nơi có ánh sáng tán xạ, độ che phủ cao thích hợp để trồng xen tán rừng, vườn ăn vừa tận dụng đất đai, vừa góp phần chống xói mòn bảo vệ đất rừng tốt Đây loại có củ địa có giá trị kinh tế cần khôi phục sản xuất để phục vụ nhu cầu kinh tế xã hội đồng thời góp phần bảo vệ mơi trường sinh thái 10 Phần KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 Tạo nguyên liệu vô trùng Nưa Hạt Nưa sau khử trùng cấy vào môi trường MS Kết sau 30 ngày nuôi cấy thu chồi vô trùng, chồi non sử dụng làm nguyên liệu cho thí nghiệm Bảng 1: Kết tạo nguyên liệu vô trùng từ hạt Phương pháp khử trùng Javen 70% HgCl2 (0,1) Số hạt cấy 85 72 Số hạt nhiễm 27,0 16,0 Tỷ lệ Số hạt nhiễm (%) nảy mầm 31,8 31,0 22,2 25,0 Tỷ lệ nảy mầm (%) 53,45 44,64 Kết thu bảng cho thấy: phương pháp khử trùng javen 70% có tỷ lệ nhiễm cao (31,8%) tỷ lệ mầm cao so với phương pháp khử trùng HgCl2 (53,45%) Bên cạnh đó, HgCl2 chất độc hại, có tác động khơng tốt đến sức khỏe Vì vậy, thí nghiệm này, chọn khử trùng javen làm phương pháp khử trùng để tạo nguyên liệu vô trùng Nưa 4.2 Tạo đa chồi Trong môi trường nghiên cứu in vitro bổ sung chất kích thích sinh trưởng auxin, cytokinin, gibberellin kích thích sinh trưởng phát triển phân hóa quan, từ tạo nên sức sống tốt cho mô tổ chức Tuy nhiên, lồi thực vật lại thích hợp với loại nồng độ chất kích thích sinh trưởng khác Vì vậy, nên sử dụng phối hợp chất kích thích sinh trưởng mơi trường ni cấy hiệu tối ưu 30 Việc tìm cơng thức mơi trường với nồng độ tỷ lệ chất kích thích sinh trưởng phù hợp với loài cây, giai đoạn phát triển bước quan trọng qui trình nhân giống in vitro 4.2.1 Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tạo đa chồi BAP có vai trò quan trọng việc hình thành đa chồi Chúng tơi tiến hành thử nghiệm công thức tạo đa chồi với nồng độ BAP khác Kết thể bảng sau 30 ngày nuôi cấy Bảng 2: Ảnh hưởng nồng độ BAP đến khả tạo đa chồi CTMT ĐC AMBA1 AMBA2 AMBA3 AMBA4 AMBA5 AMBA6 AMBA7 BAP (mg/l) Số chồi cấy 0,1 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 3,0 30 30 30 30 30 30 30 30 Số chồi tạo thành 35 45 75 97 137 180 183 189 Hệ số nhân chồi 1,2 1,5 2,1 2,8 3,9 5,1 5,2 5,4 Kết bảng cho thấy: mơi trường AMBA1 AMBA2 có hệ số nhân chồi thấp (1,5 2,1) Các môi trường AMBA5, AMBA6 AMBA7 cho hệ số nhân chồi cao, 5,1; 5,2 5,4 Tuy nhiên môi trường AMBA5 cho tỷ lệ mô sẹo thấp nhất, chồi phát sinh khỏe mạnh, đồng Vì vậy, thí nghiệm chúng tơi chọn mơi trường AMBA5 (2 mg/l BAP) mơi trường thích hợp tạo đa chồi Nưa 4.2.2 Ảnh hưởng tổ hợp BAP NAA đến khả tạo đa chồi 31 Tỷ lệ auxin/cytokinin quan trọng phát sinh hình thái hệ thống ni cấy Khi tỷ lệ auxin/cytokinin cao phát sinh mơ sẹo hình thành rễ Ngược lại dẫn tới phát sinh chồi chồi nách Chúng tiến hành thử nghiệm công thức tạo đa chồi với tổ hợp BAP NAA nồng độ khác Kết thể rõ bảng sau 30 ngày nuôi cấy Bảng 3: Ảnh hưởng nồng độ BAP NAA đến khả tạo đa chồi CTMT ĐC AMNA1 AMNA2 AMNA3 AMNA4 AMNA5 AMNA6 BAP (mg/l) 2 2 2 NAA (mg/l) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 Số chồi cấy 30 35 35 35 35 35 35 Số chồi tạo thành 52 160 198 172 164 153 134 Hệ số nhân chồi 1,7 4,6 5,7 4,9 4,7 4,4 3,8 Kết bảng cho thấy: môi trường AMNA3, AMNA4, AMNA5 AMNA6 có nồng độ NAA tăng dần (từ 0,3 - 0,6 mg/l) hệ số nhân chồi lại giảm dần (từ 4,9 đến 3,8) Môi trường AMNA2 có nồng độ NAA 0,2 mg/l cho hệ số nhân chồi cao (5,7) Vì vậy, thí nghiệm này, chọn môi trường AMNA2 (2 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA) mơi trường thích hợp tạo đa chồi Nưa 4.2.3 Ảnh hưởng tổ hợp BAP IAA đến khả tạo đa chồi Củ Nưa chia thành phần nhỏ có đường kính khoảng 0,5 cm, cấy vào môi trường dinh dưỡng MS có bổ sung BAP IAA nồng độ khác Sau 30 ngày nuôi cấy, tiến hành quan sát, thu thập phân tích số liệu, kết nghiên cứu trình bày bảng 32 Bảng 4: Ảnh hưởng nồng độ BAP IAA đến khả tạo đa chồi CTMT ĐC AMIA1 AMIA2 AMIA3 AMIA4 AMIA5 BAP (mg/l) 2 2 IAA (mg/l) 0,1 0,3 0,5 0,7 0,9 Số chồi cấy 30 30 30 30 30 30 Số chồi tạo thành 52 121 172 167 155 142 Hệ số nhân chồi 1,7 4,0 5,7 5,6 5,2 4,7 Trong thí nghiệm này, tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng tổ hợp BAP IAA đến khả tạo chồi Nưa Nồng độ BAP giữ nguyên mg/l, nồng độ IAA thay đổi theo hướng tăng dần từ 0,1 mg/l đến 0,9 mg/l công thức môi trường nuôi cấy Kết thu bảng cho thấy, sau 30 ngày nuôi cấy, mơi trường AMIA2 có hệ số nhân chồi cao 5,7 Do lựa chọn công thức môi trường thích hợp tạo đa chồi Nưa thí nghiệm AMIA2 (2,0 mg/l BAP + 0,3 mg/l IAA) 4.2.4 Ảnh hưởng tổ hợp BAP IBA đến khả tạo đa chồi Trong thí nghiệm chọn nồng độ BAP mg/l, nồng độ IBA thay đổi theo hướng tăng dần từ 0,2 mg/l đến 1,0 mg/l công thức môi trường nuôi cấy Sau 30 ngày nuôi cấy kết thu thể qua bảng Bảng 5: Ảnh hưởng nồng độ BAP IBA đến khả tạo đa chồi CTMT ĐC BAP (mg/l) IBA (mg/l) Số chồi cấy 30 33 Số chồi tạo thành 40 Hệ số nhân chồi 1,3 AMIB1 AMIB2 AMIB3 AMIB4 AMIB5 2 2 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 40 40 40 40 40 165 179 170 163 142 4,1 4,5 4,3 4,1 3,6 Kết thu bảng cho thấy: Các môi trường cho tỉ lệ mẫu tạo chồi 100% Với môi trường AMIB2 có nồng độ IBA 0,4 hệ số nhân chồi cao nhất, đạt 4,48 Vì thí nghiệm chúng tơi lựa chọn mơi trường thích hợp tạo đa chối cho Nưa mơi trường AMIB2 (2 mg/l BAP + 0,4 mg/l IBA) Qua thí nghiệm khảo sát ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến khả tạo đa chồi Nưa tổng hợp lại bảng sau Bảng 6: Kết tổng hợp thí nghiệm tạo đa chồi Nưa CTMT AMBA5 (2 mg/l BAP) AMNA2 (2 mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA) AMIA2 (2 mg/l BAP + 0,3 mg/l IAA) AMIB4 (2 mg/l BAP + 0,4 mg/l IBA) Hệ số nhân chồi 5,1 5,7 5,7 4,5 Từ kết bảng cho thấy công thức môi trường AMNA2 AMIA2 cho hệ số nhân chồi cao (5,7) Còn hai mơi trường AMBA5 AMIB5 cho hệ số nhân chồi 5,1 4,5 Kết hợp với quan sát mẫu thực tế thu phát triển chồi thấy môi trường AMNA2 cho tỷ lệ mô sẹo chồi phát triên đồng Vì vậy, qua thí nghiệm chúng tơi chọn môi trương AMNA2 (2mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA) mơi trường thích hợp để tạo đa chồi Nưa 34 4.3 Tạo hồn chỉnh Kích thích tạo rễ khâu cuối giai đoạn nghiên cứu in vitro Các chất kích thích IBA, IAA, NAA đóng vai trò quan trọng phân chia tế bào hình thành rễ 4.3.1 Ảnh hưởng IBA đến khả hình thành rễ Nưa Sử dụng chồi nhận từ mơi trường nhân đa chồi có chiều dài từ - cm cấy vào môi trường có chất kích thích rễ để xác định mơi trường thích hợp để tạo rễ Nưa Trong thí nghiệm chúng tơi sử dụng IBA nồng độ khác nhau, thay đổi từ 0,1 mg/l đến 0,6 mg/l để nghiên cứu ảnh hường IBA đến khả tạo rễ Nưa Kết sau 20 ngày nuôi cấy thu bảng Bảng 7: Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ CTMT IBA (mg/l) Số chồi cấy Số chồi rễ Tỷ lệ chồi tạo rễ (%) ĐC ARIB1 ARIB2 ARIB3 ARIB4 ARIB5 ARIB6 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 30 45 45 45 45 45 45 16 21 28 35 39 45 35,6 46,7 62,2 77,8 86,7 100,0 số rễ TB/chồi có rễ 1,6 2,3 2,5 3,4 4,6 5,7 Kết bảng cho thấy, chồi Nưa tạo rễ tất mơi trường có chất kích thích, trừ mơi trường đối chứng MS khơng có chất kích thích sinh trưởng nên chơi ni cấy khơng xuất rễ Tuy nhiên mơi trường có chất kích thích sinh trường IBA tỉ lệ rễ môi trường ARIB1 ARIB2 (tương ứng với nồng độ IBA 0,1; 0,2 mg/l) tương đối thấp đạt 35,6% 46,7% 35 Môi trường ARIB6 có tỉ lệ rễ cao đạt 100%, thí nghiệm chúng tơi lựa chọn mơi trường ARIB6 (0,6 mg/l IBA) mơi trường thích hợp để tạo rễ 4.3.2 Ảnh hưởng IBA đến khả tạo rễ Chúng thử nghiệm ảnh hưởng chất kích thích sinh trưởng đến hình thành rễ Nưa với nồng độ khác nhau, từ 0,1 - 0,6 mg/l IAA Sau 20 ngày nuôi cấy, kết thu bảng Bảng 8: Ảnh hưởng IAA đến khả tạo rễ CTMT ĐC ARIA1 ARIA2 ARIA3 ARIA4 ARIA5 ARIA6 IAA (mg/l) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 Số chồi cấy 30 40 40 40 40 40 40 Số chồi rễ 15 22 34 40 40 Tỷ lệ chồi tạo rễ (%) 22,5 37,5 55,0 85,0 100,0 100,0 số rễ TB/chồi 2,1 2,8 3,7 4,6 5,5 5,8 Kết bảng cho thấy: Các môi trường ARIA1; ARIA2 ( tương ứng nồng độ IAA 0,1 mg/l 0,2 mg/l) có tỉ lệ chồi tạo rễ thấp, đạt 22,5% 37,5% Trong đó, mơi trường ARIA5 ARIA6 có tỉ lệ chồi tạo rễ 100% Nhưng mơi trường ARIA6 có số rễ trung bình\chồi cao (5,8) Vì chúng tơi lựa chọn mơi trường ARIA6 (0,6 mg/l IAA) mơi trường thích hợp để tạo rễ 4.3.3 Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ Trong q trình thí nghiệm, chúng tơi sử dụng chất kích thích sinh trưởng NAA nồng độ khác là: 0,1; 0,2; 0,3; 0,4; 0,5; 0,6 ( mg/l) để nghiên cứu ảnh hưởng NAA đến tạo rễ Nưa 36 Kết thu sau 20 ngày ni cấy trình bày bảng Bảng 9: Ảnh hưởng NAA đến khả tạo rễ CTMT ĐC ARNA1 ARNA2 ARNA3 ARNA4 ARNA5 ARNA6 NAA (mg/l) 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5 0,6 Số chồi cấy 30 40 40 40 40 40 40 Số chồi rễ 37 40 40 40 40 40 Tỷ lệ chồi tạo rễ (%) 92,5 100 100 100 100 100 số rễ TB/chồi 4,6 5,4 6,2 6,9 7,5 7,9 Kết bảng cho thấy tất công thức môi trường cho tỉ lệ rễ cao (trừ môi trường đối chứng MS) thấp môi trường ARNA1 (0,1 mg/l NAA) có tỉ lệ chồi tạo rễ 92,5%; mơi trường lại có tỉ lệ chồi tạo rễ 100% Vì chúng tơi lựa chọn mơi trường ARNA2 (0,2 mg/l NAA) mơi trường tạo rễ thích hợp Qua ba kết bảng 7, bảng bảng thực tế trình làm thí nghiệm chúng tơi rút kết luận sau: mơi trường ARIB6 (0,6 mg/l IBA) mơi trường thích hợp để tạo rễ Nưa 4.4 Ảnh hưởng giá thể đến tỉ lệ sống bầu Cây có đầy đủ thân, rễ đưa trồng bầu, giai đoạn cần phải có chế độ chăm sóc đặc biệt, phải đảm bảo độ ẩm ánh sáng vừa phải để thích nghi dần với điều kiện tự nhiên Kết thống kê sau 15 ngày trồng bầu trình bày bảng 10 Bảng 10: Ảnh hưởng giá thể đến trồng bầu Loại giá thể Tỉ lệ Số trồng 37 Số sống Tỷ lệ sống sau 15 ngày Đất + Cát đen Cát đen + Trấu hun Trấu hun Trấu hun + Đất 1:1 1:1 1:1 150 150 150 150 120 134 145 143 (%) 80,0 89,3 96,7 95,3 Từ kết bảng 10 rút nhận xét sau: Các loại giá thể cho tỉ lệ sống cao, cá thể đất + cát đen loại giá thể cho tỉ lệ sống thấp (80,0%), với số sống sót 120 Giá thể cát đen + trấu hun giá thể trấu hun + đất cho tỉ lệ sống cao 89,3% 95,3% với 134 143 sống sót Cá thể trấu hun cho tỉ lệ sống cao nhất, tương ứng 96,7%, số sống 145 Tuy nhiên, giá thể trấu hun q nhẹ tơi xốp mơi trường thích hợp cho phát triển không phù hợp việc vận chuyển Vì vậy, chúng tơi lựa chọn giá thể thích hợp để trồng Nưa giá thể trấu hun + đất 38 KẾT LUẬN VÀ ĐỀ NGHỊ Kết luận Bước đầu nhân Nưa phương pháp nuôi cấy in vitro Môi trường thích hợp để tạo đa chồi Nưa môi trường AMNA2 (MS + 30 g/l đường saccharose + 8g/l agar + mg/l BAP + 0,2 mg/l NAA) với hệ số nhân chồi 5,7 Môi trường tốt để tạo hồn chỉnh mơi trường ARIB6 (MS + 30 g/l đường saccharose + g/l agar + 0,6 mg/l IBA) với tỉ lệ tạo rễ 100%, số rễ trung bình/chồi 5,8 sinh trưởng phát triển tốt Giá thể thích hợp để trồng sau in vitro cho Nưa trấu hun + đất với tỉ lệ sống 95,3% Đề nghị Tiếp tục nghiên cứu sinh trưởng phát triển Nưa nuôi cấy in vitro tự nhiên 39 TÀI LIỆU THAM KHẢO Tài liệu tiếng Việt Lê Trần Bình, Hồ Hữu Nhị, Lê Thị Muội (1997), Công nghệ sinh học thực vật cải tiến giống trồng, NXB Nông nghiệp Hà Nội Lê Xuân Đắc, Hà Hồng Hải, Đào Thị Thu Hà, Nguyễn Thanh Danh, Lê Thị Xuân, Nơng Văn Hải, Lê Trần Bình (2004) Nhân nhanh bảo tồn Màng tang (Litsea verticillata) tìm thấy Vườn Quốc gia Cúc Phương kỹ thuật nuôi cấy mơ tế bào thực vật, Tạp chí Cơng nghệ sinh học, 2(4): 479-486 Phạm Hoàng Hộ (1993), Cây cỏ Việt Nam, tập 2(2), NXB Montréal 528 Nguyễn Hoàng Nghĩa (1997), Bảo tồn nguồn gen trồng, NXB Nơng Nghiệp Hà Nội Hồng Thị Sản, Hồng Thị Bé (2006), Phân loại học thực vật, NXB Đại học Sư Phạm Nguyễn Đức Thành (2000), Nuôi cấy mô t ế bào thực vật nuôi cấy ứng dụng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Đỗ Năng Vịnh (2005), Công nghệ tế bào thực vật ứng dụng, NXB Nông nghiệp, Hà Nội Vũ Văn Vụ, Nguyễn Mộng Hùng, Lê Hồng Điệp (2005), Công nghệ sinh học (tập 2), NXB Giáo dục, Hà Nội Lê Thị Xuân, Schemluck M, Mai Văn Trì (1996), Cây Thơng đỏ Lâm Đồng (Taxus walli chiana) nguồn nguyên liệu quý để sản xuất thuốc chữa ung thư nhóm Taxoid, Tạp chí hóa học, 34(1), Tr.80-81 10 Võ Châu Tuấn, Huỳnh Minh Tư, Nghiên cứu nhân giống in vitro Ba kích, Tạp chí Khoa học Cơng nghệ Đà Nẵng - Số 5(40).2010, 191196) 11 Đỗ Tất Lợi (2005), Những thuốc vị thuốc Việt Nam, NXB Y học 526-527 40 Tài liệu tiếng nước ngoài: 12.Chun-Lin Long, Heng Li, Zhiqin Ouyang, Xiangyun Yang, Qin Li and Bruce Trangmar (2003), Strategies for agrobiodiversity conservation and promotion: a case from Yunnan, China Biodiversity and Conservation, 12(6): 1145-1156 13 Hejnowicz Z, Barthlott W (2005) Structural and mechanical peculiarities of the petioles of leaves of Amorphophallus (Araceae) Am J Bot 92(3): 391-403 14.Jianbin Hu, Jianwu Li (2008), Morphogenetic pathway in petiole derived callus of Amorphophallus albus in vitro Acta Physiologiae Plantarum, 30: 389-393 15.Suzuki H, Oomizu S, Yanase Y, Onishi N, Uchida K, Mihara S, Ono K, Kameyoshi Y, Hide M (2010), Hydrolyzed Konjac glucomannan suppresses IgE production in mice B cells Int Arch Allergy Immunol, 152(2):122-30 16 Tamura M, Tsushida T, Shinohara K (2005), Konjac Glucomannan Consumption May Enhance Equol Production in Mice Food Science and Technology Research, 11(4): 376-379 17 Geoge EF (1993), Plant propagation by tissue culture (2), Exegetics Ltd, Edin 18 Daniel Lineberger R (1980), Tissue culture of woody plants, Texas A&M University, College Station 19 Ning-Zhen Huang, Chuan-Ming Fu, Zhi-Guo Zhao, Feng-Luan Tang, Feng Li (2007), Tissue culture and rapid proliferation of Morinda officinalis How, Botany, Guangxi Zhuangzu Autonomous Region and the Chinese Academy of Sclences, Guilin 541006, China 20 Wei LJ, Lu P and Su WP (2006), Tissue culture and rapid propagation of Morinda officinalis How, Plant Physilogy Comunication, 42 (3), pages 475 41 21 Nandi SK, Kumar A, and Palni L M S (2002), Role of plant tissue culture in biodiversity conservation and economic development, Gyanodaya Prakashan 22 Balaraju K, Agastian P, Preetamraj JP, Arokiyaraj S, Ignacimuthu S (2008), Micropropagation of Vitex agnus catus (Verbenaceae) - A valuable medicinal plant In Vitro Cellular & Development Biology Plant, 44(5):436 - 441 23 Mukherjee A, RoyChowdhury B (2008), In vitro Propagation of Aloe Vera sp TIG Research Journal, 1(2): 116 - 119 24 Nishritha B, Sanjay S (2008), In vitro propagation of high value medicinal plant: Asparagus racemosus Willd, In vitro cellular & Developmental Biology – Plant, 44(6): 525 - 532 25 Park SU, Kim YK, Lee SY (2009), Improved in vitro plant regeneration and micropropagation of Rehmannia glutinosa L Journal of Medicinal Plants Research, 3(1): 031 - 034 26 Arora R, Bhojwani SS (1989), In vitro propagation and low temperature storage of Saussurea lappa CB Clarke - An endangered medicinal plant Plant Cell Rep, 8: 44- 47 27 Rout R, Das G, Samantaray S, Das P (2001), In vitro micropropagation of Lawsonia inermis (Lythraceae) Publication: Revista de Biologia Tropical 28 Havens K, Guerrant E, Maunder M (1999), Strategies for survival: Ex situ plant conservation Report of a research symposium held at the Chicago Botanic Garden, BG Journal, 3(3) 29 Marzio L, Del Bianco R, Donne MD, Pieramico O, Cuccurullo F (August 1989) "Mouth-to-cecum transit time in patients affected by chronic constipation: effect of glucomannan" Am J Gastroenterol 84 (8): 888-91 30 Passaretti S, Franzoni M, Comin U, et al (1991) "Action of glucomannans on complaints in patients affected with chronic 42 constipation: a multicentric clinical evaluation" Ital J Gastroenterol 23 (7): 421-5 31 Walsh DE, Yaghoubian V, Behforooz A (1984) "Effect of glucomannan on obese patients: a clinical study"), (Arvill A, Bodin L (March 1995) "Effect of short-term ingestion of konjac glucomannan on serum cholesterol in healthy men” 32 Gallaher DD, Gallaher CM, Mahrt GJ, et al (October 2002) "A glucomannan and chitosan fiber supplement decreases plasma cholesterol and increases cholesterol excretion in overweight normocholesterolemic humans” 33 Chen HL, Sheu WH, Tai TS, Liaw YP, Chen YC (February 2003) "Konjac supplement alleviated hypercholesterolemia and hyperglycemia in type diabetic subjects-a randomized double-blind trial" 34 Murashige T, Skoog F (1962), A revised medium for rapid growth and bioassays with tobacco tissue cultures, Physiol Plant, 15: 475 - 497 Tài liệu Internet: 35.http://skhcn.hue.gov.vn/Portal/? GiaoDien=11&ChucNang=341&NewsID=20110324153307 36.http://vienhoahoc.ac.vn/PrintPreview.aspx?ID=414 37.http://www.baomoi.com/8X-bao-ton-gien-nhieu-giong-cayquy/79/3777758.epi 43 PHỤ LỤC Các thành phần môi trường MS (Murashige Skoog, 1962) Thành phần khoáng đa lượng NH4NO3 KNO3 CaCl2.2H2O MgSO4.7H2O KH2PO4 Thành phần khoáng vi lượng MnSO4.H2O ZnSO4.7H2O H3BO3 KI Na2MoO4.2H2O CuSO4.5H2O CoCl2.6H20 Na2EDTA FeSO4.7H2O Vitamin Thiamine HCl Nicotinic Acid Pyridoxine HCl Glyxine Nồng độ (mg/l) 1650 1900 440 370 170 Nồng độ (mg/l) 23,3 8,6 6,2 0,83 0,25 0,025 0,025 37,3 27,8 Nồng độ (mg/l) 0,1 0,5 0,5 2,0 44 ... biệt nhân nhanh bảo tồn loài thực vật quý (Lê Trần Bình CS, 1997) Với lý trên, lựa chọn đề tài: Bước đầu nghiên cứu nhân nhanh Nưa (Amorphophallus sp) ống nghiệm để bảo tồn phục vụ sản xuất ... hồn chỉnh để nhân nhanh bảo tồn in vitro Nưa 1.2.2 Yêu cầu - Xây dựng qui trình nhân Nưa ống nghiệm với hệ số nhân chồi cao, chi phí sản xuất thấp, giá thành hạ - Cây nuôi cấy từ ống nghiệm phát... học tiến hành thu thập giống Nưa với mục đích bảo tồn, chọn lọc đánh giá giống Nưa có hàm lượng glucomannan cao, chất lượng tinh bột tốt để nhân nhanh sản xuất Nưa phục vụ công nghiệp chế biến