Thực tập vi khuẩn đường ruột

THỰC TẬP VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT DÀN BÀI I ĐẠI CƢƠNG VỀ VK ĐƢỜNG RUỘT II CÁC LOẠI MÔI TRƢỜNG III QUY TRÌNH PHÂN LẬP VK ĐƢỜNG RUỘT IV CÁC LẤY VÀ CHUYÊN CHỞ BỆNH PHẨM V CÁCH PHÂN LẬP VI KHUẨN VI CÁC PHẢN ỨNG SINH HÓA GIÚP ĐỊNH DANH VK HỌ VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT E coli is a member of the normal intestinal microbiota Other enteric bacteria (Proteus, Enterobacter, Klebsiella, Morganella, Providencia, Citrobacter, and Serratia species) are also found as members of the normal intestinal microbiota but are considerably less common than E coli HỌ ENTEROBACTERIACEAE: trực khuẩn gram âm sống ống tiêu hóa ngƣời hay vật • Mọc môi trường nuôi cấy thông thường Kỵ khí tùy nghi Di động hay không di động • • • • • Lên men glucose, sinh (-/+) Khử nitrate thành nitrite Oxidase âm tính (cytochrome-oxidase) PHẢN ỨNG KHỬ NITRATE (NITRATE REDUCTION TEST) ESCHERICHIA COLI (E.coli) • Là VK thƣờng trú, bình thƣờng có ruột (ruột già - vùng hồi manh tràng)… • Là tác nhân gây bệnh khỏi nơi thƣờng trú, gây nhiễm trùng tiểu, nhiễm trùng máu, viêm màng não sơ sinh… • Có số chủng E coli có khả gây bệnh tiêu chảy: ETEC, EPEC, EIEC,EHEC (E.coli O 157), EAEC… SHIGELLA • 1888, vi khuẩn gây tiêu chảy hội chứng lỵ Không tiết độc tố SALMONELLA + Có tới 2.500 typ huyết Salmonella khác nhau/DNA Homology study Salmonella enterica (Salmonella typhi, Salmonella choleraesuis, S.typhimurium,S.enteritidis…) + Gây bệnh cho ngƣời động vật hai Four serotypes of salmonellae that cause enteric fever ( identified in the clinical laboratory by bio-chemical and serologic tests Salmonella Paratyphi A (serogroup A) Salmonella Paratyphi B (serogroup B), Salmonella Choleraesuis (sero-group C1), S Typhi (serogroup D) PHẢN ỨNG OXIDASE http://chsweb.lr.k12.nj.us/psidelsky/class%20eleven%20summer.htm http://www.coleparmer.com/Product/Test_for_cytochrome_oxidase _activity/EW-36151-16 MÔI TRƯỜNG SIM • Mục đích: thử nghiệm tìm H2S, Indole,Motility • TP: Beef extract, peptone, peptonized iron, sodium thiosulfate, agar SỰ SINH H2S ( SIM) • Nguyên tắc: vk sinh H2S làm môi trường SIM có màu đen • Chất thị màu: Sodium thiosulfate KHẢ NĂNG DI ĐỘNG (SIM) • VK có khả di động làm đục mt cấy • VK khả di động thấy vk mọc theo đường kim cấy, môi trường xung quanh SỰ SINH INDOLE ( SIM) • Nguyên tắc: vk tiết men Tryptophanase có khả sx Indole từ Tryptophane Indole kết hợp với p-dimethylaminobenzaldehyde (thuốc thử Kovac) tạo thành hợp chất muối dimethylammonium có màu đỏ • KQ: (+) có màu đỏ (-) có màu vàng SỰ SINH INDOLE ( SIM) KẾT QUẢ TRÊN MÔI TRƯỜNG SIM SỰ LÊN MEN ĐƯỜNG • Nguyên tắc: VK lên men đường sinh acid, biến mt từ màu đỏ sang vàng • Chất thị màu: đỏ phenol • KQ: (+) màu vàng (-) màu đỏ PHENYLALANINE DEAMINASE TEST • Nguyên tắc: vk có khả sx men phenylalanine deaminase (PAD) để biến đổi phenylalanine thành phenyl-pyruvic acid, có thuốc thử FeCl310% (5 giọt) tạo thành phức hợp màu xanh • KQ: (+) màu xanh (-) màu vàng Proteus, Morganella, Providencia PHENYLALANINE DEAMINASE TEST UREASE TEST • Nguyên tắc: vk tiết men urease, phân giải urea thành ammoniac, làm kiềm hóa mt • Chất thị màu: đỏ phenol • KQ: (+) màu hồng đậm (-) màu hồng nhạt LYSINE DECACBOXYLASE TEST • Nguyên tắc: vk lên men glucose tạo mt màu vàng Nếu vk tiết men lysine decarboxylase khử -COOH lysine tạo cadaverine, mt trở lại màu tím Chất thị màu: bromocrésol purple • KQ: (+) màu tím (-) màu vàng CITRATE TEST • Nguyên tắc: vk sử dụng citrate nguồn cacbon nhất, biến sodium citrate thành chất làm kiềm hóa mt • Chất thị màu: bromothymol blue • KQ: (+) màu xanh dương (-) màu xanh TÍNH CHẤT SINH HÓA CỦA MỘT SỐ VKĐR THƯỜNG GẶP TSI GAS H2S MOT IND Sucro Man se nitol Ducit ol CIT LYS URE PAD E.coli A/A + - + + + + + - + - - Klebsiella A/A ++ - - - + + +/- + + + - Proteus Alk/A + + + + + - - + - ++ + Shigella Alk/A - - - - + + +/- - - - - 51 ... ĐƢỜNG RUỘT II CÁC LOẠI MÔI TRƢỜNG III QUY TRÌNH PHÂN LẬP VK ĐƢỜNG RUỘT IV CÁC LẤY VÀ CHUYÊN CHỞ BỆNH PHẨM V CÁCH PHÂN LẬP VI KHUẨN VI CÁC PHẢN ỨNG SINH HÓA GIÚP ĐỊNH DANH VK HỌ VI KHUẨN ĐƯỜNG RUỘT... khúm tựa sóng gợn MC SS Shigella TRÊN MÔI TRƯỜNG MC/SS  Khúm nhỏ, trong, không màu KHÚM VI KHUẨN Mấy loại vi khuẩn? 27 Phân biệt? E.coli Klebsiella Proteus Shigella 28 Lactose ? MC/SS 29 NHUỘM GRAM... • Là VK thƣờng trú, bình thƣờng có ruột (ruột già - vùng hồi manh tràng)… • Là tác nhân gây bệnh khỏi nơi thƣờng trú, gây nhiễm trùng tiểu, nhiễm trùng máu, vi m màng não sơ sinh… • Có số chủng