Ảnh hưởng của nồng độ các chất điều hòa sinh trưởng lên quá trình nhân chồi lan hoàng thảo trầm (dendrobium parishii) bằng phương pháp cấy mô

TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP – TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC SINH VIÊN ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG LÊN QUÁ TRÌNH NHÂN CHỒI LAN HOÀNG THẢO TRẦM (Dendrobium parishii) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ AN GIANG, THÁNG 12 - NĂM 2016 TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP – TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN ĐỀ TÀI NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP KHOA ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG LÊN QUÁ TRÌNH NHÂN CHỒI LAN HOÀNG THẢO TRẦM (Dendrobium parishii) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ AN GIANG, THÁNG 04 – NĂM 2017 TRƯỜNG ĐẠI HỌC AN GIANG KHOA NÔNG NGHIỆP – TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG LÊN QUÁ TRÌNH NHÂN CHỒI LAN HOÀNG THẢO TRẦM (Dendrobium parishii) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TRƯƠNG NHẬT MINH MÃ SỐ SV: DBT132785 CÁN BỘ HƯỚNG DẪN NGUYỄN THỊ THÚY DIỄM AN GIANG, THÁNG 04 - NĂM 2017 Đề tài nghiên cứu khoa học “Ảnh hưởng nồng độ chất điều hòa sinh trưởng lên trình nhân chồi lan Hoàng thảo trầm (Dendrobium parishii) phương pháp nuôi cấy mô” sinh viên Trương Nhật Minh thực hướng dẫn Th.s Nguyễn Thị Thúy Diễm Tác giả báo cáo kết nghiên cứu Hội đồng Khoa học Đào tạo thông qua ngày…………… Thư ký ……………………………… Phản biện Phản biện ……………………………….… …………………………… Cán hướng dẫn ……………………………… Chủ tịch Hội đồng ……………………………… LỜI CẢM TẠ Trong suốt trình thực đề tài “Ảnh hƣởng nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng lên trình nhân chồi lan Hoàng thảo trầm (Dendrobium parishii) phƣơng pháp nuôi cấy mô”, nhận đƣợc ủng hộ, giúp đỡ to lớn Thầy Cô, gia đình bạn bè! Trƣớc tiên xin bày tỏ lòng tri ân sâu sắc đến ba mẹ, ngƣời thân gia đình đóng góp phần không nhỏ việc hoàn thành đề tài Xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến Cô Nguyễn Thị Thúy Diễm, Cô Huỳnh Trƣờng Huê Cô Võ Thị Xuân Tuyền quan tâm, giúp đỡ hƣớng dẫn tận tình Cám ơn cô cô tận tình dạy giúp đỡ suốt trình thực đề tài Xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến Chị Nguyễn Thị Xuân Đào - cán phòng quản lý thiết bị tạo điều kiện thuận lợi cho hoàn thành đề tài Cuối xin cảm ơn bạn Nguyễn Linh Tuấn DH13TT, anh Nguyễn Kim Trọng bạn tập thể lớp DH14BT hỗ trợ hoàn thành đề tài Xin trân trọng cảm ơn! An Giang, ngày 08 tháng 05 năm 2017 Ngƣời thực Trƣơng Nhật Minh i TÓM TẮT Đề tài “Ảnh hƣởng nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng lên trình nhân chồi lan Hoàng thảo trầm (Dendrobium parishii) phƣơng pháp nuôi cấy mô” đƣợc thực nhằm mục đích xác định ảnh hƣởng nồng độ chất điều hòa tăng trƣởng lên trình nhân protocorm nhân nhanh chồi lan Hoàng thảo trầm in vitro Đề tài đƣợc thực với thí nghiệm bao gồm: (1) Ảnh hƣởng BA TDZ lên trình nhân protocorm lan Hoàng thảo trầm; (2) Ảnh hƣởng tổ hợp BA với NAA TDZ với NAA lên trình nhân nhanh chồi lan Hoàng thảo trầm in vitro Thí nghiệm đƣợc bố trí theo thể thức hoàn toàn ngẫu nhiên Kết cho thấy: - Môi trƣờng cho hiệu nhân nhanh protocorm lan Hoàng thảo trầm tối ƣu là: môi trƣờng MS bổ sung 1,5 mg/L TDZ (A8) cho số protocorm hình thành sau tuần nuôi cấy thu đƣợc 30 protocorm với trọng lƣợng trung bình đạt 0,75 g - Môi trƣờng MS bổ sung 1,5 mg/L BA + 0,2 mg/L NAA (A3) thích hợp trình nhân nhanh chồi lan Hoàng thảo trầm đạt 4,6 chồi với tiêu chiều cao, chồi số số rễ lần lƣợt đạt 25 mm, 13,6 8,0 rễ sau tuần cấy Đây nguồn vật liệu có ý nghĩa cho trình tạo hoàn chỉnh thí nghiệm qui trình vi nhân giống in vitro ii ABSTRACT The study was carried out to establish a micropropagation process of Dendrobium parishii for production Experiments comprised: (1) effects of BA and TDZ on protocorm multiplication; (2) The effect of BA, NAA and TDZ on shoot proliferation in vitro The test is arranged in a completely randomized form Results of experiments showed that medium for protocorms multiplication obtained the best result on medium supplemented MS with 1,5 mg/ L TDZ (30 protocorms/explants and 0,75 g/ explants at week after cultured) The optimal medium for in vitro shoots was MS medium containing 1,5 mg/ L BA and 0,2 mg/ L NAA, on with 4,6 shoots/ explants, 13,6 leafs/ explants, roots/ explants within weeks of culture Keywords: Dendrobium parishii, shoot proliferation, in vitro, plant growth regulators Title: Effect of concentrations of plant growth regulators on shoot proliferation Dendrobium parishii in vitro iii LỜI CAM KẾT Tôi xin cam đoan công trình nghiên cứu riêng Các số liệu công trình nghiên cứu có xuất xứ rõ ràng Những kết luận khoa học công trình nghiên cứu chƣa đƣợc công bố công trình khác An Giang, ngày 08 tháng 05 năm 2017 Ngƣời thực Trƣơng Nhật Minh iv MỤC LỤC Trang LỜI CẢM TẠ i TÓM TẮT ii ABSTRACT iii LỜI CAM KẾT iv MỤC LỤC v DANH SÁCH BẢNG viii DANH SÁCH HÌNH ix DANH MỤC TỪ VIẾT TẮT x CHƢƠNG 1: GIỚI THIỆU 1.1 TÍNH CẦN THIẾT CỦA ĐỀ TÀI 1.2 MỤC TIÊU NGHIÊN CỨU 1.3 ĐỐI TƢỢNG NGHIÊN CỨU 1.4 NỘI DUNG NGHIÊN CỨU 1.5 NHỮNG ĐÓNG GÓP CỦA ĐỀ TÀI 1.5.1 Đóng góp mặt khoa học 1.5.2 Đóng góp công tác đào tạo 1.5.3 Đóng góp phát triển kinh tế xã hội 1.5.4 Đóng góp bảo vệ môi trƣờng CHƢƠNG 2: TỔNG QUAN VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.1 GIỚI THIỆU VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.2 LƢỢC KHẢO VẤN ĐỀ NGHIÊN CỨU 2.2.1 Giới thiệu lan Hoàng thảo trầm (Dendrobium parishii) 2.2.2 Giá trị chi lan Hoàng thảo 2.3.1 Khái niệm phƣơng pháp nuôi cấy mô tế bào thực vật 2.3.2 Ƣu khuyết điểm nhân giống in vitro v 2.3.3 Một số yếu tố ảnh hƣởng đến trình nuôi cấy tế bào thực vật 2.3.4 Ứng dụng chất điều hòa sinh trƣởng nuôi cấy mô 11 2.3.5 Tình hình nghiên cứu nuôi cấy in vitro số thuộc họ lan Hoàng Thảo (Dendrobium) 13 2.4 CÂU HỎI NGHIÊN CỨU HOẶC GIẢI THUYẾT NGHIÊN CỨU 15 CHƢƠNG 3: PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 16 3.1 MẪU NGHIÊN CỨU 16 3.2 THIẾT KẾ NGHIÊN CỨU 16 3.2.2 Giai đoạn tạo vật liệu khởi đầu 16 3.2.3 Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng Cytokinin (BA, TDZ) lên trình nhân protocorm lan Hoàng thảo trầm 18 3.2.4 Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng tổ hợp Auxin (NAA) Cytokinin (BA TDZ) lên trình nhân chồi lan Hoàng thảo trầm 19 3.3 CÔNG CỤ NGHIÊN CỨU 21 3.4 PHÂN TÍCH DỮ LIỆU 21 CHƢƠNG 4: KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 4.1 HIỆU QUẢ CỦA BA VÀ TDZ LÊN QUÁ TRÌNH NHÂN PROTOCORM CÂY LAN HOÀNG THẢO TRẦM IN VITRO 22 4.1.1 Hiệu BA TDZ lên gia tăng số lƣợng hạt protocorm lan Hoàng thảo trầm 22 4.1.2 Hiệu BA TDZ lên gia tăng trọng lƣợng protocorm lan Hoàng thảo trầm 26 4.2 HIỆU QUẢ CỦA BA, TDZ VÀ NAA LÊN QUÁ TRÌNH NHÂN CHỒI CÂY LAN HOÀNG THẢO TRẦM IN VITRO 27 4.2.1 Thời gian xuất chồi 27 4.2.2 Hiệu tổ hợp BA +NAA TDZ + NAA lên trình nhân chồi chồi lan Hoàng thảo trầm 29 4.2.3 Hiệu tổ hợp BA + NAA TDZ + NAA lên gia tăng chiều cao chồi lan Hoàng thảo trầm 37 4.2.4 Hiệu tổ hợp BA + NAA TDZ + NAA lên trình gia tăng số chồi lan Hoàng thảo trầm 41 vi Dendrobium mini (Nguyễn Thị MỸ Duyên, 2009), Thạch hộc thiết bì (Nguyễn Thị Sơn & cs., 2014), chồi rễ đƣợc nuôi cấy môi trƣờng chất điều hòa sinh trƣởng Qua kết hình thành rễ chồi lan Hoàng thảo trầm cho thấy đa số chồi đƣợc nuôi môi trƣờng có bổ sung chất điều hòa sinh trƣởng NAA + TDZ NAA + BA xuất rễ Về đặc điểm rễ đƣợc tạo thành môi trƣờng nuôi cấy đƣợc ghi nhận Hình 13 Hình 14, cho thấy môi trƣờng bổ sung BA kết hợp NAA cho kết tốt với rễ to, khỏe dài so với rễ hình thành môi trƣờng TDZ kết hợp với NAA Ở nghiệm thức MS có bổ sung TDZ kết hợp NAA tăng nồng độ TDZ từ - 2,5 mg/L số rễ/mẫu cấy hình thành giảm mạnh, rễ bị ức chế chết so với nghiệm thức bổ sung BA nồng độ tăng từ 0,5 - 2,0 mg/L giúp tăng khả phát sinh chồi kết ghi nhận tăng từ 3,0 đến 8,0 rễ/mẫu cấy sau tuần theo dõi Kết nghiên cứu phù hợp với nhận định Suci Rahayu Widiati Hadi Adil (2012) sử dụng môi trƣờng có bổ sung TDZ không ảnh hƣởng số lƣợng, tăng trƣởng rễ mà có vai trò ức chế hình thành rễ Theo Lu (1993) việc bổ sung TDZ với nồng độ cao gây số bất lợi nhƣ tiếp xúc mẫu cấy với TDZ môi trƣờng nuôi cấy thời gian dài gây nên tƣợng thủy tinh thể, phát triển bất thƣờng chồi khó hình thành rễ sau Mok et al (1982) cho diện TDZ môi trƣờng nuôi cấy không cảm ứng mẫu cấy tạo rễ bất định nhƣ BA Nguyễn Quang Thạch & Phí Thị Cẩm Miện (2012) có hình thành rễ môi trƣờng có bổ sung cytokinin nhƣng số rễ hình thành thấp.Theo Ket et al., (2004) bổ sung 2,0 mg/l TDZ có hình thành rễ nồng độ TDZ môi trƣờng cao Tóm lại, qua kết khảo sát ảnh hƣởng BA, TDZ, NAA lên trình tạo rễ lan Hoàng thảo trầm tuần nuôi cấy nhận thấy môi trƣờng có bổ sung tổ hợp BA với NAA đạt hiệu tạo chồi cao có ý nghĩa so với nghiệm thức bổ sung tổ hợp TDZ kết hợp NAA nhân giống in vitro Để tạo rễ hiệu cần sử dụng môi trƣờng MS bổ sung 1,5 mg/L BA kết hợp 0,2 mg/L NAA hiệu 51 CHƢƠNG KẾT LUẬN VÀ KHUYẾN NGHỊ 5.1 KẾT LUẬN Trên sở kết thu đƣợc, đề tài rút kết luận sau đây: - Môi trƣờng cho hiệu nhân nhanh protocorm lan Hoàng thảo trầm tối ƣu là: môi trƣờng MS bổ sung 1,5 mg/L TDZ (A8) cho số protocorm hình thành sau tuần nuôi cấy thu đƣợc 30 protocorm với trọng lƣợng trung bình đạt 0,75 g - Môi trƣờng MS bổ sung 1,5 mg/L BA + 0,2 mg/L NAA (A3) thích hợp trình nhân nhanh chồi lan Hoàng thảo trầm đạt 4,6 chồi với tiêu chiều cao,số chồi, số số rễ lần lƣợt đạt 25 mm, 13,6 8,0 rễ sau tuần cấy Đây nguồn vật liệu có ý nghĩa cho trình tạo hoàn chỉnh thí bƣớc qui trình vi nhân giống in vitro 5.2 KHUYẾN NGHỊ Với kết đề tài đƣa số đề nghị nhƣ sau: - Khảo sát ảnh hƣởng BA kết hợp với cytokinin khác lên sinh trƣởng phát triển giống lan Hoàng thảo trầm nuôi cấy mô - Khảo sát ảnh hƣởng cytokinin kết hợp với auxin lên sinh trƣởng phát triển giống lan Hoàng thảo trầm nuôi cấy mô - Nghiên cứu ảnh hƣởng nồng bnđộ nƣớc dừa dịch trích hữu khác lên nhân chồi lan Hoàng thảo trầm nuôi cấy mô - Hoàn thiện qui trình vi nhân giống lan Hoàng thảo trầm, nghiên cứu qui trình vi nhân giống mô lan Hoàng thảo trầm vƣờn ƣơm đạt hiệu tối ƣu 52 TÀI LIỆU THAM KHẢO [Photographs of Thomas Ditlevsen] (2006) Truy cập từ: https://www.google.com.vn/search?tbm=isch&q=dendrobium+parishii#imgrc=X TUajNl998VoAM Budi Winarto & Fitri Rachmawati (2013) In vitro propagation protocol od Dendrobium gradita via protocorm like bodies Winarto Vol 18, No (2013) Bùi Bá Bổng (1995) Nhân giống nuôi cấy mô An Giang Khoa học Công nghệ Môi trƣờng An Giang Bùi Thị Tƣờng Thu & Trần Văn Minh (2011) Nhân nhanh hoa hoàng lan phƣơng pháp nuôi cấy mô Tạp chí Sinh học 33(4): 72-78 Bùi Xuân Đáng (2013) Phân loại giống lan Dendrobium Truy cập từ: http://www.hoalanvietnam.org/ Đào Thanh Vân & Đặng Thị Tố Nga (2008) Giáo trình hoa lan Hà Nội: Nhà xuất Nông nghiệp Debergh (1983) Assessing perceptions of the environment in elementary classrooms: the link with achievement Physiologia Plantarum, 59 (2), 270 276 Truy cập từ: http://onlinelibrary.wiley.com/enhanced/doi/10.111/j.13993054.1983.tb00770 Dƣơng Đức Huyến (2007) Thực vật chí Việt nam - Flora of Vietnam (tập 9) Hà Nội: Nhà xuất KH&KT Dƣơng Tấn Nhựt, Hồng Ngọc Trâm, Nguyễn Phúc Huy & Đinh Văn Khiêm (2009) Ảnh hƣởng nƣớc dừa sucrose lên tăng sinh mô sẹo hình thành phôi vô tính loài lan Hồ điệp (Phalaenopsis amabilis) Tạp chí Sinh học, 31(1), p 77-84 Dƣơng Tấn Nhựt (2011) Công nghệ sinh học thực vật: Nghiên cứu ứng dụng.Hà Nội: Nhà xuất Nông nghiệp Ed Herman (2000) In vitro propagation of three epiphytic orchids, Cymbidium aloifolium (L.) Sw., Dendrobium aphyllum (Roxb.) Fisch and Dendrobium moschatum (Buch-Ham) Sw through thidiazuron-induced high frequency shoot proliferation Scientia Horticulturae Volume 71 Pages 243-250 Grodzinxki, A.M.,Grodzinxki & D M (1981) Sách tra cứu tóm tắt Sinh lý thực vật Hà Nội: Nhà xuất Mir Nhà xuất Khoa học kỹ thuật Gunter E A & Ovodo Y S (2003) Production of polysaccharides by Silene vugaris callus culture depending on carbohydrate of the medium Nauka Interperiodica 68(6), pp 882-889 Hajong, S Kumaria1 & P Tandon1 (2013) Effect of Plant Growth Regulators on Regeneration Potential of Axenic Nodal Segments of Dendrobium chrysanthum Wall ex Lindl ourna of gricu ture ura eve opment Tập 6, số 1, trang 1425 – 1435 Hegarty C.P (1955) Observation on the germination of the orchid seed, Arm Orchid Soc Bull, 24, p 457-464 53 Hoàng Ngọc Thuận (2007) Tài liệu giáo khoa kỹ thuật nghề àm vườn Hà Nội: Nhà xuất Giáo dục Hà Nội Hội Hoa Lan Việt Nam (2013) Phân Loại Các Giống Lan Dendrobium Truy cập từ: http://www.hoalanvietnam.org Huetteman C.A & Prece J.E (1993) Thidiazuron a potent cytokinin for woody plant tissue culture Plant Cell Tiss Org Cult., 33: 05-119 Jian-Ping Luo, Ying Wang, Xue-Qiang Zha & Li Huang (2008) Micropropagation of Dendrobium densiflorum Lindl ex Wall through protocorm-like bodies: effects of plant growth regulators and lanthanoids ant e , Tissue and rgan u ture Tập 93, số 3, trang 333-340 Ket N.V., Hahn E.J., Park S.Y., Chakrabarty D & PaekK.Y (2004) Micropropagation of an endangered orchid Anoectochilu formosanus Biol Plant., 48(3): 339-344 Kukulczanka & -K (1985) Effect of Biostimin on growth of meristemic tissue and protocorm formation of some orchids on invitro culture American-OrchidSociety-Bulletin, 55: No 167, p 273-287 Lan dendro (2007) Thời gian năm mùa nghỉ lan Dendro Truy cập từ: http://hoalancaycanh.net/lan-dendrobium.html Lan-Zhen Meng (2013) Effects of Polysaccharides from Different Species of Dendrobium (Shihu) on Macrophage Function Molecules.Tập Trang 5779 5791 Lê Hồng Thủy Tiên (2006) Khảo sát hoa ống nghiệm dừa cạn (Catharanthus roseus) dã yên thảo (Petunia hybrida) Luận văn tốt nghiệp trƣờng Đại Học Nông Lâm - Thành Phố Hồ Chí Minh Lê Ngọc Mai (2007) Thời kì nghỉ lan Truy cập từ: http://nonghoc.com/showarticle/13545/thoi-ky-nghi-ngoi-cua-lan.aspx?AspxAutoDetectCookieSupport Lê Văn Bé, Lê Bảo Long & Hồ Thị Huỳnh Nhƣ (2003) Cải tiến quy trình sản xuất khóm cấy mô với giá thành thấp Tạp chí Khoa học Trường Đại Học ần Thơ, 253-262 Lê Văn Hoàng (2008) Giáo trình công nghệ nuôi cấy mô tế bào thực vật.Hà Nội: Nhà xuất Khoa Học Kỹ Thuật Letham D.S (1974) Regulation of cell division in plant tissue XX The cytokinin of coconut-milk Physiol Plant, 27: 66-70 Lu C.Y (1993) The Biol.,29: 92-96 use of thidiazuron in tissue culture In VitroCell Dev Mamaril, -J.c, Lopez & -A.M (1990) Comparative effect of coconut water growth hormonne extracts on the growth of reflasked Vanda, Phalanopsis (gradiflora) and Dendrobium protocorms Philippines- Joumal-of-Crop-Science (Philippines), p 23 54 Mok M C., Mok D W S & Amstrong D J (1982) Cytokinin activity of N-phenylN -1,2,3-thidiazon-5-ylurea (TDZ) Phytochem., 21: 1509-1511 Mùa nghỉ hoa lan (2015) Truy cập từ: http://www.tronghoalan.com/2015/11/muanghi-cua-hoa-lan.htm Nasiruddin K.M., Begun R., & Yasmin s (2003) Protocorm like Bodies and Plantlet Regeneration from Dendrobium formosum Leaf Callus Asian Journal of Plant Sciences (13): 955 - 957 Ngô Quang Vũ (2002) Những số hấp dẫn thị trƣờng lan cắt cành giới Hoa cảnh tháng 10 Ngô Thị Nguyệt, Tô Phƣơng Thảo, Đặng Thị Chinh,Hoàng Thị Thế, Đinh Thu Huế, Nguyễn Thị Thu Trang, Trần Thùy Dung & Trần Thị Hà (2013) Thu thập ưu trữ nguồn gen ứng dụng c ng nghệ sinh học bảo tồn phát triển só oại an quý uảng inh Đề tài nghiên cứu cấp tỉnh Sở Nông Nghiệp Và Phát Triển Nông Thôn Quảng Ninh Nguyễn Công Nghiệp (1989) Trồng hoa lan Hồ Chí Minh: Nhà xuất trẻ Thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Đức Lƣợng & Lê Thị Thủy Tiên (2002) Công nghệ tế bào Hồ chí Minh: Nhà xuất Đại học Quốc Gia Thành Phố Hồ Chí Minh Nguyễn Đức Lƣợng (2006) Công nghệ tế bào Hồ chí Minh: Nhà xuất Đại học quốc gia TP Hồ Chí Minh Nguyễn Đức Thành (2000) Nuôi cấy mô tế bào thực vật nghiên cứu ứng dụng Hà Nội: Nhà xuất Nông nghiệp Nguyễn Duy (2013) Truy cập từ: http://www.hoalanvietnam.org/7C3_kn/3ns/PhanLoai-Cac-Giong-Dendrobium.pdf Nguyễn Hà Phi Long, Nguyễn Thị Hà & Tô Thị Nhã Trầm (2016) Tạo phôi trực tiếp từ chồi tái sinh chồi từ phôi giống lan dendrobium nestor phương pháp nuôi cấy mô Luận văn tốt nghiệp trƣờng Đại Học Nông Lâm - Thành Phố Hồ Chí Minh Nguyễn Quang Thạch & Phí Thị Cẩm Miện (2012) Nghiên cứu kỹ thuật nhân giống loài lan kim tuyến (Anoectochilus setaceus Blume) in vitro bảo tồn nguồn dƣợc liệu quý Tạp chí Khoa học hát triển, 10(4): 597-603 Nguyễn Thanh Tùng, Lê Văn Điệp, Nguyễn Minh Trung & Trƣơng Thị Bích Phƣợng (2010) Áp dụng phƣơng pháp nuôi cấy mô lát mỏng tế bào nhân giống in vitro lan Hoàng thảo thân gãy (Dendrobium aducum) Tạp chí Công nghệ Sinh học 8(3): 361-367 Nguyễn Thị Hoàng Uyên (2005) Nghiên cứu gieo hạt Dendrobium superbum in vitro Luận văn tốt nghiệp trƣờng Đại Học Nông Lâm - Thành Phố Hồ Chí Minh Nguyễn Thị Quỳnh, Hoàng Ngọc Nhung, Nguyễn Vũ Ngọc Anh, Nguyễn Lê Anh Thƣ & Toyoki Kozai (2012) Sự hình thành tăng trưởng rễ bất định từ nuôi cấy in vitro đương qui nhật (Angelica acutiloba kitagawa) Luận văn thạc 55 sĩ Trường Đại học Khoa Học Tự Nhiên thành phố Hồ Chí Minh Nguyện Thị Sơn, Từ Bích Thủy, Đặng Thị Nhàn, Nguyễn Thị Lý Anh, Hoàng Thị Nga & Nguyễn Quang Thạch (2014) Nhân guống in vitro Dendrobium officinalekimura et migo Tạp chí Khoa học Phát triển Nông thôn Số trang 1274-1282 Nguyễn Thị Tình, Bùi Đình Lãm, Nguyễn Văn Bảo, Phạm Thị Thủy & Ngô Xuân Bình (2015) Nghiên cứu nhân giống lan Thạch hộc (Dendrobium nobile lindt) ống nghiệm từ phôi Tạp chí Khoa học hát triển ng th n Số 11 trang 4452 Nguyễn Văn Chƣơng & Trịnh Văn Thịnh (1991) Từ điển bách khoa Nông Nghiệp Hà Nội: Trung tâm Quốc gia biên soạn Nguyễn Văn Kết, Nguyễn Thị Cúc & Nguyễn Trung Thành (2014) Khảo sát khả nhân giống Trà my hoa đỏ (Camellia piquetiana (Pierre) Sealy) in vitro Tạp chí Khoa học ĐH GH : Khoa học Tự nhiên Công nghệ, Tập 30, Số trang 17-25 Nguyễn Văn Minh & Nguyễn Hữu Lễ (2009) Ảnh hƣởng chất điều hòa sinh trƣởng thực vật lên phát sinh chồi rễ phong lan giả hạc (Denrobium anosmum) Tạp chí hoa học c ng nghệ Tập 47, số 5, trang 99 - 107 Nguyễn Văn Uyển (1984) Nuôi cấy mô thực vật thực công tác giống trồng Hồ Chí Minh: Nhà xuất thành phố Hồ Chí Minh Nguyễn Xuân Dũng, Dƣơng Hoa Xô & Chu Hoàng Hà (2014) Tối ƣu hóa chuyển nạp gen lan Dendrobium sonia qua trung gian vi khuẩn Agrobacterium tumefaciens Tạp chí sinh học 2014 Tập36, số 1, trang 257-265 Pence, V C., Hasegawap & Janick (1979) Asexual embryogenesis in Thoebroma Cacao Amer Soc Hort Science, 104, 145-148 Phạm Hoàng Hộ (1993) Cây cỏ Việt Nam (Quyển 3) Hà Nội: Nhà xuất trẻ Phạm Tiến Khoa (2015) Nhận diện oài hoa phương pháp trồng Hồ Chí Minh: Nhà xuất Thông tin Truyền thông Phan Ngọc Toàn (2011) Khảo sát m i trường tái sinh chồi tạo protocorm lan rừng Thủy tiên tím ( endrobium ambi e (Lour ) ’brien) Luận văn tốt nghiệp trƣờng Đại học Nông Lâm TP Hồ Chí Minh Phan Thúc Huân (1997) Hoa lan nuôi trồng kinh doanh Hồ Chí Minh: Nhà xuất Nông nghiệp Thành phố Hồ Chí Minh Rout, G.R (2000) In vitro manipulatrion and propagation of medicinal plants Biotechnology Advances, 18, 91-120 Sriskandarajah, S., Mullins, M.G & Nair, Y (1989) Introduction od adventitious rooting in vitro in difficult to propagate cultivars of apple Plant Sci Lett., 24, 1-9 56 Trần Hoàng Nam (2009) Khảo sát ảnh hưởng chất điều hòa sinh trưởng nước dừa đến trình nhân giống in-vitro lan Nhất Điểm Hồng (Dendrobium draconis) Khóa luận tốt nghiệp trƣờng Đại học Tôn Đức Thắng Trần Hợp (1998) Phong lan Việt Nam Hồ Chí Minh: Nhà xuất Nông Nghiệp Trần Quang Hoàng (2005) nh hưởng chất điều hòa sinh trưởng đến trình nu i cấy invitro giống an endrobium ymbidium Luận văn tốt nghiệp trƣờng Đại học Nông Lâm - Thành Phố Hồ Chí Minh Trần Thị Mơ (2014) Nghiên cứu nhân giống vô tính in vitro giống lan Dendrobium Aduncum Khóa luận Đại học Bách Khoa Trần Văn Huân & Văn Tích Lƣợm (2000) Kỹ thuật nuôi trồng cấy lan Hà Nội Nhà xuất Mỹ thuật Trần Văn Minh 1999 Giáo trình Công nghệ sinh học Thực vật Viện sinh học nhiệt đới Trần Viết Mỹ (2009) Sản xuất tiêu thụ hoa an: hững điều ghi nhận Thái Lan Truy cập từ: http://www.khuyennongtphcm.com/?mnu=4&s=600007&id=2935 Vũ Thanh Sắc, Nguyễn Thị Thu Huyền & Lê Thị Lý (2012) Nghiên cứu nhân giống In-Vitro lan Hoàng thảo trầm trắng (Dendrobium anosmum var Alba) Tạp chí Khoa học Công nghệ Thái Nguyên Vũ Văn Vụ (1999) Sinh ý thực vật ứng dụng Hà Nội: Nhà xuất Giáo dục Yih-Juh Shiau, Satish Manohar Nalawade, Chi-Ni Hsia, Vanisree Mulabagal & HsinSheng Tsay (2005) In-vitro propagation of the chinese medicinal plant, Dendrobium candidumwall Ex lindl., from axenic nodal segments In-Vitro Cellular & Developmental Biology – Plant Tập 41, Số 5, trang 666 – 670 Zhong J.J & Yoshida T (1995) High-density cultivation of Perilla frutescens cell suspensions for anthocyanin production: Effects of sucrose concentration and inoculum size Enzyme and Microbial Technology 17, pp 1073-1079 57 PHỤ LỤC BẢNG Bảng 10: Thành phần môi trƣờng MS (Murashige Skoog, 1962) Thành phần môi trƣờng Đa lƣợng MS FeEDTA Vi lƣợng MS Vitamin Hóa chất (mg/L) NH4NO3 1650 KNO3 1900 MgSO4 7H2O 370 CaCl2 440 KH2PO4 170 FeSO4 7H2O 2,78 Na2EDTA 2H2O 37,3 H3BO3 6,2 MnSO4 22,3 ZnSO4 7H2O 11,5 Na2MoO4 2H2O 0,25 CuSO4 5H2O 0,025 KI 0,83 CoCl2 0,025 Pyridoxine- HCl 0,5 Nicotinic acid 0,5 Thiamine – HCl 0,1 Glycine 2,0 Bảng 11: Sự gia tăng số protocorm lan Hoàng thảo trầm tuần sau cấy (TN1) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 1779,709 177,971 6,843** 0,0000 Sai số 44 1144,400 26,009 Tổng cộng 54 2924,109 cv = 19,37 % * = khác biệt mức ý nghĩa 10% 58 Bảng 12: Sự gia tăng trọng lƣợng protocorm lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN1) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 0,561 0,056 2,251* 0,0318 Sai số 44 1,096 0,025 Tổng cộng 54 1,657 cv = 24,94 % * = khác biệt mức ý nghĩa 5% Bảng 13: Sự gia tăng số chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 14,145 1,415 3,795** 0,0010 Sai số 44 16,400 0,373 Tổng cộng 54 30,545 cv = 67,16 % * = khác biệt mức ý nghĩa 10% Bảng 14: Sự gia tăng số chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 32,44 32,4000 5,020** 0,0001 Sai số 44 28,400 28,400 Tổng cộng 54 60,800 cv = 44,63% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% 59 Bảng 15: Sự gia tăng số chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 55,309 5,531 5,028** 0,0001 Sai số 44 48,400 1,100 Tổng cộng 54 103,709 cv = 42,42% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% Bảng 16: Sự gia tăng số chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 70,436 7,044 5,307** 0,0000 Sai số 44 58,400 1,327 Tổng cộng 54 128,836 cv = 39,11% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% Bảng 17: Sự gia tăng chiều cao chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 74,836 7,484 2,138* 0,0412 Sai số 44 154,000 3,500 Tổng cộng 54 228,836 cv = 65,54% * = khác biệt mức ý nghĩa 5% 60 Bảng 18: Sự gia tăng chiều cao chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 192,109 19,211 2,078* 0,0473 Sai số 44 406,800 9,245 Tổng cộng 54 598,909 cv = 41,81% * = khác biệt mức ý nghĩa 5% Bảng 19: Sự gia tăng chiều cao chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 563,382 56,338 3,253** 0,0032 Sai số 44 762,000 17,318 Tổng cộng 54 1325,382 cv = 36,45% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% Bảng 20: Sự gia tăng chiều cao chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 664,000 66,400 2,972** 0,0061 Sai số 44 983,200 22,345 Tổng cộng 54 1647,200 cv = 34,67% * = khác biệt mức ý nghĩa 10=% 61 Bảng 21: Sự gia tăng số chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 26,727 2,673 5,158** 0,0001 Sai số 44 22,800 0,518 Tổng cộng 54 49,527 cv = 50,12% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% Bảng 22: Sự gia tăng số chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 89,527 8,953 2,871** 0,0076 Sai số 44 137,200 3,118 Tổng cộng 54 226,727 cv = 48,56% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% Bảng 23: Sự gia tăng số chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 244,945 24,495 3,517** 0,0018 Sai số 44 306,400 6,964 Tổng cộng 54 551,345 cv = 41,95% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% 62 Bảng 24: Sự gia tăng số chối lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 415,382 41,538 5,021** 0,0001 Sai số 44 364,000 8,273 Tổng cộng 54 779,382 cv = 32,75% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% Bảng 25: Sự gia tăng số rễ chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 81,309 8,131 5,923** 0,0000 Sai số 44 60,400 1,373 Tổng cộng 54 141,709 cv = 46,36% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% Bảng 26: Sự gia tăng số rễ chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 174,909 17,491 9,075** 0,0000 Sai số 44 84,800 1,927 Tổng cộng 54 259,709 cv = 45,18% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% 63 Bảng 27: Sự gia tăng số rễ chồi lan Hoàng thảo trầm thời điểm tuần sau cấy (TN2) Nguồn biến động Độ tự Tổng bình phƣơng Trung bình bình phƣơng F(tính) Prob Nghiệm thức 10 226,800 22,680 11,039** 0,0000 Sai số 44 90,400 2,055 Tổng cộng 54 317,200 cv = 42,16% * = khác biệt mức ý nghĩa 10% 64 PHỤ LỤC HÌNH (a) (b) (c) (d) Hình 15: Qui trình nhân vi giống lan Hoàng thảo trầm (a: vật liệu ban đầu; b: nhan chồi lan; c: tạo hoàn chỉnh; d: trồng con) Hình 16: Chuẩn bị bố trí thí nghiệm 65 ... NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CẤP KHOA ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG LÊN QUÁ TRÌNH NHÂN CHỒI LAN HOÀNG THẢO TRẦM (Dendrobium parishii) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ AN GIANG, THÁNG 04 –... TÀI NGUYÊN THIÊN NHIÊN ẢNH HƯỞNG CỦA NỒNG ĐỘ CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG LÊN QUÁ TRÌNH NHÂN CHỒI LAN HOÀNG THẢO TRẦM (Dendrobium parishii) BẰNG PHƯƠNG PHÁP NUÔI CẤY MÔ TRƯƠNG NHẬT MINH MÃ SỐ... tài Ảnh hƣởng nồng độ chất điều hòa sinh trƣởng lên trình nhân chồi lan Hoàng thảo trầm (Dendrobium parishii) phƣơng pháp nuôi cấy mô đƣợc thực nhằm mục đích xác định ảnh hƣởng nồng độ chất điều