Luận văn : ẢNH HƯỞNG CỦA CÁC CHẤT ĐIỀU HÒA SINH TRƯỞNG ĐẾN QUÁ TRÌNH NUÔI CẤY IN VITRO CỦA HAI GIỐNG LAN DENDROBIUM VÀ CYMBIDIUM part 6 docx

Các mẫu cấy đều tạo protocorm và hình thành chồi, riêng phôi soma thì ở những môi trường có bổ sung nồng độ BA cao hoặc BA kết hợp NAA mới có sự phát sinh phôi soma... Nhận xét: Qua thốn

4.2 Lan Dendrobium

Để kiểm tra ảnh hưởng của các chất điều hòa sinh trưởng đến quá trình nuôi

cấy in vitro, cho nên ngoài việc thực hiện trên giống lan Cymbidium ta còn thực hiện trên giống lan Dendrobium

4.2.1 Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của BA và NAA lên quá trình nuôi cấy in vitro của cây lan Dendrobium

Sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, kết quả thí nghiệm cho thấy các nghiệm thức đều

cho kết quả tốt

Các mẫu cấy đều tạo protocorm và hình thành chồi, riêng phôi soma thì ở những môi trường có bổ sung nồng độ BA cao hoặc BA kết hợp NAA mới có sự phát sinh phôi soma

Bảng 4.5 Ảnh hưởng của BA và NAA đến khả năng hình thành phôi

soma, protocorm và chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro

Nghiệm thức Số phôi soma Số protocorm Số chồi Chiều cao

/ mẫu cấy / mẫu cấy / mẫu cấy chồi (cm)

½ MS+5 mg/l BA 7.22 C 5.78 DE 1.89 AB 0.76 ABC

½ MS+7 mg/l BA 7.67 CD 6.22 EF 2.11 AB 0.69 ABC

½ MS+10mg/l BA 8.67 DE 7.11 FG 3.33 CD 0.49 A

½ MS+1mg/l BA+0.5 mg/l NAA 0 A 3.33 BC 6.11 E 0.99 CD

½ MS+3mg/l BA+0.5 mg/l NAA 5.33 B 4.56 CD 1.67 A 0.77 ABC

½ MS+5 mg/l BA+0.5 mg/l NAA 7.33 C 6.22 EF 2.33 ABC 0.70 ABC

½ MS+7 mg/l BA+0.5 mg/l NAA 7.78 CD 7.22 FG 2.89 BCD 0.78 ABC

½ MS+10 mg/l BA+0.5 mg/l NAA 9.11 F

8.22 G 3.44 D 0.63 AB

*Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự

khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05

Nhận xét:

Qua thống kê trắc nghiệm phân hạng các nghiệm thức của thí nghiệm trên cho

thấy sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, có những biểu hiện như sau:

*Số lượng phôi soma:

Dựa vào bảng 4.5 cho thấy có ảnh hưởng khác nhau giữa các yếu tố môi trường

nuôi cấy lên sự phát sinh phôi soma của giống lan Dendrobium ở giai đoạn sau 60

ngày nuôi cấy

Ở môi trường ½ MS, ½ MS + 1mg/l BA, ½ MS + 3mg/l BA và ½ MS + 1mg/l

BA + 0.5mg/l NAA cho thấy không có sự phát sinh phôi soma, chứng tỏ lan

Dendrobium đòi hỏi nồng độ BA cao mới có khả năng phát sinh phôi soma Quan sát

ở những môi trường có bổ sung nồng độ BA cao (BA = 5mg/l; 7mg/l; 10mg/l ) thì khả năng phát sinh phôi soma rất cao, chứng tỏ khả năng phát sinh phôi của lan

Dendrobium rất nhậy cảm với môi trường nuôi cấy có bổ sung nồng độ BA cao và khả

năng phát sinh phôi soma càng cao khi ta bổ sung kết hợp giữa BA và NAA vào môi trường nuôi cấy, cho thấy kết quả như sau:

- Ở môi trường ½ MS + 7mg/l BA số phôi: 7.67

- Ở môi trường ½ MS + 7mg/l + 0.5mg/l NAA số phôi: 7.78

- Ở môi trường ½ MS + 10mg/l BA số phôi: 8.67

- Ở môi trường ½ MS + 10mg/l BA + 0.5mg/l NAA số phôi: 9.11

Như vậy BA và NAA thích hợp cho sự phát sinh phôi soma trong nuôi cấy in

vitro

*Số lượng protocorm:

Dựa vào bảng 4.5 cho thấy có sự khác biệt giữa các yếu tố môi trường lên khả năng tạo protocorm ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy

Ở môi trường đối chứng (1/2 MS) số protocrm hình thành là 1.44, khả năng hình thành protocorm tăng ở những môi trường có bổ sung BA cao, do BA có vai trò kích thích sự phân chia tế bào nên nồng độ BA cao thì khả năng phân chia tế bào càng cao Vì vậy số protocorm tạo thành nhiều Nhưng vai trò của BA được kích thích mạnh khi ta kết hợp bổ sung BA với NAA, do đó môi trường có bổ sung BA và NAA thường cho thấy khả năng tạo protocorm cao

Qua đó cho thấy BA và NAA có vai trò đến khả năng tạo protocorm ở giai đoạn sau 60 ngày nuôi cấy

*Số lượng chồi:

Dựa vào bảng 4.5 cho thấy có sự khác biệt giữa các môi trường nuôi cấy lên

khả năng hình thành chồi Ở giai đoạn này khả năng hình thành chồi của Dendrobium

cũng không cao, do mẫu cấy chủ yếu là phát sinh phôi soma và tạo protocorm

Số chồi hình thành cao ở những môi trường nuôi cấy không có sự phát sinh phôi soma và tạo nhiều protocorm như: ½ MS + 1mg/l BA số chồi là 5.11, ½ MS + 3mg/l BA số chồi là 6.11 và ở môi trường ½ MS + 1mg/l BA + 0.5mg/l NAA số chồi 6.11 Còn ở các môi trường khác của thí nghiệm thì số chồi giảm

Như vậy ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy BA và NAA không có ảnh hưởng lớn đến khả năng hình thành chồi

*Chiều cao chồi:

Chiều cao chồi luôn giảm dần ở những môi trường có bổ sung BA hoặc BA kết hợp NAA cao, do BA chỉ kích thích sự phân chia chia tế bào chứ không kích thích sự tăng trưởng

Hình 4.9: Chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi

trường có bổ sung BA

Hình 4.10: Chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trường có

bổ sung BA và NAA

Sau 90 ngày nuôi cấy số lượng chồi gia tăng rất rõ, số lượng protocorm và phôi soma đều phát triển thành chồi do đó ở giai đoạn này ta chỉ quan sát sự sinh trưởng và phát triển của chồi

Bảng 4.6: Ảnh hưởng của BA và NAA đến sự sinh trưởng và phát triển

chồi lan Dendrobium in vitro sau 90 ngày nuôi cấy

Nghiệm thức Số chồi Số lá Số rễ Chiều cao / mẫu cấy / chồi / chồi chồi(cm)

½ MS + 3mg/l BA 6.44 BC 2.12 B 0.66 CD 1.73 CD

½ MS+1mg/lBA+0.5mg/lNAA 6.56 C

2.11 B 1.23 E 2.12 E

½ MS+3mg/lBA+0.5mg/lNAA 7.22 CD

2.33 B 1.86 D 1.97 DE

½ MS+5mg/lBA+0.5mg/lNAA 8.00 DE

2.29 B 0.64 BCD 1.91 DE

½ MS+7mg/lBA+0.5mg/lNAA 9.11 EF

2.06 B 0.49 ABC 1.30 AB

½ MS+10mg/lBA+0.5mg/lNAA 10.22 F

1.64 A 0.40 AB 0.98 A

*Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự

khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05

Nhận xét:

*Số lượng chồi:

Qua bảng trắc nghiệm phân hạng cho thấy có sự khác biệt giữa các yếu tố môi trường lên quá trình hình thành chồi ở giai đoạn 90 ngày nuôi cấy

Số chồi tăng rất cao trên môi trường có bổ sung nồng độ BA cao và tăng cao hơn khi ta bổ sung kết hợp BA và NAA vào môi trường nuôi cấy:

- Ở môi trường ½ MS + 7mg/l BA số chồi: 8.00

- Ở môi trường ½ MS + 7mg/l BA + 0.5mg/l NAA số chồi: 9.11

- Ở môi trường ½ MS + 10mg/l BA số chồi: 9.33

- Ở môi trường ½ MS + 10mg/l BA + 0.5mg/l NAA số chồi: 10.22

Như vậy ở giai đoạn sau 90 ngày nuôi cấy BA và NAA có ảnh hưởng lớn đến khả năng hình thành chồi

*Số lượng lá, rễ và chiều cao chồi:

- Số lá: Đối với lan Dendrobium cũng giống Cymbidium, càng tăng nồng độ

BA thì số lượng lá không tăng cao và có thể giảm

- Số rễ: Không chỉ ở môi trường ½ MS có sự hình thành rễ mà ở các môi trường khác cũng có sự hình thành rễ dù không cao bằng môi trường đối chứng (1/2

MS) Chứng tỏ lan Dendrobium nhậy cảm với NAA trong sự hình thành rễ dù NAA ở

nồng độ thấp

- Chiều cao chồi: Bảng 4.6 cho thấy ở môi trường ½ MS chiều cao chồi cao nhất và thấp dần ở các môi trường có bổ sung BA cao

Hình 4.11: Chồi lan Cymbidium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trường

có bổ sung BA

Hình 4.12: Chồi lan Dendrobium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro trên môi

trường có bổ sung BA và NAA

4.2.2 Thí nghiệm 2: Ảnh hưởng của TDZ và NAA lên quá trình nuôi cấy

in vitro của cây lan Dendrobium

Sau 60 ngày nuôi cấy, kết quả thí nghiệm cho thấy các nghiệm thức đều cho kết quả tốt

Trong môi trường có bổ sung kích thích tố TDZ hoặc TDZ kết hợp NAA thì khả năng hình phôi soma, protocorm và chồi được kích thích mạnh

Bảng 4.7: Ảnh hưởng của TDZ và NAA đến khả năng hình thành phôi

soma, protocorm và chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro

Nghiệm thức Số phôi soma Số protocorm Số chồi Chiều cao

/ mẫu cấy / mẫu cấy / mẫu cấy chồi (cm)

½ MS+0.05mg/l TDZ 4.56 B 4.56 BC 4.56 C 1.21 BC

½ MS+0.1mg/l TDZ 6.00 C 5.56 BC 2.22 A 0.87 AB

½ MS+0.5mg/l TDZ 7.44 D 6.89 DE 2.56 A 0.67 A

½ MS+0.05mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 4.44 B

4.33 CD 3.89 BC 1.22 BC

½ MS+0.1mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 5.00 BC 5.78 E 5.00 CD 0.93 AB

½ MS+0.5mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 8.44 DE 9.33 B 6.11 D 0.72 A

½ MS+1mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 9.44 E 10.44 A 2.56 A 0.66 A

*Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự

khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05

Nhận xét:

Qua thống kê trắc nghiệm phân hạng các nghiệm thức của thí nghiệm trên cho

thấy sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, có những biểu hiện như sau:

*Số lượng phôi soma:

Dựa vào bảng 4.7 cho thấy các yếu tố môi trường nuôi cấy có ảnh hưởng khác

biệt đến khả năng phát sinh phôi soma của lan Dendrobium

Chỉ có ở môi trường đối chứng (½ MS) là không có sự phát sinh phôi soma, còn các môi trường có bổ sung TDZ thì sự phát sinh phôi soma thể hiện rõ Chứng tỏ TDZ rất thích hợp trong sự phát sinh phôi

Khi ta kết hợp bổ sung TDZ và NAA vào môi trường nuôi cấy cho thấy khả năng phát sinh phôi soma cao hơn ở môi trường chỉ có bổ sung TDZ

Như vậy TDZ và NAA có ảnh hưởng lớn đến khả năng phát sinh phôi soma

của giống lan Dendrobium ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy

*Số lượng protocorm:

Qua bảng trắc nghiệm phân hạng cho thấy chỉ ở môi trường ½ MS cho ta số protocorm thấp nhất 2.00, còn ở các môi trường có bổ sung nồng độ TDZ cao thì cho thấy số protocorm tăng cao, khi ta kết hợp TDZ và NAA thì luôn cho hiệu quả hơn:

- Ở môi trường ½ MS + 0.5mg/l TDZ số protocorm: 6.89

- Ở môi trường ½ MS + 0.5mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số protocorm: 9.33

- Ở môi trường ½ MS + 1mg/l TDZ số protocorm: 7.33

- Ở môi trường ½ MS + 1mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số protocorm: 10.44 Như vậy TDZ và NAA có ảnh hưởng lớn đến sự tạo protocorm của giống lan

Dendrobium ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy

*Số lượng chồi:

Dựa vào bảng 4.7 cho thấy ở giai đoạn này khả năng hình thành chồi không cao, ở những môi trường có nồng độ TDZ hoặc TDZ kết hợp NAA cao thì số chồi hình thành thấp, do ở các môi trường này chủ yếu tạo protocorm và phát sinh phôi soma

Như vậy ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy TDZ, TDZ và NAA có ảnh hưởng không lớn đến khả năng tạo chồi

*Chiều cao chồi:

Bảng 4.7 cho thấy khả năng phát sinh phôi và tạo protocorm càng cao thì chiều cao chồi thấp Chứng tỏ TDZ và NAA không tác động đến sự phát triển của chồi

Hình 4.13: Chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trường có

bổ sung TDZ

Hình 4.14: Chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trường có

bổ sung TDZ và NAA

Bảng 4.8: Ảnh hưởng của TDZ và NAA đến sự sinh trưởng và phát triển

chồi lan Dendrobium in vitro sau 90 ngày nuôi cấy

Nghiệm thức Số chồi Số lá Số rễ Chiều cao / mẫu cấy /chồi /chồi chồi(cm)

½ MS + 0.05mg/l TDZ 5.78 B 2.16 B 1.31 CD 2.04 DE

½ MS + 0.1mg/l TDZ 7.56 CD 1.90 B 1.11 BC 1.67 CD

½ MS + 0.5mg/l TDZ 8.89 DEF 2.06 B 0.56 A 1.27 AB

½ MS + 1mg/l TDZ 9.44 F 1.71 AB 0.42 A 1.05 A

½ MS+0.05mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 6.56 BC

2.00 B 1.36 D 1.93 CD

½ MS+0.1mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 7.89 CDE

2.08 B 1.05 B 1.64 BC

½ MS+0.5mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 9.22 EF

1.79 B 0.49 A 1.12 A

½ MS+1mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 10.22 F 1.23 A 0.48 A 1.02 A

*Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự

khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05

Nhận xét:

Qua thống kê trắc nghiệm phân hạng các nghiệm thức của thí nghiệm trên cho

thấy sau 90 ngày nuôi cấy in vitro, có những biểu hiện như sau:

*Số lượng chồi:

Dựa vào bảng 4.8 cho thấy giữa các yếu tố môi trường nuôi cấy có sự khác biệt nhau ý nghĩa về mặt thống kê

Ở giai đoạn 90 ngày nuôi cấy số lượng chồi tăng cao ở những môi trường có bổ sung nồng độ TDZ cao và càng cao khi ta bổ sung kết hợp giữa TDZ và NAA:

- Ở môi trường ½ MS + 0.5mg/l TDZ sốchồi: 8.89

- Ở môi trường ½ MS + 0.5mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số chồi: 9.22

- Ở môi trường ½ MS + 1mg/l TDZ số chồi: 9.44

- Ở môi trường ½ MS + 1mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số chồi: 10.22

Như vậy ở giai đoạn sau 90 ngày nuôi cấy TDZ và NAA có ảnh hưởng lớn đến

sự hình thành chồi

*Số lượng lá, rễ và chiều cao chồi:

- Số lá: Bảng 4.8 cho thấy số lá không tăng cao ở những môi trường có bổ sung TDZ và TDZ kết hợp NAA cao Chứng tỏ TDZ và TDZ kết hợp NAA không ảnh hưởng đến quá trình hình thành lá

- Số rễ: Bảng 4.8 cũng cho thấy số rễ giảm trong khi số chồi lại tăng cao

- Chiều cao chồi: chiều cao chồi thường tỷ lệ nghịch với sự hình thành chồi do

đó ở những môi trường có sự hình thành chồi cao thì chiều cao chồi giảm

Hình 4.15: Chồi lan Dendrobium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trường có

bổ sung TDZ