51 4.2. Lan Dendrobium Để kiểm tra ảnh hƣởng của các chất điều hòa sinh trƣởng đến quá trình nuôi cấy in vitro, cho nên ngoài việc thực hiện trên giống lan Cymbidium ta còn thực hiện trên giống lan Dendrobium. 4.2.1. Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng của BA và NAA lên quá trình nuôi cấy in vitro của cây lan Dendrobium Sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, kết quả thí nghiệm cho thấy các nghiệm thức đều cho kết quả tốt. Các mẫu cấy đều tạo protocorm và hình thành chồi, riêng phôi soma thì ở những môi trƣờng có bổ sung nồng độ BA cao hoặc BA kết hợp NAA mới có sự phát sinh phôi soma. Bảng 4.5. Ảnh hƣởng của BA và NAA đến khả năng hình thành phôi soma, protocorm và chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro Nghiệm thức Số phôi soma Số protocorm Số chồi Chiều cao / mẫu cấy / mẫu cấy / mẫu cấy chồi (cm) ½ MS 0 A 1.44 A 3.33 CD 1.11 D ½ MS+1mg/l BA 0 A 2.56 AB 5.11 E 0.94 CD ½ MS+3 mg/l BA 0 A 3.11 B 6.11 E 0.83 BCD ½ MS+5 mg/l BA 7.22 C 5.78 DE 1.89 AB 0.76 ABC ½ MS+7 mg/l BA 7.67 CD 6.22 EF 2.11 AB 0.69 ABC ½ MS+10mg/l BA 8.67 DE 7.11 FG 3.33 CD 0.49 A ½ MS+1mg/l BA+0.5 mg/l NAA 0 A 3.33 BC 6.11 E 0.99 CD ½ MS+3mg/l BA+0.5 mg/l NAA 5.33 B 4.56 CD 1.67 A 0.77 ABC ½ MS+5 mg/l BA+0.5 mg/l NAA 7.33 C 6.22 EF 2.33 ABC 0.70 ABC ½ MS+7 mg/l BA+0.5 mg/l NAA 7.78 CD 7.22 FG 2.89 BCD 0.78 ABC ½ MS+10 mg/l BA+0.5 mg/l NAA 9.11 F 8.22 G 3.44 D 0.63 AB CV% 1.32% 1.38% 1.7% 2.15% *Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05. 52 Nhận xét: Qua thống kê trắc nghiệm phân hạng các nghiệm thức của thí nghiệm trên cho thấy sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, có những biểu hiện nhƣ sau: *Số lƣợng phôi soma: Dựa vào bảng 4.5 cho thấy có ảnh hƣởng khác nhau giữa các yếu tố môi trƣờng nuôi cấy lên sự phát sinh phôi soma của giống lan Dendrobium ở giai đoạn sau 60 ngày nuôi cấy. Ở môi trƣờng ½ MS, ½ MS + 1mg/l BA, ½ MS + 3mg/l BA và ½ MS + 1mg/l BA + 0.5mg/l NAA cho thấy không có sự phát sinh phôi soma, chứng tỏ lan Dendrobium đòi hỏi nồng độ BA cao mới có khả năng phát sinh phôi soma. Quan sát ở những môi trƣờng có bổ sung nồng độ BA cao (BA = 5mg/l; 7mg/l; 10mg/l ) thì khả năng phát sinh phôi soma rất cao, chứng tỏ khả năng phát sinh phôi của lan Dendrobium rất nhậy cảm với môi trƣờng nuôi cấy có bổ sung nồng độ BA cao và khả năng phát sinh phôi soma càng cao khi ta bổ sung kết hợp giữa BA và NAA vào môi trƣờng nuôi cấy, cho thấy kết quả nhƣ sau: - Ở môi trƣờng ½ MS + 7mg/l BA số phôi: 7.67 - Ở môi trƣờng ½ MS + 7mg/l + 0.5mg/l NAA số phôi: 7.78 - Ở môi trƣờng ½ MS + 10mg/l BA số phôi: 8.67 - Ở môi trƣờng ½ MS + 10mg/l BA + 0.5mg/l NAA số phôi: 9.11 Nhƣ vậy BA và NAA thích hợp cho sự phát sinh phôi soma trong nuôi cấy in vitro. *Số lƣợng protocorm: Dựa vào bảng 4.5 cho thấy có sự khác biệt giữa các yếu tố môi trƣờng lên khả năng tạo protocorm ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy. Ở môi trƣờng đối chứng (1/2 MS) số protocrm hình thành là 1.44, khả năng hình thành protocorm tăng ở những môi trƣờng có bổ sung BA cao, do BA có vai trò kích thích sự phân chia tế bào nên nồng độ BA cao thì khả năng phân chia tế bào càng cao. Vì vậy số protocorm tạo thành nhiều. Nhƣng vai trò của BA đƣợc kích thích mạnh khi ta kết hợp bổ sung BA với NAA, do đó môi trƣờng có bổ sung BA và NAA thƣờng cho thấy khả năng tạo protocorm cao. 53 Qua đó cho thấy BA và NAA có vai trò đến khả năng tạo protocorm ở giai đoạn sau 60 ngày nuôi cấy. *Số lƣợng chồi: Dựa vào bảng 4.5 cho thấy có sự khác biệt giữa các môi trƣờng nuôi cấy lên khả năng hình thành chồi. Ở giai đoạn này khả năng hình thành chồi của Dendrobium cũng không cao, do mẫu cấy chủ yếu là phát sinh phôi soma và tạo protocorm. Số chồi hình thành cao ở những môi trƣờng nuôi cấy không có sự phát sinh phôi soma và tạo nhiều protocorm nhƣ: ½ MS + 1mg/l BA số chồi là 5.11, ½ MS + 3mg/l BA số chồi là 6.11 và ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l BA + 0.5mg/l NAA số chồi 6.11. Còn ở các môi trƣờng khác của thí nghiệm thì số chồi giảm. Nhƣ vậy ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy BA và NAA không có ảnh hƣởng lớn đến khả năng hình thành chồi. *Chiều cao chồi: Chiều cao chồi luôn giảm dần ở những môi trƣờng có bổ sung BA hoặc BA kết hợp NAA cao, do BA chỉ kích thích sự phân chia chia tế bào chứ không kích thích sự tăng trƣởng. Hình 4.9: Chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung BA. 54 Hình 4.10: Chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung BA và NAA. Sau 90 ngày nuôi cấy số lƣợng chồi gia tăng rất rõ, số lƣợng protocorm và phôi soma đều phát triển thành chồi do đó ở giai đoạn này ta chỉ quan sát sự sinh trƣởng và phát triển của chồi. Bảng 4.6: Ảnh hƣởng của BA và NAA đến sự sinh trƣởng và phát triển chồi lan Dendrobium in vitro sau 90 ngày nuôi cấy Nghiệm thức Số chồi Số lá Số rễ Chiều cao / mẫu cấy / chồi / chồi chồi(cm) ½ MS 4.11 A 2.00 AB 1.89 F 2.83 F ½ MS + 1mg/l BA 5.22 AB 2.15 B 0.77 D 2.51 F ½ MS + 3mg/l BA 6.44 BC 2.12 B 0.66 CD 1.73 CD ½ MS + 5mg/l BA 7.22 CD 2.13 B 0.39 A 1.52 BC ½ MS + 7mg/l BA 8.00 DE 1.68 A 0.34 A 1.30 AB ½ MS + 10mg/l BA 9.33 F 1.67 A 0.30 A 1.21 AB ½ MS+1mg/lBA+0.5mg/lNAA 6.56 C 2.11 B 1.23 E 2.12 E ½ MS+3mg/lBA+0.5mg/lNAA 7.22 CD 2.33 B 1.86 D 1.97 DE ½ MS+5mg/lBA+0.5mg/lNAA 8.00 DE 2.29 B 0.64 BCD 1.91 DE ½ MS+7mg/lBA+0.5mg/lNAA 9.11 EF 2.06 B 0.49 ABC 1.30 AB ½ MS+10mg/lBA+0.5mg/lNAA 10.22 F 1.64 A 0.40 AB 0.98 A CV% 0.88% 1% 1.84% 1.1% *Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05. 55 Nhận xét: *Số lƣợng chồi: Qua bảng trắc nghiệm phân hạng cho thấy có sự khác biệt giữa các yếu tố môi trƣờng lên quá trình hình thành chồi ở giai đoạn 90 ngày nuôi cấy. Số chồi tăng rất cao trên môi trƣờng có bổ sung nồng độ BA cao và tăng cao hơn khi ta bổ sung kết hợp BA và NAA vào môi trƣờng nuôi cấy: - Ở môi trƣờng ½ MS + 7mg/l BA số chồi: 8.00 - Ở môi trƣờng ½ MS + 7mg/l BA + 0.5mg/l NAA số chồi: 9.11 - Ở môi trƣờng ½ MS + 10mg/l BA số chồi: 9.33 - Ở môi trƣờng ½ MS + 10mg/l BA + 0.5mg/l NAA số chồi: 10.22 Nhƣ vậy ở giai đoạn sau 90 ngày nuôi cấy BA và NAA có ảnh hƣởng lớn đến khả năng hình thành chồi. *Số lƣợng lá, rễ và chiều cao chồi: - Số lá: Đối với lan Dendrobium cũng giống Cymbidium, càng tăng nồng độ BA thì số lƣợng lá không tăng cao và có thể giảm. - Số rễ: Không chỉ ở môi trƣờng ½ MS có sự hình thành rễ mà ở các môi trƣờng khác cũng có sự hình thành rễ dù không cao bằng môi trƣờng đối chứng (1/2 MS). Chứng tỏ lan Dendrobium nhậy cảm với NAA trong sự hình thành rễ dù NAA ở nồng độ thấp. - Chiều cao chồi: Bảng 4.6 cho thấy ở môi trƣờng ½ MS chiều cao chồi cao nhất và thấp dần ở các môi trƣờng có bổ sung BA cao. Hình 4.11: Chồi lan Cymbidium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung BA 56 Hình 4.12: Chồi lan Dendrobium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung BA và NAA 4.2.2. Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng của TDZ và NAA lên quá trình nuôi cấy in vitro của cây lan Dendrobium Sau 60 ngày nuôi cấy, kết quả thí nghiệm cho thấy các nghiệm thức đều cho kết quả tốt. Trong môi trƣờng có bổ sung kích thích tố TDZ hoặc TDZ kết hợp NAA thì khả năng hình phôi soma, protocorm và chồi đƣợc kích thích mạnh. 57 Bảng 4.7: Ảnh hƣởng của TDZ và NAA đến khả năng hình thành phôi soma, protocorm và chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro Nghiệm thức Số phôi soma Số protocorm Số chồi Chiều cao / mẫu cấy / mẫu cấy / mẫu cấy chồi (cm) ½ MS 0 A 2.00 A 2.89 AB 1.56 C ½ MS+0.05mg/l TDZ 4.56 B 4.56 BC 4.56 C 1.21 BC ½ MS+0.1mg/l TDZ 6.00 C 5.56 BC 2.22 A 0.87 AB ½ MS+0.5mg/l TDZ 7.44 D 6.89 DE 2.56 A 0.67 A ½ MS+1mg/l TDZ 8.89 E 7.33 B 3.00 AB 0.59 A ½ MS+0.05mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 4.44 B 4.33 CD 3.89 BC 1.22 BC ½ MS+0.1mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 5.00 BC 5.78 E 5.00 CD 0.93 AB ½ MS+0.5mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 8.44 DE 9.33 B 6.11 D 0.72 A ½ MS+1mg/l TDZ+0.5mg/l NAA 9.44 E 10.44 A 2.56 A 0.66 A CV% 1.1% 1.33% 1.3% 2% *Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05. Nhận xét: Qua thống kê trắc nghiệm phân hạng các nghiệm thức của thí nghiệm trên cho thấy sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, có những biểu hiện nhƣ sau: *Số lƣợng phôi soma: Dựa vào bảng 4.7 cho thấy các yếu tố môi trƣờng nuôi cấy có ảnh hƣởng khác biệt đến khả năng phát sinh phôi soma của lan Dendrobium. Chỉ có ở môi trƣờng đối chứng (½ MS) là không có sự phát sinh phôi soma, còn các môi trƣờng có bổ sung TDZ thì sự phát sinh phôi soma thể hiện rõ. Chứng tỏ TDZ rất thích hợp trong sự phát sinh phôi. Khi ta kết hợp bổ sung TDZ và NAA vào môi trƣờng nuôi cấy cho thấy khả năng phát sinh phôi soma cao hơn ở môi trƣờng chỉ có bổ sung TDZ. Nhƣ vậy TDZ và NAA có ảnh hƣởng lớn đến khả năng phát sinh phôi soma của giống lan Dendrobium ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy. 58 *Số lƣợng protocorm: Qua bảng trắc nghiệm phân hạng cho thấy chỉ ở môi trƣờng ½ MS cho ta số protocorm thấp nhất 2.00, còn ở các môi trƣờng có bổ sung nồng độ TDZ cao thì cho thấy số protocorm tăng cao, khi ta kết hợp TDZ và NAA thì luôn cho hiệu quả hơn: - Ở môi trƣờng ½ MS + 0.5mg/l TDZ số protocorm: 6.89 - Ở môi trƣờng ½ MS + 0.5mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số protocorm: 9.33 - Ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l TDZ số protocorm: 7.33 - Ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số protocorm: 10.44 Nhƣ vậy TDZ và NAA có ảnh hƣởng lớn đến sự tạo protocorm của giống lan Dendrobium ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy. *Số lƣợng chồi: Dựa vào bảng 4.7 cho thấy ở giai đoạn này khả năng hình thành chồi không cao, ở những môi trƣờng có nồng độ TDZ hoặc TDZ kết hợp NAA cao thì số chồi hình thành thấp, do ở các môi trƣờng này chủ yếu tạo protocorm và phát sinh phôi soma. Nhƣ vậy ở giai đoạn 60 ngày nuôi cấy TDZ, TDZ và NAA có ảnh hƣởng không lớn đến khả năng tạo chồi *Chiều cao chồi: Bảng 4.7 cho thấy khả năng phát sinh phôi và tạo protocorm càng cao thì chiều cao chồi thấp. Chứng tỏ TDZ và NAA không tác động đến sự phát triển của chồi. Hình 4.13: Chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung TDZ 59 Hình 4.14: Chồi lan Dendrobium sau 60 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung TDZ và NAA Bảng 4.8: Ảnh hƣởng của TDZ và NAA đến sự sinh trƣởng và phát triển chồi lan Dendrobium in vitro sau 90 ngày nuôi cấy. Nghiệm thức Số chồi Số lá Số rễ Chiều cao / mẫu cấy /chồi /chồi chồi(cm) ½ MS 3.33 A 2.17 B 1.78 E 2.39 E ½ MS + 0.05mg/l TDZ 5.78 B 2.16 B 1.31 CD 2.04 DE ½ MS + 0.1mg/l TDZ 7.56 CD 1.90 B 1.11 BC 1.67 CD ½ MS + 0.5mg/l TDZ 8.89 DEF 2.06 B 0.56 A 1.27 AB ½ MS + 1mg/l TDZ 9.44 F 1.71 AB 0.42 A 1.05 A ½ MS+0.05mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 6.56 BC 2.00 B 1.36 D 1.93 CD ½ MS+0.1mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 7.89 CDE 2.08 B 1.05 B 1.64 BC ½ MS+0.5mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 9.22 EF 1.79 B 0.49 A 1.12 A ½ MS+1mg/lTDZ+0.5mg/lNAA 10.22 F 1.23 A 0.48 A 1.02 A CV% 3.33% 1.81% 1.55% 1.61% *Các giá trị theo sau bởi chữ cái trong cùng một cột không cùng ký tự biểu hiện sự khác biệt rất có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức độ 0,05. Nhận xét: Qua thống kê trắc nghiệm phân hạng các nghiệm thức của thí nghiệm trên cho thấy sau 90 ngày nuôi cấy in vitro, có những biểu hiện nhƣ sau: 60 *Số lƣợng chồi: Dựa vào bảng 4.8 cho thấy giữa các yếu tố môi trƣờng nuôi cấy có sự khác biệt nhau ý nghĩa về mặt thống kê. Ở giai đoạn 90 ngày nuôi cấy số lƣợng chồi tăng cao ở những môi trƣờng có bổ sung nồng độ TDZ cao và càng cao khi ta bổ sung kết hợp giữa TDZ và NAA: - Ở môi trƣờng ½ MS + 0.5mg/l TDZ sốchồi: 8.89. - Ở môi trƣờng ½ MS + 0.5mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số chồi: 9.22. - Ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l TDZ số chồi: 9.44. - Ở môi trƣờng ½ MS + 1mg/l TDZ + 0.5mg/l NAA số chồi: 10.22. Nhƣ vậy ở giai đoạn sau 90 ngày nuôi cấy TDZ và NAA có ảnh hƣởng lớn đến sự hình thành chồi. *Số lƣợng lá, rễ và chiều cao chồi: - Số lá: Bảng 4.8 cho thấy số lá không tăng cao ở những môi trƣờng có bổ sung TDZ và TDZ kết hợp NAA cao. Chứng tỏ TDZ và TDZ kết hợp NAA không ảnh hƣởng đến quá trình hình thành lá. - Số rễ: Bảng 4.8 cũng cho thấy số rễ giảm trong khi số chồi lại tăng cao. - Chiều cao chồi: chiều cao chồi thƣờng tỷ lệ nghịch với sự hình thành chồi do đó ở những môi trƣờng có sự hình thành chồi cao thì chiều cao chồi giảm. Hình 4.15: Chồi lan Dendrobium sau 90 ngày nuôi cấy in vitro trên môi trƣờng có bổ sung TDZ . 4.2. Lan Dendrobium Để kiểm tra ảnh hƣởng của các chất điều hòa sinh trƣởng đến quá trình nuôi cấy in vitro, cho nên ngoài việc thực hiện trên giống lan Cymbidium ta còn thực hiện trên giống lan. giống lan Dendrobium. 4.2.1. Thí nghiệm 1: Ảnh hƣởng của BA và NAA lên quá trình nuôi cấy in vitro của cây lan Dendrobium Sau 60 ngày nuôi cấy in vitro, kết quả thí nghiệm cho thấy các nghiệm. có bổ sung BA và NAA 4.2.2. Thí nghiệm 2: Ảnh hƣởng của TDZ và NAA lên quá trình nuôi cấy in vitro của cây lan Dendrobium Sau 60 ngày nuôi cấy, kết quả thí nghiệm cho thấy các nghiệm thức