Nghiên cứu bán tổng hợp muối Magie Hydroxi Xitrat từ Axit Hidroxi Xitric của vỏ quả bứa

1 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Công trình ñược hoàn thành ĐẠI HỌC ĐÀ NẴNG Header Page of 126 NGUYỄN THỊ THU HẰNG NGHIÊN CỨU BÁN TỔNG HỢP MUỐI MAGIE HIDROXI XITRAT Người hướng dẫn khoa học: GS TS ĐÀO HÙNG CƯỜNG Phản biện 1: PGS.TS TRẦN THỊ VĂN THI Phản biện 2: PGS.TS LÊ TỰ HẢI TỪ AXIT HIDROXI XITRIC CỦA VỎ QUẢ BỨA Chuyên ngành: Hóa Hữu Cơ Mã số: 60.44.27 Luận văn ñược bảo vệ Hội ñồng bảo vệ chấm Luận văn tốt nghiệp Thạc sĩ Khoa học, họp Đại học Đà Nẵng vào ngày 30 tháng 12 năm 2011 TÓM TẮT LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Có thể tìm hiểu luận văn tại: - Trung tâm thông tin –Học liệu - Đại học Đà Nẵng Đà Nẵng - Năm 2011 Footer Page of 126 - Thư viện trường Đại học Sư phạm - Đại học Đà Nẵng Header Page of 126 MỞ ĐẦU - - Khảo sát trình chiết tách axit hidroxi xitric từ vỏ bứa Lý chọn ñề tài: Theo Tổ chức Y tế giới (WHO) năm giới có 10 - Xây dựng quy trình tổng hợp muối Magie hidroxi xitrat triệu người mắc bệnh ung thư Nguyên nhân gây ung thư dấu - Đóng góp thêm thông tin, tư liệu khoa học bứa, hỏi lớn ñối với nhà khoa học; nhiên có ñiều chắn béo tạo sở khoa học ban ñầu cho nghiên cứu sâu ứng dụng phì nguyên nhân HCA ñược chiết từ vỏ bứa có tác dụng kìm hãm trình axit hidroxi xitric chuyển hóa lượng ñường thừa thể thành mỡ Không Đối tượng phạm vi nghiên cứu giúp giảm cân, HCA làm giảm loại mỡ xấu cho sức khỏe 3.1 Đối tượng nghiên cứu: tryglycerid, LDL cholesterol, cholesterol toàn phần tăng HDL cholesterol loại mỡ có tác dụng bảo vệ thành mạch Ngoài ra, HCA làm gia tăng nồng ñộ Serotonin, chất dẫn truyền thần kinh yếu có vai trò kiểm soát thèm ăn cảm xúc HCA kìm hãm cảm giác thèm ăn, ñồng thời cải thiện tâm lý phiền muộn người dư cân, Vỏ bứa (Garcinia oblongifolia Champ Ex Benth.) xã Bình Hải, huyện Bình Sơn, tỉnh Quảng Ngãi 3.2 Phạm vi nghiên cứu: béo phì giúp họ giảm lượng phần Tuy nhiên, HCA dạng tự - Chiết tách axit hidroxi xitric phương pháp chưng ninh có hoạt tính sinh học không bền, dễ chuyển hóa thành dạng Khảo sát ảnh hưởng thời gian chưng ninh tỉ lệ rắn/lỏng tới hàm lacton, bền hoạt tính sinh học Vì thế, cần phải tạo HCA lượng axit thu ñược phương pháp chuẩn ñộ axit-bazơ phương tồn dạng dẫn xuất, bền có hoạt tính sinh học, chủ yếu pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC) muối kim loại nhóm IA IIA Muối magie HCA có ñầy ñủ hoạt tính sinh học HCA, - Tổng hợp muối Magie hidroxi xitrat khảo sát ảnh hưởng bổ sung lượng magie cho thể Cơ thể thiếu magie yếu tố: nhiệt ñộ, thời gian tỉ lệ rắn/lỏng tới hiệu suất gây bệnh tim mạch ñột quỵ; làm tăng nguy gây bệnh trình tổng hợp muối thiếu máu tim, suy tuần hoàn, rối loạn nhịp tim Với lý trên, chọn ñề tài: “Nghiên cứu - Tinh chế muối kiểm tra sản phẩm muối ñã tinh chế phương pháp HPLC bán tổng hợp muối Magie hidroxi xitrat từ axit hidroxi xitric vỏ bứa ” Mục ñích ñề tài: Footer Page of 126 Phương pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết: Phương pháp nghiên cứu hợp chất thiên Header Page of 126 nhiên, tổng quan tài liệu ñặc ñiểm hình thái thực vật, thành phần hoá học, ứng dụng số loài thực vật thuộc họ bứa Clusiaceae 4.2 Phương pháp thực nghiệm: Chương 1: Tổng quan Chương 2: Nguyên liệu phương pháp nghiên cứu Chương 3: Kết thảo luận Phương pháp chiết tách: Phương pháp chiết chưng ninh sử dụng dung môi nước cất Phương pháp phân tích công cụ: Phương pháp sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) Phương pháp kiểm tra vi sinh vật: Phương pháp kiểm tra tiêu vi sinh vật: tổng vi sinh vật hiếu khí, E Coli tổng nấm men, nấm mốc Ý nghĩa khoa học tính thực tiễn ñề tài Từ nghiên cứu trên, ñề tài ñã thu ñược số kết với ý nghĩa sau: - Xây dựng quy trình chiết tách axit hidroxi xitric từ vỏ CHƯƠNG TỔNG QUAN 1.1 CÂY BỨA [2], [3], [4], [6] 1.1.1 Bộ chè Là lớn, bao gồm chủ yếu thân gỗ có quan hệ gần gũi với sổ sớm ñi từ Bộ chè gồm 19 họ, nước ta có họ ñó có họ quan trọng họ Chè họ Măng cụt 1.1.2.Bứa Tên khoa học: Garcinia oblongifolia Champ.ex Benth Thuộc họ măng cụt Clusiaceae bứa khô - Xây dựng quy trình tổng hợp muối Magie hidroxi xitrat từ axit hidroxi xitric ñược chiết vỏ bứa - Cung cấp thông tin khoa học thành phần cấu tạo muối Magie hidroxi xitrat - Làm sở liệu ñể ứng dụng muối Magie hidroxi xitrat thực tế Hình 1.1 Quả, lá, hoa bứa Mô tả: Cây thân gỗ cao 10- 15m Cành nhánh dài mảnh Cấu trúc luận văn: Luận văn gồm 73 trang, ñó có 14 bảng mọc xoè ngang Vỏ màu xám tro Lá mọc ñối, mép nguyên nhẵn 44 hình Phần mở ñầu 04 trang, kết luận kiến nghị 02 trang, tài bóng, có nhiều ñiểm mờ Hoa màu vàng có hoa ñực hoa lưỡng liệu tham khảo 03 trang Nội dung luận văn chia làm 03 chương: tính Hoa ñực có ñài, cánh hoa Hoa lưỡng tính có ñài, cánh hoa, nhiều nhị Bầu 6- 10 ô Quả nang hình cầu có nhiều rãnh dọc Footer Page of 126 7 Vỏ màu vàng ngoài, phía ñỏ, vị chua, 6- 10 hạt, có phương pháp quang phổ Sự xác ñịnh tách axit hidroxi xitric nhiều múi mọng nước ăn ñược (HCA) giấy Whatman No.1 ñược thực cách sử dụng n- Header Page of 126 Thành phần hoá học: Trong chứa nhiều axit hữu cơ, vitamin butanol/axit axetic/nước (4:1:5) n-propanol/axit focmic/nước (4:1:5) C (100g có 61mg vitamin C), flavonozit Các vạch ñược xác ñịnh phun metavanadate 5% Kiềm hoá axit Bộ phận dùng: Vỏ Cortex Garciniae cách trộn với lượng kiềm dư cho ñi qua cột nhựa trao ñổi ion Nơi sống thu hái: Cây mọc hoang rừng thứ sinh (Zeocarb 215) Kết rửa cho thấy có vạch (Rf = 0,34) có giá trị tỉnh từ Hà Tuyên, Vĩnh Phú ñến Quảng Nam, Đà Nẵng Thường thấp tương ứng với (-)-HCA tự Trong nồng ñộ nước rửa ñược trồng lấy tươi nấu canh chua có vạch cao (Rf = 0,46) ñó lacton Nước chiết từ cho Tính vị, công dụng: Vỏ có tính săn da ñắng, mát, thấy có vạch axit trội sắc ký với hệ dung môi khác ñộc, có tác dụng tiêu viêm, hạ nhiệt, làm săn da, lành vết thương Lá có Trong trường hợp chuẩn ñộ dịch chiết kiềm, sử dụng vị chua, thường ñược dùng nấu canh chua Hạt có áo hạt chua, ăn ñược, phenolphtalein làm chất thị, thu ñược ñiểm tới hạn khác nhau, dùng nấu canh chua môi trường lạnh sau ñó ñun nóng, ñiều cho thấy ñó ñặc Vỏ thường dùng trị: Loét dày, loét tá tràng, viêm dày ñiểm lacton Hai vạch sắc ký ñã ñược xem axit hidroxi xitric ruột, tiêu hoá, viêm miệng, bệnh cặn răng, ho máu Dùng lacton (hình 1.12 1.13) Điều chứng tỏ trị bỏng, mụn nhọt, eczema, dị ứng, mẩn ngứa, rút vết ñạn ñâm vào vạch sắc ký axit γ-hidroxi lacton không thịt Liều dùng 20- 30g dạng thuốc sắc; dùng giã vỏ tươi ñắp phải axit tactaric axit xitric Nhựa bứa dùng trị bỏng Hoá học lập thể: 1.1.3 Phân loại bứa: Gồm nhiều loại như: Garcinia harmandii Axit hidroxi xitric (axit 1,2- dihydroxy propan- 1,2,3- Pierre; Garcinia xanthochymus Hook.f.ex J.Anderson; Garcinia tricacboxylic) có trung tâm bất ñối; vậy, tồn cặp ñồng cochinchinensis Garcinia phân lập thể ñồng phân khác (Hình 1.12) Martius Maue cambogia; Garcinia indica; Garcinia atro Viridis; Garcinia dulcis; ñã tổng hợp thành công ñồng phân lập thể hidroxi xitric Một Garcinia hombroniana; Garcinia echinocarpa;… ñồng phân ñược tìm thấy Garcinia ñồng 1.1.4 Dẫn xuất HCA [6], [9], [10] phân ñược tìm thấy loài dâm bụt (Hibiscus) Cấu hình 1.1.4.1 Hoá học (-)-HCA xác lacton axit hidroxi xitric, axit hibiscus axit garcinia, ñã Choisy; Garcinia pedunculata Roxb; Lewis Neelakantan ñã chiết axit chủ yếu vỏ ñược xác ñịnh axit (2S, 3R)- (2S, 3S)-2- hidroxi xitric- G.cambogia xác ñịnh (-)-HCA chất ñược nghiên cứu 2,5- lacton (Hình 1.13) Cấu hình xác ñược xác ñịnh qui luật Footer Page of 126 9 10 Header Page of 126 Hudson, chiều quay quang học ánh sáng phân cực, vòng tròn 1.1.4.2 Muối HCA [11] ánh sáng lưỡng sắc, tính toán góc quay phân tử Glusker Vỏ G.cambogia G.indica chứa 20-30% (-)-HCA Vì cộng ñã báo cáo cấu trúc cấu hình xác muối vậy, nguồn chủ yếu chứa (-)-HCA Bên cạnh ñó, (-)-HCA dễ bị Canxi hidroxi xitrat (-)-HCA lacton chụp X-quang tinh thể lacton hoá trình hoá cô ñặc, tạo nhiều dẫn xuất bền COOH COOH HO C H HO C COOH H C COOH (-)-HCA, cụ thể là: lacton, este, muối Natri, Kali, Canxi Magie H C OH (-)-HCA Trong mẫu chiết thương mại G.cambogia, (-)-HCA HOOC C OH tồn dạng muối Kali tính chất bền (-)-HCA tự C COOH thu ñược dễ dàng từ mẫu chiết thương mại G.cambogia, H H H Axit (-)-hy®roxy xitric (I) Axit (+)-hy®roxy xitric (II) cách cho dung dịch muối Kali hoà tan nước ñi qua cột trao ñổi cation Majeed cộng ñã báo cáo cách tạo muối Kali hidroxi HO C H HOOC C OH H C COOH xitrat từ Garcinia Nó bao gồm trình chiết (-)-HCA từ Garcinia COOH COOH H C OH cách sử dụng rượu alkyl, dịch chiết trộn lẫn ñược xử lý KOH HO C COOH kết tủa Kali hidroxi xitrat hình thành lắng xuống ñáy H C COOH Balasubramanyam cộng tường thuật lại cách tạo thành cặp H H Axit (+)-allo-hy®roxy xitric (III) Axit (-)-allo-hy®roxy xitric (IV) Hình 1.12 Cấu trúc ñồng phân axit hiñroxi xitric O COOH COOH C H C HO C COOH H C C=O H HOOC C O H C muối kim loại hoà tan nhóm IA IIA (-)- HCA Nó bao gồm (-)HCA chiết nước xử lý dịch chiết với loại hiñroxit clorua kim loại khác ñể ñược cặp muối kim loại Ibnusaud cộng ñã báo cáo cách chiết tách axit H Garcinia từ vỏ tươi khô G.cambogia, G.indica OH G.atroViridis Nó bao gồm ñến cách chiết Garcinia cách C=O nấu với nước vòng 20 Hỗn hợp dịch chiết ñược cô ñặc, xử lý H metanol ñể loại bỏ pectin ñược lọc Phần nước lọc ñược xử lý dung dịch NaOH 800C nhằm thu ñược Natri hidroxi xitrat Axit (-)-hy®roxy xitric lacton Axit (+)-allo-hy®roxy xitric lacton Hình 1.13 Cấu trúc axit hiñroxi xitric lacton Footer Page of 126 11 12 Header Page of 126 thông thường muối cặp kim loại nhóm IA IIA ñược thể hình H H HO C 1.15 COO Ca HO C COO HO C COO C COO H Mg HO COO C H C COO H H H Ca HO C COO HO C COO H C COO H H Mg HO C COO HO C COO H C COO X OH C COO Y COO COO H H HO C H Hình 1.15 Công thức thông thường muối cặp kim loại nhóm IA IIA H COOK C Mg H C C HO Ca HO H Trong ñó, X kim loại nhóm IA như: Li, Na, K, Rb, Cs hay Fr COONa Y kim loại nhóm IIA như: Be, Mg, Ca, Sr, Ba hay Ra Tỷ lệ khối lượng X chiếm từ 1,5 ñến 51,0% Tỷ lệ khối lượng Y chiếm từ HO C COOK HO C COONa 2,0 ñến 50,9% Tỷ lệ khối lượng HCA chiếm từ 31,0 ñến 93,0% tùy theo khối lượng phân tử X Y Nếu X Na+, Y Ca2+ phần H C COOK H C COONa trăm khối lượng Natri 8,58%, Canxi 14,92% (-)H H HCA 76,50% Hình 1.14 Cấu thức thông thường muối kim loại Gokaraju cộng công bố dạng muối hai kim loại (Balasubramanyam cộng ñưa phương pháp tạo thành )-HCA với kim loại nhóm II Quá trình pha chế muối hai kim cặp muối kim loại hòa tan nhóm IA IIA (-)-HCA Phương pháp loại nhóm II bao gồm việc thêm hợp chất kim loại nhóm II vào bao gồm (-)-HCA chiết nước xử lý dịch dịch chiết với dung dịch (-)-HCA, thêm dung dịch hợp chất kim loại loại hidroxit clorua kim loại khác ñể ñược cặp muối kim loại, nhóm II khác Muối hai kim loại ñược thu lại cách loại bỏ nước sau ñó làm kết tủa muối tan hai kim loại cách thêm dung môi phân khỏi hỗn hợp phản ứng áp suất thấp hay sấy khô Sau ñó, muối hai cực ñể phân lập muối tan hai kim loại nhóm IA IIA (-)-HCA kim loại ñược chia tách khỏi hỗn hợp phản ứng cách thêm Dung môi phân cực ñược sử dụng dung dịch axeton 80% Công thức dung môi hữu trộn lẫn với nước lọc Những dung môi hữu Footer Page of 126 13 14 trộn lẫn với nước ancol, axeton, axetonitrin, dioxan, HCA Dịch chiết từ vỏ Garcinia ñược sử dụng vật liệu tetrahidrofuran hay hỗn hợp chúng Những muối hai kim loại bắt ñầu Những hợp chất thu ñược nghiên cứu không vị, hiệu chất bổ sung ăn kiêng thức uống mùi tan tốt nước có chức chữa bệnh béo phì Chúng có tác dụng giảm béo ñộng vật có vú, chữa trị bệnh loãng Chúng ñược sử dụng phần ăn ngày hay thức xương, ñược sử dụng phần hay thức uống hay chất bổ uống Công thức chúng ñược kiểm tra phổ cộng hưởng từ 1H- sung dinh dưỡng Công thức chúng ñã ñược kiểm tra phổ cộng NMR C13-NMR Header Page of 126 hưởng từ 1H NMR 13C NMR Muối ba kim loại (-)-HCA có công thức thông thường Những muối hai kim loại (-)-HCA ñược thể công sau: thức chung sau: HO COO HO COO COO X HO Y OCO X OCO OH HO OCO Y OCO OH COO X HO HO COO OCO Hình 1.16 Công thức thông thường muối cặp kim loại nhóm II Trong ñó: X, Y ñược lựa chọn ñộc lập từ kim loại thuộc COOZ COOZ Hình 1.17 Công thức thông thường muối ba kim loại Trong ñó: X Y ñược lựa chọn từ Kẽm hay kim loại nhóm IIA Z ñược lựa chọn từ kim loại nhóm IA nhóm II (IIA IIB) bảng tuần hoàn Những kim loại nhóm II ñược lựa chọn ñộc lập từ Be, Mg, Ca, Ba hay Ra (nhóm IIA), Zn, Cd Samuel cộng ñã nghiên cứu muối phức tạp ba, hay Hg (nhóm IIB) hợp chất cacbonat, oxit hay hidroxit bốn năm kim loại (-)-HCA, thành phần cấu tạo phương chúng pháp tổng hợp chúng, với muối chứa kim loại khác ñược lựa chọn từ Kẽm, Magie, Natri, Kali Canxi Trong thành phần Gokaraju cộng công bố công thức muối ba kim loại (-)-HCA Muối ba kim loại phổ biến muối ba kim loại Canxi, Magie Kẽm Kali Nghiên cứu bao gồm trình tạo muối ba kim loại việc thêm lượng xác ñịnh dung dịch hợp chất kim loại mong muốn vào dung dịch (-)- Footer Page of 126 muối có chứa phân tử axit hidroxi xitric Thành phần (-)-HCA muối chiếm 40 - 75% khối lượng Trong muối, có lactone (-)-HCA Quá trình tổng hợp muối ba hay bốn kim loại (-)-HCA có chứa kim loại khác bao gồm bước: Chuẩn 15 16 bị axit hidroxi xitric dạng lỏng, cho axit hidroxi xitric dạng lỏng phản CHƯƠNG NGUYÊN LIỆU ứng với hỗn hợp hợp chất kim loại số kim VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU Header Page of 126 loại: Kẽm, Magie, Natri, Kali Canxi dung dịch, sấy khô dung dịch ñể thu muối ba, bốn kim loại axit hidroxi xitric Nhiệt ñộ 2.1 NGUYÊN LIỆU Nguyên liệu ñược lấy xã Bình Hải, huyện Bình Sơn, tỉnh trình sấy khô từ 150 ñến 2000 C 1.2 CÁC PHƯƠNG PHÁP KĨ THUẬT [1], [5] Quảng Ngãi 1.2.1 Các phương pháp phân huỷ mẫu phân tích 2.2 PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU 1.2.2 Phương pháp trọng lượng 2.2.1 Phương pháp vật lý Nguyên liệu ñược kiểm tra ñộ ẩm, hàm lượng tro phương 1.2.2.1 Xác ñịnh ñộ ẩm nguyên liệu 1.2.2.2 Xác ñịnh hàm lượng tro nguyên liệu pháp trọng lượng kiểm tra hàm lượng kim loại quang phổ 1.2.3 Phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) hấp thụ nguyên tử (AAS) HCA muối Magie HCA sau chuyển hóa ñược kiểm tra 1.2.4 Phương pháp chuẩn ñộ axit- bazơ 1.2.5 Phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) [7], [12] sắc ký lỏng hiệu cao (HPLC), quang phổ hấp thụ nguyên tử 1.2.6 Phương pháp chưng ninh (AAS) 1.2.7 Phương pháp phân tích vi sinh vật 2.2.2 Phương pháp hóa học Sử dụng phương pháp chưng ninh nồi áp suất ñể chiết tách HCA từ vỏ bứa khô Tổng lượng axit dịch chiết ñược xác ñịnh phương pháp chuẩn ñộ axit-bazơ Dùng phương pháp chuyển hóa ñể tạo muối Magie HCA 2.2.3 Phương pháp sinh học Kiểm tra vi sinh vật muối Magie tạo thành phương pháp phân tích vi sinh vật 2.2.4 Phương pháp toán học Tiến hành tối ưu hóa lượng HCA chiết tách lượng muối Magie tạo thành phương pháp tối ưu hóa thực nghiệm Footer Page of 126 17 18 Header Page of 126 CHƯƠNG KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN 3.1 MỘT SỐ TÍNH CHẤT VẬT LÝ CỦA NGUYÊN LIỆU 3.1.1 Độ ẩm nguyên liệu Độ ẩm trung bình vỏ bứa khô khoảng 5,7% 3.1.2 Hàm lượng tro Hàm lượng tro trung bình vỏ khô thấp, chiếm 1,107 % khối lượng vỏ 3.1.3 Xác ñịnh hàm lượng số kim loại Kết so sánh với tiêu chuẩn CODEX STAN 164-1989 tiêu chuẩn chất lượng trái hàm lượng kim loại nặng cho phép loại rau quy ñịnh Quyết ñịnh số 867/1998/QĐ-BYT hàm lượng kim loại nặng nằm khoảng cho phép 3.2 KHẢO SÁT CÁC YẾU TỐ ẢNH HƯỞNG ĐẾN TỔNG LƯỢNG AXIT THU ĐƯỢC KHI CHƯNG NINH 3.2.1 Khảo sát theo thời gian chưng ninh Hình 3.3 Đường chuẩn HCA 3.3.2 Kết ñịnh lượng HCA phương pháp HPLC Axit chủ yếu ñược tìm thấy vỏ bứa phương pháp HPLC HCA, chiếm 15,222g/100g, ứng với thời gian lưu Khi tăng thời gian chưng ninh tổng lượng axit tăng lên 4,955 phút, ñược thể sắc kí ñồ hình 3.5 (trong ñó, theo ñạt kết cao sau 90 phút Nếu tiếp tục tăng thời gian chưng ninh hình 3.4, thời gian lưu HCA chuẩn 4,939 phút) So sánh với kết lượng axit có tăng không ñáng kể 3.2.2 Khảo sát theo tỉ lệ rắn/lỏng (R/L) Tổng lượng axit thu ñược lớn 15,037g /100g, ứng với tỉ loài ñã nghiên cứu Garcina Cambogia (17-19,2%) [9], Garcina India (12,48-15,1%) [10], Garcina Cowa (27,1%) [11], vỏ bứa khô Việt Nam ñược chưng ninh nước có hàm lượng HCA lệ rắn/ lỏng tối ưu 10g/200ml trung bình 3.3 XÁC ĐỊNH HÀM LƯỢNG HCA TRONG MẪU CHƯNG 3.4 TỔNG HỢP MUỐI MAGIE CỦA HCA NINH BẰNG PHƯƠNG PHÁP HPLC 3.3.1 Kết xây dựng ñường chuẩn Muối Magie hidroxi xitrat ñược tổng hợp từ axit hidroxi xitric ñạt khối lượng lớn 8,037g (H=45,354%) thời gian chuyển hóa phút, nhiệt ñộ 800C thể tích axit 200 ml Footer Page of 126 19 20 Header Page 10 of 126 chọn rửa tinh chế muối Magie thô cách tăng tỷ lệ cồn từ 60 ÷ 90% nước giảm 40 ÷ 10% Đo HPLC máy D-7000 HPLC; dung môi A: H2O:ACN (95:5), dung môi B: ACN, dung môi C: MeOH dung môi D: pha ñộng H3PO4 0,1% công ty Dược Danaphar Kết so sánh hàm lượng muối Magie trước sau ñược rửa cách ño HPLC thể bảng 3.11: Hình 2.8 Muối Magie trước sấy Hình 2.9 Muối Magie sau sấy Bảng 3.11 Kết diện tích pic phổ HPLC sản phẩm muối Magie 3.5 XÁC ĐỊNH CẤU TRÚC MUỐI BẰNG PHƯƠNG PHÁP HCK dạng thô HPLC HCK sau tinh chế % Kết ño phổ HPLC cho thấy thời gian lưu muối Magie TT Diện diện RT hidroxi xitrat ñã tổng hợp 4,10 phút So sánh với kết ño HPLC % Diện diện RT tích tích tích pic pic muối Magie hidroxi xitrat chuẩn có thời gian lưu 4,005 phút Tên tích pic pic (theo công bố Shrivastava cộng [17]) ta thấy kết sai 1,93 3630 1,807 X 0 hidroxi xitrat 2,37 9423 4,690 X 0 3.6 TINH CHẾ MUỐI 2,93 3227 1,606 X 0 3,41 7670 3,817 3,43 114 0,066 4,10 175150 87,175 4,09 173107 99,550 8,55 1816 0,904 8,51 669 0,385 lệch ít; ñó kết luận ñã tổng hợp thành công muối Magie Muối Magie ñiều chế dạng thô có ñộ tinh khiết trung bình (87,175%) Nó cần phải ñược tinh chế ñể xác ñịnh cấu trúc sử dụng làm thực phẩm chức Quá trình tinh chế muối Magie ñược thực sau: Cho sản phẩm muối Magie ñiều chế dạng rắn tan hỗn hợp cồn nước theo tỷ lệ khác Magie hidroxi xitrat Sau rửa sạch, tạp chất giảm, 03 pic có thời gian lưu lần Kết cho thấy tỷ lệ cồn 60% nước 40% muối lượt 1,93; 2,37 2,93 biến mất; 02 pic tạp chất có diện tích Magie thô tan sau ñó tạo lớp dầu Khi tăng tỷ lệ cồn lên 70%, 80%, nhỏ pic có thời gian lưu 3,43 8,51 Pic thể muối Magie có 90% ta nhận ñược kết tương tự Vậy, mặt ñịnh tính, diện tích lớn ñạt ñộ tinh khiết 99,55% Footer Page 10 of 126 22 21 Header Page 11 of 126 10 Intensity (mV) 3.7 KIỂM TRA HÀM LƯỢNG KIM LOẠI NẶNG TRONG SẢN PHẨM MUỐI MAGIE HIDROXI XITRAT HYDROXYCITRIC ACID MAGNESIUM 12 Để sử dụng muối Magie hidroxi xitrat thực phẩm, cần phải tiến hành kiểm tra hàm lượng kim loại nặng có sản phẩm muối phương pháp quang phổ hấp thụ nguyên tử (AAS) Bảng 3.12 Kết xác ñịnh thành phần kim loại nặng sản phẩm muối Magie hidroxi xitrat TT 0 10 HYDROXYCITRIC ACID MAGNESIUM Intensity (mV) Kết Hàm lượng loại (AAS) (mg/kg) cho phép (*) (mg/kg) Retention Time (min) 10 Phương pháp thử 11 Hình 3.10 Sắc kí ñồ muối Magie hidroxi xitrat trước tinh chế 12 Tên kim Pb TCVN 6193-1996 KPH 2 Cu TCVN 6193-1996 8,5 30 Zn TCVN 6193-1996 40 40 Fe TCVN 6193-1996 KPH - Sn TCVN 6193-1996 0,14 40 As TCVN 6193-1996 0,129 Ghi chú: - (*) Quyết ñịnh số 867/1998/QĐ-BYT Bộ Y Tế ngày tháng năm 1998 việc ban hành Danh mục Tiêu chuẩn vệ sinh ñối với lương thực, thực phẩm 3.8 XÁC ĐỊNH MỘT SỐ CHỈ TIÊU VI SINH CỦA MUỐI THU ĐƯỢC So sánh kết thử nghiệm tiêu vi sinh muối thu ñược với giới hạn cho phép tiêu vi sinh thực phẩm cho thấy tiêu vi sinh muối tổng hợp ñược ñều nằm giới Retention Time (min) Hình 3.15 Sắc ký ñồ mẫu M5 Footer Page 11 of 126 10 11 hạn cho phép Do ñó, sử dụng muối Magie hidroxi xitrat làm thực phẩm hay dược phẩm 23 24 KẾT LUẬN KIẾN NGHỊ Đã xác ñịnh ñộ ẩm, hàm lượng tro thành phần kim loại (-)-HCA có tính chống béo phì hiệu quả, ñược cung cấp chủ yếu nguyên liệu vỏ bứa Kết so sánh với tiêu chuẩn CODEX STAN dạng muối Vì vậy, nên tiếp tục nghiên cứu theo 164-1989 tiêu chuẩn chất lượng trái hàm lượng kim loại hướng ñiều chế ứng dụng muối (-)-HCA sản xuất dược nặng cho phép loại rau quy ñịnh Quyết ñịnh số liệu hay thực phẩm chức giúp giảm cân Header Page 12 of 126 867/1998/QĐ-BYT Bộ Y Tế ngày tháng năm 1998 việc ban hành Danh mục Tiêu chuẩn vệ sinh ñối với lương thực, thực phẩm hàm lượng kim loại nặng nằm khoảng cho phép Vì sử dụng vỏ bứa ñể làm thực phẩm dược phẩm mà không ảnh hưởng ñến sức khoẻ người Đã xác ñịnh ñược ñiều kiện ñể chưng ninh thu HCA vỏ bứa khô tốt 15,222g/100g Điều kiện tối ưu phương pháp chưng ninh nồi áp suất là: tỉ lệ rắn/lỏng 10g/200ml; thời gian chưng ninh 90 phút Đã xác ñịnh ñiều kiện phản ứng chuyển hóa axit hidroxi xitric thành muối Magie hidroxi xitrat ñạt hiệu suất 45,354% là: nhiệt ñộ chuyển hóa 800C, thực ñược phản ứng phút thể tích axit 200ml Đã tinh chế ñược muối Magie hidroxi xitrat tới 99,55% cách rửa muối thô với hỗn hợp cồn nước theo tỉ lệ 60:40 thể tích Kết xác ñịnh số tiêu vi sinh hàm lượng sô kim loại nặng sản phẩm muối Magie hidroxi xitrat tổng hợp ñược nằm khoảng cho phép Footer Page 12 of 126 Nghiên cứu xây dựng quy trình chiết tách (-)-HCA từ vỏ bứa theo quy mô công nghiệp ñể sản xuất thực phẩm giảm cân chứa (-)HCA Việt Nam  ... tổng hợp muối Magie hidroxi xitrat từ axit hidroxi xitric vỏ bứa ” Mục ñích ñề tài: Footer Page of 126 Phương pháp nghiên cứu 4.1 Nghiên cứu lý thuyết: Phương pháp nghiên cứu hợp chất thiên Header... 1.1.2 .Bứa Tên khoa học: Garcinia oblongifolia Champ.ex Benth Thuộc họ măng cụt Clusiaceae bứa khô - Xây dựng quy trình tổng hợp muối Magie hidroxi xitrat từ axit hidroxi xitric ñược chiết vỏ bứa. .. Khảo sát trình chiết tách axit hidroxi xitric từ vỏ bứa Lý chọn ñề tài: Theo Tổ chức Y tế giới (WHO) năm giới có 10 - Xây dựng quy trình tổng hợp muối Magie hidroxi xitrat triệu người mắc bệnh