Chương XIII GEN TRỊ LIỆU KHÁNG DI CĂN

Chương XIII GEN TRỊ LIỆU KHÁNG DI CĂN MỞ ĐẦU Di nguyên nhân gây tử vong cho bệnh nhân ung thư Sự diện khối u di thường dấu hiệu giai đoạn muộn tiến triển bệnh tế bào khối u trải qua nhiều biến đổi di truyền để góp phần vào việc kháng lại xạ trị hay hóa trị Để xử lý khối u khó nắm bắt này, cần hệ thống chuyển giao có hiệu lực toàn hệ thống mang thiết bị trị liệu tới nhiều đích khối u bệnh nhân Các tác nhân đòi hỏi phải đủ mạnh để ức chế tăng trưởng khối u loại bỏ u Trong chương tập trung vào kinh nghiệm sử dụng adenovirus E1A (Ad.E1A) với tư cách gen liệu pháp GTL ung thư điều trị khối u di Cuối trình bày phát phạm vi hoạt động kháng u kháng di gen liệu pháp p202 tiềm việc kháng lại khối u di E1A - GEN KHÁNG DI CĂN E1A - gen kiềm chế di Ad.E1A protein đa chức biến nạp, tổng hợp DNA, apoptosis, biệt hóa kiềm chế khối u E1A mô tả oncogene chủ yếu có khả thúc đẩy tăng trưởng làm tế bào yên lặng loài gặm nhấm hợp tác với ras oncogene để biến nạp tế bào Tuy nhiên, E1A liên quan với bệnh ác tính người có nhiều nghiên cứu sâu rộng nhằm tìm kiếm mối liên quan Hơn nữa, E1A rõ có gây kiềm chế di thực nghiệm tế bào gặm nhấm biến nạp ras oncogene neu oncogene E1A kiềm chế di số dòng tế bào khối u xác định người Di trình phức tạp bao gồm nhiều bước TB khối u tương tác với chất ngoại bào tế bào mô đệm để khởi đầu kết thúc trình di Vì chẳng có ngạc nhiên thấy mối liên hệ kiềm chế di qua trung gian E1A với điều hòa lên gen kiềm chế di E-cadherin, nucleosid diphosphat kinase (NM23) chất ức chế mô metalloproteinase (TMP) đồng thời điều hòa xuống gen tăng cường di matrix metalloproteinase (MMP) MMP-1, MMP-3, MMP-9, chất hoạt hóa plasminogen dạng urokinase, phân tử kết dính (CD44) HER-2 Mặc dầu E1A thông bào hoạt tính kháng u, liệu thực nghiệm tăng lên chứng minh E1A có khả ức chế sinh u TB loài gặm nhấm biến nạp dòng TB ung thư người Vì thế, dựa khả kiềm chế sinh u di nên E1A coi gen kiềm chế khối u Những thực nghiệm nói chủ yếu sử dụng thể thâm chuyển ổn định E1A (E1A stable transfectants) để xác định hoạt tính kiềm chế khối u E1A Những thí nghiệm cung cấp nguyên lý hoạt động kiềm chế khối u liên quan tới E1A, chưa phải nguyên lý “trị liệu” Để biến E1A thành gen liệu pháp hiệu ứng, người ta phải phát triển số chiến lược GTL với việc sử dụng liposom vec tơ virus với tư cách hệ thống chuyển gen Đồng thời phải chứng minh GTL dựa sở E1A thực thu hiệu ứng trị liệu mô hình ghép ngoại lai người chuột mô mô hình ung thư vú, ung thư buồng trứng ung thư phổi Mặc dầu với nghiên cứu tiền lâm sàng khích lệ vấn đề an toàn phải đặc biệt quan tâm muốn E1A thực TNLS theo quan niệm hành E1A oncogene Năm 1995 nhà khoa học đề nghị FDA phê chuẩn TNLS pha I điều trị bệnh nhân có biểu mức HER-2 với E1A, lý E1A điều hòa xuống HER-2 dẫn đến kiềm chế sinh u di E1A kiềm chế sinh u di qua trung gian biểu mức HER-2 Biểu mức HER-2 di Sự khuếch đại/biểu mức tiền gen ung thư (proto-oncogene) HER2 phát khoảng 30% ung thư vú ung thư buồng trứng người Đáng kể bệnh nhân ung thư vú ung thư buồng trứng có biểu mức HER-2 khối u tỷ lệ sống sót họ thấp thời gian tái phát ngắn so với bệnh nhân không biểu mức HER-2 Vì thế, biểu mức HER-2 sử dụng marker bệnh lý học cho tiên lượng sơ Sự biểu mức HER-2 phát với tần số cao ung thư phổi, ung thư đường tiêu hóa, ung thư bàng quang ung thư miệng Điều gợi lên biểu mức HER-2 giữ vai trò quan trọng việc phát triển bệnh ác tính người Về mặt lâm sàng, biểu mức HER-2 liên quan tới tiến triển di bệnh Biểu mức HER-2 tương quan với di sớm tăng tỷ lệ di Sự hình thành di phổi đòi hỏi TB khối u phải tăng trưởng vi môi trường thuận lợi Vì thể thâm chuyển biểu mức HER-2 có khả vượt qua chọn lọc tăng trưởng tổ chức Khi ép buộc biểu mức HER-2 làm phục hồi phần tiềm di dòng TB ung thư vú di khác in vitro in vivo, điều khẳng định biểu mức HER-2 nguyên nhân gây nên kiểu hình di Vì thế, muốn HER-2 biểu mức thấp mô bình thường thuốc ung thư dựa sở HER-2 phải có hiệu ứng trị liệu chọn lọc kháng lại khối u biểu mức HER-2 Dựa ý tưởng này, nhiều chiến lược trị liệu phát triển nhắm tới khối u biểu mức HER-2 Một số gen trị liệu với sở E1A điều trị khối u biểu mức HER-2 Sự kiềm chế E1A di qua trung gian biểu mức HER-2 E1A kiềm chế biểu mRNA protein HER-2 trạng thái ổn định cách điều hòa xuống hoạt tính promoter HER-2 Vì biểu mức HER-2 làm tăng cường tiềm di TB ung thư E1A điều hòa xuống HER-2 dẫn đến kiềm chế di Thực vậy, biểu E1A TB ung thư biểu mức HER-2 làm cho TB di hơn.Tuy nhiên, E1A kiềm chế di bất chấp có biểu mức HER-2 Ý kiến ủng hộ việc quan sát thấy HER-2 biểu từ trước TB ung thư biểu E1A hồi phục tính sinh u chúng thất bại việc hồi phục tiềm di biểu MMP Kết quán với báo cáo trước khẳng định E1A có liên quan tới hoạt tính kiềm chế di xa E1A làm trung gian kiềm chế di cách đích phân tử điều hòa xuống đường tín hiệu di cảm ứng HER-2 Gen trị liệu E1A Các nghiên cứu tiền lâm sàng Để test hiệu lực gen trị liệu dựa sở E1A chuột mang khối u biểu mức HER-2, có mô hình ghép ngoại lai ung thư (buồng trứng, vú phổi) thiết lập hệ thống chuyển giao sử dụng cationic liposome 3β [ N-(N’-dimethylaminoethane)-carbamoyl] cholesterol:dioleoylphatidylethanolamine (DC-Chol):DOPE Ad.E1A Mô hình ung thư buồng trứng Mô hình ung thư buồng trứng thiết lập cách tiêm TB ung thư buồng trứng biểu mức HER-2 (SKOV3) vào màng bụng chuột nu/nu Cấy ghép khối u buồng trứng thu nhận từ màng treo ruột khoang bụng có bắt màu dương tính HER-2 Chuột mang khối u tiêm vào màng bụng phức hợp vec tơ biểu E1A với DC-Chol (DCC-E1A) Ad.E1A Phân tích mổ tử thi cho thấy số chuột xử lý với E1A/DC-Chol bị chết hội chứng liên quan khối u không phát thấy xâm lấn di khối u thường thấy nhóm đối chứng (không điều trị với thể đột biến E1A/DC-Chol, E1A đơn lẻ DC-Chol đơn lẻ) Khi kiểm tra mô khối u cắt lọc từ chuột xử lý với E1A/DC-Chol rõ ràng biểu E1A tương quan với điều hòa xuống protein HER-2 khối u thu nhận từ nhóm đối chứng Đáng ý 70% chuột xử lý với E1A/DC-Chol sống sót năm đối chứng tất chết vòng 200 ngày Những chuột sống bình thường khỏe mạnh không phát thấy khối u bên tác dụng phụ điều trị Những kết rõ việc tiêm vào màng bụng phức hợp E1A/DC-Chol phương thức vận chuyển hữu ích để cảm ứng TB ung thư buồng trứng in vivo việc xử lý với E1A/DC-Chol làm thấp biểu HER-2, kiềm chế tăng trưởng khối u, giảm di căn, tăng thời gian sống sót hiệu ứng phụ Quan sát số chứng khẳng định hiệu lực tính khả thi việc sử dụng gen trị liệu sở E1A/DC-Chol để điều trị ung thư buồng trứng cách hiệu mô hình ghép ngoại lai Hiệu lực việc sử dụng Ad.E1A mô hình ung thư buồng trứng tương tự cách xử lý với E1A/DC-Chol Ngoài SKOV3, công trình nghiên cứu Ad.E1A đề cập tới dòng TB ung thư buồng trứng người biểu HER-2 2774 Thật hấp dẫn là, Ad.E1A làm tăng đáng kể thời gian sống sót mô hình u SKOV3, lại thất bại thực mô hình khối u 2774 Những kết khác biệt hiệu ứng thâm nhiễm virus SKOV3 dòng tế bào 2774 hai gây nhiễm xác định gen β-galactosidase mang adenovirus Quan sát gây ý tới khả E1A làm trung gian cho hiệu ứng kháng u đặc biệt tế bào ung thư buồng trứng biểu HER-2, hiệu ứng tế bào ung thư buồng trứng biểu HER-2 thấp Cũng cần phải có cách khác xử lý nghiêm ngặt TB ung thư biểu HER-2 2774 để có hiệu ứng tương tự thấy xử lý TB ung thư biểu mức HER-2, khối u SKOV3 cắt lọc từ chuột thâm nhiễm Ad.E1A đồng thời giảm biểu protein HER-2 mẫu khối u tương tự Vì thế, kết khẳng định có mối liên quan tới nguyên nhân in vitro biểu E1A điều hòa xuống HER-2 Khi sử dụng Ad.LacZ để theo dõi phổ biểu E1A mô hình khối u SKOV3, thật khích lệ biết có biểu cao LacZ bệnh cổ trướng ác tính khối u so với mô tổ chức khác, điều gợi lên Ad.E1A đích cách ưu tiên vào vị trí u Mô hình ung thư vú Khi thâm nhiễm Ad.E1A ức chế đặc hiệu tăng trưởng TB ung thư vú biểu mức HER-2 (MDA-MB-361 SKBR3) lại thấy có hiệu ứng ức chế tăng trưởng qua trung gian E1A TB ung thư biểu thấp HER-2 (MDA-MB-435 MDA-MB-231) Dựa sở quan sát Ad.E1A E1A/DC-Chol sử dụng để định giá hiệu lực mô hình ung thư vú biểu mức HER-2 Các tế bào MDA-MB-361 cấy vào khối mỡ vú chuột nu/nu Các khối u vú thường trở nên rõ ràng khoảng 45 ngày sau cấy ghép Ad.E1A E1A/DC-Chol tiêm vào khối u Sau tháng xử lý với E1A Ad.E1A E1A/DC-Chol kéo dài thời gian sống sót (thời gian sống sót kéo dài năm, trái lại nhóm đối chứng 15 tháng) ức chế tăng trưởng khối u Xử lý với Ad.E1A tốt đôi chút so với xử lý E1A/Dc-chol Đáng ý là, không phát thấy di tổ chức màng bụng gan, ruột, lách thận Những kết phù hợp với khả E1A việc ức chế di gợi lại hiệu ứng kháng u qua trung gian E1A mô hình ung thư buồng trứng biểu mức HER-2, không phát thấy di chuột xử lý với E1A Sự kiềm chế u vú tương quan với biểu E1A điều hòa xuống protein HER-2 nhờ xác định western blot phân tích hóa tổ chức miễn dịch mẫu khối u Dẫn liệu gợi lên tính khả thi gen trị liệu sở E1A (bằng Ad.E1A E1A/DC-Chol) kháng lại ung thư vú biểu mức HER-2 in vivo Một nghiên cứu độc chất sau thực chuột có thẩm quyền miễn dịch để đảm bảo chắn độ an toàn quy trình giảm thiểu tối đa hiệu ứng phụ liên quan tới việc điều trị gen trị liệu E1A Các thử nghiệm lâm sàng Pha I ung thư vú ung thư buồng trứng Phân phối qua khoang thể Để đánh giá tính khả thi việc sử dụng E1A cho bệnh nhân ung thư biểu mức HER-2, TNLS pha I thực nhóm bệnh nhân ung thư vú ung thư buồng trứng giai đoạn muộn Phức hợp E1A/DC-Chol cationic liposome (DCC-E1A) tiêm vào khoang ngực vào màng bụng Những kết thu từ nghiên cứu pha I chứng minh độc tính giới hạn (có thể DCC-E1A E1A) Sự chuyển gen hiệu (xác định biểu mRNA E1A khối u tổ chức vị trí xa), điều hòa xuống HER-2, việc xử lý với DCC-E1A liên quan tới thu nhỏ khối u giảm quần thể TB tăng sinh tăng tế bào apoptotic Thật thú vị việc tăng TB apoptotic lại tương quan với việc tăng nồng độ yếu tố hoại tử khối u α (TNF-α) Vì E1A làm bất hoạt NF-kB, phân tử kháng apoptotic cảm ứng TNF-α nên có khả việc tăng tế bào apoptotic E1A gây nhạy cảm với apoptosis cảm ứng TNF-α Tổng cộng có 18 bệnh nhân ung thư vú giai đoạn muộn (n = 6) ung thư buồng trứng (n = 12) xử lý với DCC - E1A, có bệnh nhân ung thư vú không thấy chứng bệnh lý u, bệnh nhân có đáp ứng thấp hơn, bệnh nhân bênh ổn định bệnh nhân bệnh có tiến triển Những kết chứng minh tính khả thi thử nghiệm DCCE1A Phân phối khối u Trong thử nghiệm pha I với bệnh nhân có khối u vú tái phát phẫu thuật cắt bỏ điều trị DCC-E1A thông qua việc tiêm vào khối u Không quan sát thấy độc tính liên quan tới giới hạn liều thuốc, hiệu ứng phụ liên quan tới thuốc Sự biểu E1A phát thấy mẫu khối u sau xử lý với DCC-E1A Có bệnh nhân ung thư vú sau điều trị rõ ràng khồng thấy chứng bệnh lý khối u vị trí u Pha II ung thư đầu cổ - phân phối khối u Đã hoàn tất nghiên cứu pha I điều trị với DCC-E1A cho bệnh nhân ung thư đầu cổ Những kết nghiên cứu rõ độc tính giới hạn liều, liều dùng thấp liều dung nạp tối đa Sự biểu E1A điều hòa xuống HER-2 thấy sinh thiết khối u xử lý với DCC-E1A Sau thành công nghiên cứu pha I, nghiên cứu pha II đa trung tâm hoàn tất DCC-E1A sử dụng tác nhân đơn phân phối cách tiêm vào khối u Trong số 24 bệnh nhân ung thư đầu cổ tái phát, phẫu thuật có bệnh nhân (1/24 = 4,2%) có đáp ứng đầy đủ 37,5% (9 24 bệnh nhân) có đáp ứng khách quan tiến tới trạng thái bệnh ổn định Tác dụng phụ thông thường đau vị trí tiêm, phản ứng phụ liên quan tới việc phân phối DCC-E1A Những kết cho thấy, tiêm vào khối u DCC-E1A an toàn dung nạp tốt Trên sở kết khích lệ từ thử nghiệm pha II trị liệu DCC-E1A kết hợp với xạ trị ion hóa hóa trị liệu khả thi tương lai gần GEN KHÁNG DI CĂN p202 p202 Protein p202 mã hóa cụm 200 gen cảm ứng interferon chuột Họ protein có đoạn tương đồng phần gồm 200 amino acid Cho tới nay, p202 thành viên xác định đặc tính kỹ họ protein gồm p203, p204 D3 chuột MNDA, IFI16 AIM2 người Về mối liên quan bệnh lý học p202 người ta phát p202 gen ứng cử viên dùng mô hình lupus ban đỏ hệ thống chuột Tuy nhiên, hoạt tính người chưa xác định P202 phosphoprotein 52- kDa gắn với chất nhiễm sắc nhân, chủ yếu liên quan tới tương tác protein – protein Đáng ý số chất điều hòa phiên mã quan trọng gồm gen u nguyên bào võng mạc (Rb), E2F-1, E2F-4, p107, p130, Fos/Jun (AP-1), protein gắn p53 (53BP), c-Myc, MyoD myogenin có liên quan thể chất với p202 in vitro in vivo Những quan sát làm rõ ý nghĩa mặt chức p202 việc điều hòa chu kỳ tế bào, truyền tín hiệu, apoptosis biệt hóa Nhìn chung tương tác protein - protein liên quan tới p202 làm ức chế hoạt động promoter Trong đa số trường hợp, ngăn chặn trực tiếp liên kết yếu tố phiên mã với thành phần DNA nguồn p202 đáp ứng cho việc kiềm chế phiên mã Tương tự ức chế tăng trưởng cảm ứng interferon, biểu dai dẳng p202 rõ ràng làm ức chế tăng trưởng tế bào loài gặm nhấm tế bào ung thư người Sự ức chế tăng trưởng qua trung gian p202 có liên quan tới việc làm yếu chuyển tiếp chu kỳ G1/S Mặc dầu chế phân tử ức chế tăng trưởng qua trung gian p202 chưa rõ lắm, người ta quan sát thấy p202 gắn với số phân tử điều hòa chu kỳ tế bào quan trọng in vitro in vivo Rb, p107, p130, E2F-1, E2F-4 c-Myc sáng tỏ tác động p202 việc điều hòa chu kỳ tế bào Chẳng hạn p202 tương tác với E2F-1, làm thủ tiêu hoạt hóa phiên mã qua trung gian E2F-1 gen pha S DHFR, b-Myc PCNA, kết việc tiến vào pha S bị suy giảm Ngoài ức chế tăng trưởng, gần người ta rõ biểu p202 làm thúc đẩy apoptosis Sự xuất apoptosis qua trung gian p202 phụ thuộc vào hoạt hóa caspase Dựa sở ức chế tăng trưởng hoạt hóa tiền apoptosis p202 mà người ta thiết lập nghiên cứu tiền lâm sàng để đánh giá tính khả thi việc sử dụng p202 gen trị liệu điều trị khối u thực nghiệm Các nghiên cứu gen trị liệu tiền lâm sàng với p202 Mô hình ung thư vú Ung thư vú di bệnh nguy hiểm chết người Những cách điều trị thông thường hóa trị, xạ trị có kết hợp không kết hợp với phẫu thuật đạt kết hạn chế Các nhà khoa học rõ sử dụng vec tơ biểu p202 phức hợp polyethylenimin mô hình ghép ngoại lai ung thư vú có hoạt tính kháng u ex vivo Vì ung thư vú bệnh di nên cần phải phát triển hệ thống chuyển giao toàn hệ thống qua đường tĩnh mạch gen p202 tới vị trí u tiên phát hay di Kết cục là, phải tiến hành phương pháp so sánh hiệu lực việc điều trị gen trị liệu p202 với việc sử dụng adenovirus tái tổ hợp biểu p202 phức hợp liposom CMV-p202/SN2 mô hình ghép ngoại lai ung thư vú CMV-p202 vec tơ biểu p202 hướng dẫn promoter cytomegalovirus (CMV) Công thức SN2 liposom test cho thấy có hiệu ứng chuyển gen cao mô hình gen trị liệu toàn hệ thống động vật Người ta thấy tăng trưởng khối u giảm đáng kể nhóm điều trị Ad-p202 nhóm điều trị CMV-p202/SN2 Những số liệu có ý nghĩa lớn CMV-p202/SN2 Ad-p202 vượt qua nhiều hàng rào miễn dịch, sinh lý học cấu trúc bên bên mạch máu để tới tế bào ung thư giải phóng hiệu ứng trị liệu so sánh với mô hình trị liệu khác tiêm vào khối u Những kết chắn khẳng định tính khả thi cuả việc điều trị ung thư vú gen trị liệu p202 toàn hệ thống Khi kiểm tra khối u xử lý với Ad-p202 CMV-p202/SN2 thử nghiệm hóa miễn dịch tổ chức người ta thấy mức protein p202 tương quan với phạm vi apoptosis khối u mô hình xác định thử nghiệm khía đánh dấu (nick and labeling) dUTP qua trung gian deoxynucleotid transferase tận đầu (terminal) làm biến màu đuôi mẩu DNA Quan sát phù hợp với dẫn liệu in vitro thâm nhiễm Ad-p202 làm cảm ứng apoptosis Vì thế, apoptosis cảm ứng p202 góp phần vào hoạt động kháng u in vivo nói chung Ngoài người ta thấy giảm sút mạnh nhiều yếu tố sinh mạch, yếu tố tăng trưởng nội mạch (VEGF) khối u vú xử lý với CMV-p202/SN2 Ad-p202 so sánh với cách điều trị đối chứng Kết phù hợp với quan sát trước cho thấy biểu p202 làm kiềm chế di tạo mạch khối u tuyến tụy Vì thế, kết lại khẳng định p202 gen trị liệu tiềm thích hợp cho gen trị liệu ung thư vú Mô hình ung thư tụy Ung thư tụy loại ung thư “hiếu chiến” cao nguyên nhân hàng đầu gây tử vong ung thư nước Phương Tây Nguy bệnh dự đoán năm 1999 có 28.000 trường hợp mắc chẩn đoán hầu hết trường hợp bị chết Nguyên nhân tiên đoán nghèo nàn bệnh nhân tới khám bệnh giai đoạn muộn Thời gian sống sót trung bình dao động từ đến tháng tỷ lệ sống sót năm 2% Hiện chưa có phương pháp điều trị hữu hiệu loại bệnh nguy hiểm phương pháp điều trị thông thường hóa trị xạ trị đạt kết hạn chế Vì chiến lược điều trị loại bệnh nhu cầu khẩn thiết Các số liệu trước cho thấy p202 có khả kiềm chế biến nạp (ức chế tăng trưởng môi trường thạch mềm [soft agar]) tế bào ung thư tuyến tụy - Pancreatic cancer cell –[Panc-1]) in vitro Có khả p202 kiềm chế sinh u in vivo Để test hiệu ứng trị liệu p202 mô hình ghép ngoại lai ung thư tụy, nhà khoa học thực thí nghiệm sinh u quan thử nghiệm tạo da mô hình chuột thấy mô hình, sinh u tế bào Panc-1 biểu p202 giảm mạnh so với tế bào ung thư tụy cha mẹ (parental) Đặc biệt mô hình gây ung thư quan thực nghiệm – orthotopic) tế bào Panc-1 biểu p202 có tần suất tạo u thấp mà chuột có khối u lại có tỷ lệ sống sót cao đáng kể so với chuột mang u Panc-1 Những kết chứng minh rõ ràng p202 có hoạt tính kháng u cách tiềm in vivo Kiềm chế di p202 Khi kiểm tra tăng trưởng khối u tụy người ta thấy 40% chuột mang khối u Panc-1 20% chuột mang khối u vec tơ đối chứng có di gan Trái lại di gan phát chuột có có khối u biểu p202 Kết cho thấy p202 có hoạt tính kháng di in vivo Để test giả thuyết in vitro, người ta áp dụng thí nghiệm buồng đôi (double chamber assay) tế bào test phát thấy buồng phía trên, buồng phía đáy làm đầy với môi trường có chứa chất lôi hóa học (chemoattractant) laminin Một màng lót matrigel dùng để tách biệt buồng Để dịch chuyển từ buồng xuống buồng dưới, tế bào phải vượt qua hàng rào (tức phải kiến tạo lại khung màng bản) cách sản xuất protease tiết MMP trước xuyên qua lỗ màng Vì thí nghiệm dường mô lại trình di nhiều tế bào phát thấy buồng dưới, rõ ràng tế bào test có tiềm di Dựa quy luật người ta thấy tế bào biểu p202 có khả thấm nhập vào màng so với tế bào Panc-1 cha mẹ Quan sát in vitro phù hợp với dẫn liệu in vivo ủng hộ cho giả thuyết p202 kiềm chế di Cũng giống hoạt tính kháng di p202, nhà khoa học phát hoạt tính MMP-2, promoter di giảm tế bào Panc-1 biểu p202 Kiềm chế tạo mạch p202 Các tài liệu nêu rõ tăng trưởng di khối u đòi hỏi phải có tăng trưởng liên tục mạch máu Để kiểm tra xa hoạt tính kháng u qua trung gian p202 khối u tuyến tụy người ta phải phân tích hình thành mạch máu khối u Panc-1 khối u biểu p202 Các nhà khoa học phát nhiều mạch máu giảm đáng kể khối u biểu p202 so sánh với khối u Panc-1 Phù hợp với giảm tạo mạch, nhà khoa học phân tích hóa miễn dịch tổ chức phát biểu yếu tố tạo mạch interleukin (IL-8) VEGF giảm khối u có biểu p202 Vì p202 nhìn chung hiểu chất điều hòa âm phiên mã nên phải test xem có kiềm chế protein Il-8 hay VEGF khối u p202 hay không (vì p202 kiềm chế phiên mã) Các nhà khoa học làm thí nghiệm với việc đồng thâm chuyển vec tơ biểu p202 với luciferase hướng dẫn promoter IL-8 hay VEGF vào tế bào Panc - Thật thú vị phát thâm chuyển p202 gây ức chế hoạt tính promoter IL-8 VEGF Vì quan sát chứng tỏ p202 có gây kiềm chế biểu IL-8 VEGF mức độ phiên mã Tập hợp dẫn liệu thu khẳng định biểu p202 có liên quan tới giảm tạo mạch góp phần vào làm giảm tiềm tăng trưởng di khối u biểu p202 Phân phối p202/liposom để kiềm chế tăng trưởng khối u mô hình ghép ngoại lai ung thư tụy Để test hiệu ứng trị liệu việc xử lý với p202 mô hình gen trị liệu tiền lâm sàng, nhà khoa học xử lý khối u Panc - da cách tiêm thẳng vào khối u CMV - p202 với hệ thống chuyển gen phi virus SN2 Các nhà khoa học chứng minh việc xử lý với CMV - p202/SN2 làm ức chế đáng kể tăng trưởng khối u so sánh với xử lý đối chứng Kiểm tra sinh thiết khối u phương pháp hóa miễn dịch tổ chức người ta thấy mức biểu protein p202 tương quan với phạm vi apoptosis khối u xử lý với CMV p202/liposom Như lại lần cho thấy có phù hợp với ý kiến cho apoptosis qua trung gian p202 góp phần vào hoạt tính kháng u nói chung Kết cung cấp sở khoa học cho khảo sát xa với việc áp dụng gen trị liệu sở p202 điều trị ung thư tụy ĐỊNH HƯỚNG TƯƠNG LAI Trong chương tóm lược phát liên quan tới kiềm chế di gen liệu pháp E1A p202 Cả gen có tiềm kiềm chế sinh u, di tạo mạch Đối với E1A, dẫn liệu sơ thu TNLS pha II khích lệ Cả E1A p202 làm cho TB ung thư nhạy cảm với apoptosis cảm ứng TNF-α chiếu xạ tia γ dẫn đến tăng cường apoptosis Những dẫn liệu nêu lý cần phải phát triển trị liệu phối hợp E1A (hoặc p202) với TNF-α (hoặc chiếu xạ tia γ) để có hiệu ứng trị liệu tốt so với việc sử dụng tác nhân đơn lẻ Có khả E1A p202 kết hợp với tác nhân hóa trị làm hoạt hóa NF - kB để làm tăng hiệu lực tiêu diệt khối u Hơn nữa, xử lý toàn hệ thống điều bắt buộc điều trị khối u di nên việc đích đặc hiệu làm tối thiểu hóa hiệu ứng phụ tiềm tàng Một cách để vượt qua trở ngại biểu gen E1A p202 phải đặt kiểm soát promoter đặc hiệu u chuyển giao hệ thống chuyển gen đặc hiệu u Vì biểu đặc hiệu E1A hay p202 vị trí u lại kết hợp với tác nhân hóa trị liệu thích hợp nên làm tế bào ung thư nhạy cảm với apoptosis có lẽ làm tăng hiệu ứng tiêu diệt khối u di