Chương XI GEN TRỊ LIỆU KHÁNG TẠO MẠCH TRONG UNG THƯ MỞ ĐẦU Rõ ràng tăng trưởng khối u phụ thuộc vào tạo mạch, trình phát triển liên tục tế bào nội mô từ mạch máu sẵn có từ trước In situ, khối u có đường kính nhỏ mm tồn trạng thái tiền huyết quản (prevascular state) bị hạn chế khả tăng trưởng (với điều kiện không cần tưới máu từ nguồn cung cấp) Không giống trình tân huyết quản hóa, khối u “im lìm” kích cỡ hiển vi nằm yên lặng nhiều năm Khi tăng thêm mạch máu làm tăng khả cung ứng oxy chất chuyển hóa cho khối u loại chất thải loại Tuy nhiên, mạch máu tạo thành tạo thuận lợi cho tẩu thoát tế bào khối u tới vùng xa thể, phát hình thành di Bằng chứng cho thấy mạch máu phát triển từ tế bào tiền thân nội mô có nguồn gốc từ tủy xương góp phần vào việc làm tăng trưởng mạch máu khối u Vì thế, ức chế tạo mạch khối u trị liệu tiềm quan trọng tất dạng ác tính, kể khối u đặc tủy xương (với bệnh ác tính máu) Việc ức chế hay kìm hãm mao mạch đơn lẻ đụng chạm tới tăng trưởng nhiều tế bào khối u Các kiểu trị liệu thiết kế nhằm ức chế hình thành mạch máu có lợi nhắm vào tế bào nội mô ổn định mặt di truyền hỗ trợ cho tăng trưởng khối u khả kháng lại cách trị liệu kháng tạo mạch Trái lại, hóa trị liệu chuẩn lại thiết kế nhằm công tế bào khối u không ổn định mặt di truyền, mà dẫn đến việc kháng lại nhanh chóng tác nhân trị liệu hóa học Tạo mạch trình gồm nhiều bước phức tạp, liên quan đến trình sinh lý học bình thường người trưởng thành bao hàm hệ thống sinh sản phụ nữ làm lành vết thương Ngoài việc làm cho khối u tăng trưởng, tạo mạch giữ vai trò quan trọng nhiều trình bệnh lý bao gồm viêm khớp, lạc nội mạc tử cung, bệnh võng mạc đái tháo đường thoái hóa Quá trình tạo mạch mô tả kỹ nhiều tài liệu Các tế bào nội mô mao mạch tiểu tĩnh mạch mao mạch nhận kích thích tiền tạo mạch từ yếu tố tăng trưởng hòa tan bao gồm yếu tố tăng trưởng nội mô huyết quản (vascular endothelial growth factor – VEGF) yếu tố tăng trưởng nguyên bào sợi (basic fibroblast growth factor – bFGF) với phương thức cận tiết (paracrine) từ tế bào khối u bao quanh tế bào mô đệm khoang ngoại bào Sự thoái hóa màng serin protease plasmin metalloproteinase gian bào (matrix metalloproteinases – MMP) sau hoạt hóa tế bào nội mô cho phép tế bào rời khỏi mạch máu thiết lập để hướng tới kích thích tạo mạch Những tế bào nội mô yên lặng cách bình thường trở nên tăng sinh nhanh chóng theo hướng phát triển chồi (mầm) mao mạch Các tế bào nội mô đâm mầm tạo nên ống nối với mạch máu khác cho phép máu lưu thông Các mao mach nguyên thủy chưa hỗ trợ tế bào quanh mạch bắt đầu có biểu hình thành màng Hoạt hóa receptor angiopoietin 1/Tie (tyrosin kinase 2) khởi đầu yên lặng nội mô, trưởng thành mạch với hoàn tất màng tăng tế bào trung mô dần trở thành tế bào quanh mạch (pericyte) Không giống tạo mạch sinh lý học mô bình thường, mạch máu khối u không trải qua trình sinh trưởng theo kiểu Những mạch máu trạng thái chưa trưởng thành bị rò rỉ tác động angiopoietin – kháng chủ vận angiopoietn 1, tạo tín hiệu không ổn định mạch máu, thúc đẩy sửa đổi huyết quản bổ sung có diện yếu tố tăng trưởng tạo mạch Tân huyết quản hóa khối u không đơn giản phát sinh từ việc biểu mức yếu tố tăng trưởng tạo mạch Folkman Hanahan đề xuất vấn đề diện “sự chuyển đổi tạo mạch” (angiogenic switch) để mô tả chuyển dịch cân yếu tố dương âm kiểm soát tăng trưởng, tăng sinh nội mô hình thành huyết quản khối u Sự điều hòa gen thông qua việc biểu thấp yếu tố điều hòa âm tạo mạch góp phần vào việc phát triển kiểu hình tạo mạch (Hình 11.1) Hình 11.1 Cơ chế tạo mạch khối u Các yếu tố tiền tạo mạch tạo tế bào khối u, bao gồm yếu tố tăng trưởng nội mô huyết quản (VEGF) kích thích tế bào nội mô yên lặng cạnh mao mạch có từ trước Các tế bào nội mô hoạt hóa tăng sinh tiết enzym proteolytic làm thoái hóa chất ngoại bào, cho phép tế bào di cư tới khối u Các tế bào di cư tạo màng dọc theo mạch máu mọc Hơn nữa, tế bào tiền thân nội mô tuyển mộ từ tủy xương vào mao mạch tạo thành Sự ổn định hóa mạch số lượng tế bào bao quanh, thu hút yếu tố tăng trưởng có nguồn gốc từ tiểu cầu (platelet-derived growth factor -PDGF) giải phóng tế bào nội mô (Theo Steve Gyorffy, Jack Gauldie, A Keith Stewart Xiao-Yan Wen (2005) Cancer Gene Therapy Human Press Totowwa, New Jersey) Ngoài yếu tố tăng trưởng tạo mạch VEGF bFGF, 28 chất trung gian (mediator) tạo mạch xác định Trái ngược với yếu tố 50 chất ức chế tạo mạch nội sinh biết đến Nhiều số chất ức chế đoạn proteolytic đại phân tử xác định có hoạt tính kháng tạo mạch, bao gồm: angiostatin, endostatin, canstatin, vasostatin peptid xác định tumstatin endorepellin Trong mô hình tiền lâm sàng chuột, phân phối toàn hệ thống chất ức chế tạo mạch protein tái tổ hợp làm thu nhỏ khối u Tuy nhiên, ngoại trừ cytokin kháng tạo mạch, chất ức chế angiostatin endostatin lại an toàn, thời gian phân phối kéo dài phản ứng phụ xảy Điều tính đặc hiệu chất ức chế tế bào nội mô góp phần vào việc tạo mạch khối u Các nghiên cứu động vật rõ protein kháng tạo mạch tái tổ hợp phân phối lặp lặp lại nhiều lần liều lượng cao làm nhỏ lại khối u Những protein tái tổ hợp khó sản xuất tinh chế với lượng lớn để sử dụng thực hành lâm sàng Các protein tái tổ hợp không ổn định đời sống bán phần huyết tương ngắn có biến đổi glycosyl hóa Với việc đầu tư kỹ thuật tài cho sản xuất chất ức chế tạo mạch tái tổ hợp nội sinh cho ứng dụng lâm sàng gen trị liệu trì mức protein lưu hành sản xuất trực tiếp từ tế bào bệnh nhân xử lý với vec tơ CÁC CHIẾN LƯỢC GEN TRỊ LIỆU KHÁNG SỰ TẠO MẠCH Hai chiến lược gen trị liệu đề xuất để chuyển giao protein kháng tạo mạch Chiến lược thứ liên quan tới gen trị liệu hệ thống, theo vectơ tiêm vào bệnh nhân để tạo nên chất ức chế tạo mạch lưu thông nồng độ cao Lý mô hình tiền lâm sàng chuột TNLS pha I gần không thấy có độc tố tế bào sử dụng protein angiostatin endostatin Tuy nhiên, độc tế bào việc phân phối toàn hệ thống vec tơ hiệu ứng phụ tiềm ẩn, đặc biệt sử dụng vec tơ virus Chiến lược thứ hai gen trị liệu kháng tạo mạch hướng khối u nhằm tăng mức protein kháng tạo mạch môi trường khối u Cách tiếp cận nhằm trì protein mức cao khối u hạn chế độc tế bào cho hệ thống đặc tính sinh học protein vec tơ Tuy nhiên, giới hạn tiềm tàng xảy với cách tiếp cận này, đặc biệt điều trị khối u mà chưa thể áp dụng chuyển giao vec tơ xử lý di Với trị liệu kháng tạo mạch khác bao gồm protein tái tổ hợp, kháng thể đơn dòng chất ức chế chuyển tải tín hiệu có trọng lượng phân tử nhỏ, gen chuyển tiềm năng,… thể loại chất ức chế “trực tiếp” hay “gián tiếp” kháng tạo mạch Các chất ức chế trực tiếp nhắm đặc hiệu vào tế bào nội mô khối u, cách tiếp cận gián tiếp lại nhắm vào khả tế bào khối u tế bào người sản sinh yếu tố tăng trưởng tạo mạch VEGF bFGF Những yếu tố làm phức tạp thêm cho phương pháp gen trị liệu kháng tạo mạch áp dụng dạng khối u khác Mặc dầu việc ức chế tân huyết quản hóa nhận thức trị liệu phổ biến ung thư, thực tế thành công gen trị liệu kháng tạo mạch phụ thuộc vào khả tối ưu hóa hệ thống vec tơ với gen chuyển phù hợp đặc hiệu cho dạng khối u Gen trị liệu kháng tạo mạch sử dụng sinh phẩm không virus plasmid DNA trần chiến lược có liên quan tới virus adenovirus, virus adeno liên hợp, retrooncovirus, lentivirus sử dụng nhiều mô hình khối u loài gặm nhấm (Bảng 11.1) Phần lớn cách tiếp cận sử dụng gen chuyển trực tiếp gây độc tế bào tới tế bào nội mô khối u angiostatin endostatin Những cách tiếp cận khác nhằm kiểm soát ức chế yếu tố tăng trưởng tiền tạo mạch trình nới rộng việc nhắm tới đường MMP serin protease GEN TRỊ LIỆU CƠ SỞ TẾ BÀO VÀ PLASMID Gen trị liệu dựa sở plasmid DNA đóng gói chất dẻo biểu endostatin người có hiệu ứng làm chậm tăng trưởng Renca da ung thư phổi Lewis (Lewis lung carcinoma – LLC) chuột Công trình chứng minh tiêm vào phức hợp plasmid – polymer trì mức endostatin lưu thông phát chuột sau 14 ngày xử lý Một mô hình di phổi chuột xử lý sơ việc tiêm plasmid vào cơ, sau tuần tiêm lại làm giảm đáng kể hạch u phổi Những kết nghiên cứu chứng minh tính khả thi việc tiêm lặp lại phức hợp plasmid nhằm cảm ứng vừa phải ức chế tăng trưởng khối u mà không làm phát triển ĐUMD vec tơ Vì ĐUMD lại an toàn pha chế tương đối dễ dàng nên phức hợp plasmid – polymer dùng cho việc chuyển giao đặc tính hấp dẫn hệ thống Tiêm cục vec tơ plasmid – polymer biểu angiostatin endostatin làm giảm tăng trưởng khối u 36 49%, sau lần tiêm khối u mô hình ung thư vú Trong công trình tiến hành song song, phức hợp plasmid – polymer biểu endostatin phân phối toàn hệ thống qua tĩnh mạch làm giảm kích cỡ khối u 40% so với đối chứng Trong mô hình ung thư vú chuột chuyển gen, gen ung thư HER/neu điều khiển promoter virus khối u vú chuột (murine mammary tumor virus – MMTV), vec tơ plasmid-lisosom biểu angiostatin tiêm vào tuyến vú chuột trước phát có khối u hình thành Chuột nhận gen angiostatin giảm đáng kể số lượng kích cỡ khối u so với đối chứng Không di phổi chuột xử lý, điều chứng tỏ có hiệu ứng hệ thống hiệu ứng cục trị liệu kháng tạo mạch Cấy ghép tế bào thâm chuyển ex vivo có plasmid mang DNA bổ cứu angiostatin endostatin làm ức chế tăng trưởng khối u cách cục hệ thống Thâm chuyển khối u ác tính mô liên kết có nguồn gốc từ nguyên bào sợi (sarcoma sợi) T241 chuột tạo mạch cao với angiostatin kiềm chế tăng trưởng khối u nguyên phát ức chế phát triển di nhỏ phổi chuột Khi tiêm da tế bào thận chuột hamster sơ sinh thâm chuyển với andostatin dạng vi đóng gói hạt alginat – poly – L- lysin làm ức chế tăng trưởng u nguyên bào đệm người mô hình chuột nude Khi tiêm da đơn 2x105 tế bào công nghệ hóa tiết liên tục endostatin ức chế tăng trưởng khối u tới 62% tuần Trong mô hình ung thư não, plasmid endostatin đóng gói thâm chuyển 293 tế bào cấy vào não làm giảm hình thành mạch máu khối u, tăng sống sót động vật tới 85% Các tế bào cấy ghép biến đổi tiết endostatin tháng Sự biểu dài hạn phát triển ĐUMD kháng lại TB đóng gói mức cực tiểu đặc tính hấp dẫn tiến trình gen trị liệu kháng tạo mạch Các tế bào gốc hay tế bào tiền thân nội mô rõ quan trọng tân huyết quản hóa khối u Có khả TB tải nạp với gen kháng tạo mạch phương tiện chuyển giao quan trọng, tiêm vào toàn hệ thống, tốt tới vùng có tăng trưởng khối u Trị liệu tế bào theo kiểu thực hành với tế bào tiền thân nội mô tự thân phân lập từ tủy xương bệnh nhân trực tiếp từ máu Bảng 11.1 Những ví dụ gen trị liệu kháng tạo mạch mô hình ung thư loài gặm nhấm Vec tơ Plasmid Các TB thâm chuyển plasmid Tế bào gốc tiền thân nội mô Adenovirus Virus adeno liên hợp Lentivirus/các tế bào gốc Virus gây bệnh bạch cầu chuột Moloney Gen Endoststin Angiostatin Endoststin, angioststin Endostatin Throbospondin VEGFR2 (Flk-1) hòa tan Angiostatin IL-12 Endostatin VEGFR1 (Flt-1) hòa tan VEGFR2 (Flk-1) hòa tan TIE- TIMP VEGF antisense Angiostatin VEGFR1 (Flt—1) hòa tan (Tie2/Tek promoter/thymidine kinase Endostatin, angiostatin Yếu tố tiểu cầu (PF4) Flk-1 âm tính ưu Một cách tiếp cận ex vivo khác sử dụng “nhà máy” tế bào giàn cấy ghép Những cấy ghép màng bụng phiến polyglycolic acid dễ phân hủy gieo với nguyên bào sợi NIH3T3 có retrovirus biểu throbospondin-2 chứng minh có ức chế tạo mạch tăng trưởng khối u ung thư tế bào vảy, u hắc sắc tố mô hình ghép ex vivo TB thâm chuyển nghiên cứu người nhằm ức chế tân huyết quản hóa khối u Điều phụ thuộc vào việc phát tế bào thích hợp để cấy ghép an toàn vào vật chủ Một chiến lược đích sử dụng hạt nano báo cáo Hood cộng phát triển hạt nano cationic gắn với ligand hữu phân tử nhỏ nhắm tới integrin αv β3 nội mô tạo mạch Chuyển giao qua tĩnh mạch αv β3 ligand –NP cộng hợp với phân tử truyền tín hiệu Raf đột biến khả gắn với adenosin triphosphat làm ngăn chặn đường tín hiệu nội mô tạo mạch, dẫn đến apoptosis tế bào nội mô có liên quan khối u cảm ứng thu nhỏ khối u tiên phát khối u di Sử dụng hạt nano cho lợi vượt trội vec tơ virus chúng không sinh miễn dịch áp dụng lặp lại với liệu trình điều trị kéo dài dai dẳng khối u di Hình 11.2 Các phương thức ức chế gen trị liệu kháng tạo mạch trực tiếp Gen trị liệu kháng tạo mạch nhắm tới tế bào nội mô khối u hoạt động Các vec tơ tiêm trực tiếp vào khối u chuyển giao toàn hệ thống qua hệ tuần hoàn Các tế bào tiền thân nội mô tải nạp ex vivo tiêm tĩnh mạch tới vị trí tạo mạch, tạo nên việc sản xuất cục chất ức chế tạo mạch Sự ức chế tăng trưởng mạch hoàn tất với việc gen chuyển biểu chất ức chế tế bào nội mô, ngăn chặn yếu tố tăng trưởng nội mô tiền tạo mạch làm trở ngại phân giải chất ngoại gian bào (Theo Steve Gyorffy, Jack Gauldie, A Keith Stewart Xiao-Yan Wen (2005) Cancer Gene Therapy Human Press Totowwa, New Jersey) Chuyển giao chất ức chế tạo mạch adenovirus Các vec tơ adenovirus hệ khiếm khuyết chép sử dụng chủ yếu nghiên cứu gen trị liệu kháng tạo mạch Những vec tơ có nhiều lợi cho gen trị liệu khả thâm nhiễm tế bào chép không chép, biểu gen thời cao, không gắn với nguy cho người có khả sản xuất virus độ chuẩn cao Tuy nhiên, việc áp dụng vec tơ bị hạn chế túc chủ phát triển ĐUMD thể dịch tế bào sau tiếp nhận vec tơ lần Một vec tơ adenovirus typ biểu angiostatin chuột (Ad-angiostatin) mô tả Vec tơ rõ in vitro có hiệu ứng ức chế tăng trưởng tế bào nội mô nuôi cấy tân huyết quản hóa mô hình matrigel tạo mạch điều khiển bFGF Bổ sung thêm 109 pfu virus tạo apoptosis cho tế bào nội mô di cư nút matrigel (matrigel lug) tuần sau cấy ghép da Trong mô hình ung thư vú di phổi làm giảm đáng kể gánh nặng khối u làm chậm lại xuất hạch khối u nhìn thấy Sự biểu mức cục 5-10 ngày nhờ việc tiêm trực tiếp Ad-angiostatin vào chuột chuyển gen mang khối u vú cấy ghép gen chuyển làm chậm lại tăng trưởng khối u tăng sống sót chuột xử lý tuần so với đối chứng Mật độ vi mạch máu xác định nhuộm CD31 thấy giảm đáng kể, hoại tử apoptosis lại tăng lên khối u xử lý với angiostatin Những kết tương tự phát thấy sử dụng cytokin kháng tạo mạch tiềm interleukin -12 (IL-12) biểu cục khối u Động học tăng trưởng khối u tuần khởi đầu tương tự khối u xử lý với Adangiostatin Ad-IL-12 Không giống chuột xử lý với angiostatin, có phần trăm chuột xử lý với IL-12 tiếp tục thoái lui hoàn toàn khối khu Những thoái lui nhờ khả kích thích miễn dịch cytokin mà tạo nên ĐUMD đặc hiệu tế bào T Những kết từ mô hình ung thư vú tiên phát di chứng minh biểu angiostatin làm chậm tăng trưởng khối u, chưa đủ để cảm ứng thoái lui hoàn toàn khối u thiết lập Tổ hợp angiostatin với IL-12 làm giảm tiềm mật độ vi mạch máu ức chế tăng trưởng khối u Những chuột xử lý với trị liệu tổ hợp tăng đáng kể tổi thọ nói chung có thoái lui khối u Những chuột xử lý với Ad-angiostatin phân phối qua mũi màng bụng hay đưa thẳng vào khối u tăng trọng tới 30% Tác dụng phụ xảy vòng tuần phân phối vec tơ cho chuột FVB chuột C57Bl/6 Kiểm tra chuột thấy có suy giảm chức buồng trứng giảm mức estradiol progesteron giống khởi đầu thời kỳ mãn kinh Những dẫn liệu khẳng định chắn angiostatin lưu thông mức cao có tác động tới tạo mạch sinh lý học bình thường hệ sinh sản nữ giới Những kết rõ việc theo dõi cẩn thận bệnh nhân nữ tuối sinh đẻ mà lại tiến hành gen trị liệu kháng tạo mạch đòi hỏi cần thiết Nhiều nhóm nghiên cứu báo cáo hiệu lực chuyển gen endostatin adenovirus nhiều mô hình khối u Những kết Wen cộng rõ việc phân phối toàn hệ thống vec tơ qua tĩnh mạch có protein endostatin lưu thông mức cao tháng chuột 129/J Trái lại, chuột Balb/c nhận lượng vec tơ giống hệt lại có mức endostatin thấp nhiều biểu thời gian ngắn Trong mô hình u phổi di căn, phân phối vec tơ toàn hệ thống làm giảm đáng kể di EOMA so với chuột xử lý với vec tơ đối chứng Tuy nhiên, không thấy giảm tăng trưởng u sắc tố di B18 sử dụng liều virus tương tự chuột C57Bl/6 Trong mô hình di gan từ trực kết tràng, gen trị liệu endostatin adenovirus bảo vệ 25% chuột không phát triển tổn thương di Nghiên cứu tận dụng tính hướng gan vec tơ adenovirus nhằm tạo nên môi trường tạo mạch nghèo nàn cho việc phát triển di kết tràng Phân phối trước vec tơ adenovirus có hiệu ứng ức chế phát triển khối u mô hình ung thư vú chuột chuyển gen Sự tạo mạch thông qua việc phân phối toàn hệ thống vec tơ làm chậm lại chuyển đổi từ tổn thương vú xâm lấn tới ung thư xâm lấn Gen trị liệu adenovirus sử dụng receptor kháng chủ vận nhắm vào yếu tố tăng trưởng tạo mạch báo cáo có hiệu Các vec tơ biểu receptor hòa tan VEGF chứng minh kết hứa hẹn mô hình động vật Tiêm vec tơ sản xuất VEGFR1 hòa tan (Flt-1 [ Fms-like tyrosine kinase) hòa với phần Fc IgG ức chế tăng trưởng khối u phổi tiết VEGF mức cao Các kháng chủ vận VEGF lưu thông phát 21 ngày không phát thấy độc tố tế bào động vật Flt-1 dạng hòa tan có hiệu ứng làm giảm tăng trưởng u nguyên bào sợi T241 LLC tiêm vec tơ qua đường tĩnh mạch Báo cáo chứng minh hiệu vec tơ adeno sản xuất VEGFR2 hòa tan (Flk-Fc [ fatal liver kinase- Fc]) để ức chế tăng trưởng khối u đại tràng chuột SCID Những kết chứng minh hiệu receptor VEGF việc ức chế tăng trưởng dạng khối u khác Tuy nhiên, chưa giải thích độc tính gây nên bệnh cổ trướng sau sử dụng vec tơ Flt-1 Adenovirus biểu Tie hòa tan ức chế tăng trưởng khối u tiên phát di Lin cộng chứng minh chuyển giao toàn hệ thống vec tơ tác động với phương thức bắt chước tác động angiopoietin 2, bao gồm tan dã mạch máu dẫn đến việc thu nhỏ mạch máu khối u Người ta nghiên cứu việc chuyển giao chất ức chế mô metalloproteinase (tissue inhibitor of metalloproteinase- TIMP) – kháng chủ vận tự nhiên MMP việc ức chế xâm lấn tạo mạch tế bào khối u Các vec tơ biểu TIMP1 TIMP2 ức chế xâm lấn khối u tế bào ung thư tụy tạng chuột adenovirus phân phối sớm vào khối u phát triển Tiêm trực tiếp vec tơ biểu Ad-TIMP2 hiệu lực việc ức chế tăng trưởng LLC sơ cấp làm giảm số lượng di phổi Giảm đáng kể mật độ vi mạch máu quan sát thấy nhờ nhuộm WF Tuy nhiên, ích lợi thời gian sống sót nói chung 12 ngày so với động vật đối chứng Những nhược điểm chuyển gen adenovirus nhằm ức chế tạo mạch loại bớt nhiều vec tơ hệ thứ – adenovirus “phụ thuộc helper” Park cộng phát triển hệ thống vec tơ adenovirus phụ thuộc helper với việc loại bỏ toàn trình tự mã hóa virus Những vec tơ sau sử dụng để chuyên chở tới 33,6 kb DNA ngoại sinh Tuy nhiên, vec tơ không biểu protein virus nên làm giảm nhiều ĐUMD túc chủ, dẫn đến biểu kéo dài gen chuyển, thật lý tưởng trị liệu kháng tạo mạch Tuy nhiên, ưu điểm hệ thống chưa vận dụng nghiên cứu tạo mạch in vitro in vivo Chuyển gen kháng tạo mạch virus adeno liên hợp Các virus adeno liên hợp tái tổ hợp (recombinant adeno-asociated virus –rAA) vec tơ khiếm khuyết chép, không gây bệnh thuộc nhóm parvovirus người Những vec tơ có tiềm to lớn gen trị liệu ung thư chúng tải nạp tế bào phân chia không phân chia, tính sinh miễn dịch vec tơ khác hợp vào hệ gen túc chủ, cho phép biểu dài hạn gen chuyển Tuy nhiên, hệ thống vec tơ tích hợp khác, quan ngại đột biến ghép tiềm tàng làm hạn chế ứng dụng chúng Có vài báo việc sử dụng vec tơ để chuyển giao gen kháng tạo mạch trị liệu ung thư Nguyen cộng phát triển vec tơ rAAV chứa gen angiostatin, endostatin mRNA antisense VEGF Nghiên cứu chứng minh khả sản xuất protein endostatin angiostatin hoạt hóa khả ức chế sản xuất VEGF từ TB khối u nuôi cấy Tuy nhiên, nghiên cứu chưa mở rộng tới mô hình động vật Ma cộng tác xử lý thành công mô hình khối u não chuột tiêm vào hộp sọ hay rAAV biểu angiostatin.Thâm chuyển ổn định tế bào u thần kinh đệm C6 với rAAV-angiostatin sau cho ghép nội sọ, kết ức chế đáng kể tăng trưởng khối u Các khối u đạt thể tích tối đa tuần sau cấy ghép, lại thu hẹp lại đáng kể sau tuần Trái lại, TB khối u tải nạp đối chứng đạt thể tích nguy hiểm tối đa vòng tuần Những thoái lui tương tự quan sát tiêm trực tiếp vec tơ vào khối u não có từ trước Khả sống sót tăng đáng kể, 40% chuột xử lý có phân bố mạch nhỏ thưa thớt khối u tháng Khả sống sót tăng tới 55% tiêm đồng thời với gen tự sát RSVtk Độc tính liên quan tới việc xử lý với ganciclovir làm hạn chế khả sống sót cao Trong nghiên cứu tiếp theo, người ta tiêm đơn rAAV-angiostatin vào chân chuột nude làm ức chế sinh huyết quản khối u làm tăng trưởng tế bào U87 nội sọ Mức angiostatin lưu thông cao làm tăng thời gian sống sót nhóm điều trị, 40% chuột sống sót 10 tháng Biểu dài hạn lợi ích vec tơ rAAV Khi tiêm vào tĩnh mạch cửa vec tơ sản xuất Flk-1 hòa tan chứng minh biểu protein từ gan tháng Điều rõ có hiệu ứng việc làm giảm mật độ mạch máu khối u kích cỡ khối u da SK-NEP-1 mô hình chuột Ức chế tân huyết quản hóa khối u retrovirus Gen trị liệu trung gian retrovirus nhiều nhóm nghiên cứu sử dụng để chuyển giao chất ức chế tạo mạch biểu dài hạn mô hình khối u Đa số nghiên cứu sử dụng retrooncovirus bệnh bạch cầu chuột Moloney (Molooney murine leukemia – MmuLv) Các vec tơ lentivirus hệ thứ khiếm khuyết chép dựa tảng virus gây thiếu hụt miễn dịch người phát triển cho ứng dụng kháng tạo mạch Đây cố gắng để vượt qua hạn chế khả vec tơ MMuLv nhằm thâm nhiễm với TB phân chia Chuyển giao tổ hợp angiostatin endostatin retrovirus rõ có tác động đồng vận mô hình trị liệu u sắc tố bệnh bạch cầu Chuột cấy ghép tế bào bệnh bạch cầu L1210 tải nạp MMuLv biểu chất ức chế tạo mạch, khả sống sót không u nói chung 40%, lại không thấy lợi sống sót nhóm TB tải nạp với angiostatin endostatin Các vec tơ retrovirus sử dụng mô hình u thần kinh đệm loài gặm nhấm để chuyển giao yếu tố tiểu cầu (PF4) Flk-1 âm tính trội (dominant negative Flk-1) Tanaka cộng tác chứng minh rằng: 14 ngày sau cấy ghép tế bào thần kinh đệm RT2 tải nạp với PF4 khối u tạo nhỏ giảm phân bố mạch máu Trái lại khối u đối chứng tăng cường huyết quản hóa lớn nhiều Trong nghiên cứu u thần kinh đệm GS-9L chuột, TB tải nạp với Flk-1 âm tính trội, thiếu domain báo hiệu nội bào ức chế tăng trưởng khối u tiêm vào não Không thấy có thu nhỏ đáng kể khối u xảy dich (supeRNAtant) có chứa virus tiêm vào khối u có từ trước, điều chứng tỏ hiệu ứng tải nạp vec tơ retrovirus in vivo nghèo nàn Mặc dù nghiên cứu retrovirus quan trọng việc chứng minh hiệu ứng có lợi việc biểu chất ức chế tạo mạch dài hạn, nhiên áp dụng thực tế điều trị khối u người hạn chế KẾT LUẬN Những nghiên cứu tạo mạch lĩnh vực thiết lập 30 năm Trong thời kỳ người ta chứng minh rõ ung thư khối u “hiếu chiến” đòi hỏi mạch máu phải phát triển để di hóa sang điểm xa thể Điểm bật thập kỷ trước nhiều chất ức chế tạo mạch protein nội sinh hay mảnh protein phát thể Hiện TNLS khảo sát độ an toàn hiệu lực chất ức chế Những protein tái tổ hợp có đặc tính đặc biệt nhiều trở ngại vượt qua việc tìm hiểu chế tác động, liều lượng sử dụng hiệu ứng sinh học lâm sàng Đã có chứng cho thấy nhiều chất ức chế protein có cấu trúc phức tạp khó sản xuất với số lượng lớn để sử dụng cho bệnh nhân ung thư Hy vọng gen trị liệu làm giảm nhẹ nhược điểm cách làm cho bệnh nhân tạo chất ức chế cách trực tiếp tế bào Đối với áp dụng khác gen trị liệu ung thư trở ngại cách tiếp cận kháng tạo mạch việc phát triển vec tơ an toàn thích hợp Vec tơ gen trị liệu tối ưu cho trị liệu tạo mạch phải chuyển giao cách chắn gen chuyển nhiều giai đoạn Hơn nữa, vec tơ phải an toàn tính sinh miễn dịch thấp cho phép áp dụng nhiều lần bệnh nhân ung thư phải trì chất ức chế nhiều tháng thiết lập thoái lui bệnh bậc ổn định Sau chót là, vec tơ thích hợp sử dụng phụ thuộc vào dạng ung thư đặc tính sinh học gen chuyển kháng tạo mạch Tuy vậy, nghi ngờ gen trị liệu kháng tạo mạch phương pháp điều trị có ý nghĩa ung thư tương lai gần